Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 13
1.1 Патогенез заболеваний органов дыхания 13
1.2 Современные представления об отхаркивающих средствах 20
1.3 Фитотерапевтические средства, применяемые при воспалительных заболеваниях органов дыхания 27
Глава 2 Материалы и методы исследования 38
2.1 Материалы исследования 38
2.2 Методы исследования 42
2.2.1 Методы изучения химического состава 42
2.2.1.1 Постановка качественных реакций на основные группы биологически активных веществ 42
2.2.1.2 Количественное определение органических кислот в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов 43
2.2.1.3 Количественное определение дубильных веществ в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов 43
2.2.1.4 Количественное определение полисахаридов в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов 44
2.2.1.5 Количественное определение флавоноидов в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов 44
2.2.2 Оценка безопасности водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов 46
2.2.2.1 Определение значения ld50 для водного извлечения нового грудного сбора 46
2.2.2.2 Оценка безопасности применения водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов при курсовом применении 47
2.2.3 Методы изучение фармакологической активности 47
2.2.3.1 Оценка муколитической активности 48
2.2.3.2 Оценка противовоспалительной активности 48
2.2.3.3 Оценка противоаллергической активности 50
2.2.3.4 Оценка обезболивающей активности 52
2.2.3.5 Оценка антимикробной активности 53
2.2.3.6 Оценка антиоксидантной активности 54
2.2.4 Статистические методы исследований
Глава 3 Исследование химического состава водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов 56
3.1 Определение содержания сухого остатка, значения рн и оценка качественного состава биологически активных веществ водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов 56
3.2 Оценка количественного химического состава водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов
3.2.1 Определение содержания полисахаридов в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов 59
3.2.2 Определение количественного содержания органических кислот в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов 61
3.2.3 Определение содержания дубильных веществ в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов 62
3.2.4 Определение содержания суммы флавоноидов в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов 63
Глава 4 Исследование токсичности и фармакологической активности нового грудного сбора 65
4.1 Оценка токсичности водного извлечения нового грудного -сбора при однократном и курсовом применении 65
4.1.1 Определение значения ld50 водного извлечения нового грудного сбора при внутрижелудочном введении мышам 65
4.1.2 Оценка токсичности водного извлечения нового грудного сбора при курсовом внутрижелудочном введении мышам 67
4.2 Исследование фармакологической активности водного извлечения нового грудного сбора и отдельных его компонентов 69
4.2.1 Оценка муколитической активности водного извлечения нового грудного сбора и отдельных его компонентов 69
4.2.2 Оценка противовоспалительной активности водного извлечения нового грудного сбора и отдельных его компонентов 72
4.2.3 Оценка противоаллергической активности водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов 76
4.2.4 Оценка обезболивающей активности водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов :t;h 79
4.2.5 Оценка антимикробной активности водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов 83
4.2.6 Оценка антиоксидантнои активности водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов 85
Глава 5 Обсуждение результатов исследования 89
Выводы 100
Научно-практические рекомендации 102
Список литературы
- Фитотерапевтические средства, применяемые при воспалительных заболеваниях органов дыхания
- Количественное определение органических кислот в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов
- Оценка количественного химического состава водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов
- Оценка противовоспалительной активности водного извлечения нового грудного сбора и отдельных его компонентов
Введение к работе
Актуальность исследования
Распространенность патологии дыхательных путей занимает одну из лидирующих позиций в структуре заболеваемости населения. Увеличение числа больных с заболеваниями органов дыхания в первую очередь обусловлено неблагоприятной экологической обстановкой, нерациональным питанием, стрессами, а также прогрессирующим ростом резистентности возбудителей патологии к широко применяемым и относительно новым антибиотикам, возрастающей этиологической ролью условно-патогенной микрофлоры (Чучалин А. Г., 2004, 2007; Стрельцова Е. В., 2007).
В профилактике и комплексной терапии заболеваний органов дыхания широко применяют растительные средства с антимикробным, противовоспалительным и иммуномодулирующим действием. Значительная часть таких средств создана на основе эфирных масел, природных полифенольных соединений, терпеноидов, полисахаридов (Мирович В. М., 2010).
