Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1.Особенности биологических свойств стафилококков, выделенных от бактерионосителей 9
1.2. Влияние антропогенных факторов на состояние бактерионосительства 18
1.3. Способы санации бактерионосителей 23
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 32
2.1. Выделение и идентификация стафилококков 32
2.2. Методы изучения биологических свойств стафилококков 33
2.3. Методика определения способности S. aureus образовывать биопленки 37
2.4. Методика определения чувствительности S. aureus
к антибиотикам 38
2.5. Методики определения лактоферрина и slgA в носовом секрете 38
2.6. Методики определения влияния циклоферона на стафилококки 39
2.7. Методика санации резидентных бактерионосителей 41
2.8. Молекулярно-генетическое исследование штаммов стафилококков 42
2.9. Методики определения загрязнения атмосферного воздуха исследуемых территорий и оценки риска его воздействия для здоровья населения 44
2.10. Методы статистической обработки материала 45
ГЛАВА 3. Фенотипическая характеристика стафилококков и местный иммунитет у бактерионосителей. 47
3.1. Факторы персистенции стафилококков, выделенных у детей со слизистой оболочки переднего отдела носа 47
3.2. Характеристика местного иммунитета при стафилококковом бактерионосительстве 55
ГЛАВА 4. Оценка риска для здоровья детского населения атмосферного воздуха промышленного города и сельского населенного пункта 60
4.1. Гигиеническая характеристика загрязнения атмосферного воздуха исследуемых территорий Оренбургской области 60
4.2. Оценка риска неканцерогенных эффектов при действии загрязнителей атмосферного воздуха 65
ГЛАВА 5. Изучение качественных характеристик и биологических свойств стафилококков, выделенных у детей, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды 70
ГЛАВА 6. Разработка способа санации резидентных стафилококковых бактерионосителей 86
6.1.Изучение влияния циклоферона на биологические свойства 5". aureus в эксперименте 86
6.2. Санация резидентных стафилококковых бактерионосителей циклофероном 92
6.3. Изучение особенностей действия циклоферона на S. aureus с использованием атомно-силовой микроскопии 99
6.4. Особенности санации циклофероном стафилококковых бактерионосителей, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды 102
Заключение 106
Выводы 118
Список литературы
- Влияние антропогенных факторов на состояние бактерионосительства
- Методики определения загрязнения атмосферного воздуха исследуемых территорий и оценки риска его воздействия для здоровья населения
- Характеристика местного иммунитета при стафилококковом бактерионосительстве
- Оценка риска неканцерогенных эффектов при действии загрязнителей атмосферного воздуха
Введение к работе
Проблема стафилококкового бактерионосительства сохраняет свою актуальность, поскольку бактерионосители являются источниками эпидемиологической опасности. В то же время важное клиническое значение стафилококкового бактерионосительства определяется типичностью процесса транслокации стафилококков со слизистых оболочек во внутреннюю среду организма-хозяина с развитием широкого спектра заболеваний (Wertheim H.F. et al., 2005; van Rijen M.M., Kluytmans J.A., 2008). Условия формирования резидентного бактерионосительства связаны с наличием у резидентной стафилококковой микрофлоры особых свойств, обеспечивающих ее адаптацию к условиям, складывающимся на слизистой оболочке передних отделов носовых ходов, и таким образом, ответственных за длительное сохранение микроорганизма в данной экологической нише. Так, среди штаммов S. aureus, выделенных от резидентных бактерионосителей, установлена высокая частота встречаемости антагонистической активности в отношении широкого круга микроорганизмов (кори-небактерий, микрококков и др.), являющихся представителями нормальной микрофлоры верхних дыхательных путей (Дерябин Д.Г., 2000). Показано, что у постоянных носителей резидентного типа происходит накопление наиболее вирулентных и резистентных к антибиотикам стафилококков (Терновская Л.Н., 1983; Эрдынеева Б.С, 2011), а также обладающих способностью к инактивации факторов естественной резистентности с высокими значениями признаков (Блиндер Е.А., 2005; Карташова О.Л. с соавт., 2009).
Многочисленными исследованиями показано, что техногенные факторы внешней среды, модифицируя свойства стафилококков, способствуют формированию состояния бактерионосительства и развитию инфекционно-воспалительных заболеваний (Даутов Ф.Ф. с соавт., 2007; Атаниязова Р.А., 2008; Ковальчук И.Ю., 2009; Ефимова Н.В. с соавт., 2011).
