Введение к работе
Актуальность проблемы
Бронхит - одно из наиболее частых после ОРВИ заболеваний органов дыхания у детей. В среднем, регистрируемая заболеваемость бронхитами в детском возрасте составляет около 100 случаев на 1000 детей в год (Середа Е.В., 2001; Таточенко В.К., 2004). Широкий диапазон в показателях распространенности бронхитов, судя по всему, объясняется тем, что при обращении в поликлинику зачастую диагностируется не острый бронхит, а ОРВИ. Также к гиподиагностике рецидивирующих форм бронхитов ведет расширенное использование понятия «часто болеющие дети» (Самсыгина Г.А., 2009).
Основную роль в развитии бронхитов играют вирусы, вирусно-бактериальные ассоциации и внутриклеточные возбудители (Самсыгина Г. А. с соавт., 1998).
Начало большинства заболеваний органов дыхания, в том числе и бронхитов, связано с развитием патологических процессов в слизистых оболочках дыхательных путей, которые в норме задерживают и элиминируют около 70% поступающих извне патогенов. Барьерные функции слизистых оболочек осуществляются с помощью механизма колонизационной резистентности. Термин «колонизационная резистентность», впервые введенный Van der Waaij D. в 1971 году, трактуется как совокупность взаимосвязанных физиологических, микробиологических и иммунологических факторов организма, придающих стабильность индигенной (нормальной) микрофлоре и препятствующих колонизации организма посторонними микроорганизмами (Шендеров Б.А., 1998).
Функции индигенной микрофлоры разнообразны. Она способствует синтезу незаменимых аминокислот, продуцирует различные витамины, пантетоновую кислоту, биотин. Основная функция индигенной микрофлоры заключается в поддержании колонизационной резистентности организма (Шендеров Б.А., 1998; Sierra P. et al., 2000; Stepanovic S. et al., 2001).
В норме представители патогенной и условно-патогенной микрофлоры не оказывают отрицательного влияния на организм, но, вследствии различных нарушений, они, активно размножаясь, могут заселять нетипичные для них экологические ниши, становясь причиной инфекционных процессов различной локализации (Shibusawa T. et al., 1991; Парфенов А. И. с соавт., 1998).
Бронхит является аэрогенной инфекцией, поэтому именно в верхних отделах респираторного тракта после ингаляционной антигенной стимуляции на слизистых оболочках происходит нарушение иммунологического гомеостаза и запускаются локальные защитные реакции для поддержания колонизационной резистентности организма. Эти защитные реакции обозначаются термином «местный иммунитет слизистых оболочек» (Карякина Е.В. с соавт., 2004).
Защита на местном уровне развивается путем формирования типичной воспалительной реакции после взаимодействия патогенов с мембранными Toll-подобными рецепторами (TLR), которые являются представителями системы рецепторного врождённого иммунного ответа. Затем происходит активация белков системы комплемента, генов цитокинового каскада, иммуноглобулинов. Все эти процессы определяют уровень мукозальной колонизационной резистентности, благодаря которой происходит блокирование жизнедеятельности, дезинтеграция и удаление инфекционного агента из организма (Абатуров А.Е., 2006).
Среди факторов местной иммунной защиты, участвующих в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек ротоглотки и обусловливающих баланс воспалительно - противовоспалительных реакций респираторного тракта, значительная роль отводится как индигенной микрофлоре, так и цитокинам, интерферонам, факторам роста, комплементу, лизоциму, sc, sIgA и др. (Маянский А.Н. с соавт., 1993; Kowalski M.L. et al., 1993).
Но, несмотря на это, клиническому изучению саливарного уровня цитокинов посвящены единичные работы, связанные, в основном, с патологией слизистой оболочки ротовой полости. А большинство исследователей при оценке местного иммунитета слизистых ротоглотки ограничиваются анализом содержания только sIgA. Содержание и соотношение других биологически активных веществ в слюнной жидкости, вносящих значительный вклад в формирование колонизационной резистентности организма, мало изучены, особенно у детей.
Буккальные эпителиоциты, так же как и слюна, могут быть индикатором нарушений саливарного гомеостаза. Их рецепторный аппарат подвергается воздействию протеолитических и гликозидазных ферментов секрета ротовой полости. Содержание таких ферментов заметно повышается во время заболеваний. В результате этого воздействия происходит нарушение колонизационной резистентности слизистых оболочек, которое проявляется в колонизации организма условно-патогенными и патогенными микроорганизмами, и тем самым создается угроза инфекционных осложнений (Weinmeister K.D. et al., 1994).
Актуальность работы заключается в необходимости изучения факторов, которые участвуют в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек ротоглотки, и установления их роли в патогенетических механизмах развития бронхитов у детей.
Цель исследования
Изучение системы мукозального иммунитета и микробиоценоза ротоглотки у детей с разными формами бронхитов и их роли в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек.
Задачи исследования
1. Установить этиологически значимых возбудителей бронхитов у детей.
2. Оценить состояние колонизационной резистентности слизистых оболочек респираторного тракта у здоровых и больных бронхитами детей по показателям естественной и экспериментальной адгезии с применением в качестве тест-объектов клеток назофарингеального и буккального эпителия.
3. Провести комплексный анализ бактериологических посевов с задней стенки глотки и показателей клеточных и гуморальных факторов местного иммунитета в слюне у здоровых и больных бронхитами детей.
4. Оценить роль микрофлоры и саливарных иммунологических факторов в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек ротоглотки.
Научная новизна
Впервые проведено комплексное изучение антиинфекционной резистентности детей, больных бронхитами, базирующееся на оценке колонизационной резистентности слизистой оболочки задней стенки глотки.
