Содержание к диссертации
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 4
ВВЕДЕНИЕ 5
ГЛАВА 1 УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗЕ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА И МЕТОДЫ ИХ
ЭЛИМИНАЦИИ 11
1.1 Дисбактериоз толстого кишечника у детей и взрослых 11
1.2. Коррекция дисбактериоза толстого кишечника 15
1.2.1. Антибиотикотерапия 15
1.2.2 Фаготерапия 17
1.2.3. Применение пробиотиков 17
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 28
Объем исследований 28
Питательные среды 32
Методы микробиологических исследований 32
Методы статистической обработки результатов исследований 39
ГЛАВА 3 УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫЕ МИКРООРГАНИЗМЫ ПРИ
ДИСБАКТЕРИОЗЕ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА . 40
ГЛАВА 4 СВОЙСТВА УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗЕ
ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА, ВЛИЯЮЩИЕ НА ИХ
КОЛОНИЗАЦИОННУЮ АКТИВНОСТЬ 53
Адгезивные свойства условно-патогенных микроорганизмов 53
Антилизоцимная активность условно-патогенных микроорганизмов ..56 ГЛАВА 5 СВОЙСТВА УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ,ОПРЕДЕЛЯЮЩИЕ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГОПРИМЕНЕНИЯ ПРОБИОТИКОВ 60
5.1 Антагонистические взаимодействия условно-патогенных микроорганизмов и лакто- и бифидобактерий, входящих в состав
пробиотиков 61
Адгезивные свойства лакто- и бифидобактерий, входящих в состав пробиотиков 81
Биосовместимость микроорганизмов, входящих в состав препаратов, применяемых для коррекции дисбактериоза толстого кишечника, с микроорганизмами - представителями нормальной микрофлоры толстого кишечника 89
ГЛАВА 6 СВОЙСТВА УСЛОВНО ПАТОГЕННЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ТАКТИКУ ВЫБОРА
ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ КОРРЕКЦИИ ДИСБАКТЕРИОЗА ТОЛСТОГО
КИШЕЧНИКА 93
Антибиотикорезистентность условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при диагностике дисбактериоза толстого кишечника 93
Фагорезистентность условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при диагностике дисбактериоза толстого кишечника 96
Антагонистические свойства бацилл, входящих в состав эубиотиков, в отношении условно-патогенных микроорганизмов 102
ЗАКЛЮЧЕНИЕ : 108
ВЫВОДЫ: 111
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ: 112
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 113
ПРИЛОЖЕНИЕ 136
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт
ИБС - ишемическая болезнь сердца
КОС - коагулазоотрицательные стафилококки
МИК - минимальная ингибирующая концентрация
НГОБ - неферментирующие грамотрицательные бактерии
УПМ - условно- патогенные микроорганизмы
УПЭ - условно-патогенные энтеробактерии
Введение к работе
Актуальность проблемы.
Бактериологический метод диагностики дисбактериоза толстого кишечника широко востребован врачами разного профиля и реализуется во многих лабораториях страны. Результаты исследований служат основанием для назначения препаратов, используемых для коррекции дисбактериоза. Существуют многочисленные рекомендации, описывающие технику проведения таких исследований, разработан отраслевой стандарт ОСТ 91500.11.0004-2003 «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника».
В то же время проблема дисбактериозов вызывает острые дискуссии. Это обусловлено многими причинами, среди которых ведущей является отсутствие достоверных методов его диагностики.
Так, профессор А.Н. Маянский [1999] пишет: «Фактически это дорогостоящее (тем более, что тестирование рекомендуется делать в динамике), трудоемкое исследование с невысокой (если не с нулевой) отдачей. Принимая во внимание огромный опыт такого рода исследований, представляется возможным почти безошибочно ставить регламентированный инструкциями диагноз "дисбактериоз", опираясь на клинику». С ним солидарны и многие гастроэнтерологи, подчеркивающие, что препараты типа «Лактулоза», «Би-фидумбактерин», «Хилак», а также многие другие, способствующие нормализации состава микрофлоры можно назначить и, не зная количества лакто-бактерий и бифидобактерий в испражнениях. В то же время, действующий ОСТ 91500.11.0004-2003 провозглашает: «Поскольку дисбактериоз кишечника в ряде случаев протекает бессимптомно, решающее значение при постановке диагноза имеют микробиологические показатели».
В ОСТ 91500.11.0004-2003 приведена информация о содержании в фекалиях здоровых людей 15 групп микроорганизмов, однако, очевидно, это лишь малая доля от числа видов, обитающих в кишечнике человека. Следует признать, что дать исчерпывающую характеристику состава нормальной
микрофлоры кишечника невозможно даже в научных, а тем более в практических лабораториях.
По-видимому, надо уделять внимание только тем группам бактерий, количество которых в той или иной степени влияет на тактику коррекции дисбактериоза. Основное внимание при этом должно уделяться условно-патогенным бактериям и грибам, численность которых чрезмерна. Однако критерии оценки значимости отдельных штаммов, выделенных от пациента в генезе дисбиотических нарушений, не разработаны.
При коррекции дисбиотических нарушений кишечной микрофлоры одновременно со стимуляцией «полезной» составляющей микробиоты необходимо подавить микроорганизмы, численность которых чрезмерна. Выбор оптимальной схемы коррекции состава микрофлоры без лабораторных исследований крайне затруднен, однако оптимальный перечень подобных исследований не определён.