Несмотря на многочисленные достижения по разработке и внедрению в клиническую практику синтетических лекарств, фитотерапия по-прежнему сохраняет свою актуальность благодаря оптимальному сочетанию результативности и безопасности применения многих препаратов растительного происхождения (Мирович В. М., 2010). В настоящее время ассортимент лекарственных средств растительного происхождения, применяемых в практическом здравоохранении, составляет около 40 % (Самылина И. Н., 2000). Одним из направлений развития фитотерапии является углубленное исследование эффектов не только мало изученных, но и часто используемых по ограниченному числу показаний фармакопейных лекарственных растений, а также разработка новых рациональных многокомпонентных растительных сборов. Перспективность и развитие исследований в области разработки рецептуры многокомпонентных сборов для лечения пациентов с различными патологиями обеспечивается достаточной сырьевой базой по большинству видов лекарственных растений (Доброхотов И. В., 2011; Пупыкина К. А., 2008; Полуэктова Е. А., 2011).
Обоснованность применения растительных препаратов для профилактики и лечения заболеваний органов дыхания определяется тем, что к ним практически не наблюдается привыкания микроорганизмов, они сочетают в себе комплексы биологически активных веществ (БАВ), которые обуславливают многопрофильное действие на основные стадии патологического процесса (Мирович В. М., 2010).
Наиболее часто фитопрепараты используют в качестве муколитических, противовоспалительных, антимикробных, мочегонных, седативных средств. Фармакологическая активность растений обусловлена наличием биологически активных веществ, таких как полисахариды, флавоноиды,
фенолкарбоновые кислоты, эфирные масла, органические кислоты, каро-тиноиды, витамины, дубильные вещества (Быстрова М. Н., Демидова М. А., 2012). В разной степени данные вещества оказывают противовоспалительное, антимикробное, отхаркивающее, иммуностимулирующее действие (Сошникова О. В., 2006).
Комбинированное применение лекарственного растительного сырья в виде растительных сборов позволяет получить синергизм в действии и более широкий спектр фармакологического действия за счет влияния каждого компонента, что способствует повышению эффективности фитотерапии (Морохи-на С. Л. и соавт., 2011).
Входящее в состав сборов лекарственное растительное сырье может корректировать лечебное действие друг друга. Сборы хорошо сочетаются с традиционными методами лечения, совместимы с другими лекарственными средствами и друг с другом, оказывают мягкое воздействие на организм, обеспечивая достижение стойкого лечебного эффекта (Морохина С. Л. и соавт., 2011, Иващенко Н. В. и соавт., 2013). При воспалительных заболеваниях органов дыхания в научной и народной медицине применяют различные виды лекарственного растительного сырья (алтея корни, аниса плоды, багульника болотного побеги, девясила корневища и корни, мать-и-мачехи листья, солодки корни, сосны почки, подорожника большого листья, синюхи корневища с корнями, фенхеля плоды и т.д.). Многие виды лекарственного растительного сырья с муколитическои активностью входят в состав многокомпонентных сборов (отхаркивающий сбор и грудные сборы №1, №2, №3, №4). Вместе с тем возможна разработка новых стандартизированных грудных сборов с точной дозировкой и подтвержденным в соответствии с правилами доказательной медицины эффектом.
Исследования по разработке состава, изучению химического состава и оценке фармакологической активности новых грудных сборов направлены на расширение ассортимента стандартизированных и эффективных лекарственных средств растительного происхождения.
Цель работы — разработка нового грудного сбора для лечения воспалительных бронхолегочных заболеваний и оценка его фармакологической активности.
Для достижения указанной цели предстояло решить следующие задачи:
-
На основе анализа содержания биологически активных веществ и изучения фармакологической активности лекарственного растительного сырья, обладающего муколитическои и антисептической активностью, разработать состав нового грудного сбора.
-
Провести сравнительное исследование содержания основных биологичес -ки активных веществ: полисахаридов, дубильных веществ, органических кислот, флавоноидов в водных извлечениях нового грудного сбора.
-
Определить значение LD5o для водных извлечений нового грудного сбора при внутрижелудочном введении мышам.
-
Оценить безопасность курсового применения водных извлечений нового грудного сбора при внутрижелудочном введении мышам.
-
Оценить муколитическую, противовоспалительную, обезболивающую, противоаллергическую, антимикробную и антиоксидантную активности нового грудного сбора в эксперименте на лабораторных животных.
