Содержание к диссертации
ВВЕДЕНИЕ 6
ГЛАВА 1. КЛЕЩЕВОЙ ЭНЦЕФАЛИТ, СОВРЕМЕННЫЕ СРЕДСТВА ИММУНОПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ (обзор литературы). . 12
Эпидемиология клещевого энцефалита 12
Этиология, патогенез и диагностика клещевого энцефалита. ... 15
Противовирусный иммунитет. Основные средства профилактики
и терапии клещевого энцефалита 21
1.4 Определение потенциального иммунного ответа индивида на
введение антигена 28
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 35
Получение образцов иммунной плазмы 35
Методы определения содержания специфических антител в образцах иммунной плазмы 37
Иммуногематологические исследования 38
Метод медицинской статусметрии. . . 39
2.5 Статистический анализ 39
ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУННОГО ОТВЕТА ДОНО
РОВ НА ВАКЦИНЫ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА 43
Активность гуморального иммунитета у вакцинированных. ... 43
Сравнительное исследование титров антител к вирусу клещевого энцефалита у вакцинированных доноров методом РТГА и ИФА. . 50
ГЛАВА 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОГО ИММУННОГО
ОТВЕТА ИНДИВИДА НА ВАКЦИНУ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФА
ЛИТА 56
4.1 Факторы, влияющие на активность иммунного ответа у доноров
при вакцинации 56
Ассоциация активности гуморального иммунного ответа на вакцину КЭ с HLA - фенотипом. 61
Особенности иммунного ответа индивида на вакцину клещевого
энцефалита в зависимости от HLA-аллелей класса II (локусов DR
hDQ) 66
4.4 Выявление потенциально активных антителопродуцентов на ос
нове учета комплекса присущих организму признаков 68
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 72
ВЫВОДЫ 82
ЛИТЕРАТУРА 83
ПРИЛОЖЕНИЕ 103
ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ
АПК - антигенпредставляющие клетки
АТ-ВКЭ - антитела к вирусу клещевого энцефалита
ВКЭ - вирус клещевого энцефалита
ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения
ГАЕ - гемагглютинтрующая единица
ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа
ГИБ - городская инфекционная больница
ГНТ - гиперчувствительность немедленного типа
ГНЦ - гематологический научный центр
Д - дальтон
ИФА - иммуноферментный анализ
КЭ - клещевой энцефалит
МЗ - Министерство Здравоохранения
МИД50 - минимальная иммунизирующая доза
МКА - моноклональные антитела
мРНК - информационная, матричная рибонуклеиновая кислота
ОСПК - областная станция переливания крови
ПИПВЭ - производство института полимиелита и вирусных энцефалитов
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РАМН - Российская академия медицинских наук
РБН - реакция биологической нейтрализации
РГА - реакция гемагглютинации
РДПА - реакция диффузной преципитации в агаре
РНК - рибонуклеиновая кислота
РСК - реакция связывания комплемента
РТГА - реакция торможения гемагглютинации
РФ - Российская Федерация
СПК - станция переливания крови
ЦГСЭН - центр Госсанэпиднадзора
ЦГЭ - центр гигиены и эпидемиологии
»
ЦИК - циркулирующий иммунный комплекс
ЦНС - центральная нервная сиситема
ЦТЛ - цитотоксический лимфоцит
HLA - human leucocyte antigen - человеческий лейкоцитарный антиген
Ig М (Ig G, Ig А) - иммуноглобулин класса М (G, А)
IL - интерлейкин
ISW-TBE - International Scientific Working Group on tick-borne encephalitis
y-IFN - гамма интерферон
МНС I/II - Major Histocompatibility complex - главный комплекс тканевой
совместимости, специфичности класса I/II ТВЕ - Tick-borne encephalitis - клещевой энцефалит TNF - фактор некроза опухоли TCR - Т-клеточный рецептор лимфоцитов
Введение к работе
Согласно рекомендациям ВОЗ (1982) одной из важнейших областей применения иммуноглобулинов является профилактика и лечение вирусных инфекций, резистентных к химиопрепаратам [74].
