Введение к работе
Актуальность проблемы. Изучение вилюйского энцефаломиелита (ВЭ) началось с 50-х гг XX века с признанием нозологической самостоятельности заболевания (Шаповал А Н , Сарманова Е С , 1955, Шаповал А Н , 1956, 1959). По клиническим и патоморфологическим признакам ВЭ представляет собой хроническую прогрессирующую дегенерацию центральной нервной системы (ЦНС) с продолжительным клиническим течением (Петров ПА., 1964, 1987, Владимирцев А И , 1964, Тазлова Р С , 1982, Авцын А П с соав , 1983; Владимирцев В А , 1993, 2000, Goldfarb LG , Gajdusek D С , 1992, Masters С. A etal., 1996) Отличительной чертой заболевания является этническая избирательность, ВЭ поражает только коренное население Республики Саха (Якутия): якутов, реже эвенков и эвенов По данным Института здоровья Академии наук Республики Саха (Якутия), в 2002 г на учете с диагнозом ВЭ состояло 192 человека В среднем по республике заболеваемость ВЭ составляет 5 человек на 10 тыс коренного населения
Актуальность проблемы ВЭ связана с особой тяжестью поражения ЦНС, приводящей к инвалидности с существенной или полной утратой физических и умственных способностей или смерти больного, распространением по территории Республики Саха (Якутия) в районы, ранее свободные от ВЭ, и отсутствием методов специфического лечения и профилактики заболевания Сложность ситуации усугубляется тем, что большинство больных проживает в сельской местности, небольших отдаленных поселках, а также отсутствием специфических лабораторных методов диагностики заболевания, что затрудняет своевременное выявление и учет пациентов
Природа заболевания до сих пор не известна Несмотря на особенности клинического течения, свидетельствующие об инфекционной природе ВЭ, не удается выявить этиологический агент заболевания (Сарманова Е С с соав , 1960, Караванов А.С. с соав., 1985,1996, Goldfarb L G., Gajdusek D.K , 1992; Янагихара Р. с соав , 2000) Роль наследственных и экологических факторов в происхождении ВЭ также остается неясной (Зубри Г.Л с соав , 1977, Гольдфарб Л.Г. с соав., 1979; Макаров В Н., Алексеев В П , 1996; Фефелова В В. с соав., 1996).
В последние годы большое внимание уделяется исследованию роли иммунологических нарушений в патогенезе хронической формы ВЭ Некоторыми авторами поддерживается точка зрения о наличии аутоиммунного компонента при ВЭ (Тазлова PC, 1968; Аутеншлюс А.И р " -1Q9R; nrrnp"4 ВЛ, 1996;
1 ЮС НАЦИОНАЛЬНАЯ і
Шатунов А.Ю , 1999). Однако большинство исследв||Д^<йэД50 отЗЛ^сти направлено
на изучение состояния иммунитета в периферической крови больных (Дубов А В с соав , 1991, 1995; Ганкина Н Ю с соав , 1992, Кононова С К с соав , 1996) Между тем в исследовании патогенеза хронических инфекционных и аутоиммунных заболеваний, связанных с поражением ЦНС, большой научный интерес вызывает изучение реакций местного иммунитета и анализ иммуноглобулинов цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) (Thompson Е J and Keir G , 1990, McLean В N etal, 1990, Kaiser R, 1991, Lunding J et al, 2001; Verbeek M ,2002, Reiber H , 2001) Причиной этого интереса является возможность с помощью выявления интратекального, те локального, в пределах оболочек мозга, синтеза иммуноглобулинов определить специфическую иммунореактивность, направленную против антигенов, локализованных за гематоэнцефалическим барьером (Thompson Е J , 1995, Reiber Н et al, 1998, Correale J , 2002, Smdic С J M et al , 2003) Кроме того, выявление интратекального синтеза иммуноглобулинов класса G (IgG) является одним из наиболее чувствительных лабораторных методов дифференциальной диагностики воспалительных заболеваний ЦНС (Andersson А etal, 1994; Reiber Н. et.al, 2003) Все вышеизложенное указывает на то, что исследование интратекального иммунного ответа при ВЭ имеет большое значение, как для изучения этиологии и патогенеза заболевания, так и для разработки дополнительных методов лабораторной диагностики ВЭ.
