Введение к работе
4 Актуальность исследования
В современную эру инвазивной диагностики широкого спектра заболеваний, и прежде всего патологии почек и сердечно-сосудистой системы, поражение почек, связанное с использованием рентгеноконтрастных средств (РКС), расценивается как одна из важнейших причин ятрогенной острой почечной недостаточности (ОПН). По оценкам проспективных клинических исследований, вызванная РКС нефротоксичность составляет в среднем около 12% случаев госпитальной ОПН. при этом смертность достигает 5-10% (Тареева И.Е., 1987; Сергеев П.В. и соавт., 1993; Berns А., 1989; Idee J. и соавт., 1994). Это определяет как медицинский, так и значимый социально-экономический характер проблемы. Вместе с тем отсутствие достаточных знаний о механизмах нефротоксического действия РКС препятствует разработке и своевременному использованию эффективных методов профилактики этого наиболее серьезного осложнения использования контрастных-средств.
В настоящее время среди причин развития ОПН, вызванной воздействием контрастных средств, обсуждается в основном прямое цитотоксическое действие РКС, прежде всего на уровне клеток канальцевого эпителия, что обусловливает ренальный тип ОПН (Defray G. И соавт., 1990; Agmon Y., Brezis М., 1993). Вместе с тем, учитывая разнообразный характер ОПН, вызываемой РКС, в том числе и преренальный, представляется, что гемодинамические нарушения, включая изменения внутрипочечного кровообращения, играют не менее значимую роль в механизмах нефротоксического действия РКС. Причины подобных гемодинамических нарушений не выяснены и требуют дальнейшего изучения. В частности, практически не исследована роль гормональных факторов эндотелия -эндогенного оксида азота (N0) и эндотелина, являющихся мощными сосудорасширяющими и сосудосуживающими гормонами, способными воздействовать как на системную, так и на внутрипочечную гемодинамику. Нет сведений о характере участия в нефротоксическом действии РКС других вазоактивных пептидов - тромбоксана и простациклина, противоречивы данные о ренин-ангиотензиновой системе (РАС) и простагландинах (ПГ), также оказывающих выраженное влияние на общую и внутриклубочковую микроциркуляцию (Larson Т. И соавт., 1991; Наугог J. И соавт., 1991). В большей степени исследованы механизмы воздействия РКС на состояние водно-электролитного гомеостаза. В частности, R.Katzberg и соавт. (1986), M.Brezis и соавт. (1991) было показано, что РКС, являясь осмотически высокоактивными веществами, способны, по типу осмотических и тиазидовых диуретиков, вызывать выраженные водно-электролитные нарушения и прежде всего нарушения обмена кальция - внутриклеточного (в цитозоле) и
5 внеклеточного - гилеркальциемию (Bakris G„ Burtett J., 1988 Deray G. И соавт., 1990a). Учитывая многообразие и значимость физиологических функций Са, таких как участие в синтезе и метаболизме практически всех вазоактивных гормонов, роль собственно ионов Са в процессах спазма и релаксации почечных артериол, а также его роль в поддержании водно-электролитного гомеостаза, представилось целесообразным исследовать механизмы нефротоксического действия РКС в связи с нарушениями обмена Са и определить эффекты коррекции этих нарушений в профилактике нефротоксического действия РКС в условиях экспериментальных и клинических исследований.
Согласно данным литературы, в настоящее время не существует специальных средств патогенетической терапии и профилактики ОПН, вызванной аоздзйствием РКС. Вместе с тем объем использования контрастных средств растет, и в том числе за счет высоких доз РКС при ангиографии и ангиопластике, что ведет, соответственно, к росту осложнений и смертности, вызванной воздействием РКС. В этой связи остается актуальным изучение механизмов поражения почек контрастными средствами и поиск методов профилактики нефротоксического
действия РКС.
Цель исследования
Уточнить механизмы нефротоксического действия рентгеноконтрастных
средств; обосновать и разработать подходы к профилактике поражения почек при их
применении. «> .
