Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Аналитический обзор литературы Алкогольный синдром плода: современное состояние проблемы 10
1.1. Актуальные аспекты проблемы АСП 10
1.1.1. Патогенез АСП 14
1.1.2. Клинические проявления АСП 23
1.1.3. Моделирование алкогольного синдрома плода в эксперименте на животных 27
1.2. Коррекция АСП: изыскание способов ослабления эмбрио- и фето-
токсического действия этанола 40
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Животные 47
2.2. Соединения, используемые в эксперименте 47
2.3. Методы исследования
2.3.1. Получение животных с датированным сроком беременности 48
2.3.2. Введение беременным самкам испытуемых растворов 49
2.3.3. Методики и основные эксперименты по оценке физического развития и изучению мозга и поведения животных, подвергшихся пренатальной алкоголизации 49
2.3.4. Методы моделирования и оценки эмбриотоксического действия этанола 52
Глава 3. Результаты исследования
3.1. Исследование фетотоксического действия спирта этилового синтетического ректификованного 56
3.2. Изыскание способов ослабления эмбрио- и фетотоксического действия этанола 72
3.2.1. Экспериментальная коррекция фетотоксического действия этанола с помощью Гипоксена 72
3.2.2. Экспериментальная коррекция фетотоксического действия этанола с помощью экстракта гребней винограда 85
3.2.3. Экспериментальная коррекция эмбриотоксического действия этанола с помощью Гипоксена и экстракта гребней винограда 101
Глава 4. Обсуждение результатов 104
Выводы 116
Список литературы
- Клинические проявления АСП
- Соединения, используемые в эксперименте
- Введение беременным самкам испытуемых растворов
- Экспериментальная коррекция фетотоксического действия этанола с помощью Гипоксена
Введение к работе
Негативное влияние алкоголя на потомство замечено давно [8], однако, углубленное изучение этого воздействия началось лишь в последние 25-30 лет, когда было отмечено нарастание алкоголизма у женщин во всех странах мира [48, 162]. Первые сообщения об алкогольном синдроме плода (АСП) появились во Франции в 1968 году [146], а в 1973 году американские исследователи подтвердили результаты наблюдений французских коллег [138].
Эпидемиологические исследования последних лет свидетельствуют о том, что алкогольный синдром плода, как нозологическая единица пренатальной этиологии, имеет довольно широкое распространение и обнаруживается в диапазоне от 1 на 300 новорожденных до 1 на 1000 новорожденных от женщин, потреблявших алкоголь во время беременности [100]. В развернутом виде АСП включает специфические морфологические черепно-лицевые изменения, пре- и постнатальное отставание роста, пороки развития внутренних органов и скелета и, наконец, психическую неполноценность [152, 178]. Правда, все признаки АСП одновременно встречаются относительно редко.
Причины возникновения АСП связывают, прежде всего, с токсическими эффектами алкоголя. В экспериментальных исследованиях было обнаружено, что пренатальная алкоголизация животных увеличивает смертность эмбрионов и плодов, число мертворожденных и смертность в течение первого месяца жизни [88]. Токсические эффекты алкоголя могут быть усилены за счет различного рода примесей, содержащихся в алкогольных напитках [51, 52, 53, 57].
Середина 1990-х годов ознаменовалась увеличением смертности от отравлений алкоголем, а также ростом числа алкогользависимых соматических заболеваний [95, 149]. Увеличение числа смертельных отравлений алкоголем по времени совпало с увеличением случаев обнаружения синтетического спирта в алкогольных напитках, реализуемых населению [48]. В результате возникли опасения относительно токсических свойств синтетического спирта, которые привели к тому, что синтетический спирт был внесен в перечень ядовитых и сльно- / действующих веществ.
Способы предупреждения АСП ограничиваются проведением профилактических бесед с многопьющими и больными алкоголизмом женщинами детородного возраста. Попытки использования с этой целью некоторых лекарственных средств, в частности ноотропов, успехом не увенчались [28, 41, 90, 96]. Поиск способов и средств, препятствующих реализации эмбрио- и фетотокси-ческого действия алкоголя представляется исключительно важным как в теоретическом, так и в практическом отношении. Потенциально к таким средствам могут быть отнесены лекарственные препараты и иные средства, обладающие антиоксидантным и антигипоксантным действием, в частности такие как новое лекарственное средство «Гипоксен» и экстракт гребней винограда под названием «Каприм».
