Введение к работе
Актуальность темы. Тейлвриоз - это широко распространенное во многих стрнах мира протозойное заболевание крупного рогатого скота, наносящее огромный материальный ущерб, который связан, в первую очередь, со значительной смертностью животных, достигающей 90. особенно среди высокопродуктивных животных. Хотя на территории России оно регистрируется в осноеном'в южных областях ( Астраханской, Волгоградской, Ростовской), в Калмыкии, Дагестане, Ингушетии, Краснодарском и Ставропольском краях, а также на Дальнем Востоке, это не умаляет его отрицательного влияния на развитие скотоводства в нашей стране, так как заболевание имеет тенденцию к медленному , но неуклонному распространению.
Основное средство борьбы с тейлериозом - иммунизация живой культуральной противотейлериозной вакциной. Только" в государствах Среднеазиатского региона, по данным В.Т.Заблоцкого /1988/, живой культуральной вакциной против тейлериоза, разработанной и внедренной в производство лабораторией протозоологии ВИЭВ, в настоящее время иммунизировано около 3,5 млн. голов крупного рогатого скота. При этом эффективность вакцины составляет не менее 94,58 / Р.Х.Нораев,1991/.
Однако использование этой вакцины полностью не решает проблемы из - за ряда ограничений. Живая вакцина способствует циркуляции прививочного штамма возбудителя во внешней среде, - что ограничивает ее применение лишь стационарно неблагополучной по тейлериозу зоной; в энзоотических же очагах введение "живой вакцины не разрешено. Применение этой вакцины нередко
сопровождается поствакциналышми осложнениями, обусловленными нарушениями "Наставления по применению противотейлериозной вакцины" ( иммунизация ослабленных животных, больных,животных ниже средней упитанности ). Хранение и транспортировка вакцины возможны только при температуре - 196 С
Принимая во внимание перечисленные недостатки живой вакцины, напрашивается вывод о необходимости замены этого метода иммунизации на не менее эффективный и более безопасный.
Принципиальным решением этой проблемы является конструирование химических, ив том числе субъединичных вакцин. В зарубежной литературе последних лег неоднократно высказывалось мнение о возможности создания субъединичной вакцины против тейлериоза, вызываемого Иі. parva, из поверхностных антигенов спорозоитов, шизонтов и инвазированных культуральных лимфоидных клеток / Впегу D.L. et al.,1986; Hall P.R.,1988; Jungmann R. et al.,1989: Glaeoodine J. et al.,1990 /. При этом особое внимание уделялось поверхностным антигенам трансформированных тейлериями клеток культуры / Baldwin C.L. et al.,1987; Chandhri S.S. et al.,1991 /.
Исходя из вышесказанного, представляют интерес исследования поверхностных антигенов культуральных лимфоидных клеток, инвазированных Th. annulata, с целью конструирования на их основе , субъединичной вакцины.
Цель работы. Основная цель настоящей работы - идентификация и разработка метода выделения поверхностных антигенов лимфоидных клеток крупного рогатого скота, инвазированных Th. annulata, и
Изучение уЛЬТрастрУКТУрЫ ЭТОГО ВОЗбУДИТеЛЯ В КУЛЬТуре ЛИМ50ИДНЫХ
клеток, пунктатах из лимфатических узлов и в эритроцитах
периферической крови больных тейлеризом животных. Задачи исследования.
1. Идентифицировать тейлериоспецифкческке антигены на
мембрвне лимфоидных 'клеток крупного рогатого скота,
инвазированшх Th. annulata, методами:
а/ иммуноэлектронной микроскопии с использованием поликлональных антител и биоспецифического маркера;
б/ иммунопероксидазного теста ' с использованием поликлональных антител и биоспецифического маркера.
2. Разработать метод выделения плазматических мембран
трансформированных Th. annulata лимфоидных клеток крупного
рогатого скота.
-
Выявить способность комплексного поверхностного антигена выделенных плазматических мембран лимфоидных клеток крупного рогатого скота, инвазированных Th. annulata. индуцировать тейлериоспецифические антитела in vivo.
-
Изучить ультраструктуральные особенности возбудителя Th. annulata в культуре лимфоидных клеток, в пунктатах из лимфатических узлов и в эритроцитах периферической крови больного тейлеряозом животного.
Научная новизна работы. Впервые идентифицированы тейлериоспецифические поверхностные антигены плазматической мембраны лимфоидных клеток крупного рогатого скота, инвазированных Th. annulata, при культивиовании In vitro.
Разработан метод выделения поверхностного антигена культуральных лимфоидных клеток крупного рогатого скота, трансформированных Th. annulata.
Установлена способность получнных антигенов индуцировать in
vivo антитела, специфичные к Иі. annulata.
Уточнении дашше об ультраструктуре Th. annulata в культуре лимфоидных клеток крупного рогатого скота, в пунктатах из лимфагических узлов и в эритроцитах периферической кроЕИ Сольного тейлериозом животного.
Практическая ценность. Разработан технологически приемлемый метод выделения комплексного поверхностного антигена культуралышх клеток, трансформированных возбудителем тейлериоза.
Установлена способность выделенного антигена _ к индукции тейлериоспецифических антител, что служит основой дальнейших исследований, направленных на изучение его физико-химических и протективішх свойств с целью конструирования противотейлериозной субъединичной вакцины.
Апробация работы. Материалы доложены и получили положительную оценку на:
- международной научной конференции "Актуальные проблемы
медицинской и ветеринарной паразитологии" / Витеоск, 1003 г. /;
республиканской научно-практической конференции по животноводству и ветеринарной медицине / Витебск, 19Э4 г. /;
межлабораторном совещании сотрудников / 1994 г. /;
- Ученом Совете Всероссийского научно - исследовательского
института экспериментальной ветеринарии / 1994 г. /.
На защиту выносятся следующие положения диссертации:
1. Методы идентификации поверхностных антигенов лимфоидных
клеток крупного рогатого скота, трансформированных Th. annulata.
2. Метод получения нефракционированного поверхностного
антигена культуральннх лимфоидных клеток, трансформированных Th.
annulata.
3. Результаты исследования способности кафракцяонированного
поверхностного антигена культуральных лимфошшых клеток,
трансформированных Th. annulata, к ішдукции тейлериоспецифических
антител.
4. Результаты исследования ультраструктури Th. annulata.
Публикация результатов исследований. По теме диссертации
опубликована 4 статьи.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 124 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, список литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 20 рисунками. Список литературы включает 219 источников, из них 65 отечественных и 154 зарубежных авторов.