Задачи исследования
В условиях экспериментальных и клинических исследований определить:
-
Влияние высоко- и низкоосмолярных рентгеноконтрастных средств на функциональное состояние почек, водно-электролитный гомеостаз и ренин-ангиотенэиновую систему.
-
Роль простагландинов в развитии острой почечной недостаточности, вызванной воздействием рентгеноконтрастных средств.
-
Значение нарушений обмена кальция в механизмах нефротоксического действия рентгеноконтрастных средств.
-
Роль эндогенного оксида азота (N0) в нарушении внутрипочечной гемодинамики, связанном с воздействием рентгеноконтрастных средств.
-
Роль тромбоксана и простациклина в механизмах нефротоксического действия контрастных средств.
6, Роль эндотелина в механизмах нефротоксического действия
рентгеноконтрастных средств.
7. Оценить эффективность антагонистов ионов кальция (верапамипа и коринфара) в
профилактике нефротоксического действия рентгеноконтрастных средств.
Научная новизна
Впервые в условиях клинических и экспериментальных исследований установлена решающая роль нарушений обмена кальция в изменениях водно-электролитного гомеостаза, нарушениях внутрипочечной гемодинамики и функции почек, обусловливающих нефротоксическое действие рентгеноконтрастных средств.
Впервые на экспериментальной модели ОПН, вызванной воздействием РКС, показана роль простагландинов в механизмах нефротоксического действия контрастных средств. Установлено, что блокада синтеза простагландинов (индометацином) способствует усилению нефротоксичности РКС, а сочетанное использование индометацина и РКС является фактором высокого риска развития ОПН.
Впервые установлена роль и характер изменений синтеза оксида азота (N0) в механизмах нефротоксического действия РКС. Выявлено, что нарушение синтеза NO обусловлено снижением активности кальцийзависимых NO-синтетаз и прямым цитотоксическим действием РКС. Дефицит синтеза N0 опосредует нарушения внутриклубочковой гемодинамики путем воздействия на приносящую артериолу и коэффициент ультрафильтрации.
Впервые исследована роль тромбоксана и простациклина в механизмах нефротоксического действия РКС при всех вариантах хронического гломерулонефрита, атеросклероз?, и ишемической болезни сердца (ИБС). Установлено, что воздействие РКС вызывает повышение уровня тромбоксана Аг и снижение концентрации простациклина. Названные изменения коррелируют со степенью ухудшения функционального состояния почек.
Впервые исследована роль изменения концентрации сосудосуживающего гормона эндотелия - эндотелина-1 в механизмах нефротоксического действия РКС у больных хроническим гломерулонефритом, атеросклерозом и ИБС. Выявлено повышение уровня эндотелина, находящееся в прямой корреляционной связи с ухудшением функции почек после введения рентгеноконтрастных средств.
Впервые на модели ОПН показано, что антагонисты ионов кальция при введении непосредственно перед инфузией РКС предотвращают развитие экспериментальной ОПН путем нормализации водно-электролитного обмена, активности ренин-ангиотензиновой системы и синтеза эндогенного оксида азота
(NO); у больных хроническим гломерулонефритом, атеросклерозом и ИБС достоверно улучшают функциональное состояние почек, способствуют нормализации синтеза эндотелина, тромбоксана и простациклина, измененных после введения РКС.
Практическая значимость
Проведенное клинико-экслериментальное исследование позволило уточнить и выявить новые звенья патогенеза ОПН, вызванной воздействием рентгеноконтрастных средств, и обосновать выбор препаратов для профилактики этого осложнения.
Выявление приоритетной роли нарушений обмена Са в изменении внутрипочечнои гемодинамики и функции почек, в нарушении синтеза ваэоактивных гормонов (эндотелина, N0, тромбоксана, простациклина), также участвующих в регуляции почечного кровотока, позволило исследовать и обосновать возможности использования препаратов, нормализующих обмен кальция - антагонистов ионов Са - в профилактике нефротоксического действия РКС.