Цель и задачи исследования
Цель настоящего исследования заключалась в сравнительной оценке фето-токсического действия спирта этилового синтетического ректификованного и спирта этилового пищевого, а также в изыскании способов коррекции эмбрио-и фетотоксического действия алкоголя.
В ходе исследования решались следующие задачи:
1. Сравнительное изучение действия пренатальной алкоголизации крыс спиртом этиловым синтетическим ректификованным и спиртом этиловым пищевым ректификованным на физическое развитие и поведение потомства.
2. Сравнительное изучение действия пренатальной алкоголизации крыс спиртом этиловым синтетическим ректификованным и спиртом этиловым пищевым ректификованным на чувствительность к наркотическому действию этанола и уровень добровольного потребления раствора этилового спирта у потомства. 3. Оценить способность лекарственного препарата «Гипоксен» корректировать развитие нарушений роста, развития и поведения у крыс, подвергавшихся воздействию алкоголем в процессе внутриутробного развития.
4. Изучить способность экстракта гребней винограда, препятствовать развитию нарушений роста, развития и поведения потомства крыс, подвергавшихся воздействию алкоголем в процессе внутриутробного развития.
5. Изучить способности лекарственного препарата «Гипоксен» и экстракта гребней винограда корректировать эмбриотоксическое действие алкоголя.
Научная новизна полученных результатов
Подтверждено, что синтетический спирт и пищевой спирт при хроническом воздействии оказывают одинаковое по проявлениям и выраженности действие на плод.
Впервые на экспериментальной модели алкогольной фетопатии обнаружена способность нового лекарственного средства антигипоксантного типа действия под названием «Гипоксен» для предотвращения нарушений развития и поведения, а также формированию алкогольной мотивации и изменению чувствительности к наркотическому действию этанола у потомства, пренатально подвергавшегося воздействию алкоголем.
Впервые показано, что экстракт гребней винограда эффективно препятствует реализации проявлений фетотоксического действия алкоголя на уровне формирования алкогольной мотивации, нарушений развития и поведения у потомства, пренатально подвергавшегося воздействию алкоголем.
Впервые установлено, что лекарственное средство «Гипоксен» и экстракт гребней винограда препятствуют проявлениям эмбриотоксического действия алкоголя. Практическая значимость полученных результатов
Разработан комплекс методик, позволяющих без использования дорогостоящего оборудования дать заключение о потенциальной способности того или иного спирта вызывать у животных, подвергшихся пренатальной алкоголизации, патологию физического развития и поведения, предрасположенность к формированию алкогольной зависимости.
Результаты исследований позволили сформулировать несколько важных в практическом плане положений.
Первое - спирт этиловый синтетический ректификованный по параметрам хронической токсичности не отличается от пищевого этилового спирта и потому алкогольные напитки, изготовленные на его основе, не могут служить причиной повышенной смертности от отравлений алкоголем. Внесение этого спирта в перечень ядовитых веществ является необоснованным.
Второе - экстракт гребней винограда и лекарственное средство «Гипоксен» могут служить в качестве эффективных средств, препятствующих нарушениям развития и поведения у потомства, подвергавшегося длительной пренатальной алкоголизации.
Личный вклад соискателя.
Автор принимал непосредственное участие в выполнении исследований по всем разделам диссертации, включая выдвижение идеи, освоение методических подходов, организацию и проведение экспериментальных исследований, аналитический обзор литературы, обобщение и анализ результатов исследований. Экспериментальная часть выполнена соискателем на базе Национального Научного Центра Наркологии Министерства Здравоохранения и Социального Развития Российской Федерации. Научный руководитель оказывал консультативную помощь в разработке моделей, при постановке целей и задач исследования, обсуждении и трактовке полученных результатов. В выполнении отдельных фрагментов исследований принимали участие сотрудники лаборатории токсикологии ННЦН.
Апробация результатов диссертации
Результаты исследований, включенные в диссертацию, докладывались на: 2-ой научно-практической конференции по традиционным методам терапии в акушерско-гинекологической практике (Москва, 2003); 2-ом съезде токсикологов России (Москва, 2003).
