Содержание к диссертации
Введение
Глава 2. Обзор литературы 7
2.1. Современные представления о легионеллезной инфекции и её возбудителе 7
2.1.1. Современные представления о легионеллезной инфекции 7
2.1.2 Общая характеристика легионелл 13
2.2. Особенности экологии легионелл и их значение в распространении легионеллеза 17
2.2.1. Взаимодействие легионелл с простейшими и другими микроорганизмами 18
2.2.2. Биопленки легионелл 19
2.3. Методы выявления и идентификации легионелл в объектах окружающей среды 22
2.3.1. Бактериологический метод выделения легионелл 22
2.3.2. Другие методы выявления легионелл в объектах окружающей среды. 25
2.3.3. Методы идентификации и типирования легионелл 26
Глава 3. Материалы и методы 33
3.1. Использованные в работе штаммы легионелл 33
3.2. Методы культивирования легионелл 34
3.3. Получение биоплёнок 36
3.3.1. Получение биоплёнок легионелл 36
3.3.2. Получение биоплёнок других микроорганизмов 37
3.4. Бактериологическое выделение легионелл 38
3.5. Определение легионелл методом ПЦР-РВ 41
3.5.1. Определение легионелл с помощью тест-системы Кванти Legionella
spp. и Кванти Legionella pneumophila 41
3.5.2. Определение легионелл с помощью тест-системы АМПЛИЛЕГ-РВ 44
3.6. Определение чувствительности легионелл к действию дезинфицирующих препаратов 46
3.7. Статистические методы обработки результатов 47
Глава 4. Результаты 48
4.1. Выделение легионелл из объектов окружающей среды 48
4.2. Выявление легионелл в объектах окружающей среды с помощью ГЩР в реальном времени 51
4.2.1. Отработка методики ГЩР в реальном времени в модельных системах 51
4.2.2. Применение ГЩР в реальном времени для выявления легионелл в воде и биоплёнках потенциально опасных водных систем 54
4.3. Формирование биопленок легионелл 60
4.3.1. Формирование моновидовых биоплёнок легионелл 60
4.3.2. Биоплёнки легионелл в ассоциации с другими микроорганизмами...
65
4.4. Изучение эффективности действия дезинфицирующих препаратов на легионеллы 66
4.4.1. Изучение действия дезинфицирующих препаратов на модели биопленок легионелл 66
4.4.2. Изучение действия препарата «СаносилСупер 25» на легионеллы в градирне промышленного предприятия 69
Глава 5. Обсуждение 71
Глава 6. Выводы 82
Список литературы 83
- Современные представления о легионеллезной инфекции и её возбудителе
- Взаимодействие легионелл с простейшими и другими микроорганизмами
- Использованные в работе штаммы легионелл
- Выявление легионелл в объектах окружающей среды с помощью ГЩР в реальном времени
Введение к работе
Легионеллезная инфекция известна уже более 30 лет и достаточно хорошо разработаны методы её диагностики и лечения, однако возбудитель по-прежнему представляет существенную угрозу общественному здоровью, вызывая крупные эпидемические вспышки с летальными исходами в различных странах мира. Среди наиболее заметных эпидемических вспышек легионеллеза, например в Голландии в 1999г (188 случаев, 16 летальных), Австралии 1999 г. (98/9), Испании 2002 г. (470/9), Франции 2004 г. (86/16), Норвегии 2005 г. (55/10), свое место заняла и эпидемическая вспышка легионеллеза в Российской Федерации - г. Верхняя Пышма в 2007 г., во время которой заболели 127 человек, при этом зарегистрировано 5 летальных исходов (2).