—Установленная роль нарушений гормональной регуляции функции почек делает перспективными использование препаратов, корригирующих гормональные нарушения (донаторы оксида азота, блокаторы рецепторов к эндотелину и др.) в профилактике и, возможно, лечении ОПН, вызванной воздействием РКС.
— Уточнены факторы, повышающие риск развития ОПН при использовании
контрастных средств, наиболее значимым из которых является исходно
повышенный уровень креатинина сыворотки крови.
Внедрение результатов исследования
Результаты работы используются в клинической практике клиники терапии и профболезней им.Е.М.Тареева ММА им.И.М.Сеченова, отделения острой почечной и печеночной недостаточности НИИ скорой помощи им.Н.В.Склифосовского, отделения ангиографии городской клинической больницы №15 г.Москвы, а также используются в лекционных курсах общей терапии для студентов медико-профилактического факультета ММА им.И.М.Сеченова и для курсантов кафедры нефрологии факультета послевузовского профессионального образования ММА им.И.М.Сеченова.
Положения, выносимые на защиту 1. О ведущей роли нарушений обмена кальция в механизмах нефротоксического действия рентгеноконтрастных средств.
-
О значении нарушений водно-электролитного гомеостаза и активности ренин-ангиотенэиновой системы в механизмах развития острой почечной недостаточности, вызванной воздействием рентгеноконтрастных средств.
-
О роли нарушения синтеза простагландинов в механизмах нефротоксического действия рентгеноконтрастных средств.
-
О влиянии рентгеноконтрастных средств на синтез эндотелиального фактора релаксации сосудов -.оксида азота (N0), о механизмах нарушения синтеза NO и его роли при острой почечной недостаточности, вызванной воздействием рентгеноконтрастных средств.
-
О роли увеличения концентрации сосудосуживающего фактора эндотелия -эндотелина - в механизмах снижения функциональной деятельности почек при нефротоксическом действий рентгеноконтрастных средств.
-
О значении повышения уровня тромбоксана Аг и снижении уровня простациклина в механизмах нефротоксического действия рентгеноконтрастных средств.
-
О патогенетической обоснованности применения антагонистов ионов кальция в профилактике нефротоксического действия рентгеноконтрастных средств.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 35 печатных работ, из них 16 - в центральных медицинских журналах; 19 работ опубликовано в международных журналах (2 в виде оригинальных статей, 17 в виде тезисов, принятых к докладам на международных симпозиумах).
Апробация работы
Апробация диссертации была проведена на совместном заседании кафедры нефрологии ФПЛО, отдела нефрологии НИЦ и кафедры терапии и профболеэней медико-профилактического факультета ММА им.И.М.Сеченова.
Основные положения диссертации представлены на'з Всероссийской научной конференции "Фармакология почек" (Барнаул, 1990), на двух российских научно-практических конференциях (Ростов-на-Дону, 1990; Владикавказ, 1993); на сателлитом симпозиуме XI Международного нефрологического конгресса (Иркутск, 1990), на I Международной конференции "Экологические проблемы" (Владикавказ, 1992); на 3 съезде общества физиологов России (Пущино, 1993), на I съезде нефрологов России (Казань, 1994); на I Европейском конгрессе фармакологов (Милан, 1995), на 47-м ежегодном заседании Американской ассоциации клинической химии (Анагейм, Калифорний, 1995), на XXXII и XXXIII конгрессах Европейской ассоциации диализа, трансплантации и нефрологии (Афины, 1995; Амстердам, 1996), на ХШ Международном конгрессе нефрологов (Мадрид, 1995).