Опубликованность результатов
Результаты диссертации отражены в 4 публикациях (4 статьи в научных журналах).
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из общей характеристики работы, аналитического обзора литературы по теме, описания объектов и методов исследования, изложения полученных результатов исследования и их обсуждения, выводов и библиографии, включающей 197 названий. Диссертация содержит 12 иллюстраций и 25 таблиц.
Клинические проявления АСП
Соматические уродства наиболее часто представлены аномалиями конечностей - неполное разгибание в локтевых суставах, аномальным расположением пальцев, укорочением ногтей, сращением пальцев кисти, кмитодактилией (кем-птодактилия), клинодактилией и дисплозией тазобедренных суставов. У некоторых детей с АСП встречаются и такие дефекты развития костной ткани, как неправильный рост зубов, атипичная форма грудной клетки, укорочение стоп, уменьшение величины метакарпальных и метатарзальных костей [137]. Примерно у 32-49% больных с АСП имеются пороки сердца в виде дефекта межжелудочковой или межпредсерднои перегородок, незаращения артериального протока, у 32 % - множественные гемангиомы. У каждого 2-3-го больного обнаруживаются генитально-анальные нарушения - гипоспадия, неопустившиеся семенники, гипопластические малые срамные губы, удвоение влагалища, кли-торомегалия, смещенный в сторону живота задний проход, его заращение [152]. Иногда отмечаются удвоение мочевыводящих путей, избыточный волосяной покров, особенно на лбу [137]. Наблюдаются также характерные отклонения в дерматоглифике [152].
У детей с АСП сразу после рождения наблюдается развитие симптомов, характерных для синдрома отмены алкоголя. В первые дни после рождения у них регистрируются тремор и недостаточность дыхания, требующая искусственной вентиляции. Характерны также повышенная раздражимость, гиперрефлексия, особенно на звуковые раздражители, плохой сон, затруднения в сосании и глотании. Частым симптомом является моторная дискоординация, реже встречается гипотония мышц, еще реже - спастическая дисплегия [81, 84]. Некоторые авторы в целях предотвращения развития абстинентного синдрома у новорожденных даже рекомендуют не прерывать прием алкоголя во время беременности, естественно не злоупотребляя им [123].
На вскрытии умерших больных с АСП обычно выявляются тяжелые повреждения головного мозга, аномалии коры больших полушарий, отсутствие сосудистых сплетений желудочков мозга, рудиментарная закладка мозжечка, атипичное расположение клеточных слоев, свидетельствующее о нарушении миграции нейронов в процессе формирования коры мозга в период внутриутробного развития, иногда полностью отсутствует мозолистое тело [78]. Аномалии развития центральной нервной системы эмбрионов, лолученных от матерей, употреблявших алкоголь в период беременности, обнаруживаются в полушариях головного мозга в 71,5% случаев, в среднем мозге - в 40,5%, в мозжечке -в 21%, в промежуточном мозге - в 16,6%, в продолговатом мозге - в 2,6% [69].
При исследовании дизонтогенеза головного мозга выявлены 11 вариантов патологии головного мозга, включая нарушения формирования стенок мозга, отклонения в развитии корковой пластинки, поражение закладок структур и отделов мозга и другие [69]. Авторы отмечают стабильность возникших в процессе онтогенеза структурных изменений в мозгу детей, родившихся от матерей, злоупотреблявших алкоголем. Это, к примеру, выраженная складчатость, впячивание и слипание стенки мозга, а также гиперплазия клеток, недоразвитие сосудистого сплетения.
Предполагается, что задержка роста плода при внутриутробном воздействии алкоголя связана с нарушениями развития мозга [137]. Многие симптомы поражения ЦНС при АСП сохраняются затем в течение многих лет жизни ребенка. Примерно у 80-88% детей, родившихся с признаками АСП, наблюдаются дефекты развития нервной системы [31, 82, 119]. У таких детей с возрастом становится очевидным отставание в психическом развитии, затруднено приобретение двигательных навыков, нарушено зрительное и слуховое восприятие, наблюдаются расстройства речи, эмоциональная лабильность, энурез, эпилепсия.
