Содержание к диссертации
Введение 6
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 .Микрофлора желудочно-кишечного тракта человека в норме и
патологии 12
1.1.1. Состав, роль и становление нормальной микрофлоры
желудочно-кишечного тракта детей 12
1.12.Микробиологические аспекты дисбактериоза 16
Методы лабораторной диагностики и критерии дисбактериоза кишечника 22
Основные подходы, применяемые для коррекции
дисбактериоза кишечника у детей 24
1.3.1.Пробиотики - биологические препараты для коррекции
микрофлоры кишечника человека 24
Влияние пробиотикое, содержащих облигатную микрофлору, на микробиоценоз кишечника 33
Влияние пробиотикое — самоэлиминирующихся антагонистов на микробиоценоз кишечника 39
Иммуномодулирующая эффективность пробиотикое 42
Клиническая эффективность пробиотикое 44
1.3.6. Эффективность нитрофуранов при коррекции
микроэкологических нарушений кишечника 45
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Объекты исследований 50
Микробиологический анализ кала на дисбактериоз кишечника 53
Идентификация энтеробактерий 55
Идентификация стафилококков 55
Идентификация энтерококков 56
Идентификация дрожжеподобных грибов рода Candida 56
Идентификация бифидобактерий 56
Идентификациялактобактерий 57
Идентификация клостридий 57
Критерии оценки эффективности коррекции дисбактериоза 58
Определение показателя постоянства вида и показателя склонности к совместному обитанию микроорганизмов 59
Статистическая обработка полученных результатов 60
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Особенности микроэкологических нарушений при
дисбактериозе кишечника у детей разных возрастных групп 62
Особенности микроэкологических нарушений при дисбактериозе кишечника у детей первого года жизни 62
Особенности микроэкологических нарушений при дисбактериозе кишечника у детей в возрасте от 1 до 3 лет 66
3.2. Коррекция дисбактериоза кишечника у детей пробиотиками -
самоэлиминирующимися антагонистами и нитрофуранами 69
3.2.1 Эффективность пробиотиков - самоэлиминирующихся
антагонистов при коррекции дисбактериозов кишечника у детей 70
Эффективность препаратов «Бактисубтил» и «Энтерол» при коррекции дисбактериозов кишечника у детей первого года жизни 70
Эффективность препаратов «Бактисубтил» и «Энтерол» при
коррекции дисбактериозов кишечника у детей в возрасте от 1 до 3 лет 74
3.2.2. Эффективность нитрофуранов при коррекции
дисбактериозов кишечника у детей 79
Эффективность препаратов «Фуразолидон» и «Эрсефурил» при коррекции дисбактериозов кишечникау детей первого года жизни 80
Эффективность препаратов «Фуразолидон» и «Эрсефурил» при коррекции дисбактериозов кишечника у детей в возрасте от 1 до 3 лет 90
4
3.2.3. Сравнительная оценка эффективности пробиотиков и нитрофуранов
при коррекции дисбактериозов кишечника у детей 97
Сравнительная оценка эффективности пробиотиков и нитрофуранов при коррекции дисбактериозов кишечника у детей первого года жизни 98
Сравнительная оценка эффективности пробиотиков и нитрофуранов при коррекции дисбактериозов кишечника у детей в возрасте
от 1 до 3 лет 108
3.3. Эффективность препаратов, содержащих микроорганизмы облигатной
микрофлоры, при коррекции дисбактериозов кишечника у детей 117
3.3.1. Эффективность препаратов «Бифидумбактерин сухой» и
«Бифидобак» при коррекции дисбактериозов кишечника у детей
первого года жизни 118
3.3.2. Эффективность препаратов «Бифидумбактерин сухой»,
«Бифидобак», «Линекс», «Бификол сухой» и «Санта-Русь» при коррекции
дисбактериозов кишечника у детей в возрасте 1 до 3 лет 122
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
Анализ микроэкологических нарушений при дисбактериозе кишечника у детей разных возрастных групп 129
Особенности коррекции пробиотиками и нитрофуранами
дисбактериозов кишечника у детей 137
ВЫВОДЫ 149
ЛИТЕРАТУРА 153
Приложение 189
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ДК — дисбактериоз кишечника ЖКТ — желудочно-кишечный тракт КОЕ — колониеобразующих единиц КР — колонизационная резистентность НМК — нарушения микробиоценоза кишечника ОМФ — облигатная микрофлора ОКИ — острые кишечные инфекции ТК — толстая кишка
УПМ — условно-патогенные микроорганизмы УПЭ — условно-патогенные энтеробактерии ГОБ — грамотрицательные бактерии БАД — биологически активные добавки ФОС — фруктоолигосахариды
Введение к работе
В настоящее время проблемы микробной экологии человека в норме и различных патологических состояниях, а также при воздействии на организм профессиональных и экологических факторов занимают важное место в решении многих задач биологии и медицины. При этом основное внимание исследователей сосредоточено на разработке методов и средств диагностики, коррекции и профилактики нарушений различных микробиоценозов (Isolauri, 2001; Захаренко, 2001; Черешнев с соавт., 2001; Бондаренко с соавт., 2003 Воробьёв с соавт., 20046). Показано, что под воздействием различных неблагоприятных факторов формируются стойкие дисбиотические нарушения, способные приводить к снижению иммунологической реактивности с последующим развитием воспалительных заболеваний (Баранов с соавт., 2000; Леванова с соавт., 2001 в). Особое значение подобные нарушения имеют для новорожденных и детей раннего возраста, так как именно у них наиболее часто развиваются различные патологические состояния (Блохина, Дорофейчук, 1979; Яцык, Захарова, 1997; Николаева, 2000; Бондаренко, 2005; Урсова, 2005).