В связи с этим, научный интерес представляет изучение биологических, в том числе персистентных свойств у стафилококков, выделенных от резидент-
ных и транзиторных бактерионосителей, а также бактерионосителей, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенного загрязнения, что позволит разработать способы борьбы с бактерионосительством.
Целью настоящей работы явилось изучение биологических свойств стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа бактерионосителей разных типов, с разработкой способа их санации.
Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи:
-
Изучить биологические свойства стафилококков (антикарнозиновая, антилактоферриновая, slgA- протеазная активность) и местный иммунитет у бактерионосителей разных типов.
-
Исследовать биологические свойства S. aureus, выделенных от бактерионосителей, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды, и провести их сравнительный анализ.
-
Разработать способ санации резидентных бактерионосителей циклофе-роном и оценить его эффективность.
Научная новизна
Проведенные исследования позволили установить, что золотистые стафилококки, выделенные у резидентных бактерионосителей, характеризуются высокой экспрессией свойств, направленных на инактивацию защитных факторов барьерного эпителия слизистых переднего отдела носа (карнозина, лактофер-рина, slgA), которые могут служить критериями эпидемиологической опасности.
Выявлена прямая зависимость между уровнем антилактоферриновой и sl-gA-протеазной активностей стафилококков и содержанием лактоферрина и slgA в назальном секрете резидентных бактерионосителей. Научно обоснованы особенности патогенеза резидентного бактерионосительства на модельных системах «лактоферрин хозяина - антилактоферриновая активность стафилококков» и «slgA хозяина - sIgA-протеазная активность стафилококков».
Установлено, что у бактерионосителей, проживающих на территориях с высоким уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды, отмечается
повышение уровня микробной обсемененности слизистой оболочки передних отделов носа золотистыми стафилококками, обладающими выраженной анти-карнозиновой активностью и способностью к образованию биопленок.
Экспериментально установлена оптимальная длительность проведения санации резидентных стафилококковых бактерионосителей циклофероном. Выявлены особенности санации лиц, проживающих на территориях с высоким уровнем загрязнения воздушной среды, характеризующиеся подавлением у золотистых стафилококков способности к инактивации карнозина и появлением симбионтов в составе микрофлоры носовых ходов. С использованием метода атомно-силовой микроскопии впервые визуализированы результаты воздействия циклоферона на поверхностные структуры клеток S. aureus, выявлено значительное увеличение шероховатости их поверхности и изменение морфологии, что позволяет констатировать нарушение барьерных функций клеточной стенки золотистых стафилококков.
Практическая значимость
В результате исследования получены новые данные, расширяющие представление о роли факторов персистенции стафилококков в формировании бактерионосительства.
Свойства стафилококков, направленные на инактивацию факторов естественной резистентности хозяина, и, особенно их комбинация, могут быть использованы как эпидемиологические маркеры стафилококков, выделенных от резидентных бактерионосителей.
На основе полученных экспериментально-лабораторных данных разработан способ санации циклофероном стафилококковых бактерионосителей под контролем антикарнозиновой активности стафилококков (Патент РФ на изобретение № 2441656), позволяющий санировать стафилококковых бактерионосителей, проживающих на территориях с высоким уровнем загрязнения воздушной среды. Материалы работы использованы при составлении информационно-методического письма «Диагностика и санация стафилококковых бакте-
рионосителеи», утвержденного Министерством здравоохранения Оренбургской области.
Положения, выносимые на защиту
1. Формирование резидентного бактерионосительства характеризуется
изменением состояния систем «лактоферрин - антилактоферриновая актив
ность», «slgA - slgA- протеазная активность»: одновременным увеличением со
держания в назальном секрете лактоферрина и секреторного Ig А, а также зна
чений антилактоферриновой и slgA- протеазной активности золотистых стафи
лококков.
-
У резидентных стафилококковых бактерионосителей, проживающих в условиях повышенного уровня загрязнения воздушной среды, отмечается высокая микробная обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа золотистыми стафилококками с выраженной антикарнозиновой активностью и способностью к образованию биопленок.
-
Основу эффективной санации резидентных стафилококковых бактерионосителей, проживающих на территориях с высоким уровнем загрязнения воздушной среды, составляет использование циклоферона, подавляющего пер-систентный потенциал золотистых стафилококков и способствующего нормализации состояния микробного биоценоза.