Научная новизна
Впервые на основании экспериментальных исследований получен новый грудной сбор, состоящий из растительного сырья 5 видов (тимьяна ползучего трава, солодки голой корни, алтея лекарственного корни, мать-и-мачехи листья, подорожника большого листья). Определено количественное содержание основных действующих веществ (флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот и полисахаридов) в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов.
Проведено сравнительное исследование фармакологической активности впервые полученного нового грудного сбора с эффектами водных извлечений отдельных компонентов, грудного сбора №4 и синтетического муколитического средства ацетилцистеина. Показано, что при однократном и курсовом внутрижелудочном введении подопытным животным полученный новый грудной сбор является малотоксичным (относится к веществам IV класса токсичности). Впервые установлено, что муколитическая активность разработанного грудного сбора в среднем в 1,6 раза выше, чем у наиболее часто используемого грудного сбора №4. Полученный новый грудной сбор обладает также высокой антиоксидантной активностью. При этом суммарная антиоксидантная активность нового грудного сбора превышает расчетную величину антиоксидантной емкости, полученную по результатам определения антиоксидантной активности отдельных компонентов сбора, что, вероятно, свидетельствует о наличии синергизма в действии биологически активных веществ компонентов сбора.
Научно-практическая значимость
Результаты работы имеют как теоретическое, так и практическое значение. Показана перспективность получения нового грудного сбора для профилактики и лечения хронических воспалительных заболеваний органов дыхания, имеющих ряд преимуществ, как более эффективной лекарственной формы. Результаты по оценке безопасности применения, изучению муколитической, противовоспалительной, противоаллергической, обезболивающей, антимикробной активностей водного извлечения нового грудного сбора позволили экспериментально обосновать терапевтическую эффективность и могут быть использованы при разработке проекта инструкции по медицинскому применению в качестве муколитического средства.
Положения, выносимые на защиту
-
Наличие муколитической, противовоспалительной и обезболивающей активности у впервые полученного нового грудного сбора.
-
Более высокая муколитическая и антиоксидантная активность нового грудного сбора по сравнению с грудным сбором №4.
-
Наличие синергизма между отдельными компонентами нового грудного сбора в отношении антиоксидантной активности.
Внедрение в практику
Результаты, полученные при исследовании фармакологической активности и определении основных действующих веществ нового грудного сбора, используются в учебном процессе: в лекционном курсе и на практических занятиях по темам «Лекарственные средства, влияющие на систему органов дыхания», «Производство настоев», «Анализ лекарственного сырья, содержащего флавоноиды, полисахариды», а также в научно-исследовательской работе кафедры управления и экономики фармации Тверской государственной медицинской академии. Результаты исследований по разработке нового грудного сбора внедрены в практику лаборатории отдела контроля качества ОАО «Тверская фармацевтическая фабрика».
Связь темы диссертационного исследования с планом научных работ учреждения
Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО Тверская ГМА Министерства здравоохранения России. Номер государственной регистрации 01201174214.
Апробация работы
Основные положения и результаты диссертации были доложены и обсуждены на III международном медицинском конгрессе Армении «Вместе во имя здоровья» (7—9 июля 2011 г., Ереван), на международном конгрессе «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» (15—16 ноября 2011 г., Москва), на II международном конгрессе «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» (7—9 июня 2012 г., Москва), на III научно-практической конференции с международным участием «Естественные науки: достижения нового века» (24—26 августа 2013 г., Шарджа, ОАЭ), на расширенном заседании кафедры фармации ТГМА (02 октября 2013 г., Тверь).
Личное участие автора в получении результатов
Личный вклад автора состоит в анализе отечественных и зарубежных источников по теме диссертационного исследования, разработке состава сбора и непосредственном выполнении всех экспериментальных исследований по оценке безопасности, фармакологической активности нового грудного сбо-
pa, качественного и количественного состава биологически активных веществ основных групп химическими и инструментальными методами. Исследования по определению антиоксидантной активности сбора и отдельных его компонентов были проведены совместно с кандидатом химических наук, старшим научным сотрудником лаборатории химии возобновляемого природного сырья Института органической и физической химии им. А. Е. Арбузова Казанского научного центра Российской академии наук, А. А. Лапиным. Исследования по оценке антимикробной активности сбора были проведены совместно с доктором медицинских наук, доцентом кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ТГМА Ю. В. Червинец. Автор лично участвовала в анализе полученных данных, их статистической обработке и интерпретации, формулировке выводов. Публикации по результатам работы подготовлены при активном участии автора (авторский вклад составляет 85 %).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 2 — в центральных рецензируемых изданиях и журналах, рекомендованных ВАК при Министерстве образования и науки Российской Федерации.