Легионеллы широко распространены в природных водоёмах, где они паразитируют в организме водных амёб и не представляют существенной опасности для человека. В инженерно-технических сооружениях связанных с циркуляцией воды (поверхности труб и оборудования систем водоснабжения, градирен, систем кондиционирования и увлажнения воздуха), концентрация легионелл резко возрастает, за счёт образования биоплёнок, что является ключевым фактором накопления потенциально опасных концентраций возбудителя (9). В сочетании с возможностью аэрогенного распространения или аспирации возбудителя, возникает угроза возникновения эпидемии легионеллеза (обычно возникают в местах массового скопления людей). Сочетание высокой концентрации легионелл в водной среде с источниками мелкодисперсного аэрозоля, позволяет возбудителю инфекции проникать в нижнюю часть респираторного тракта и легкие человека, где происходит контакт с альвеолярными макрофагами, в которых легионеллы активно размножаются.
Сложность количественной оценки легионелл в сочетании с высокой устойчивостью к дезпрепаратам в перечисленных водных объектах создают существенные трудности в оценке потенциальной опасности данных систем и проведении профилактических мероприятий. В этом отношении, экспериментальное изучение процесса образования биоплёнок и анализ эффективности на данной модели различных методов ускоренного выявления возбудителя и оценка действия дезинфекционных средств является одним из наиболее перспективных подходов.
Цель и задачи исследования
Цель работы: разработать методы выявления и количественного определения легионелл в потенциально опасных водных системах и модельных биопленках.
Задачи исследования:
1. Получить коллекцию отечественных штаммов легионелл, выделенных из потенциально опасных водных объектов окружающей среды.
2. Разработать и внедрить в практику алгоритм количественного выявления легионелл в модельных и природных образцах воды и биопленок с помощью сочетания бактериологического метода и ПЦР в реальном времени.
3. Изучить способность к формированию биопленок у различных видов и штаммов легионелл при различных условиях культивирования, выявить различия в способности к образованию биопленок у разных штаммов легионелл.
4. Изучить способность легионелл к персистенции в ассоциативных биопленках, образованных другими микроорганизмами.
5. Разработать методику оценки действия дезинфекционных средств. Изучить эффективность действия различных дезинфекционных препаратов против легионелл на модельных биопленках и в водных системах.
Научная новизна работы:
- Создана коллекция отечественных штаммов легионелл, выделенных из потенциально опасных водных объектов окружающей среды (градирни промышленных предприятий, система автономного и городского водоснабжения, бассейн).
- Впервые разработан алгоритм выявления легионелл в потенциально опасных водных системах, основанный на сочетании ПЦР в реальном времени и бактериологических методов.
- Впервые выявлен различный уровень способности штаммов легионелл к формированию моновидовых биопленок.
Разработаны методические подходы к оценке действия дезинфицирующих препаратов на легионеллы на модели биопленок и в водных системах.
Практическая значимость работы:
• Разработанный алгоритм определения легионелл в водных системах и биопленках на основе скрининга с помощью ПЦР-РВ, с последующим бактериологическим подтверждением, включен в качестве базового метода в методические указания Роспотребнадзора МУК 4.2.2217-07. «Выявление бактерий Legionella pneumophila в объектах окружающей среды».
• Разработана методика определения эффективности действия дезинфекционных препаратов на модельных биопленках легионелл.
Материалы диссертации доложены на IX съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, апрель 2007); 22 и 23 конференции Европейской рабочей группы по легионеллезу (Лиссабон, 2006; Стокгольм, 2007); 18 конгрессе Европейского респираторного общества (Берлин, 2008).
