Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ, До настоящего времени туберкулез остается важной медико-биологической и социальной проблемой. К началу 60-х годов сложилось ошибочное мнение о туберкулезе как об исчезающей болезни. Однако этот прогноз не оправдался. За последние 20 лет в мире не произошло существенного снижения заболеваемости ни в России, ни во всем мире [Шилова М.В., 2001].
Несмотря на успехи в разработке и применении новых противотуберкулезных препаратов и использовании утвержденных схем лечения и регламентированных способов оценки эффективности лечения, в мире увеличиваются случаи рецидивов туберкулеза. Реактивация туберкулезного процесса может быть следствием подавления иммунной системы при развитии иммунодефицишых состояний различной этиологии (ВИЧ-инфекция, прием иммуносупрессоров) или развиться в ходе естественного старения организма. Реактивация туберкулезного процесса может бьпъ следствием неправильного лечения заболевания. В любом случае, в основе реактивации туберкулеза лежит сохранение в организме метаболически неактивных форм микобактерий, которые при определенных условиях могут перейти в активно размножающиеся формы. Выживание возбудителя в макроорганизме, благодаря его широкой изменчивости, и персистенция микобактерий представляет потенциальную опасность развития эндогенной реактивации и клинически выраженного туберкулезного процесса на протяжении всей жизни человека [Дорожкова И.Р., Крупу В.Н., Попеску Т.Т., 1990; Земскова З.С, Дорожкова И.Р, 1984, Дорожкова И.Р, 1974].
Так как выявление некультивируемых форм микобактерий невозможно традиционными бактериологическими методами, для адекватной оценки эффективности противотуберкулезной химиотерапии необходимо использовать более тонкие методы, выявляющие генетический материал М. tuberculosis. Молекулярно-генетические методы позволяют провести идентификацию, типирование и определение лекарственной чувствительности возбудителя прямо из диагностического материала, таким образом расширить представление о реактивации туберкулеза при химиотерапии.
2 ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящего исследования явилась
молекулярно-генетическая оценка эффективности противотуберкулезной
химиотерапии при экспериментальном туберкулезе. ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
1. На экспериментальной модели хронической туберкулезной
инфекции при внутривенном заражении М.tuberculosis H37Rv в дозе 2,5х104
КОЕ мышей линии BALB/C провести ПЦР на выявление ДНК М.tuberculosis
в паренхиматозных органах и крови.
Провести бактериологические, цитологические и молекулярно-генетические исследования экспериментального туберкулеза при лечении двумя препаратами (изониазидом и пиразинамидом) и возникновении реактивации туберкулезного процесса.
Провести типирование по RFLP IS6110 штамма М.tuberculosis H37Rv, использованного для заражения мышей и штаммов микобактерий, полученных на разные сроки лечения и реактивации туберкулезного процесса.
4. Провести сравнение результатов бактериологических,
цитологических и молекулярно-генетических исследований, полученных при
лечении экспериментального туберкулезного процесса изониазидом и
пиразинамидом и при включении в схему химиотерапии рифампицина.
5. Изучить спектр лекарственной чувствительности штаммов
М.tuberculosis на все сроки эксперимента бактериологическим и
молекулярно-генетическим методами.
Показано, что при экспериментальной туберкулезной инфекции ДНК М.tuberculosis выявляется не только в паренхиматозных органах, но и в крови зараженных животных.
В Корнелловской модели реактивированного туберкулеза доказан эндогенный характер реактивации процесса.
Экспериментально доказано, что предотвращение реактивации экспериментального туберкулезного процесса связано не с продолжительностью химиотерапии, а с комбинацией противотуберкулезных препаратов, использующихся для лечения.
Показано, что штаммы микобактерий туберкулеза, полученные в результате эндогенной реактивации, сохраняли чувствительность к
противотуберкулезным препаратам исходного штамма М. tuberculosis H37Rv, использованного для заражения мышей.