Объем и структура диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 2-х глав результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, научно-практических рекомендаций и списка литературы, включающего 173 источника, в том числе 20 иностранных. Работа изложена на 123 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц и 3 рисунка.
Фитотерапевтические средства, применяемые при воспалительных заболеваниях органов дыхания
Воспалительные заболевания органов дыхания являются наиболее часто встречающейся патологией во всем мире, а лечение пациентов с данными заболеваниями ассоциировано с серьезными экономическими затратами. Увеличению распространенности заболеваний органов дыхания способствуют ухудшение экологической обстановки, связанное с загрязнением окружающей среды, неблагоприятные метеоусловия, несбалансированное питание, стрессы, нерациональная фармакотерапия инфекционных заболеваний, приводящая к распространению антибиотикорезистентной микрофлоры и другие факторы [105, 114, 121, 141].
По своему течению заболевания органов дыхания могут быть острыми и хроническими. Кпинико-морфологические проявления болезней органов дыхания являются весьма многообразными, так как существует большое число этиологических факторов этих заболеваний, а поражаться могут различные отделы дыхательной системы. По локализации различают заболевания верхних дыхательных путей (например, острые респираторные вирусные инфекции, фарингиты, ларингиты, трахеиты) и нижних дыхательных путей (бронхиты, пневмонии, хроническая обструктивная болезнь легких, бронхиальная астма).
Одним из наиболее распространенных и тяжелых заболеваний органов дыхания является хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ). По данным современных эпидемиологических исследований в развитых странах Европы и Америки, ХОБЛ страдают от 4 до 15% взрослого населения. В нашей стране согласно данным Министерства здравоохранения РФ зарегистрировано 2,4 млн больных ХОБЛ, однако результаты отдельных эпидемиологических исследований позволяют предположить, что их число существенно выше [116, 117, 140, 155].
Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) — хроническое медленно прогрессирующее заболевание, течение которого характеризуется периодически возникающими обострениями. В периоде обострения ХОБЛ отмечаются появление или усиление одышки, увеличение объема отделяемой мокроты, изменение характера мокроты (чаще становится гнойной). В настоящее время до 75-80% обострений ХОБЛ имеют инфекционную природу. Именно обострения заболевания являются основной причиной обращения больных ХОБЛ за медицинской помощью, так как нередко приводят к существенному ухудшению состояния пациентов и необходимости стационарного лечения. Серьезными последствиями заболевания могут быть ограничение физической работоспособности и инвалидизация пациентов [62, 71, 88, 116, 117, 173].
Основными факторами риска развития ХОБЛ являются табачный дым (табакокурение или вдыхания вторичного табачного дыма); профессиональные вредности (работа в условиях повышенной запыленности производственных помещений, в том числе при воздействии кадмия, кремния, цементной и асбестовой пыли, испарений расплавленных металлов и т.д.); воздействие поллютантов окружающей среды (продукты сгорания дизельного топлива, выхлопные газы грузовых и легковых автомашин, в том числе диоксид серы, азота и углерода, свинец, угарный газ, бензопирен); генетические факторы (дефицит al-антитрипсина, который приводит к развитию эмфиземы, формированию бронхоэктазов), недоношенность и, возможно, генетическая предрасположенность — группа крови А(П), отсутствие IgA, частые инфекционные заболевания дыхательных путей [37, 88,105].
В патогенезе ХОБЛ наибольшую роль играют воспалительный процесс, дисбаланс протеиназ и антипротеиназ в легких, окислительный стресс. Патофизиологические изменения при ХОБЛ включают гиперсекрецию слизи, дисфункцию мукоцилиарного аппарата, бронхиальную обструкцию, деструкцию паренхимы и эмфизему легких, расстройства газообмена, легочную гипертензию, системные проявления.