Цель исследования: раскрыть роль локальных иммунных реакций на уровне ЦНС в патогенезе хронической формы вилюйского энцефаломиелита и на этой основе обосновать принципы дифференциальной диагностики ВЭ с заболеваниями нервной системы невоспалительной природы
Задачи исследования:
-
Выявить у больных хронической формой ВЭ интратекальный синтез IgG на основе анализа клонального спектра иммуноглобулина G в ЦСЖ и сыворотке крови
-
Изучить взаимосвязь между выявлением интратекального синтеза IgG и рядом клинических характеристик заболевания ВЭ (продолжительность, наличие острого периода, возраст начала заболевания)
-
Исследовать специфичность интратекально синтезированных IgG у больных ВЭ к вирусным антигенам.
-
Выявить у больных ВЭ присутствие вируса, к антигенам которого проявляют специфичность интратекально синтезированные IgG
-
Оценить возможность использования метода изоэлектрофокусирования с иммуноблоттингом для лабораторной Диагностики ВЭ
Научная новизна работы Впервые показано участие локальных иммунных реакций гуморального типа на уровне мозга в патогенезе хронической формы ВЭ. Разработана схема развития локального иммунного ответа при ВЭ С помощью анализа клонального спектра IgG в ЦСЖ и сыворотке крови установлено, что у больных подострой и хронической формами ВЭ развивается интратекальныи синтез олигоклональных IgG Оценка взаимосвязи между выявлением интратекального синтеза олигоклональных IgG и рядом клинических характеристик заболевания ВЭ выявило, что интратекальныи гуморальный иммунный ответ обнаруживается у больных ВЭ вне зависимости от длительности заболевания (от 3 до 29 лет) и наличия острого периода.
Анализ антигенной специфичности олигоклональных IgG впервые выявил у больных ВЭ интратекальныи синтез антител, специфичных к антигенам вируса простого герпеса (ВПГ) или Herpes Simplex 1 и 2 типа, что позволяет предположить участие вирусов семейства Herpesvindae в инициировании локального иммунного ответа при ВЭ Установлено, что интратекальная иммунореактивность при ВЭ не связана с репродукцией ДНК вируса простого герпеса в клетках биологических жидкостей и тканях мозга больных ВЭ, что свидетельствует о латентной форме вирусной инфекции, при которой зараженная клетка становится мишенью для разрушающего действия иммунной системы по причине изменения антигенной специфичности клеточной мембраны
Практическая значимость работы Патогенетически обоснованы принципы дифференциальной диагностики ВЭ и хронических невоспалительных заболеваний ЦНС В отличие от заболеваний ЦНС невоспалительной природы при ВЭ методом изоэлектрофокусирования с иммуноблоттингом обнаруживается интратекальныи синтез олигоклональных IgG. Результаты исследования показывают, что метод изоэлектрофокусирования с иммуноблоттингом имеет высокую степень чувствительности (100%) и специфичности (80%) при исследовании больных ВЭ и может использоваться в качестве лабораторного теста в комплексе с клиническими данными для диагностики ВЭ.
Внедрение в практику здравоохранения. По результатам исследования в практику клинического отделения Института здоровья Академии наук Республики Саха (Якутия), являющегося специализированным лечебно-профилактическим учреждением для больных ВЭ, внедрены два метода для лабораторной диагностики ВЭ 1) изоэлектрофокусирование ЦСЖ и сыворотки крови и 2) диагностика вируса Herpes Simplex - 1, 2 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
-
Важным звеном патогенеза хронической формы ВЭ является развитие локального иммунного ответа в пределах ЦНС, о чем свидетельствует интратекальный синтез IgG
-
Интратекальный синтез IgG при ВЭ связан с иммунореактивностью к вирусу простого герпеса 1, 2 типа, при этом репликация ДНК этого вируса в клетках крови, ЦСЖ и тканях мозга больных ВЭ не выявляется
-
Метод изоэлектрофокусирования с иммуноблоттингом имеет большое значение в верификации диагноза ВЭ в вероятных и сомнительных случаях для дифференцирования ВЭ от невоспалительных заболеваний ЦНС
Апробация работы. Материалы диссертационной работы были доложены на клиническом семинаре Института здоровья АН PC (Я) (Якутск, 2000), 10-й научно-практической конференции «Нейроиммунология» (С-Петербург, 2001), на 3-й итоговой научно-практической конференции Белорусского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии (Минск, 2002), заседании республиканского общества неврологов (Якутск, 2002), на 10-м Российско-Японском международном медицинском симпозиуме (Якутск, 2003).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, трех глав (обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования и их обсуждения), заключения, выводов и списка использованной литературы Диссертация содержит 87 страниц текста, 7 таблиц и 10 рисунков Библиографический указатель включает 153 источника, из них 89 отечественных и 64 зарубежных.