Апробация работы. Материалы работы были доложены и обсуждены на: пленуме Научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды РАМН и Минздравсоцразвития России по проблеме: «Методологические проблемы изучения, оценки и регламентирования биологических факторов в гигиене окружающей среды» (Москва, 2009); IX Российской конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2011); II международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Фундаментальные и прикладные исследования в биологии» (Донецк, 2011); X научной сессии молодых ученых и студентов «Современное решение актуальных научных проблем в медицине» (Нижний Новгород, 2011); VII Всероссийской конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2012).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 4 публикации в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, получен патент на изобретение РФ № 2441656 от 10 февраля 2012 года.
Объем и структура диссертационной работы
Влияние антропогенных факторов на состояние бактерионосительства
Однако количественные изменения в динамике соответствующих сани-тарно-показательных микроорганизмов изучаемой внешней среды нередко не отражают ее истинной потенциальной опасности для здоровья человека, так как не учитывают сдвигов в качественных характеристиках условно-патогенных бактерий.
Неблагополучная экологическая обстановка в районе проживания приводит не только к изменениям таксономической структуры микробиоценоза открытых экосистем макроорганизма, которые протекают по общим закономерностям: в результате снижения количественного содержания симбионтов, участвующих в обеспечении колонизационной резистентности открытых экосистем, нарушается контроль за количественным и качественным составом всей микрофлоры, что проявляется не только повышением содержания условно-патогенных микроорганизмов, но и изменением их биологических свойств, в частности, усилением факторов, способствующих «агрессии» и персистенции (Покателов А.А., 2009).
Проведенный сравнительный анализ биологических характеристик стафилококковой аутофлоры слизистой оболочки носа у детей в возрасте 8-12 лет, проживающих в четырех районах промышленного города (город Оренбург) с разными уровнем и структурой антропогенной нагрузки (воздуха, воды, снегового покрова и почвы), в районе с наиболее высоким уровнем антропогенной нагрузки выявил изменения количественных характеристик стафилококковой микрофлоры: высокий уровень носительства золотистых стафилококков, обладающих антилизоцимной активностью, гемолитической активностью и хлопьеобразующего фактора (Музалева О.В., 1999); у стафилококков, выделенных от школьников города Красноярска, проживающих в экологически благополучном исследуемом районе, продукцию ферментов гиалуронидазы и лизоцима регистрировали в 2-3 раза реже, чем у культур стафилококков, выделенных от детей, проживающих в промышленном рай оне, расположенном рядом с интенсивными транспортными магистралями, а также в районе, соседствующим с химическими предприятиями (Бакшеева С.С., Валышева И.В., 2011), стафилококки, колонизирующие передний отдел носа детей, проживающих в экологически неблагополучном районе крупного промышленного города, обладали более выраженными факторами перси-стенции (Бакшеева С.С., 2011).
С помощью корреляционного анализа установлена тесная зависимость между биологическими свойствами стафилококков, выделенных от бактерионосителей, и показателями состояния окружающей среды, в частности факторы патогенности коагулазоположительных стафилококков, в большей степени, связаны с содержанием в атмосферном воздухе диоксида серы, сероводорода, оксида углерода и аммиака, факторы персистенции коагулазоот-рицательных стафилококков - с концентрацией в воздушной среде сероводорода и аммиака (Осиян С.А. с соавт., 2005).
Проведенный обзор имеющихся данных литературы однозначно показал, что техногенное загрязнение воздушной среды оказывает влияние не только на численность аумикрофлоры слизистой оболочки переднего отдела носа, но и ее качественные характеристики: отмечается выраженный полиморфизм микробного пейзажа и появление штаммов, в большей степени наделенных признаками патогенности и персистенции.
Одним из эффективных методов борьбы со стафилококковым бактерионосительством является санация бактерионосителей (Gurieva T.V. et al., 2012).
Для санации стафилококковых бактерионосителей, согласно Приказа № 720 (от 31.07.1978), используют следующие средства: фурацилин, риванол, борную кислоту, стафилококковый бактериофаг, в период эпидемиологического неблагополучия - хлорофиллипт.
