Содержание к диссертации
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 5
ВВЕДЕНИЕ 6
1 АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР 9
1.1 Систематика Микоплазм 10
1.2 Семейство Mycoplasmataceae 12
1.2.1 Морфология микоплазм 12
1.2.2 Чувствительность микоплазм к физическим и химическим факторам 15
1.2.3 Биохимические свойства урогенитальных микоплазм . 16
1.2.4 Культуральные свойства 17
1.2.5 Антигенная структура 19
1.3 Микоплазмозы человека 20
1.3.1 Микоплазмы, инфицирующие человека .' 21
1.3.1.1 Mycoplasma pneumoniae 21
1.3.1.2 Mycoplasma fermentans 23
1.3.1.3 Mycoplasma hominis 24
1.3.1.4 Ureaplasma urealyticum 25
1.3.2 Факторы патогенности 27
1.3.3 Патогенез 28
1.3.4 Эпидемиология ЗО
1.3.5 Клинические проявления 31
1.3.5.1 Здоровых женщин 32
1.3.5.2 Микоплазмоз беременных 32
1.3.6 Лечение 33
1.4 Чувствительность микоплазм к антибиотикам. Резистент ность 35
1.4.1 Критерии для определения чувствительности Чп vivo\ 35
1.4.1.1 Клиническая эффективность 36
1.4.1.2 Уровень антибиотика в сыворотке крови 36
1.4.1.3 Изменение чувствительности у микроорганизмов одного вида 38
1.4.2 Механизмы резистентности 38
1.4.3 Методы определения чувствительности * in vitro* 39
1.4.3.1 Методы диффузии 39
1.4.3.2 Методы разведения 41
1.5 Классификация антибиотиков 43
1.5.1 Группа тетрациклинов 45
1.5.2 Группа макролидов 47
1.5.3 Группа хинолонов/фторхинолонов 49
1.5.4 Группа линкозамидов 51
1.5.5 Группа аминогликозидов 51
1.5.6 Чувствительность антибиотиков разных классов к урогенитальным микоплазмам 53
1.6 Лабораторная диагностика 55
1.6.1 Бактериологические методы диагностики 56
1.6.2 Серологические методы 57
1.6.3 Методы молекулярной биологии 59
1.7 Сравнение методов анализа 61
2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 63
2.1 Объекты исследования 63
2.2 Микробиологические методы исследования 64
2.3 Физико-химические методы исследования 65
2.4 Вспомогательные материалы, используемые при исследовании 65
3 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 66
3.1 Усовершенствование жидкой питательной среды «МИКО- ПЛАЗМА-50» 66
3.1.1 Подбор системы индикаторов 67
3.1.2 Определение точки эквивалентности выбранной смеси индикаторов 71
3.1.3 Поиск и определение антибиотиков для подавления роста посторонней микрофлоры 71
3.2 Определение минимальной подавляющей концентрации (МІЖ) 72
3.2.1 Приготовление жидких питательных сред МИКОПЛАЗМА-50 и УРЕАПЛАЗМА-50 74
3.2.2 Определение МПК для М hominis 78
3.2.3 Определение МПК для U.urealyticum 81
3.2.4 Разработка Тест-системы для определения антибиоти-кочувствительности к возбудителям урогенительных мико-плазмозов 83
3.3 Сравнительная оценка эффективности разработанной Тест- системы 85
4 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ 87
4.1 Результаты по усовершенствованию жидкой питательной среды «МИКОПЛАЗМА-50» 87
4.2 Результаты по определению минимальной подавляющей концентрации (МПК) 91
4.3 Результаты по апробации разработанной Тест-Системы 103
5. ВЫВОДЫ 111
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 113
ПРИЛОЖЕНИЕ А '..' 129
Введение к работе
Микоплазмы, более раннее название - организмы подобные возбудителю плевропневмонии (Pleuropneumonia like organism PPLO) были впервые выделены от животных в 1898 году, а от человека в 1937 году. В 1937 году Dienes и Edsall описали случай инфицированности человека. Речь шла о генитальной инфекции, абсцессе Бартолиевой железы, вызванной микоплазмой, которая, вероятнее всего являлась Mycoplasma hominis. В 1954 году, при диагностике уретрита Shepard впервые, кроме Mycoplasma hominis, изолировал Ureaplasma urealyticum или Т-штаммы (от английского - "tiny-form PPLO colonies"). Микоплазмы давно известны в качестве возбудителей заболеваний многих видов животных, птиц и растений, однако их роль в инфекционной патологии человека стала предметом интенсивных исследований только с 1962 года, когда было доказано, что этиологическим агентом первичной пневмонии является микоплазма. В дальнейшем была установлена этиологическая связь нескольких видов микоплазм с различными заболеваниями дыхательных и мочеполовых путей.