Результаты диссертационной работы доложены на заседаниях секции нефрологии и иммунопатологии Московского городского научного общества терапевтов, на конференциях кафедры нефрологии ФППО и отдела нефрологии НИЦ ММА им.И.М.Сеченова, на научно-практической конференции отделения острой почечной и печеночной недостаточности Московского научно-исследовательского института скорой помощи им.Н.В.Склифосовского. ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ
Диссертация изложена на страницах машинописного текста и включает следующие главы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования, выводы, практические рекомендации. Диссертация иллюстрирована рисунками и таблицами. Библиографический указатель включает отечественных и зарубежных источников.
Основной базой выполнения работы явилась кафедра нефрологии ФППО и отдел : нефрологии НИЦ (зав. - член-корреспондент РАМН, член-корреспондент РАЕН, профессор И.Е.Тареева), клиника терапии и профболезнеи им. Е.М.Тареева (дир. - член-корреспондент РАМН, профессор Н.А.Мухин) ММА им.И.М.Сеченова.
Обследованные больные находились на лечении и амбулаторном наблюдении в клинике терапии и профболезнеи им.Е.М.Тареева ММА им.И.М.Сеченова в период с 1990 по 1995 г., в отделении острой печеночно-почечной недостаточности (рук.- профессор С.Г.Мусселиус) Московского научно-исследовательского института скорой помощи им.Н.В.Склифосовского, в отделении интервенционной кардиологии (рук.- профессор Д.Г.Иоселиани) и отделении сосудистой хирургии (рук.- профессор В.С.Работников) Института сердечнососудистой хирургии им.Бакулева, в отделении ангиографии (зав. - к.м.н. ААФилатов) Городской клинической больницы №15 г.Москвы.
Методики биофизического, радиоиммунного и морфологического исследования проводились в Институте химической физики РАН совместно с ведущим научным сотрудником Е.Н.Бурговой и профессором А.Ф.Ваниным, в Кардиологическом научном центре РАМН при методическом участии профессора В.П.Мосенко, в Научно-производственном центре медицинской биотехнологии МЗиМП РФ совместно с к.б.н. ЕАПерфильевой, на кафедре патологической анатомии ММА им.И.М.Сеченова профессором ААИвановым. Сотрудникам названных учреждений автор выражает глубокую благодарность за участие и помощь в работе.
Материалы и методы исследования
Экспериментальная часть
Характеристика экспериментальных моделей и методики исследовании Исследования проведены на 645 крысах линии Вистар, самцах, весом 280-300 г, содержащихся на стандартном рационе. При применении низконатриевого рациона использовали дистиллированную воду и специальные брикеты с ниэконатриевым питанием. Суточный диурез определяли в обменных клетках. Кровь из камер сердца и аорты забирали под наркозом либо методом декапитации для исключения влияния стресса и действия наркотических анальгетиков на гормональную систему.
В соответствии с поставленными задачами проведены три серии экспериментов (рис. 1). ВI серии исследованы показатели функционального состояния почек и факторов их регуляции на модели ОПН, вызванной воздействием РКС (верографина) и индометацина. Использование индометацина преследовало двоякую цель: а) приближение экспериментальной модели к клинической ситуации -снижению функции почек блокадой синтеза простагландинов, б) исследование роли собственно простагландинов в механизмах нефротоксического действия РКС. Животные были разделены на 4 группы: I группе (контрольной) вводили физиологический раствор, II группе - верографин в дозе 7 мл/кг массы тела, III -иидометацин в дозе 18 мг/кг массы тела, IV группе - оба препарата в аналогичных дозах. Подобранные дозы верографина и индометацина при изолированном введении (II и III группы) не вызывали существенных изменений функции почек, при сочетанном введении (IV группа) - развивалась ОПН. Все животные в течение недели до введения препаратов находились на низконатриевой диете. В основу получения модели ОПН взята адаптированная методика R.Vari и соавт. (1988). Всем животным определяли натрий, калий и кальции в сыворотке крови и моче, активность ренина плазмы (АРП) и вазопрессин в плазме крови, рассчитывали экскретируемую фракцию натрия, определяли скорость клубочковой фильтрации (СКФ) и объем циркулирующей крови (ОЦК) в почках, «меряли диурез. Содержание электролитов исследовали методом атомно-абоорбционной спектрофотометрии (спектрофотометр фирмы "Perkin Elmer", США), измерение ОЦК проводили с использованием альбумина 1S1I. АРП определяли с применением коммерческих наборов "Renk" ("Sorin", Франция), содержание еазопрессина - наборами "Buhlmann" (Швейцария). СКФ рассчитывали по эндогенному креатинину. Антидиуретический эффект еазопрессина определяли в пробе с питуитрином.