В настоящее время рекомендуют также антисептики Тонзинал (Салута М, Россия), содержащий в составе водорастворимые экстракты трав зверо боя, тысячелистника, растений календулы, корня солодки, плодов шиповника, морскую соль, декаметоксин, лимонную кислоту, лактозу; наряду с антимикробным действием установлена его способность повышать местный иммунитет (секреторный иммуноглобулин А; лизоцим; активность системы комплемента; увеличивать способность фагоцитов захватывать и переваривать микроорганизмы; метаболическую активность фагоцитов - НСТ-реакцию, хемилюминесценцию) и Анавидин, разработанный Иркутским институтом химии им. А.Е. Фаворского СО РАН.
Л.Н. Ерофеевой с соавт. (2000) для санации стафилококковых бактерионосителей предлагается использование состава, состоящего из фурацили-на, отвара травы зверобоя и натрия-карбоксиметилцеллюлозы, которая увеличивает продолжительность контакта со слизистой оболочкой полости носа.
Таким образом, традиционные методы санации бактерионосителей основаны на местном применении антисептиков.
Разработаны и внедрены в практическое здравоохранение для санации резидентных стафилококковых бактерионосителей также пробиотики: Ви-тафлор, содержащий штаммы лактобактерий (Лобзин Ю.В. с соавт., 2008), характеризующийся повышенным терапевтическим потенциалом, поскольку создан на основе бактериального симбиотического комплекса (бикультура L. acidophilus на основе штаммов Д №75 и Д №76) мутуалистического типа, обладающего эффектами синтрофии и синергизма (Вахитов Т.Я. с соавт., 2006). По сравнению с моноштаммами симбиотическая бикультура характеризуется повышенным пробиотическим потенциалом (высокой жизнеспособностью, широким спектром и уровнем антагонистической активности, устойчивостью к терапевтическим дозам ряда антибиотиков, адаптивной способностью, резистентностью к абиотическим факторам среды). На 450 волонтерах было показано, что доля назофарингиального носительства при интраназальном применении «Витафлора» значительно снижается, причем одновременно с нормализацией микроэкологии происходит активация индукторного звена местного иммунитета (Петров Л.Н., 2011).
Методики определения загрязнения атмосферного воздуха исследуемых территорий и оценки риска его воздействия для здоровья населения
При изучении выраженности sIgA-протеазной активности установлено, что уровень признака у штаммов, выделенных от резидентных БН, двукратно превышал количественные значения у изолятов от транзиторных БН (соответственно 0,262±0,047 мкг/мл и 0,107±0,024 мкг/мл, р 0,05). Установлено, что у штаммов эпидермальных стафилококков, выделенных со слизистой носа не носителей S. aureus, средние значения выраженности признака составили 0,166±0,097 мкг/мл (рис. 3). 0,3 0,25 + 0,2 0,15 0,1 0,05 резидентные транзиторные не носители Примечание: -р 0,05 (по сравнению с транзиторными) Рис. 3. Уровень выраженности sIgA-протеазной активности у стафилококков, выделенных при различных типах бактерионосительства
Анализ частоты встречаемости комбинации обоих исследуемых признаков у штаммов золотистых стафилококков, выделенных от бактерионосителей, показал, что изоляты от резидентных БН, обладающие одновременно АЛфА и sIgA-протеазной активности, регистрировались в 36,4%, тогда как среди 24 выделенных от транзиторных БН штаммов S. aureus ни один не обладал комбинацией данных свойств. Напротив, у транзиторных БН 54,2% выделенных штаммов не имели обоих признаков, а у штаммов от резидентных БН - лишь 13,6% изолятов.
Исследование частоты встречаемости штаммов стафилококков с различным уровнем выраженности АЛфА и sIgA-протеазной активности показало, что 27,8% штаммов от резидентных БН имели значения АЛфА более 900 нг/мл, а среди штаммов от транзиторных БН подобные изоляты отсутствовали. Аналогичная закономерность была выявлена и для распределения sl gA-протеазной активности:.55,6% штаммов от резидентных БН были способны инактивировать 0,2-0,4 мкг/мл секреторного иммуноглобулина А, в то время как все штаммы от транзиторных БН имели активность, не превышающую 0,2 мкг/мл.