Современные представления о легионеллезной инфекции и её возбудителе
Легионеллезная инфекция известна уже более 30 лет. Достаточно хорошо изучены различные аспекты биологии и экологии возбудителя, разработаны методы диагностики и лечения. Тем не менее, легионеллы представляют существенную угрозу общественному здоровью, вызывая крупные эпидемические вспышки в различных странах мира с высоким процентом летальных исходов (5-20%). Более того, за последние годы значительный интерес к проблеме легионеллеза не только сохранился, но и постоянно растет во всем мире. Хотя в целом уровень заболеваемости легионеллезом относительно, например, пневмококковой инфекции невелик, многочисленные спорадические и групповые случаи, десятки эпидемических вспышек регулярно выявляют в различных странах мира. Наиболее типичные примеры последних лет: крупная эпидемия среди посетителей выставки цветов в Голландии (1999г.), во время которой заболели 188 человек, из них 16 умерли; дельфинарий в Австралии (1999г.) - 98 заболели и 9 умерли; микрорайон в г. Мурсия, Испания (2002г.) — 470 случаев, из них 9 летальных; промышленные предприятия во Франции (2004г.) - 86/16, Норвегии (2005г.) - 55/10 соответственно (8, 66, 70). На территории Российской Федерации первые случаи легионеллеза описаны еще в 1979 г. (3, 4, 5). В июле 2007г. была зарегистрирована крупная вспышка легионеллеза в Свердловской области - г. Верхняя Пышма, во время которой заболели 127 человек, 5 из них умерли (2).
Возбудитель легионеллеза - Legionella pneumophila, как и другие виды семейства Legionellaceae (более 50 видов, большая часть которых является сапрофитами и не представляет опасности для человека), широко распространены в природе обитая в пресноводных водоемах, где они паразитируют в водных амебах и других простейших (8, 23). Размножение легионелл активно идет в теплой воде в диапазоне температур 20 - 45С, хотя их выделяют и из холодной воды. Условия для выживания легионелл в искусственных сооружениях более благоприятны, чем в естественных, что ведёт к накоплению в них возбудителя в высоких концентрациях. Легионеллы активно колонизуют синтетические и резиновые поверхности водопроводного, промышленного, медицинского оборудования с образованием так называемых биопленок, в которых легионеллы значительно более устойчивы к действию дезинфицирующих веществ по сравнению с планктонными формами (23, 37, 104). При колонизации легионеллами искусственных водных систем, к которым относятся системы горячего и холодного водоснабжения, централизованные системы кондиционирования воздуха с водным охлаждением, градирни, вихревые бассейны и джакузи массового пользования в аквапарках и спортивно-восстановительных центрах, увлажнители воздуха, фонтаны и т. д. концентрация легионелл значительно возрастает и возникает возможность возникновения заболевания. Так, при эпидемиологическом расследовании 49 внебольничных вспышек легионеллеза зарегистрированных в Европе в 2003 -2004 гг., в 16 случаях причиной вспышек явилась контаминация легионеллами градирен, в 4 - систем горячего и холодного водоснабжения, в 3 -контаминация джакузи и в 26 случаях источник инфекции установить не удалось.
Наиболее распространенный фактор передачи легионеллезной инфекции - мелкодисперсный аэрозоль, контаминированный легионеллами. Капли водного аэрозоля диаметром менее 5 микрон легко проникают в нижнюю часть респираторного тракта и далее в альвеолы легких, где вирулентные штаммы легионелл активно размножаются в альвеолярных макрофагах, вызывая острую тяжелую пневмонию.
Альтернативным путем передачи является аспирация контаминированной водопроводной воды. В связи с тем, что температура воды в системе горячего водоснабжения в большинстве Европейских стран и США не превосходит 50С и крайне благоприятна для размножения возбудителя, все большее количество спорадических и групповых случаев легионеллеза связывают с аспирацией водопроводной воды (32, 102).
При анализе эпидемических вспышек с аэрозольным путем передачи показано, что болезнь легионеров (легионеллезная пневмония) развивается у 5-10% лиц, находившихся в зоне действия аэрозоля. Вторая, более редкая клиническая форма легионеллеза - лихорадка Понтиак (острое респираторное заболевание) поражает 80 - 100% таких лиц.