Установлено, что колонизационная резистентность слизистой оболочки задней стенки глотки является интегрирующей составляющей мукозального иммунитета.
Показано, что при остром и хроническом бронхите наблюдается снижение уровня естественной колонизации буккального эпителия «оральными» стрептококками и, как следствие этого, отмечается снижение устойчивости назофарингеального эпителия к экспериментальной адгезии с использованием тест-культур.
Выявлена взаимосвязь показателей местного иммунитета (секреторных иммуноглобулинов, лизоцима и цитокинов) с уровнями экспрессии эпителиоцитами задней стенки глотки Toll-подобных рецепторов. При высокой инфекционной нагрузке (микст-инфекции) у пациентов с острым бронхитом наблюдались более высокие уровни экспрессии генов TLR-2, -3, -4 и -8, показателей sIgA, sc, лизоцима и провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-8, ИНФ-, ФНО- , ГМ-КСФ, чем у детей с хроническим бронхитом.
Установлено, что по комплексной оценке уровней экспрессии эпителиальными клетками задней стенки глотки генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8 и продукции цитокинов ИЛ-1, ИЛ-8, ИНФ-, ФНО- и ГМ-КСФ при бронхитах у детей можно охарактеризовать стадию течения заболевания. Так, при бронхите пятикратное повышение уровней этих показателей свидетельствует, чаще всего, об его остром течении, а отсутствие значительного повышения указывает на хроническое течение бронхита.
Впервые разработаны комплексные информативные критерии оценки нарушения микробиоценоза задней стенки глотки, которые помогут усовершенствовать диагностику и терапию бронхитов у детей.
Полученные результаты позволили расширить знания о микробиологических и иммунологических факторах организма, которые вместе с индигенной (нормальной) микрофлорой участвуют в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек дыхательного тракта при бронхитах у детей.
Практическая значимость
Выведенные нормативы показателей микробиологических, иммунологических и биохимических факторов, вносящих значительный вклад в формирование индигенной микрофлорой колонизационной резистентности слизистых оболочек верхних дыхательных путей в детском возрасте, могут помочь в совершенствовании диагностики и лечении бронхитов у детей, а также использоваться в научно-исследовательской работе.
Метод определения уровней экспрессии генов TLR с использованием ПЦР в реальном времени, совмещенной с обратной транскрипцией с применением специфических праймеров (патент РФ № 2327995 «Способ диагностики хронического урогенитального хламидиоза», зарегистрирован 27.06.2008 г.), был апробирован на эпителиальных клетках задней стенки глотки и может быть введен в клинико-диагностическую практику при диагностике бронхитов для определения стадии заболевания. Метод воспроизводится в условиях стандартной ПЦР-лаборатории.
Внедрение результатов работы в практику
По материалам диссертации издано учебное пособие «Микроэкология и гуморальный иммунитет слизистых открытых полостей человека в норме и при патологических состояниях», рекомендованное учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия для системы послевузовского профессионального образования врачей. Издано также пособие для врачей «Роль инфекции в развитии патологии верхнего отдела дыхательных путей у детей» (утверждено проректором по учебной работе и международному сотрудничеству Российской медицинской академии последипломного образования, член-корр. РАМН, профессором И.В. Поддубной).
Основные положения, выносимые на защиту
1. Нарушение антиинфекционной резистентности слизистой оболочки задней стенки глотки при бронхитах у детей проявляется в количественных изменениях ее микробиологических и иммунологических показателей, которые в норме вместе с индигенной микрофлорой участвуют в формировании колонизационной резистентности и препятствуют колонизации организма посторонними микроорганизмами.
2. Изменения систем врожденного и приобретенного иммунитета при бронхитах сопровождаются выраженным дисбалансом иммунологических показателей мукозального иммунитета.
3. Состояние микробиоценоза ротоглотки у детей с бронхитами взаимосвязано с уровнем мукозального иммунитета.
Апробация работы
Диссертация апробирована на совместном заседании секций «Медицинская биотехнология» и «Общая и прикладная иммунология» Ученого совета ФБУН
МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, протокол № 2 от 28 февраля 2013 г.
Результаты диссертационной работы были представлены на Научно-практической конференции, посвященной 50-летию детского инфекционного отделения МОНИКИ (Москва, 2008); Юбилейной Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н.Блохиной Роспотребнадзора и 20-летию Приволжского окружного центра по профилактике и борьбе со СПИД (Нижний Новгород, 2009); Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 100-летию Ростовского научно-исследовательского института микробиологии и паразитологии (Ростов-на-Дону, 2009); XIV научно-практической конференции ГОУ ДПО «Пензенский институт усовершенствования врачей» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (Пенза, 2009); XVI, XVII, XVIII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2009, 2010, 2011).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 5 - в рецензируемых изданиях; 7- в сборниках материалов конференций; 1- учебное пособие для системы послевузовского профессионального образования врачей; 1- пособие для врачей. Получен 1 патент на изобретение.
Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах печатного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы (глава 1), материалы и методы исследований (глава 2), результаты собственных исследований (глава 3), заключение, выводы, список цитируемой литературы. Диссертация иллюстрирована 5 рисунками и 9 таблицами. В библиографическом указателе приведено 185 источников, из них 93- на русском и 92 - на иностранном языках.
![Клинико-функциональная характеристика различных вариантов острого обструктивного бронхита у детей раннего возраста [Электронный ресурс]](/i/i/4414/201268.png "Клинико-функциональная характеристика различных вариантов острого обструктивного бронхита у детей раннего возраста [Электронный ресурс] Хафизова Елена Евгеньевна")