Важная роль в формировании резидентного стафилококкового бактерионосительства отводится антикарнозиновой активности микроорганизмов. Было установлено, что среди стафилококков, выделенных от резидентных бактерионосителей, 56% обладало максимальным уровнем признака, равным 3 мг/мл, 28% - в диапазоне от 1,5 до 2,9 мг/мл и 16% -0,7-1,4 мг/мл. Среди стафилококков, выделенных от транзиторных бактерионосителей, 35% обладало максимальным уровнем признака, 28% в диапазоне 1,5-2,9 мг/мл и 37% не обладало изученной активностью.
При изучении антикарнозиновой активности у золотистых стафилококков, выделенных от резидентных бактерионосителей, выявлено, что этот признак встречался в 100% случаев со средним значением 2,8±0,21 мкг/мл; штаммы, выделенные от бактерионосителей транзиторного типа, обладали АКрА в 80,4% со средним значением 1,79±0,12 мкг/мл. Таким образом, при изучении выраженности АКрА было показано, что средние значения признака у стафилококков, выделенных от резидентных бактерионосителей, было в 1,5 раза выше по сравнению со средними значениями признака у стафилококков, выделенных от транзиторных бактерионосителей. АКрА у эпидермальных стафилококков, выделенных от бактерионосителей резидентного типа, регистрировалась в 100% случаев со средним показателем 2,6±0,19мкг/мл, транзиторного - в 81,8% случаев со средним значением 1,1±0,15мкг/мл.
Таким образом, проведенные исследования выявили различия в частоте распространенности, уровне выраженности антилактоферриновой, slgA-протеазной и антикарнозиновой активностей у изолятов S. aureus, выделенных от транзиторных и резидентных бактерионосителей (табл. 2). Более высокие значения данных свойств, а также комбинация трех признаков были характерны для штаммов золотистых стафилококков, выделенных со слизистой оболочки носа резидентных бактерионосителей. Указанные свойства были характерны и для эпидермальных стафилококков, выделенных от не носителей S. aureus.
Характеристика местного иммунитета при стафилококковом бактерионосительстве
На следующем этапе работы были изучены микробная обсемененность слизистой оболочки бактерионосителей и биологические свойства стафилококков, выделенных у детей, проживающих на территориях (село Шарлык и город Новотроицк) с разным уровнем загрязнения воздушной среды.
В Шарлыке при обследовании 109 детей, золотистый стафилококк был выделен у 15 из них (13,8%о); микробная обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа этим микроорганизмом в период первого обследования у 26,6% детей составляла 1 103 КОЕ/мл; 5 103; 5 104; 5 107 (по 6,6%); по 13,3% 1 106 КОЕ/мл и 1 105; по 20% - 5 106 и 5 105; у одного ребенка (6,6%) на желточно-солевом агаре был отмечен рост единичных колоний стафилококков. Кроме того, S. aureus выделялись в ассоциациях с коагулазо-отрицательными стафилококками в 29,4% случаев, обсемененность золотистыми стафилококками составляла в 43,8% случаев 1 105 КОЕ/мл; в 15,6% -1 103 КОЕ/мл; по 9,4% - 5 105 КОЕ/мл и 5 104 КОЕ/мл; по 6,5% - 1 106 КОЕ/мл и 5 106 КОЕ/мл; по 3,1% - 1 104 КОЕ/мл; 5 103 КОЕ/мл и 1 103 КОЕ/мл.
Через 10 дней, во время второго обследования, были получены следующие результаты: среди 109 обследованных детей, S. aureus выделялся в 8,9% случаев, микробная обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа составляла у 22,2% 1 106 КОЕ/мл; у 11,1% - 1 103 КОЕ/мл; по 33,3% - 1 105 КОЕ/мл и 5 103 КОЕ/мл. В 36,6% случаев (36 детей) S. aureus высевались в ассоциации с КОС: в 5,6 % случаев обсемененность составляла 1 103 КОЕ/мл; в 5,6% - 1 104 КОЕ/мл; в 44,4% -1 105 КОЕ/мл; в 8,3% - 1 106 КОЕ/мл; в 2,7% - 5 103 КОЕ/мл; в 8,3% - 5 104 КОЕ/мл; в 16,6% - 5 105 КОЕ/мл; в 2,7% - 5 10б КОЕ/мл; в 8,3% - 1 103КОЕ/мл. Через 10 дней, во время третьего обследования, S. aureus был выделен у 17 детей (16,8%). Микробная обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа у 35,5% бактерионосителей в период третьего обследования составляла 5 105 КОЕ/мл; у 23,5% - 1 105 КОЕ/мл; у 11,8% - 1 10б КОЕ/мл; у 23,5 - 5 106 КОЕ/мл; у одного бактерионосителя (5,9%) - 5 107 КОЕ/мл. В 29,1% случаев (30 детей) S. aureus высевались в ассоциации с КОС: в 10,0 % случаев обсемененность составляла 1 103 КОЕ/мл; в 6,7% - 1 104 КОЕ/мл; в 13,3% -1 105 КОЕ/мл; в 6,6% - 1 106 КОЕ/мл; в 3,3% - 5 103 КОЕ/мл; в 20,0% - 5 104 КОЕ/мл; в 16,7% - 5 105 КОЕ/мл; в 16,6% - 1 103 КОЕ/мл; единичные колонии в 6,6% случаев.
