Введение к работе
Актуальность проблемы. В начале XXI столетия сепсис по-прежнему остается одной из самых нерешенных проблем современной медицины вследствие неуклонной тенденции к росту количества больных и стабильно высокой летальности (Б.Р.Гельфанд, ВАРуднов и др., 2004 г.).
Известно, что в расшифровке этиологической структуры бактериемии, сепсиса и установлении диагноза ведущую роль играют лабораторные исследования. Обнаружение микробов в крови расценивается как решающий диагностический критерий, т.к. определение точного диагноза, а в дальнейшем и эффективная терапия, могут быть осуществлены только при выделении гемокультуры.
Микробиологические исследования крови требуют обеспечения лабораторной службы страны стандартными высококачественными питательными средами. Однако отечественная промышленность не выпускает питательных сред для накопления и выделения гемокультуры, поэтому каждая лаборатория самостоятельно готовит питательные среды для посевов крови. Это не дает возможности унифицировать и стандартизировать исследования, а также получать сопоставимые результаты. К недостаткам сред лабораторного приготовления относят также образование сгустка фибрина при посеве крови в питательную среду, отсутствие инактиваторов бактерицидных субстанций крови, узкий перечень выделяемых микроорганизмов, длительные сроки инкубации посевов и низкий процент высеваемости гемокультур (Бадиков В.Д.и др. 1998 г., Ребенок Ж.А., 2005 г.).
В методических рекомендациях по диагностике и терапии сепсиса (2004 г.) предлагается исключить использование сред лабораторного приготовления,
заменив их средами промышленного производства.
**ОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ I БИБЛИОТЕКА "J
Зарубежные фирмы («Oxoid», «bio-Merieux» и др.) для выделения гемокультур выпускают во флаконах коммерческие питательные среды, готовые к употреблению. Аналогичных питательных сред отечественная промышленность не производит.
В связи с вышеизложенным разработка отечественных питательных сред промышленного производства для выделения гемокультуры представляется весьма актуальной.
Цель работы: разработка и экспериментально-клиническое изучение двухфазной питательной среды для выделения гемокультуры.
Задачи исследования:
разработать рецептуру жидкой питательной среды обогащения для гемокультуры с учетом физиологических потребностей основных клинически значимых возбудителей бактериемии и сепсиса (жидкая фаза);
определить в жидкой питательной среде обогащения чувствительность, скорость роста и накопительный эффект микроорганизмов;
разработать оптимальный состав плотной питательной среды для использования еб в качестве твёрдой фазы при конструировании двухфазной среды;
изучить чувствительность твердой фазы и скорость роста тест-штаммов на ней;
разработать экспериментально-производственную технологию серийного выпуска двухфазной питательной среды для выделения гемокультуры;
определить целевые биологические свойства разработанной двухфазной среды в модельных опытах;
изучить биологические свойства двухфазной питательной среды для выделения гемокультуры с использованием клинического материала;
предложить схему бактериологического исследования крови с использованием двухфазной питательной среды для выделения гемокультуры.
Научная новизна
Научно обоснован и экспериментально апробирован состав новой среды обогащения для гемокультур. Разработанная среда обеспечивала высокую скорость роста, а также накопление при минимальных концентрациях клинически значимых возбудителей бактериемии и сепсиса. Получено положительное решение по заявке № 2003119514/13 (020615) о выдаче патента на среду обогащения для выделения гемокультур.
На основе сконструированной среды обогащения впервые создана двухфазная питательная среда, увеличивающая высеваемость микроорганизмов в 2 раза при ускорении роста гемокультур на 18-20 ч. Получено положительное решение по заявке № 2003137242/13 (039884) о выдаче патента на двухфазную среду для микробиологического исследования крови.
Практическая значимость
Впервые в России разработана и апробирована на производстве предприятия НПО «Питательные среды» ФГУП НПО «Микроген» МЗ и СР РФ двухфазная питательная среда для выделения гемокультуры.
Внедрение среды в практику позволит обеспечить лабораторную службу страны стандартными препаратами для бактериологического исследования крови и будет способствовать снижению межлабораторных вариаций результатов исследований, сокращению времени проведения анализа и установления диагноза при подозрении на бактериемию и сепсис.
Основные положения, выносимые на защиту:
1.Научно обоснована, создана и апробирована отечественная промышленная технология изготовления двухфазной питательной среды для выделения гемокультуры.
2. С использованием широкого набора музейных и свежевыделенных микроорганизмов доказана диагностическая ценность впервые разработанной коммерческой двухфазной питательной среды для выделения гемокультуры. Апробация работы
Материалы диссертации доложены и обсуждены на Международном конгрессе «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс и проблемы» (СПб, 2003г.), на 4 Международной научно-практической конференции «Разработка производство стандартизация микробиологических питательных сред и тест-систем» (Махачкала, 2003 г.), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов» (Томск, 2004 г.).
Диссертационная работа апробирована на Межинститутской научной конференции Дагестанского научного центра РАМН, филиала ФГУП «Микроген» МЗ и СР РФ в г. Махачкале НПО «Питательные среды» и Дагестанской Государственной медицинской академии (кафедра микробиологии, вирусологии с иммунологией), Махачкала, 2005 г. Публикации
По теме диссертации опубликовано 7 работ, в том числе 3 в центральной печати. Объем и структура диссертации
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 140 источников отечественных и зарубежных авторов, и приложения. Работа
7 изложена на 128 страницах машинописного текста, содержит 29 таблиц и 14 рисунков.