В настоящее время для коррекции дисбиотических нарушений применяют пробиотики - препараты, содержащие облигатную микрофлору (ОМФ) или культуры грибов, спорообразующих бактерий, обладающих антагонистической активностью - а также различные антибактериальные препараты, например, нитрофураны (Барановский, Кондрашина, 2000; Камилова с соавт., 2001; Бондаренко с соавт., 2003; Лобзин с соавт., 2003).
Традиционно пробиотики применяют для подавления патогенной, условно-патогенной и восстановления нормальной микрофлоры кишечника при острых кишечных инфекциях (ОКИ) и дисбактериозах (Sullivan et al., 2003; Бондаренко, Воробьёв, 2004; Macintyre, Cymet, 2005). Но, как показали исследования последних лет, их клиническая эффективность также обусловлена наличием иммуномодулирующих свойств, а также вовлечением в обменные процессы (Urau et al., 1999; Miraglia del Guidice et al., 2002;
7
Мазанкова, Лыкова, 2004; Парфёнов, 2004; Ткаченко, 2004). Следует
отметить, что целесообразность их применения при кишечных инфекциях
остаётся спорной (Брудастов с соавт., 1996; Vaughan, Mollet, 1999;
ф Циммерман, 2000; Lebenthal Е., Lebenthal Y., 2003), так как известны
примеры неудачных попыток коррекции дисбиотических состояний различными бактерийными препаратами (Воробьёв с соавт., 1997; Долгушин с соавт., 1998; Щербаков с соавт., 1998; Ардатская с соавт., 2001; Воеводин с соавт., 2001; Захаренко, 2001; Бухарин с соавт., 2003; Семёнова, 2003). Кроме того, имеются данные о потенциальной опасности бифидо-, лакто- и
колисодержащих пробиотиков и препаратов из непатогенных представителей
рода Bacillus (Мухина, 1999; Коршунов с соавт., 2000; Попова с соавт, 2001;
Осипова с соавт, 2002; Корниенко, 2005).
В доступной литературе отсутствуют данные о масштабных
рандомизированных исследованиях, позволяющих достоверно оценить
эффективность различных препаратов и схем терапии кишечного
~ дисбактериоза у детей (Cucchiara et al., 2002; Nielsen et al., 2002; Young,
Huffman, 2003; Самсыгина, 2003; Meier, Steuerwald, 2005; Szajewska, Mrukowicz, 20056).
Известно, что степень и длительность дисбиотических нарушений связана с биологическими свойствами условно-патогенных микроорганизмов (УПМ), выступающих в роли этиологического фактора (Леванова с соавт., 2002а; Тюрин, 2003). Дисбактериозы кишечника (ДК), обусловленные ассоциациями УПМ, вызывают более тяжёлые дисфункции кишечника и чаще является причиной бактериемии и сепсиса (Красноголовец, 1989; Коршунов, 1989; Николаева, 2000). Поэтому главным компонентом их коррекции чаще является селективная деконтаминация нитрофуранами и пробиотиками (Захаренко, 2001; Камилова с соавт., 2001).
Мало изучена проблема неслучайных ассоциаций условно-патогенных микроорганизмов и их элиминации у детей разных возрастных групп с ДК.
Недостаточно сведений о сравнительной эффективности препаратов в
8 отношении отдельных УПМ и их ассоциаций, а также отдельных представителей облигатной микрофлоры. Невелик объём информации о появлении УПМ в диагностически значимых количествах как побочного эффекта коррекции ДК у детей. Выяснение поставленных вопросов, на наш взгляд, позволит разработать эффективные схемы коррекции ДК у детей раннего возраста.
Цель исследования.
Определение сравнительной эффективности пробиотиков и нитрофуранов в коррекции дисбактериозов кишечника у детей раннего возраста.
Задачи исследования;
Изучить характер изменений в составе микробиоценоза кишечника у детей разных возрастных групп с ДК.