При обследовании детей, проживающих в Шарлыке, были получены следующие результаты: только S. aureus трижды выделялся у 13 детей (12,6%). Микробная обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа у 30,8% детей составляла 1 105 КОЕ/мл; у 15,4% - 1 106 КОЕ/мл; у 30,8% -5 106КОЕ/мл; и у 23,1% бактерионосителей - 5 105КОЕ/мл. У 14 детей стафилококк выделяли однократно или дважды (13,6%). У 21 человека, наряду с золотистым стафилококком, на слизистой оболочке носа вегетиро-вали КОС; из них у 9 - выделялись коагулазоотрицательные стафилококки в ассоциациях с S. aureus, микробная обсемененность которым не превышала 1 103 КОЕ/мл. У 60 детей (58,3%) высевались коагулазоотрицательные стафилококки (S. cohnii, S. auricularis, S. simulans, S. sciuri, S. capitis, S. xylosis, S. hominis, S. haemolyticus, S. warneri, S. saprophyticus).
В первое обследование в Новотроицке был обследован 101 ребенок и золотистый стафилококк выделен у 18 детей (17,8%); микробная обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа этим микроорганизмом в период первого обследования у 16,7% детей составляла 1 10 КОЕ/мл; у 5,6% 1 108 КОЕ/мл; у 5,6% 5 104; у 22,2% 5 107 КОЕ/мл; у 16,7% 5 105 КОЕ/мл и у 33,3% - 5 106 КОЕ/мл. Кроме того, S. aureus выделялись в ассоциациях с коагулазоотрицательными стафилококками в 30,7% случаев, обсемененность золотистыми стафилококками составляла в 25,8% случаев 1 КОЕ/мл; в 12,9% - 1 103 КОЕ/мл; у 12,9% - 5 105 КОЕ/мл; у 6,5% 5 103 КОЕ/мл; у 6,5% - 5 106 КОЕ/мл; по 3,2% - 1 104 КОЕ/мл; 1 10б КОЕ/мл; у 9,7% 1 103КОЕ/мл; у 19,4% - 5 107 КОЕ/мл.
Через 10 дней, во время второго обследования, были получены следующие результаты: среди .101 обследованного ребенка, S. aureus выделялся в 8,0% случаев, микробная обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа составляла у 25,0% 5 106 КОЕ/мл и у 25,0% 5 107 КОЕ/мл; по 12,5% 1 106КОЕ/мл; 1 107КОЕ/мл; 5 104 КОЕ/мл; 5 105 КОЕ/мл. В 32,7% случаев (33 ребенка) S. aureus высевались в ассоциации с КОС: в 6,1 % случаев обсемененность составляла 1 103 КОЕ/мл; в 12,9% - 1 104 КОЕ/мл; в 21,2% -1 105 КОЕ/мл; в 9,7% - 1 106 КОЕ/мл; в 3,0% - 5 103 КОЕ/мл; в 15,2% - 5 105 КОЕ/мл; в 3,0% - 1 108 КОЕ/мл; в 12,9% - 5 106 КОЕ/мл; в 9,7% - 1 103 КОЕ/мл; в 6,1% случаев выделялись единичные колонии.