Бронхит (как острый, так и хронический), бронхиальная астма, пневмония также являются распространенными патологиями органов дыхания. Острый бронхит - это острое воспаление слизистой оболочки бронхов. Основным симптомом является кашель. Предрасполагают к заболеванию переохлаждение, инфекции верхних дыхательных путей, курение, снижение иммунитета. В большинстве случаев острого бронхита его причиной является инфекция, вирусная, бактериальная, реже - грибковая. Хронический бронхит - хроническое воспаление бронхов, возникающее в результате затянувшегося острого бронхита (например, после перенесенной кори или гриппа) или же длительного воздействия на слизистую оболочку бронхов биологических, физических и химических факторов (возбудители инфекции, курение, охлаждение дыхательных путей, запыление и т.д.). Клинически хронический бронхит проявляется развитием обострений (кашель с мокротой) не менее 3-х месяцев в году в течение 2-х лет подряд при исключении других возможных причин кашля [4, 157, 165, 166].
Бронхиальная астма - заболевание, при котором наблюдаются приступы экспираторной одышки, вызванные аллергической реакцией в бронхиальном дереве с нарушением проходимости бронхов.
Факторами, вызывающими бронхиальную астму, являются главным образом экзогенные аллергены при несомненной роли наследственности. Среди причин, определяющих повторные приступы бронхиальной астмы, выделяют инфекционные заболевания, особенно верхних дыхательных путей, аллергические риносинуситопатии, воздействия внешней среды, воздействия веществ, взвешенных в воздухе (пыль комнатная и производственная, дым, различные запахи и др.), метеорологические (повышенная влажность атмосферного воздуха, туманы) и психогенные (психогенные раздражения) факторы, употребление ряда пищевых продуктов и лекарств. Инфекционно-аллергическая бронхиальная астма наблюдается при воздействии аллергенов на больных с острыми или хроническими бронхолегочными заболеваниями, вызванными инфекционными агентами.
Количественное определение органических кислот в водных извлечениях нового грудного сбора и отдельных его компонентов
В качестве препарата сравнения в экспериментах использовали «АЦЦ» (действующее вещество ацетилцистеин) фирмы Hexal AG (Германия) - как эффективный муколитический препарат, обладающий также противовоспалительным действием и грудной сбор №4 (ОАО «Красногорсклексредства», Россия). Исследуемые препараты вводили мышам внутрижелудочно с помощью специального зонда. Водные извлечения нового грудного сбора и отдельных его компонентов вводили подопытным мышам внутрижелудочно в дозе 355 мг/кг (в пересчете на сухое вещество), что составляет 1/20 от LD5o, ацетилцистеин в дозе 1500 мг/кг (раствор ацетилцистеина получали путем растворения 9 г препарата АЦЦ в 200 мл горячей воды, полученный раствор охлаждали). Животным контрольной группы вводили изотонический раствор натрия хлорида.
Эксперименты по моделированию химического раздражения брюшины проводили на белых беспородных самцах мышей весом 20±2 г.
Воспалительную реакцию индуцировали внутрибрюшинным введением мышам-самцам 300 мг/кг уксусной кислоты в виде 3% раствора. Наблюдение за подопытными животными проводили в течение 20 мин после введения уксусной кислоты. Мышей, у которых не возникала реакция «корчения» (характерные движения животных, включающие сокращения брюшных мышц, чередующиеся с их расслаблением, вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины), в экспериментах не использовали.
На следующий день мышам с положительной реакцией через 30 мин после внутрижелудочного введения исследуемых препаратов, внутрибрюшинно вводили раствор уксусной кислоты в указанных выше дозе и концентрации. Каждую подопытную мышь помещали в стеклянный контейнер, регистрировали общее число приступов экстензорных судорог («корчей») в течение 1 часа. Проведено 9 серий опытов, в которых оценивали число специфических ноцицептивных реакций на введение следующих препаратов: 1. Контроль - изотонический раствор натрия хлорида; 2. Ацетицистеин; 3. Водное извлечение грудного сбора №4; 4. Водное извлечение нового грудного сбора; 5. Водное извлечение тимьяна ползучего травы; 6. Водное извлечение солодки голой корней; 7. Водное извлечение алтея лекарственного корней; 8. Водное извлечение мать-и-мачехи листьев; 9 Водное извлечение подорожника большого листьев. В каждой серии опытов использовали по 10 животных.