Во II серии экспериментов было исследовано функциональное состояние почек и факторов их регуляции, роль нарушений обмена Са и влияние антагонистов ионов Са - верапамила - на механизмы нефротоксического действия РКС (верографина). В данной серии экспериментов, в отличие от I серии, ОПН получена при изолированном введении верографина в дозе 10 мл/кг массы тела животного. Животные были разделены на три группы: 1 группа - контрольная (получала инъекции физиологического раствора), 2-я группа - животные с ОПН, индуцированной путем однократного введения 76% раствора верографина в дозе 10 мл/кг массы тела со скоростью 1 мл/мин; 3-ей группе животных непосредственно перед инъекцяей верографина был введен верапамил в дозе 1,3 мг/кг массы тела со скоростью 10 мкг/мин. Всем животным определяли показатели, аналогичные таковым в 1 серии экспериментов.
Морфологическое исследование почек в группах животных с ОПН проводили светооптическим методом на парафиновых срезах, окрашенных гематоксилинэозином, использовали PAS-реакцию, окраску по Ван Гизону. Все исследования проводили через 48 ч после введения фармакологических препаратов.
В 111 серии экспериментов была исследована роль изменений синтеза оксида азота (N0) в механизмах развития ОПН при воздействии РКС (верографина) и влияние антагонистов ионов Са (верапамила) на процессы синтеза N0. Модель ОПН была получена аналогично таковой во II серии экспериментов. Третья серия экспериментов включала три варианта: 1) исследование влияния РКС на синтез N0 в почках и печени животных на модели ОПН, индуцированной РКС; 2) изучение влияния верапамила на синтез NO в данных условиях; 3) изучение механизмов активации синтеза NO в почках и печени под воздействием верапамила с использованием конкурентного ингибитора NO-синтетазы (NOS) - N-hhtdo-L-аргинина. В данной серии экспериментов доза верапамила также составила 1,3 мг/кг массы тела. В варианте 1 показатели синтеза N0 определяли через 24 и 48 ч после введения РКС. Во 2 и 3 вариантах - через 48 ч после введения верографина и верапамила.
Оксид азота (N0), синтезированный в почках in vivo, обнаруживали с помощью метода электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), используя в качестве ловушки NO комплексы Fe2+ с диэтилдитиокарбаматом (ДЭТК). При связывании NO с этой ловушкой образуются парамагнитные мононитрозильные комплексы железа с ДЭТК (МНКЖ с ДЭТК), характеризующиеся сигналом ЭПР с положением максимумов д=2,035; д=2,02 и сверхтонкой триплетной структурой при д=2,035 (Kubrina L. и
12 соавт., 1993). Для количественной оценки NO в ткани помек животным вводили ДЭТК Na соль ("Sigma") в 0,2 мл физиологического раствора в дозе 500 мг/кг за 30 мин до забоя. М-нитро-Ьаргинин ("Sigma") вводили в 0,5 мп физиологического раствора в дозе 300 мг/кг за 1 ч до забоя. При ЭПР-исследовании спектры ЭПР регистрировали при - 196С на радиоспектрометрах "Рубин" и "Радиопан" (Польша). Исследование NO проводили в Институте химической физики РАН совместно с ведущим научным сотрудником ЕН.Бурговой и профессором А.Ф.Ваниным..