В настоящее время представляется очевидным, что функциональные нарушения ЦНС и связанные с ними нарушения поведения могут иметь место даже при отсутствии структурных нарушений в головном мозге. Такие аномалии являются предметом изучения нового раздела медицины и психологии - поведенческой тератологии, которая имеет большие перспективы в плане определения пороговых уровней эмбриотоксичности и тератогенности алкоголя.
Для исследования действия этанола на развивающийся организм единственным способом является моделирование АСП на животных [80]. Различные авторы используют разные сроки, способы введения, а также дозы этанола, что затрудняет анализ имеющихся на настоящий момент данных. При этом этанол может потребляться с водой и пищей в течение всей беременности [1, 43, 126, 128] или только в течение какого-то ее периода [104, 125]. Потребление алкоголя может быть добровольным, когда предоставляется две поилки, с водой и раствором этанола, и принудительным, когда раствор этанола является единственным источником питья [24, 61], или пищи, если этанол предъявляется в составе жидкой диеты. При свободном выборе между водой и раствором этанола, доза последнего достаточно приблизительна. Этанол является высококалорийным продуктом, поэтому повышение содержания этанола вследствие насильственного введения или добровольного потребления отражается на биоэнергетических процессах, и в итоге, потребление этанола изменяет диету [108, 136]. Для компенсации возможных изменений обычно контрольные животные получают эквикалорийные пищевые добавки или же, напротив, уменьшается общее количество пищи, которое получают алкоголизируемые самки
Алкоголь можно вводить прямо в желудок через специальный зонд. В этом случае экспериментатор получает большую возможность контролировать концентрацию, дозу и режим введения алкоголя. Можно применять этанол в течение короткого периода времени, даже однократно, что позволяет выявлять критические моменты развития, наиболее чувствительные к этанолу.
Соединения, используемые в эксперименте
Раствор этилового спирта для введений готовили из пищевого этилового ректификованного спирта марки «Экстра», полученного из зерносмеси пшеницы и ржи на заводе-изготовителе (ОАО «Алвист», г. Бежецк Тверской обл.). Спирт соответствовал требованиям ГОСТ 51-652 и СанПиН 2.3.2.560-96.
Исследованию подвергали спирт этиловый синтетический ректификованный (ТУ 82-001-11726438-93), производства НПО «Химсинтез» (Этол медицинский). Исследуемые спирты разводили водой до концентрации 30 г/л (около 40%). Конечную концентрацию растворов контролировали по их плотности.
Сухой экстракт гребней винограда под названием «Каприм» получен путем экстрагирования (экстрагент - дистиллированная вода) сырья методом интен сивной реперколяции (t = 60С) до состояния водного раствора и его поел е-дующей сублимационной сушки (t = 40ЯС). В итоге сухой водный сублимир о-ванный экстракт гребней винограда представляет собой порошок светло-зеленого с буроватым оттенком цвета.
Концентрация экстракта в растворе этанола (25%, вес/об), предназначенного для введения животным, составляла 5 г/л. Указанная концентрация выбрана исходя из того, что при введении этанола в выбранной нами дозе беременные крысы получали препарат Каприма в дозе 100 мг/кг в сутки.
Гипоксен вносили в раствор этилового спирта из расчета 5 мл 5% раствора Гипоксена на 1 л водно-спиртовой смеси, крепостью 25%, вес/об., т.е. препарат Гипоксена беременные самки получали в дозе 30 мг/кг в сутки.
В качестве контроля использовали животных, которым вместо спиртов вводили эквиобъемное количество воды. Все растворы вводили интрагастралъно с помощью шприца и металлического зонда с оливой на конце.
Крысы становятся половозрелыми на 8-9-й неделе. Спаривание у крыс, как правило, происходит тогда, когда самка находится на стадии эструс эстрально-го цикла.
В каждую из 5-ти клеток, где находилось по три самца, подсаживали по семь самок на спаривание, не определяя у них стадии эстрального цикла. На следующий день утром брали мазки у самок. После отсадки семи самок из 1-ой клетки, трех самцов из этой клетки кормили творожными шариками с добавлением витамина Е. Не забеременневших самок обратно сажали к самцам. Затем проделывали те же операции последовательно со всеми остальными животными. Самок, в вагинальном мазке которых были обнаружены сперматозоиды, отсаживали, метили, распределяли по группам и начинали отсчет дней беременности, считая этот день - первым днем беременности.