Легионеллез выявляют, как правило, у лиц среднего и пожилого возраста на фоне действия таких факторов риска как курение, злоупотребление алкоголем, сопутствующие заболевания, в первую очередь диабет и сердечнососудистые заболевания; иммуносупрессивная терапия, первичные и вторичные иммунодефициты. В то же время легионеллезная инфекция, включая тяжелые формы заболевания, может возникать и у ранее совершенно здоровых людей. У детей легионеллез выявляют редко, обычно на фоне сопутствующих заболеваний. Болезнь легионеров чаще поражает мужчин, чем женщин (соотношение заболевших составляет два-три к одному) (26, 32).
Особенностью эпидемиологии легионеллезной инфекции является выделение трех основных групп, по характеру приобретения, заболевания: внебольничная пневмония, внутрибольничная (нозокомиальная) инфекция и легионеллез, связанный с поездками, путешествиями (travel-associated legionellosis). Характер приобретения легионеллезной инфекции обязательно учитывается при статистическом анализе выявленных случаев в Европейских странах и США. Так, из 4452 случаев зарегистрированных Европейской рабочей группой по легионеллезу в 2003 г.: 2106 отнесены к группе внебольничой пневмонии, 347 - к нозокомиальной инфекции, 927 -легионеллез, связанный с поездками, путешествиями. В 1072 случаях группа не была определена
Взаимодействие легионелл с простейшими и другими микроорганизмами
Важнейшим фактором успешного выживания легионелл в природных условиях является их существование в составе биопленок. В пробах биопленок из водопроводных труб и систем промышленного охлаждения количество легионелл всегда гораздо выше, чем в пробах воды, что свидетельствует о выраженной ассоциированности этих микроорганизмов с биопленками (94).
Понятие о биопленках, как о своебразных сообществах микроорганизмов, было введено еще И.И. Мечниковым, однако последовательное систематическое изучение биопленок началось сравнительно недавно. В общем виде биопленка представляет собой сбалансированное по видовому составу сообщество микроорганизмов (биоценоз), в котором присутствует определенное распределение функций между различными микроорганизмами (13). Биопленки являются неотъемлемой частью организма человека: они присутствуют в ротовой полости, просвете кишечника, сосудов и т.д.
Биопленки широко представлены в природных водоемах, а также в искусственных водных системах. Они формируются на внутренних поверхностях труб систем водоснабжения, фильтрации и очистки воды, в системах кондиционирования воздуха, подводных сооружениях и т.д. Биопленка представляет собой совершенно особую экологическую нишу, являющуюся чрезвычайно благоприятной средой для размножения микроорганизмов, так как формирующийся полисахаридный слой (гликокаликс) в совокупности с другими продуктами жизнедеятельности микроорганизмов образует матрикс биопленки, обеспечивающий бактериям защиту от неблагоприятных факторов окружающей среды. Предполагается, что при формировании биопленок у многих бактерий происходит переключение систем метаболизма от свободноживущего к организованному, «общественному» образу жизни, при этом наблюдается обмен химическими сигналами между микроорганизмами в пределах одного вида и между видами (10). Клетки легионелл в составе биопленок морфологически значительно отличаются от «планктонных» (свободно плавающих клеток), а также от клеток, выращенных на питательных средах (88).
В виде биопленок бактерии хорошо защищены от неблагоприятных влияний, химических и биологических факторов окружающей среды. Так, известно, что обычные способы дезинфекции воды в системах водоснабжения жилых домов, больниц и т.д. с помощью свободного хлора практически неэффективны против легионелл, находящихся в составе биопленок (79, 98). Огромной проблемой является формирование биопленок из патогенных бактерий, в том числе легионелл в резиновых и пластмассовых дренажных трубках, катетерах, других изделиях, применяемых в хирургии, а также в системах водоснабжения и водоотведения стоматологических установок (12, 35, 109). Наилучшие результаты при дезинфекции систем водоснабжения с биопленками были получены при использовании диоксида хлора, однако при этом ряд компонентов биопленок, и, прежде всего амебы, слабо подвергались действию препарата (74, 105).