Острый воспалительный отек лап у мышей вызывали субплантарным введением в заднюю лапу подопытных животных 0,1 мл 2% водного раствора формалина. Онкометрию лапы проводили с помощью инженерного микрометра МК-0-25 через 1, 4, 8 и 24 часа после введения исследуемых препаратов. Активность исследуемых препаратов выражали в %% угнетения отека.
Проведено 9 серий опытов, в которых оценивали выраженность формалин-индуцированного отека лапы у подопытных животных при введении следующих препаратов: 1. Контроль - изотонический раствор натрия хлорида; 2. Ацетицистеин; 3. Водное извлечение грудного сбора №4; 4. Водное извлечение нового грудного сбора; 5. Водное извлечение тимьяна ползучего травы; 6. Водное извлечение солодки голой корней; 7. Водное извлечение алтея лекарственного корней; 8. Водное извлечение мать-и-мачехи листьев; 9 Водное извлечение подорожника большого листьев. В каждой серии опытов использовали по 10 животных.
Противоаллергическую активность водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов изучали на моделях активной кожной анафилаксии и кожной аллергической реакции замедленного типа у мышей.
Активную кожную анафилаксию у мышей моделировали по Г. Фримелю (1987) в модификации М.А. Демидовой [38]. Постановку реакции активной кожной анафилаксии проводили в экспериментах на белых неинбредных мышах самцах массой 20,5±0,6 г. Сенсибилизацию подопытных животных проводили трехкратным ежедневным подкожным введением 1 мкг овальбумина, разведенного в 0,2 мл изотонического раствора натрия хлорида с равным количеством вазелинового масла. Реакцию активной кожной анафилаксии индуцировали на 21-е сутки латентного периода сенсибилизации. С этой целью подопытным животным в хвостовую вену вводили синий Эванса (0,25 мл 1,6% раствора на 100 г веса), после чего внутрикожно - 0,05 мкг овальбумина, что приводило к развитию местной аллергической реакции. Через 20 минут животным внутрижелудочно с помощью специального зонда вводили водные извлечения нового грудного сбора и отдельных его компонентов в дозах 355 мг/кг (что составляет 1/20 от LD50). После достижения эффекта препаратов (30 минут) повторно внутрикожно вводили антиген с другой стороны живота. Через 20 минут животных (под эфирным наркозом) забивали, отсепаровывали кожу и оценивали результаты реакции.
Для удобства прочтения реакций, места введения аллергена обводили цветным фломастером. Визуально кожная анафилаксия проявлялась окрашиванием участка кожи в синий цвет, что было связано с выходом красителя из кровеносного русла в очаг аллергического поражения. Выраженность реакции активной кожной анафилаксии оценивали по площади опытных и контрольных пятен.
Оценка количественного химического состава водных извлечений нового грудного сбора и отдельных его компонентов
В контрольной серии опытов с использованием изотонического раствора натрия хлорида индикаторные частицы в результате работы мерцательного эпителия передвинулись по изолированной трахее крысы на 5 мм в течение 124,0±9,1 минут. В серии опытов с использованием синтетического муколитического средства ацетилцистеина скорость продвижения индикаторных частиц по изолированной трахее крысы была в среднем в 1,5 раза (р 0,05), а при применении водного извлечения грудного сбора №4 - в 1,4 раза (р 0,05) больше, чем в контроле. Полученные данные подтверждают наличие выраженной отхаркивающей активности у ацетилцистеина и грудного сбора №4, при этом различия в эффективности исследованных препаратов в этом отношении были недостоверны.
Обращает на себя внимание тот факт, что время продвижения индикаторных частиц на 5 мм по изолированной трахее крысы в серии опытов с использованием водного извлечения нового грудного сбора было соответственно в 2,3 раза (р 0,05), в 1,6 раза (р 0,05) и в 1,5 (р 0,05) раза меньше, чем в контроле (изотонический раствор натрия хлорида) и в сериях опытов с использованием ацетилцистеина и водного извлечения грудного сбора №4. Возможно, более высокая отхаркивающая активность нового грудного сбора связана с тем, что все 5 компонентов сбора обладали муколитической активностью различной степени выраженности.