Схему второго дня продолжали на протяжении 7-10 дней до тех пор, пока не набирали 24-х беременных самок (по 8 в группе).
Беременных самок кормили сырой рыбой, творогом, смесью нарезанных овощей с кашей и маслом с витаминами. За один день до родов и на протяжении двух недель лактации кормящим самкам один раз в день давали белый хлеб в молоке. Самцы в период спаривания, помимо стандартного корма, получали пекарские дрожжи [23].
2.3.2. Введение беременным самкам испытуемых растворов производили с 1-го по 21-ый день беременности внутрижелудочно. Введения проводили в период между 11.00-13.00 часами ежедневно. Дозу вводимого этанола перерасчитывали один раз в десять дней в соответствии с изменяющейся в процессе беременности массой тела крыс.
Отсаживание беременных самок на роды проводили на 19-й день беременности в индивидуальные клетки. С 20-го дня особенно внимательно следили за наличием и поступлением воды из поилок, подкармливали крыс-самок хлебом с молоком.
Роды проходили, как правило, ночью. Утром у родивших самок фиксировали количество новорожденных, отмечая число живых и мертворожденных, наличие у них дефектов и пороков развития, вес самки и потомства, включая мертвых, которых записывали с маркировкой «М».
На протяжении всего периода беременности и до 28-го дня лактации у крыс-самок еженедельно регистрировали массу тела.
У потомства регистрировали время появления признаков, характеризующих развитие крысят обоего пола (отлипание ушей, покрытие шерстью и открывание глаз) [109], и динамику массы их тела [105].
На 10-й день жизни у крысят обоего пола определяли наличие безусловных рефлексов переворачивания на плоскости и удержания передними лапами на горизонтальной веревочке (по продолжительности, в секундах) [102].
В возрасте 48-58 дней оценивали физическую выносливость и координацию движений животных в тесте "вращающийся стержень", фиксируя время удержания на барабане, вращающемся со скоростью 18 оборотов/минуту. За день до тестирования животных предварительно тренировали в течение 5 мин. при скорости вращения барабана 9 об./мин. [10].
В возрасте 48-58 дней изучали двигательную активность в тесте "открытое поле в условиях естественного освещения [91]. Для этого животных помещали в центр "открытого поля", представляющего собой квадратную камеру площадью 100 х 100 см и высотой стенок 40 см, разделенную на 25 равных квадратов. В течение 5-ти мин. регистрировали горизонтальную (число пересеченных внутренних и внешних квадратов) и вертикальную (число стоек) двигательную активность, груминг и его продолжительность, время пассивного поведения, количество встряхиваний головой, лапами и всем телом, а также число фекальных болюсов и уринаций.
В возрасте 47 - 57 дней исследовали поведение животных в тесте "крестообразный приподнятый лабиринт", оценивая исследовательскую активность и уровень тревожности крысят. О состоянии рабочей памяти животных судили по оптимальности исследовательского поведения, определяемой по числу заходов в рукава, количеству свешиваний вниз головой с лучей в течение одного обхода (3 мин). Об уровне тревожности судили по числу выходов на открытые лучи и суммарному времени нахождения на открытых лучах [10].
Введение беременным самкам испытуемых растворов
Постановка эксперимента. Методика исследования базировалась на основе положений, разработанных и сформулированных в Институте общей и коммунальной гигиены им. А.Н. Сысина АМН РФ [27].
Методика забора эмбрионального материала (вскрытие беременных самок и извлечение плодов. Определение пред- и постимплантационной гибели зародышей). На 20-ый день беременности определяли массу тела беременной самки, затем усыпляли ее в парах эфира и помещали ее на операционный столик. Анатомическим пинцетом приподнимали кожу живота по средней линии и вскрывали брюшную полость, отодвигали в сторону весь комплекс пищеварительных органов так, чтобы видны были оба рога матки и извлекали из брюшной полости целиком органы репродуктивного тракта, который представлен парными яичниками, яйцеводами, двурогой маткой и влагалищем. Захватив пинцетом овариальный конец матки, осторожно отсекали от мезентерия по очередно оба ее рога и влагалище. Матку вместе с яйцеводами и яичниками помещали в чашку Петри с теплым физиологическим раствором.