Заболевания человека, вызываемые микоплазмами, объединяют в группу микоплазмозов, большая часть которых относится к заболеваниям урогениталь-ного тракта. В последнее время резко возросла частота хламидийной, вирусной, микоплазменной и смешанной инфекции, передающиеся главным образом половым путем, борьба с которыми представляет значительные трудности в связи с развивающейся устойчивостью к антибиотикам и особенностями ответных реакций организма.
Высокая инфицированность населения микоплазмами, широкий спектр заболеваний, вызываемый ими, заставляет исследователей все более внимательно изучать эту группу микроорганизмов. Лабораторная и клиническая диагностика, лечение и профилактика этих инфекций в настоящее время приобретает все более важное значение в современном здравоохранении.
Урогенитальные микоплазмы Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyicwn вызывают такие распространенные инфекции, как негонококковые уретриты, воспаления органов малого таза, эндометриты и бактериальные вагинозы. Они могут также вызывать преждевременные роды, рождения детей с малым весом и клиническими проявлениями заражения крови, болезнями респираторного тракта и неврологическими расстройствами. У микоплазм также как и у других микроорганизмов может проявляться антибиотикорезис-тентность за счет генетических мутаций или путем приобретения нового генетического материала. Поэтому при назначении антибиотикотерапии важным является проведение тестов на сравнительную чувствительность антибиотиков различных групп. Стандартизированными методами для определения антибио-тикочувствительности микоплазм являются только методы серийных разведений в агаре или в жидкой питательной среде. Диффузионный метод на дисках не может использоваться для Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, так как эти культуры растут очень медленно и антибиотики успевают раньше распределиться в слое агара прежде чем колонии вырастут и дадут определенную зону ингибирования роста.
Предварительное определение антибиотикочувствительности при назначении лечения микоплазменных и уреаплазменных инфекций позволяет снизить удельный вес положительных результатов при повторном обследовании после курса антибиотикотерапии с 37 % до 7-8 %.
Целью лабораторной диагностики является идентификация возбудителей, вызывающих различные микоплазмозы, а также установление их чувствительности или устойчивости к антибактериальным средствам, используемым по общепринятым схемам терапии.
Разработка Тест-системы для идентификации и определения антибиотикочувствительности возбудителей урогенитальных микоплазмозов Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum и послужило объектом данного исследования.
Таким образом, цель настоящего исследования состоит в разработке тест-системы для идентификации и определения антибиотикочувствительности , возбудителей урогенитальных микоплазмозов: Mycoplasma hominis и Urea-plasma urealyticum. Тест-система должна удовлетворять следующим условиям: чувствительность селективность, надежность, быстрота и простота исполнения. Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:
• Поиск подходящей системы индикаторов, улучшающей наглядное определение результатов качественной реакции на рост Mycoplasma hominis.
• Поиск и определение концентрации антибиотиков для подавления роста посторонней бактериальной и грибной микрофлоры.
• Изучение чувствительности возбудителей урогенитальных микоплазмозов Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum к антибиотикам разных групп в исспытаниях in vitro.
• Определение минимальной подавляющей концентрации (МІЖ) антибиотиков: 2-х тетрациклинов (тетрациклин, доксициклин), 2-х фтор-хинолонов (офлоксацин, ципрофлоксацин), 2-х макролидов (эритромицин, кларитромицин), линкозамида (клиндамицин), аминогли-козида (гентамицин) - для ингибирования роста урогенитальных микоплазм Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum.
• Изучение сравнительной активности антибиотиков разных групп к Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum.
• Проведение сравнительной оценки эффективности разработанной Тест-системы для идентификации и определения антибиотикочувствительности возбудителей урогенитальных микоплазмозов Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum при сравнении с зарубежным аналогам.