Определить эффективность корригирующего действия пробиотиков (самоэлиминирующихся антагонистов) и нитрофуранов на микробиоценоз кишечника у детей разных возрастных групп с ДК.
Определить эффективность корригирующего влияния препаратов, содержащих облигатную микрофлору, на микробиоценоз кишечника у детей разных возрастных групп с ДК.
Научная новизна.
Впервые определена неслучайная склонность к совместному существованию УПМ в одном биоценозе толстого кишечника (ТК), исходя из этого, выявлены конкретные ассоциации у детей первого года жизни и в возрасте от 1 до 3 лет. Наиболее часто у детей раннего возраста обнаруживали ассоциацию гемолитической Escherichia coli и Staphylococcus aureus .
Впервые проведена сравнительная оценка влияния препаратов пробиотиков - самоэлиминирующихся антагонистов («Бактисубтил» и
9 «Энтерол») и нитрофуранов («Фуразолидон» и «Эрсефурил») на ассоциации микроорганизмов при ДК. Показано, что нитрофураны достоверно чаще, чем пробиотики нарушали ассоциацию S. aureus и бактерий рода Proteus с полной элиминацией одного из ассоциантов у детей первого года жизни.
Впервые выявлено, что пробиотик «Энтерол» более активно, по сравнению с «Бактисубтилом», снижает содержание S. aureus в кишечнике детей первого года жизни при коррекции ДК.
Впервые установлено, что препарат «Фуразолидон» более эффективен в элиминации бактерий рода Klebsiella, по сравнению с препаратом «Эрсефурил», у детей первого года жизни при коррекции ДК.
Впервые показано, что в процессе коррекции нарушений микробиоценоза кишечника (НМК) у детей наряду с вытеснением УПМ, обусловливающих ДК, проявлялся достоверный эффект появления других УПМ в диагностически значимых разведениях.
Практическая значимость работы.
Результаты проведённых исследований позволяют оптимизировать схемы коррекции микробиоценозов кишечника у детей с дисбактериозами.
Исследования микробных сообществ кишечника у детей с дисбактериозами выявили высокую частоту встречаемости УПМ и их ассоциаций у детей раннего возраста, что обосновывает применение пробиотиков — самоэлиминирующихся антагонистов и нитофуранов.
Результаты сравнительной оценки эффективности пробиотиков -самоэлиминирующихся антагонистов и нитрофуранов в элиминации ассоциаций УПМ и их диссоциации обосновывают предпочтительное применение нитрофуранов при коррекции ассоциативных ДК у детей раннего возраста.
Высокая частота дефицита бифидобактерий и молочно-кислых стрептококков при ДК у детей раннего возраста, обосновывает применение препаратов, содержащих ОМФ.
10 Сравнительная оценка эффективности различных препаратов, содержащих ОМФ, показала, что в коррекции ДК у детей раннего возраста предпочтительно примененять синбиотики и поликомпонентные пробиотики, содержащие бифидо- и лактобактерии.
Апробация работы.
Основные положения диссертации доложены на 7-й научно-практической конференции молодых учёных КГМУ (Казань, 2002), Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 70-летию кафедры детских инфекционных болезней КГМУ, «Микроэкология матери и ребенка, принципы диагностики и лечения» (Казань, 2002), 10-й, 12-й, 13-й научно-практических конференциях Поволжского региона «Окружающая среда и здоровье населения» (Казань, 2002, 2004, 2005), научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань, 2004), научно-практической конференции молодых учёных КГМА, посвященной 85-летию основания КГМА (Казань, 2005).
Положения, выносимые на защиту:
Нарушения в микробиоценозе кишечника у детей раннего возраста в большинстве случаев обусловлены одновременным снижением количества ОМФ и наличием УПМ и их ассоциаций. Наиболее часто в неслучайных ассоциациях с другими УПМ обнаруживаются S.aureus, гемолитическая E.coli, бактерии родов Klebsiella и Proteus.
Пробиотки - самоэлиминирующиеся антагонисты («Бактисубтил» и «Энтерол») эффективно вытесняют УПМ из микробиоценоза кишечника, однако «Энтерол» активнее элиминирует S.aureus.
Нитрофураны («Фуразолидон» и «Эрсефурил»), обладающие сходным спектром действия, имеют некоторые особенности. «Фуразолидон» достоверно лучше, чем «Эрсефурил» снижает содержание бактерий рода Klebsiella в микробиоценозе кишечника у детей раннего возраста.
Нитрофураны обладают более широким спектром антагонистической активности в отношении УПМ, чем пробиотики. Однако нитрофураны достоверно способствуют появлению новых УПМ, ранее не выявлявшихся в составе микрофлоры кишечника.
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 12 работ, из них - 8 статей (2 в центральной печати).