Сравнительное исследование отхаркивающей активности водных извлечений отдельных компонентов сбора показало, что наиболее активным в этом отношении был настой листьев подорожника. В серии опытов с использованием водного извлечения подорожника большого листьев время продвижения индикаторных частиц по трахее было в среднем в 2,2 раза (р 0,05) меньше, чем в контроле и в 1,5 раза (р 0,05) меньше, чем в серии опытов с ацетилцистеином. Несколько слабее действовали настой корней алтея и листьев мать-и-мачехи. В серии опытов с использованием водного извлечения алтея лекарственного корней время продвижения индикаторных частиц по трахее было соответственно в 1,8 раза (р 0,05) и в 1,2 раза (р 0,05) меньше, чем в контроле и в серии опытов с ацетилцистеином. Время передвижения индикаторных частиц по трахеи крысы при использовании водного извлечения мать-и-мачехи листьев было в среднем 1,2 раза (р 0,05) меньше, чем в серии опытов с ацетилцистеином. Достоверных отличий в отхаркивающей активности водных извлечений алтея лекарственного корней и мать-и-мачехи листьев обнаружено не было.
Наименьшей отхаркивающей активностью из отдельных компонентов сбора обладали водные извлечения тимьяна ползучего травы и солодки голой корней. Было отмечено, что время продвижения индикаторных частиц в сериях опытов с использованием водных извлечений тимьяна ползучего травы и солодки голой корней было соответственно в 1,3 раза (р 0,05) и 1,2 раза (р 0,05) меньше, чем в контроле, но соответственно в 1,2 раза (р 0,05) и 1,3 раза (р 0,05) раза больше, чем в сериях опытов с ацетилцистеином.
Таким образом, результаты экспериментального исследования, проведенные с использованием модели изолированной трахеи крысы, показали, что новый грудной сбор обладал более высокой отхаркивающей активностью, чем водные извлечения отдельных его компонентов и препараты сравнения - ацетилцистеин и грудной сбор №4. Возможно, это связано с процессами синергизма биологически активных веществ, входящих в состав растительного сырья. Следует отметить, что результаты сравнительной оценки муколитической активности нового грудного сбора и эталонного грудного сбора №4 согласуются с результатами проведенных фитохимических исследований, свидетельствующих о более высоком содержании в новом грудном сборе биологически активных веществ, в том числе полисахаридов, от концентрации которых во многом зависит муколитическая активность фитопрепаратов.
Оценку противовоспалительной активности нового грудного сбора осуществляли на моделях химического раздражения брюшины («реакция корчения» у мышей) и острого воспалительного отека лапы у мышей, индуцированного введением формалина в подушечку лапы подопытных животных. Установлено, что при внутрижелудочном введении водного извлечения нового грудного сбора достоверно уменьшалось количество специфических ноцицептивных ответов («корчей») на внутрибрюшинное введение уксусной кислоты у мышей. Об этом свидетельствовало уменьшение числа сокращения брюшных мышц, чередующиеся с их расслаблением, вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины под влиянием исследованных водных извлечений сбора и отдельных его компонентов по сравнению с контролем (табл. 13).
Оценка противовоспалительной активности водного извлечения нового грудного сбора и отдельных его компонентов
С учетом коэффициента межвидового переноса доз с подопытных мышей на человека терапевтическая доза водного извлечения нового грудного сбора для человека составляет 27 мг/кг.
Результаты экспериментального исследования, проведенные с использованием модели изолированной трахеи крысы, показали, что новый грудной сбор обладал более высокой отхаркивающей активностью, чем водные извлечения отдельных его компонентов и препараты сравнения -ацетилцистеин и грудной сбор №4. Об этом свидетельствовал тот факт, что скорость продвижения индикаторных частиц по изолированной трахее крысы в серии опытов с использованием водного извлечения нового грудного сбора была соответственно в 2,3 раза (р 0,05), в 1,6 раза (р 0,05) и в 1,5 (р 0,05) раза выше, чем в контроле (изотонический раствор натрия хлорида) и в сериях опытов с использованием ацетилцистеина и водного извлечения грудного сбора №4. Возможно, это связано с процессами синергизма биологически активных веществ, входящих в состав растительного сырья. Из отдельных компонентов сбора наиболее активным в этом отношении был настой листьев подорожника.