Изучение проблем образования биопленок легионеллами должно в итоге дать ответы на ряд важнейших вопросов эпидемиологии и профилактики легионеллеза, а также выявить основные факторы, влияющие на колонизацию систем водоснабжения легионеллами.
Исследованиеие биопленок во многом сдерживается методическими трудностями: модельные системы предоставляют хорошие возможности для мониторинга большинства факторов, включая скорость потока воды, температуру, содержания химических веществ и т.д., однако, естественно, не воспроизводят природные условия. С другой стороны, исследования в естественной среде не позволяют идентифицировать все компоненты биопленки и контролировать ряд факторов (38). Среди компонентов естественных биопленок, помимо легионелл, были идентифицированы многочисленные виды рода Pseudomonas, прежде всего P.aerginosa, а также
Actinomycetes spp, Aeromonas spp, Alcaligenes spp, Klebsiella spp, Acinetobacter spp (94).
Результатами ряда исследований было показано, что скорость формирования биопленки и количество легионелл в трубах, изготовленных из меди и нержавеющей стали в начале эксплуатации (на протяжении нескольких недель) были существенно ниже, чем в трубах, изготовленных из других материалов. По истечении 12 месяцев (что, очевидно, связано с формированием и стабилизацией биопленки, а также образованием окислов металлов) различия уже не регистрировались, за исключением резиновых и полиэтиленовых труб, в которых толщина биопленки была намного больше (94, 108). По-видимому, при долгосрочном применении материал труб (медь, сталь, или поливинилхлорид) не играет существенной роли в степени колонизации систем легионеллами (108). Окрашивание труб изнутри серебросодержащей краской также не имело долгосрочного положительного эффекта (95).
Достаточно противоречивыми являются результаты исследований о влиянии скорости потока воды на плотность колонизации систем водоснабжения легионеллами. Длительное время считалось, что застой теплой воды способствует ускоренному формированию биопленок и успешному размножению легионелл, на основе чего при обслуживании систем водоснабжения рекомендовались периодические продувки систем горячей водой, а также ликвидация всех «слепых» участков трубопроводов. В ряде недавних публикаций на основе данных экспериментов в модельных системах, напротив, было продемонстрировано, что в системах с турбулентными потоками воды степень колонизации легионеллами была наибольшей, а в трубах со стоячей водой - наименьшей (72). Таким образом, данная проблема требует дальнейших исследований.
Использованные в работе штаммы легионелл
Все штаммы легионелл выращивали на плотной агаризованной среде буферный угольно-дрожжевой агар (БУДРАГ, BCYEa) с ростовой и селективной добавкой («Oxoid») при 37С в течение 72ч., также в качестве ростовых добавок применяли L-цистеин 400мг/л (Япония) и пирофосфат железа растворимый 250мг/л («Sigma») приготовленные в условиях лаборатории. Для выращивания легионелл в жидкой среде использовали Proteose-Pepton №3 («Difco») с добавлением L-цистеина, инкубировали на круговой качалке при 37С в течение 72ч. Среды промышленного производства готовили в соответствии с прописями на этикетке. В условиях лаборатории среды готовили по следующей схеме: Компоненты основы среды БУДРАГ (на 1 литр): Дрожжевой экстракт - 10,0 г Агар - 13,0 г Активированный уголь - 2,0 г а-кетоглютаровая кислота, калийная соль - 1,0г ACES-буфер (г4-2-ацетамидо-2-аминоэтан-сульфанильнаякислота, РК=6,9 при20С)-10г 1 М КОН - 40 мл глицин - 3 г Компоненты ростовой добавки (на 1 литр): L-цистеин - 0, 40 г Пирофосфат железа растворимый - 0,25 г Компоненты селективной добавки (на 1 литр): Полимиксин В - 80 000 ед. Ванкомицин - 5 мг Циклогексимид - 80 мг
К навеске ACES- буфера добавляли 500 мл дистиллированной воды и выдерживали на водяной бане при 50С, помешивая до полного растворения. К 440 мл дистиллированной воды добавляли 40 мл 1 М КОН и осторожно смешивали с первым раствором. Полученным раствором заливали смесь навесок дрожжевого экстракта, агара, активированного угля, кетоглютаровои кислоты и глицина и выдерживали на водяной бане при 50С, помешивая до полного растворения всех компонентов. Среду автоклавировали 15 минут при 121С, охлаждали до 50С, после чего добавляли стерильные компоненты ростовой и селективной добавки. Навески L-цистеина и пирофосфата железа растворимого растворяли в 10 мл дистиллированной воды каждую, стерилизовали фильтрацией через мембранный фильтр и добавляли в среду.