Через 10 дней, во время третьего обследования, S. aureus был выделен у 13 детей (12,9%). Микробная обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа у 15,4% бактерионосителей в период третьего обследования составляла 5 106 КОЕ/мл; у 7,7% - 1 105 КОЕ/мл; у 38,5% - 1 106 КОЕ/мл; у 23,1 - 5 105 КОЕ/мл; по 7,7 1 103 КОЕ/мл и 1 103 КОЕ/мл. В 34,6% случаев (35 детей) S. aureus высевались в ассоциации с КОС: в 17,1 % случаев обсемененность составляла 1 103 КОЕ/мл; в 5,7% - 1 104 КОЕ/мл; в 14,3% - 1 103 КОЕ/мл; в 11,4% - 1 106 КОЕ/мл; в 11,4% - 5 103 КОЕ/мл; в 8,6% - 5 104 КОЕ/мл; в 11,4% - 5 105 КОЕ/мл; единичные колонии в 11,4% случаев.
Оценка риска неканцерогенных эффектов при действии загрязнителей атмосферного воздуха
После санации были получены следующие результаты: рост золотистого стафилококка отсутствовал у 19 детей (44,2%). В остальных случаях (24 ребенка) микробная обсемененность золотистыми стафилококками слизистой оболочки переднего отдела носа снизилась по сравнению с исходным
уровнем в 83,3% случаев (у 20 детей), в 33,30% случаев (8 детей), на слизистой оболочке, наряду с золотистыми стафилококками, регистрировали КОС, способность к инактивации карнозина у S. aureus понизилась в 79% случаев (у 34 детей).
В Новотроицке было санировано циклофероном в течение 7 дней 35 человек. После проведенной санации были получены следующие результаты: рост золотистого стафилококка отсутствовал у 3 детей (8,6%). В остальных случаях (32 человека) микробная обсемененность золотистыми стафилококками слизистой оболочки переднего отдела носа снизилась по сравнению с исходным уровнем в 40% случаев (у 13 детей), у 26 человек (80%), наряду с золотистыми стафилококками, стали регистрироваться КОС, причем микробная обсемененность ими слизистой оболочки переднего отдела носа в 71,4% составляла 5 105 - 5 106КОЕ/мл. Способность к инактивации карнозина у S. aureus понизилась в 77% случаев (у 17 детей) на 54%).
При разработке способа санации в качестве предполагаемого препарата для санации резидентных стафилококковых бактерионосителей нами был выбран препарат циклоферон, который, как известно, стимулирует иммунитет и естественную колонизационную резистентность слизистых оболочек макроорганизма и снижает способность микроорганизмов к инактивации комплемента.
В связи с тем, что факторы персистенции являются биомишенью для изучения и отбора препаратов, пригодных для борьбы с патогенами, мы в условиях in vitro изучили влияние препарата на антикарнозиновую активность стафилококков, которая определяет формирование бактерионосительства, а также на их способность образовывать биопленки. Исходная популя-ционная структура штамма стафилококка, выделенного от резидентного бактерионосителя, представлена клонами с высокими и средними значениями признака. Проведенными исследованиями установлена перестройка популя-ционной структуры штамма под влиянием циклоферона: в ходе эксперимента изменялось соотношение клонов с высоким, средним и низким уровнями активности и появлялись клоны, не обладающие способностью к инактивации карнозина и образованию биопленок, причем максимальное число таких клонов отмечено на седьмой день эксперимента. Для подтверждения полученных результатов о возможности использования циклоферона в качестве препарата для санации бактерионосителей, нами была проведена их санация в течение 7 дней под контролем антикарнозиновой активности выделенных штаммов и выявлено совпадение результатов направленности воздействия циклоферона в условиях in vitro и in vivo.
С использованием метода атомно-силовой микроскопии впервые визуализированы результата воздействия циклоферона на поверхностные структуры клеток S. aureus, оценен спектр изменений морфологических параметров золотистых стафилококков под воздействием циклоферона. Полученные данные расширяют представления о механизме биологической активности данного препарата.
Проведенная санация, циклофероном лиц, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды, характеризуется преимущественной элиминацией золотистых стафилококков и снижением микробной обсемененности слизистой оболочки данными микроорганизмами носовых ходов лиц, проживающих на экологически благополучных территориях; появлением в микробиоценозе представителей нормальной микрофлоры слизистой оболочки переднего отдела носа (коагула-зоотрицательные стафилококки) у резидентных бактерионосителей, проживающих на территории с высокой антропогенной нагрузкой, а также снижением способности золотистых стафилококков к инактивации карнозина в обоих случаях.
Полученные результаты позволяют рекомендовать использование циклоферона для санации лиц, проживающих на территориях с высокой антропогенной нагрузкой воздушной среды.