Затем отсепарировывали яичник и подсчитывали под бинокулярной лупой количество желтых тел. На поздних сроках беременности у крыс желтые тела представляют собой округлые образования розового цвета, отличающиеся от более мелких антральных фолликулов. Осторожно вскрывали рога матки по наружному краю и освобождали плоды от околоплодных оболочек и отделяли от плаценты, пережимая при этом пуповину на 2-3 сек. пинцетом. В рогах матки подсчитывали число живых и мертвых плодов, количество мест имплантации, учитывая нормальные плоды и резорбции. Живые плоды реагируют на механическое воздействие. Места резорбций представляли собой коричневые точки на слизистой оболочке матки (при гибели эмбрионов на ранних постимплантаци-онных стадиях) или сгустки темноокрашенных мацерированных тканей (при гибели эмбрионов на более поздних постимплантационных стадиях). По разности между количеством желтых тел и числом мест имплантации определяли предимплантационную гибель, а по разности между числом мест имплантации и числом живых плодов - постимплантационную гибель эмбрионов. На лотке в последовательном порядке соответственно из левого и правого рогов матки располагают плоды и плаценты. Исследование плодов проводили под бинокулярной лупой в чашке Петри, обращая внимание на состояние головы плода (особенно - на состояние лицевого черепа и глаз), позвоночника, хвоста, строение конечностей, наличие подкожных гематом. Плоды взвешивали и измеряли их кранио-каудальный размер при помощи штангенциркуля или циркуля-измерителя и линейки.
Для последующего изучения состояния внутренних органов плоды фиксировали в жидкости Боуэна не менее 10 дней.
Исследование внутренних органов плодов. После фиксации в жидкости Боуэна (от 10 до 30 дней) плоды переносили в этанол крепостью 96% об., где они могут сохраняться в течение длительного периода времени, а затем при ступали к их изучению. В нашей работе использовался модифицированный метод Вильсона [27]. Сущность метода заключается в приготовлении ручным способом, с помощью лезвия безопасной бритвы, серии поперечных срезов, которые затем исследуют под бинокулярной лупой. Производили только 9 основных срезов: 4 в области головы и 5 в области туловища.
Удалив конечности и хвост плода, помещали его на пробковый столик, по возможности фиксируя препаровальной иглой. Разрезом, идущим параллельно нижней челюсти, отделяли голову от туловища и исследовали их отдельно.
Уровни срезов и исследование внутренних органов плода:
1 - первый разрез производился перпендикулярно нижней челюсти, непосредственно за вибриссами. На этом срезе видно состояние нижней челюсти, переднего отдела твердого неба и носовой полости;
2 - второй разрез головы проходил через середину глазных яблок, захватывая обонятельные луковицы;
3 - на третьем разрезе изучали состояние головного мозга: коры больших полушарий, боковых и третьего желудочков;
4 - четвертый разрез проходил за ушной раковиной в области мозжечка и продолговатого мозга. Изучали состояние четвертого желудочка мозга, 3-й и 4-й срезы позволяли диагностировать водянку головного мозга;
5 - пятый разрез делали через туловище на уровне гортани, на нем видны пищевод, спинной мозг, сосуды, слюнные железы;
6 - на шестом разрезе, проходящем параллельно предыдущему, впереди передних конечностей, наблюдали пищевод, трахею, спинной мозг, сосуды;
7 - седьмой разрез располагался под передними конечностями, на нем наблюдали органы грудной полости: сердце, легкие, бронхи, спинной мозг и пищевод;
Экспериментальная коррекция фетотоксического действия этанола с помощью Гипоксена
При исследовании толерантности крыс к этанолу длительность наркотического сна в контроле, у крыс 2-й и 3-й групп составила 108,2±32,8 мин. (п=17); 86,2±27,0 мин. (п=16, р 0,05 по сравнению с контролем) и 76,4±27,1 мин. (п=19,
р 0,01 по сравнению с контролем), соответственно. Таким образом, пренатальная алкоголизация пищевым и синтетическим спиртом приводит примерно к одинаковому снижению длительности наркотического сна, что может свидетельствовать о снижении чувствительности к алкоголю или к повышению устойчивости этих животных к наркотическому действию алкоголя.