Концентрированные растворы антимикробных препаратов также добавляли в среду до требуемой конечной концентрации.
Конечное значение рН среды - 6,95 ±0,02. Среду разливали в стерильные чашки Петри по 25мл и подсушивали в термостате при 36С в течение часа. Среда имеет характерный черно-серый цвет.
В качестве контрольной среды, не поддерживающей рост легионелл, использовали среду БУДРАГ без добавления селективной и ростовой добавки. Для пересева колоний легионелл и дальнейшего культивирования, использовали среду БУДРАГ с ростовой, но без селективной добавки.
Для изучения способности легионелл к формированию биопленок использовали 26 штаммов 10 видов Legionella spp. из коллекции лаборатории легионеллеза ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН, в том числе свежевыделенные штаммы из объектов окружающей среды в Российской Федерации.
Бактериальные культуры выращивали в протеозопептонном бульоне (Difco) или на агаре BCYEa (Oxoid) с добавлением L-цистеина и водорастворимой формы пирофосфата железа при 37С в течение 72 ч.
В качестве вирулентной культуры использовали штамм L.pneumophila, Philadelphia 1 (LD5o для морских свинок не более 105 КОЕ). Тестирование всех штаммов легионелл на способность формировать биопленки проводили в 96луночных плоскодонных пластиковых планшетах для иммуноферментного анализа (Costar). Выращенные в бульоне культуры тестируемых штаммов разводили свежей питательной средой 1:10. Полученные суспензии стерильно вносили по 150 мкл в лунки планшет (по 4 лунки для каждого штамма).
Выявление легионелл в объектах окружающей среды с помощью ГЩР в реальном времени
Для отработки метода выделения мы провели ряд модельных экспериментов. В качестве образцов для исследования использовали: 1. Различные разведения смеси культур Legionella pneumophila и Legionella micdadei; 2. Модельные монобиопленки культур Legionella pneumophila штамм Philadelphia 1; Legionella pneumophila штамм BLR-05; Legionella dumoffi; Legionella longbeachae. Были приготовлены водные образцы объемами 1 мл, 100мл и 500 мл, сто содержащие 10 , 10 , 10 КОЕ различных культур L. pneumophila и L.micdadei для каждого варианта объема. Кроме того, был приготовлен аналогичный набор образцов L.pneumophila, в каждом из которых содержалось 105КОЕ L.micdadei. Выделение ДНК в эксперименте с модельными биоплёнками 4х видов легионелл проводили также из 1 мл, предварительно сконцентрировав фильтрацией образцы объемом 100 мл и 500 мл. Фильтрацию образцов проводили параллельно через поликарбонатные и нитроцеллюлозные фильтры, используя при этом различные методики снятия биомассы с фильтра и последующего лизиса клеток. Фильтры с осаждённой биомассой помещали в пробирки и обрабатывали тремя способами (рис 2): в пробирку добавляли Змл чистой воды, снимали биомассу с фильтра механически, интенсивно встряхивая на вортексе, из полученного концентрата брали 1мл для выделения ДНК. в пробирку добавляли Змл чистой воды, снимали биомассу с фильтра механически, интенсивно встряхивая на вортексе, из полученного концентрата брали 1мл и готовили лизат (при 195С в течение 15 минут), помещали фильтр в пробирку, содержащую 1мл лизирующего буфера. Ю5 (ЮЗ, Ю2):
По результатам экспериментов чувствительность системы АМПЛИ-ЛЕГ-РВ составила для L.pneumophila: 10 /500 мл и 107100 мл - при использовании поликарбонатных фильтров и 10 /500 мл, 10/100 мл - при использовании нитроцеллюлозных фильтров. Для L.micdadei чувствительность составила 107500 мл в реакции определения родоспецифического маркера - ДНК гена 16S рРНК Legionella spp., в реакции определения видоспецифического маркера Legionella pneumophila - ДНК гена тір результат был отрицательный. Анализ экспериментальных биопленок также подтвердил видоспецифичность тест-системы при определении ДНК гена тір и родоспецифичность при определении ДНК гена 16S рРНК.