Клиническая часть В соответствии с поставленными задачами исследовано функциональное состояние почек, активность гормональных систем, регулирующих функциональную деятельность почек, и состояние водно-электролитного гомеостаза у больных до и после введения высоко- (ВОРКС) и низкоосмолярных (НОРКС) рентгеноконтрастных средств, исследовано влияние антагониста Са - коринфара на степень нефротоксического действия РКС.
Клиническая характеристика больных
В настоящей работе представлены результаты обследования 136 больных.
Из них 88 чел (45 мужчин и 43 женщины в возрасте от 18 до 63 лет), больных различными вариантами хронического гломерулонефрите (ХГН) и пиелонефритом (ПН), находились на лечении и амбулаторном наблюдении в клинике терапии и профболеэней им.Е.М.Тареева ММА им.И.М.Сеченова в периоде 1990 по 1995 гг.
Гломерулонефрит диагностирован у 64 больных (у 38 мужчин и 26 женщины в возрасте от 18 до 63 лет), среди них ХГН латентного течения - у 9, гипертонического типа - у 24, нефротического типа - у 14, смешанного типа - у 17. Из всех 64 больных ХГН функция почек у 37 была исходно сохранной, у 27 - сниженной (креатинин крови > 1,4 мг/дл). Морфологическая картина почечного процесса была представлена МИ у 9 больных, МН - у 12, МПГН - у 11. МКГН - у 4, ФСГС - у 2.
Пиелонефрит диагностирован у 24 больных (14 мужчин, 10 женщин в возрасте от 16 до 34 лет), из них у 16 - хронический ПН в стадии ремиссии, у 8 - в стадии обострения. У всех больных ПН функция почек была сохранной.
12 чел (8 мужчин и 4 женщины в возрасте от 20 до 63 лет), страдавших тяжелыми формами ОПН, обследованы в отделении острой почечно- печеночной недостаточности Научно-исследовательского института скорой помощи им.Н.В.Склифосовского, куда они поступали из различных стационаров г.Москвы для проведения диализно-фильтрационных методов лечения ОПН, развившейся в результате введения РКС. Среди них 9 (75%) исходно имели патологию почек, 2 -страдали гипертонической болезнью, 1 - хроническим гепатитом. У всех больных
ОПН развилась на 2-4-й день после введения РКС. Всем 12 больным проводилась активная детоксикационная терапия с использованием диализно-фильтрационных и сорбционных методов лечения.
Всем больным с нефрологической патологией (ХГН, пиелонефритом, ОПН) проводилась внутривенная урография с введением 40-60 мл ВОРКС верографина.
Из 64 больных ХГН 28 пациентам до и после введения РКС проводилась терапия коринфаром по поводу артериальной гипертензии. Из них у 12 больных исходно функция почек была сохранной (креатинин сыворотки < 1,4 мг/дл), у 16 -сниженной. 36 больных ХГН не принимали антагонисты Са. Из них у 25 функция почек исходно была в пределах нормы, у 11 - снижена.
36 чел (30 мужчин и 6 женщин в возрасте от 35 до 73 лет), больных ишемической болезнью сердца (ИБС) и атеросклеротическим поражением сосудов, обследованы в отделении интервенционной кардиологии и отделении сосудистой хирургии Института сердечно-сосудистой хирургии им.Бакулева. Больным проводилась ангиография и ангиопластика сосудов сердца, головного мозга и конечностей с использованием больших количеств (от 250 до 400 мл и более) высоко- и низкоосмолярных РКС в отделении ангиографии на базе городской клинической больницы №15.
Из 36 больных ИБС и атеросклерозом 17 больных принимали коринфар до и после введения РКС в связи с артериальной гипертензией, 19 больных антагонисты Са не принимали. У всех 36 больных функция почек исходно была сохранной. Из них 16 пациентам вводили ВОРКС (верографин), 20 - НОРКС (омнипак).