Существующее мнение о безвредности пробиотиков для пациента в настоящее время поколеблено [Besselink M.G.H. et al., 2008; Vleggaar F.P. et al., 2008], а литературные данные об их эффективности не однозначны [Watkin-son P.J. et al., 2007]. Установлено, что пробиотические препараты могут подавлять индигенные лактобациллы пациента [Глушанова Н.А., Шендеров Б.А., 2005]. Способность к адгезии к эпителиальным клеткам хозяина — признанный тест при отборе потенциальных штаммов пробиотиков [Dunne С. et al., 2001]. Однако, адгезивная активность - сугубо индивидуальное свойство: штамм пробиотика, обладающий высокой адгезией к эпителию пациентки «А», может практически не прикрепляться к эпителию «Б» [Бойцов А.Г. и соавт., 2004].
Коррекция состава факультативно-анаэробной части микрофлоры кишечника требует назначения таких препаратов, как бактериофаги и антибиотики. Их правильный выбор не возможен без адекватного лабораторного пособия.
Таким образом, специальные лабораторные тесты могут облегчить правильность выбора пробиотиков и антимикробных препаратов. Необходимость в таких тестах ещё до конца не осознана медицинской общественностью, а техника их выполнения не стандартизирована.
Цель исследования - характеристика условно-патогенных микроорганизмов (УПМ), выделенных от больных с дисбактериозом толстого кишечника и выбор на её основе лабораторных тестов, необходимых для обеспечения правильного выбора пробиотических и антибактериальных препаратов.
Задачи исследования:
Оценить значимость условно-патогенных микроорганизмов в развитии дисбактериоза толстого кишечника при некоторых патологических состояниях.
Определение факторов колонизации (антилизоцимной активности и адгезивности) УПМ, выделенных при дисбактериозе.
Выбор методов определения чувствительности УПМ к антагонистической активности пробиотических микроорганизмов и B.cereus.
Определение чувствительности УПМ к антибиотикам, бактериофагам, антагонистической активности пробиотических микроорганизмов и B.cereus.
Изучение свойств пробиотических микроорганизмов, влияющих на эффективность их применения на фоне избыточной численности УПМ в кишечнике.
Научная новизна:
Сопоставлены спектры условно-патогенных микроорганизмов, выделяемых при дисбактериозе толстой кишки различного генеза. Впервые изучена адгезивность УПМ, выделенных у больных с дисбактериозом толстого кишечника, по отношению к собственным эпителиальным клеткам. Получена новая информация о чувствительности УПМ указанного происхождершя к антибиотикам, бактериофагам и об их антилизоцимной активности. Дана
оценка значимости адгезивных и антагонистических свойств пробиотических штаммов, влияющих на эффективность коррекции дисбактериоза толстого кишечника.
Практическая значимость:
Предложены схемы выбора препаратов для коррекции дисбактериоза толстого кишечника на основании данных бактериологического исследования. Показана необходимость внедрения в работу бактериологических лабораторий индивидуального подбора препаратов для коррекции дисбактериоза толстого кишечника. Показана эффективность фаготерапии при определении чувствительности к бактериофагам до начала лечения. Предложена методика определения антагонистической активности бацилл, входящих в состав эу-биотиков. Рекомендованы методы определения антагонистической активности пробиотических микроорганизмов и B.cereus.
Дана оценка значимости адгезивных и антагонистических свойств пробиотических штаммов и B.cereus, влияющих на эффективность коррекции дисбактериоза толстого кишечника.
Материалы работы внедрены в работу бактериологической лаборатории больницы Петра Великого и Санкт-Петербургского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Пастера.
Получены удостоверения на рационализаторское предложение № 1804, № 1805, № 1806, принятые ГОУВПО СПбГМА им. И.И. Мечникова 05.12.2008 г. к использованию под наименованиями: «Способ определения in vitro адгезивной активности пробиотических препаратов, содержащих лакто-и бифидумбактерии, используемых для коррекции дисбиоза толстого кишечника»; «Способ индивидуального подбора in vitro пробиотических препаратов, содержащих лакто- или бифидумбактерии для коррекции дисбиоза толстого кишечника на основе антагонистической активности, адгезивной активности и биосовместимости»; «Способ индивидуального подбора in vitro пробиотических препаратов, содержащих лакто- или бифидумбактерии для
элиминации условно-патогенных микроорганизмов при дисбиозе толстого кишечника на основе антагонистической активности».
Кроме того, результаты диссертационной работы внедрены в учебный процесс кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии ГОУВПО СПбГМА им. И.И. Мечникова для врачей-интернов, ординаторов и слушателей факультета усовершенствования врачей.
Основные положения, выносимые на защиту:
Выбор пробиотиков, эубиотиков, антибиотиков и бактериофагов для коррекции дисбактериоза толстого кишечника должен быть индивидуальным, учитывающим особенности организма хозяина и биологических свойств микроорганизма и основываться на данных лабораторных исследований.
Разработана схема лабораторного тестирования для выбора препаратов пробиотиков, основанная на определении адгезивных свойств препарата к клеткам эпителия пациента, антагонистических свойств по отношению к индигенным штаммам - представителям его микрофлоры и условно-патогенным микроорганизмам, количество которых избыточно. Осуществлен выбор оптимальных методов тестирования.
Подтверждена эффективность коммерческих препаратов бактериофагов в отношении условно-патогенных микроорганизмов при условии их выбора на основании обязательного лабораторного тестирования.
Разработан метод определения антагонистической активности эубиотиков, который может быть использован для оптимального выбора препарата.
Апробация работы. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ. Основные положения работы доложены на отчетных научно-практических конференциях сотрудников и молодых ученых СПбГМА им. И.И. Мечникова (Санкт-Петербург, 2006, 2007), на четвертой международной конференции, посвященной 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени
Пастера и 120 летию Парижского института Пастера «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями» (Санкт-Петербург, 2008), а также в выступлении на 6-й международной Германо-Российской конференции Кох-Мечников «От Ильи Мечникова и Пауля Эрлиха к современным достижениям медицинской науки и практики» (Санкт-Петербург, 2008).