Обращает на себя внимание тот факт, что новый грудной сбор наряду с отхаркивающим действием обладал также противовоспалительной, противоаллергической, обезболивающей и антиоксидантной активностью.
Экспериментальные исследования, проведенные с использованием модели химического раздражения брюшины («реакция корчения») у мышей, показали, что при числе специфических ноцицептивных ответов у подопытных мышей, получавших водное извлечение нового грудного сбора, на внутрибрюшинное введение уксусной кислоты было в среднем в 1,8 раза (р 0,05) меньше, чем в контроле. Противовоспалительная активность нового грудного сбора при химическом раздражении брюшины у мышей была в среднем в 1,2 раза (р 0,05) больше, чем у грудного сбора №4. Из отдельных компонентов сбора наиболее выраженную противовоспалительную активность проявил настой листьев мать-и-мачехи. Наличие противовоспалительной активности у водного извлечения нового грудного сбора подтвердили исследования, проведенные с использованием модели острого воспалительного отека лапы у мышей, индуцированного введением формалина в подушечку лапы подопытных животных.
Оценку противоаллергической активности нового грудного сбора проводили на моделях активной кожной анафилаксии и аллергической реакции замедленного типа у мышей. Было показано, что при использовании водного извлечения нового грудного сбора уменьшалась выраженность реакции активной кожной анафилаксии у мышей. При этом противоаллергическая активность нового грудного сбора была в среднем в 1,4 раза слабее, чем у преднизолона, и сопоставима с эффектами грудного сбора №4. На течение аллергических реакций замедленного типа новый грудной сбор влияния не оказывал. Возможно, сходные противоаллергические свойства исследованных сборов связаны с содержанием в них солодки корней. Известно, что в солодке голой содержатся вещества, близкие как по своему строению, так и по действию к стероидным гормонам, продуцируемым корковым слоем надпочечников и обладающим выраженными противовоспалительными свойствами (глицирризиновая кислота солодки, освобождающаяся при гидролизе глицирризина, подвергается в дальнейшем метаболическим преобразованиям, оказывая кортикостероидоподобное действие). Экспериментальные исследования, проведенные с использованием модели «горячая пластинка», позволили выявить наличие обезболивающей активности у нового грудного сбора, которая была слабее, чем у метамизола натрия, но сопоставима с эффектами грудного сбора №4. Обращает на себя внимание и тот факт, что при использовании водных извлечений отдельных компонентов сбора обезболивающая активность либо не проявлялась, либо была существенно слабее, чем у сбора. Приведенные данные свидетельствуют о том, что обезболивающая активность нового грудного сбора связана с синергизмом в действии отдельных компонентов сбора. Такая закономерность характерна для многокомпонентных растительных препаратов и описана в научной литературе в отношении различных фармакологических эффектов.
В наших исследованиях явления синергизма были отмечены также в отношении антиоксидантной активности сбора. Так, было обнаружено, что суммарная антиоксидантная активность водного извлечения исследованного сбора превышала расчетную величину антиоксидантной емкости, полученную по результатам определения антиоксидантной активности отдельных компонентов сбора, в среднем в 1,5 раза (р 0,05). Обращает на себя внимание и тот факт, что антиоксидантная емкость водного извлечения нового грудного сбора была в 12,3 раза выше, чем у грудного сбора №4.
Таким образом, в настоящей работе на основании изучения химического состава и фармакологических свойств отдельных компонентов разработан состав нового грудного сбора, обладающего наряду с отхаркивающим действием выраженными противовоспалительными, противоаллергическими, обезболивающими и антиоксидантными свойствами.
![Изучение фармакологической активности производных пирроло[1,2-[А]]бензимидазола, проявляющих антиоксидантные и антирадиккальные свойства](/i/i/4463/390174.png "Изучение фармакологической активности производных пирроло[1,2-[А]]бензимидазола, проявляющих антиоксидантные и антирадиккальные свойства Ельцова Лариса Витальевна")
![Исследование антиаритмической активности производного 4-нитро-n-[1-фенил-5-(диэтиламино) пентил] бензамида (экспериментальное исследование)](/i/i/5047/650993.png "Исследование антиаритмической активности производного 4-нитро-n-[1-фенил-5-(диэтиламино) пентил] бензамида (экспериментальное исследование) Сингх Лариса Николаевна")