Методы клинического исследования Общеклинические биохимические исследования проводились в межклинической биохимической лаборатории ММА им.И.М.Сеченова (зав. -Т.Н.Александровская), в биохимических лабораториях НИИ скорой помощи им.Н.В.Склифосовского и городской клинической больницы №15 г.Москвы. Контрольную группу для биохимических исследований составили 30 практических здоровых лиц (15 мужчин и 15 женщин в возрасте от 24 до 45 лет).
Дополнительные исследования до и через 48-72 ч после введения РКС включали в себя определение: 1) эндотелина.плазмы; 2) тромбоксана плазмы; 3) простациклина плазмы; 4) функционального состояния почек; 5) водно-электролитного гомеостаза.
Эндотелин-1 (ЗТ-1). Концентрацию ЭТ-1 определяли в экстрактах плазмы с помощью коммерческих наборов Endothelin-1,2 фирмы "Amersham" (Великобритания). Кровь забирали утром натощак, в одно и то же время суток, в
14 пластмассовые пробирки, помещенные в лед и содержащие ингибитор синтеза эндотелина (контрикал - 2500 ед на 5 мл крови) и антикоагулянт (0,1 М ЭДТА в 0,9% NaCt рН 7,4). Плазму немедленно отделяли центрифугированием при 4С и 2000 q в течение 15 мин. Экстракцию ЭТ-1 проводили модифицированным методом (Горбачева О. и соавт., 1991): 1 мл плазмы, подкисленной 55 мкл 2 М НС!, пропускали через колонку Amprep octyl С 8 ("Amersham", Великобритания), предварительно обработанную 2 мл 100% метанола и 30 мл дистиллированной воды. Скорость промывки не превышала 5 мл/мин. После прохождения плазмы колонку промывали 10 мл 0,1% раствора TFA. После выпаривания сухой остаток растворяли в соответствующем количестве буфера и проводили радиоиммунологический анализ, основанный на конкурентной ингибиции связывания антител к ЭТ-1 с меченым лигандом. Чувствительность определения была в пределах 2,5 пг на пробирку. При необходимости экстракты хранили при -20С до момента использования. Группу контроля составили 27 здоровых доноров. Исследования ЭТ-1 проводились в Кардиологическом научном центра РАМН при методическом участии профессора В.П.Мосенко.
Тромбоксан Аг (ТкА2) и простациклин (ПГИг) определяли в плазме по содержанию их стабильных аналогов ТкВ2 и 6-кето-ПГФіа соответственно. Использована стандартная методика радиоиммунного исследования с применением коммерческих наборов "ТкВг-РИА" и "б-кето-PGFt,, -РИА" производства Биотехнологическая компания "ДиаКон" (Россия). Исследования проводились в Научно-производственном центре медицинской биотехнологии МЗиМП РФ совместно с к.Є.н. Е.А.Перфильевой. Все предварительные процедуры, осуществляемые во время сбора и подготовки к анализу образцов плазмы, были направлены на предотвращение синтеза простагландинов de novo и сохранение имеющихся простагландинов от метаболической и химической деградации. Кровь собирали у больных натощак, в одно и то же время суток, в пластмассовые пробирки, помещенные в лед и содержащие ингибитор синтеза простагландинов (аспирин) и антикоагулянт (2% раствор ЭДТА). Плазму немедленно отделяли центрифугированием при 4С и 2000 q в течение 30 мин. Плазму хранили до недели при -20С или сразу подвергали экстракции. Экстракты содержали при -20С до момента использования, но не более 1 мес. Группу контроля при исследовании тромбоксана составили 16 практических здоровых доноров, простациклина - 7.
Статистический анализ полученных данных проводился на ПЭВМ с использованием интегральных программных систем "Statgraphics" и "Statistica". Применялись параметрические критерии Стьюдента (t) и Фишера (F) в
15 экспериментальном исследовании, непараметрический критерий - парный критерий вилкоксона (Т) и коэффициент корреляции рангов Спирмена (г) - в клинической части. Различия считались достооерными при р<0,05.