По чувствительности и специфичности разработанная тест-система при исследовании вышеуказанных модельных образцов не отличалась от тест-систем Кванти Legionella spp. и Кванти Legionella pneumophila BIO-RAD.
Метод позволяет количественно определять моноспецифические биопленки вида L. pneumophila {Philadelphia 1 и BLR-05) и высокоспецифично дифференцировать их от биопленок других видов легионелл (L.dumoffi и L.longbeachae) (табл. 5).
Далее метод ПЦР-РВ был использован нами для определения легионелл при профилактическом мониторинге централизованной системы кондиционирования воздуха (табл. 7), автономной системы водоснабжения используемой в полевых условиях (табл. 8), градирен промышленного предприятия (таблл. 9,10).
Полученные результаты свидетельствовали об удовлетворительной корреляции результатов ПЦР-РВ и бактериологического метода. Концентрация легионелл определяемая с помощью ПЦР-РВ (количество геномных копий на литр) в некоторых образцах превышала концентрацию легионелл, выявляемую бактериологически (КОЕ на литр) на порядок. Данный феномен может быть объяснен естественным содержанием в соответствующих экосистемах планктонных форм легионелл, выявляемых как с помощью ПЦР-РВ, так и бактериологически, и некультивируемых форм легионелл, выявляемых только с помощью ПЦР-РВ (23).
При обследовании автономной системы водоснабжения, используемой при разведке нефтегазовых месторождений, выявлена контаминация системы Legionella pneumophila (табл. 8). Возбудитель в течение 2х лет выявляли в системе холодного (горячего) водоснабжения при температуре 25-30С с помощью ПЦР-РВ и бактериологии. Отсутствие бактериологического выделения возбудителя при достаточно высоком числе геномных копий Legionella pneumophila в образцах воды из системы горячего водоснабжения, по-видимому, связано с амплификацией ДНК мертвых клеток легионелл после нагревания воды в котельной. Выявление возбудителя в холодной воде в концентрации, превышающей 10 КОЕ/литр, требует проведения профилактических мероприятий или замены оборудования, используемого в системе автономного водоснабжения.
Обследование градирен промышленного предприятия проводилось нами в декабре 2007г. (табл. 9) и в июне 2008г. (табл. 10). При обследовании градирен промышленного предприятия выявлена устойчивая контаминация Legionella pneumophila всего объекта, требующая применения профилактических мероприятий на предприятии. При обследовании градирен на наличие легионелл исследовались также образцы биопленок (поверхностные наросты зеленовато-коричневатого цвета) на чашах градирен или рядом с ними.
![Конструирование и внедрение в практику генодиагностической тест-системы для выявления ДНК возбудителя сибирской язвы [Электронный ресурс]](/i/i/4289/212277.png "Конструирование и внедрение в практику генодиагностической тест-системы для выявления ДНК возбудителя сибирской язвы [Электронный ресурс] Тучков Игорь Витальевич")