Оценка судорожной готовности у животных разных групп статистически значимых различий не обнаружила: интенсивность судорожной реакции (в баллах) в 1-й группе составила 0,4±1,0 (п=9); во 2-й группе - 0,8±1,2 (п=12) и в 3-й группе — 0,9±1,1 (п=12) соответственно. Можно говорить лишь о тенденции к снижению порога судорожной реакции на аудиогенный раздражитель у крыс, подвергавшихся воздействию растворами пищевого и синтетического спирта в процессе внутриутробного развития.
Таким образом, пренагалъное воздействие пищевым и синтетическим этиловым спиртом приводит к: - уменьшению массы тела новорожденных и задержке наращивания массы тела потомства на протяжении более трех месяцев со дня рождения; - отставанию в развитии по срокам прорезывания глаз и покрытия шерстью; - снижению способности крыс к обучению; - увеличению склонности к развитию депрессивно-подобных состояний; - увеличению уровня добровольного потребления раствора этилового спирта; - снижению чувствительности к наркотическому действию алкоголя.
При пренатальном воздействии спиртом этиловым синтетическим более выраженными были такие негативные отличия развития и поведения, как: - задержка в сроках покрытия шерстью и по сравнению с пренатальним воздействием пищевым спиртом; - отставание в выработке безусловного рефлекса.
При пренатальном воздействии спиртом этиловым пищевым более выраженными были такие негативные отличия развития и поведения, как: - более сильное снижение способности крыс к обучению.
Изыскание способов ослабления эмбрио- и фетотоксического действия этанола. Экспериментальная коррекция фетотоксического действия этанола с помощью Гипокссна. В качестве средства, корректирующего токсическое действие этанола, был использован лекарственный препарат «Гипоксен», который вводился в дозе 30 мг/кг один раз в сутки с 1-го по 21-й день беременности интрагастрально в составе 25% раствора пищевого этилового спирта, вводимого в дозе 4,5 г/кг (3-я группа).
В таблице 10 представлена динамика прибавки массы тела крыс-самок, получавших в течение всей беременности интрагастрально 25% раствор этанола в дозе 4,5 г/кг (2-я группа). Можно видеть, что в 3-й группе животных, получавших раствор этанола с Гипоксеном, вес крыс-самок на протяжении всей беременности не отличался от такового в группе контрольных животных, получавших в процессе всей беременности воду в эквиобъемном количестве (1-я группа), и только в 1-ю неделю лактации была выявлена достоверно меньшая прибавка в весе.
Явления мертворожденное у крыс-самок ни в одной из исследуемых групп зарегистрировано не было. Однако общая гибель новорожденных крысят на протяжении 30-ти дней жизни от рождения составила в 1-й группе - 0,1±0,4%; во 2-Й группе - 2,4±2.,5% (р 0,05 по сравнению с контролем) и в 3-й группе -0,0±0,0% (р 0,05 по сравнению со 2-й группой), то есть в помете крыс-самок, получавших раствор этанола с Гипоксеном гибели потомства не наблюдалось.
При изучении элементарных поведенческих рефлексов у 10-ти дневных сосунков установлено, что время удержания на горизонтальной веревочке составило в 1-й группе - 15,0±13,5 сек. (п=53) и во 2-й группе - 12,6±15,7 сек. (п=40) сек. В 3-й группе время удержания равнялось - 18,4±11,3 сек. (п=53) и было достоверно (р 0,05) больше, чем во 2-й группе, иными словами добавление в раствор этанола Гипоксена предотвращало снижение мышечной силы крысят.
Как видно из таблицы 11 вес новорожденных крысят в 3-й группе был достоверно больше, чем у животных во 2-й группе и не отличался от такового в контроле. Добавление Гипоксена не оказывало существенного влияния на признаки, характеризующие развитие крысят (сроки отлипания ушей, покрытия шерстью и открывания глаз).
Что касается динамики массы тела потомства крыс, то во все сроки наблюдения, вплоть до 110-го дня жизни, достоверных различий между группами не наблюдалось (табл.11).
При оценке физической выносливости в тесте "вращающийся стержень" время удержания на стержне составило в 1-й группе - 87±74 сек. (п=23), во 2-й группе - 57±52 сек. (п=14) и в 3-й группе - 85±100 сек. (п=19). Однако эти различия были не достоверны.