Актуальность проблемы профилактики и терапии КЭ определяется высоким уровнем заболеваемости, тяжелыми последствиями болезни и высокой летальностью (до 40%) [19, 50, 82, 110, 138]. Заболевание широко распространено на территории 27 стран, от Франции до Японии [23, 62, 142, 144, 171, 177, 179, 181]. В странах Европы ежегодно регистрируют до 3 тыс. случаев КЭ, при этом отмечают высокий уровень заболеваемости детей и подростков (до 70%) [130, 132, 168, 178]. В России во второй половине XX века ареал КЭ расширился, сложились благоприятные условия для повышения эпидемиологического потенциала природных очагов инфекции. Если до 1984 года показатель заболеваемости составлял 1,5-2,5 случая на 100 тыс. населения, то в последующий период он принимал значения от 3,5 до 7 случаев на 100 тыс. населения, что соответствует 5-Ю тыс. случаев заболеваний КЭ в год [35, 36, 37, 62, 81]. Треть заболевших составляют дети [19, 20, 49, 62, 86]. Практически повсеместное распространение природных очагов КЭ на территории нашей страны указывает на необходимость создания эффективных мер профилактики и терапии этого заболевания [19,20, 73, 82, 85].
Практическое здравоохранение располагает двумя отечественными и тремя зарубежными вакцинами против КЭ, зарегистрированными в Федеральном агентстве по здравоохранению и социальному развитию [10,13,15,100]. Вместе с тем, ежегодно проводимая вакцинация охватывает лишь 2-3 млн. человек, что составляет около 2% населения РФ. По этой причине снижения общей заболеваемости КЭ не происходит [10, 48, 62, 73, 85]. Следовательно, необходимы препараты, которые могут обеспечить надежную защиту населения от клещевого энцефалита [15,19, 75,76].
На сегодняшний день основным средством терапии КЭ является донорский иммуноглобулин, содержащий антитела к вирусу клещевого
энцефалита (ВКЭ) и предназначенный для внутримышечного или внутривенного введения [48, 61, 75, 76, 86, 99, ПО]. Иммуноглобулин с высокими титрами специфических антител (более 1:320) используют для экстренной профилактики КЭ. Своевременное применение специфических иммуноглобулинов позволяет снизить заболеваемость КЭ более, чем в 5 раз, а в случае заболевания избежать осложнений и летальности [65, 87, 110].
f Однако потребности здравоохранения в этих препаратах удовлетворены
далеко не полностью [10, 45, 62, 99, ПО, 132, 133]. Производство иммуноглобулинов против КЭ затруднено тем, что при использовании серологического скрининга плазмы невакцинированных доноров не удается заготовить необходимый объем иммунного сырья. Кроме того, причиной дефицита и высокой стоимости аллогенных иммунных препаратов крови
» является ограниченность кадров доноров, их большой отсев в процессе
обследования и иммунизации [9, 66,93 17, 64, 66,93, 94^5].
Существующая система комплектования групп иммунных доноров не предусматривает учет генетически обусловленных особенностей иммунного'' ответа индивида на конкретную вакцину. При этом вакцинации подвергается значительная часть ареактивных в отношении продукции специфических?
» антител лиц. Плазма этих доноров не может быть использована для
производства иммуноглобулинов, а антигенные нагрузки на организм донора оказываются неоправданными.
Заготовить необходимые объемы плазмы крови для производства иммуноглобулинов, повысить специфическую активность препаратов и одновременно рационально использовать донорский контингент позволяет новый
* подход к комплектованию групп иммунных доноров, а именно -
целенаправленный отбор доноров, у которых предполагается активная выработка специфических антител [17, 55].
Иммунный ответ на вакцину трудно прогнозировать, однако это возможно. Необходимый эффект при вакцинации, по-видимому, в существенной мере определяется антигенным составом тканей организма [16, 17, 55, 64, 107]. Для
ряда вакцин показана ассоциация иммунного ответа с антигенами лейкоцитов и эритроцитов [17, 55, 89]. В частности, разработан способ определения потенциальной активности антителопродукции индивида на стафилококковый и столбнячный анатоксины, в основу которого положена идентификация HLA-фенотипа у вакцинированных [17]. Исходя из сказанного, можно полагать, что перспективы иммунного донорства во многом связаны с решением проблемы целенаправленного отбора лиц с предположительно активной выработкой специфических антител, т.е. изучение критериев определения потенциального иммунного ответа доноров на вакцины весьма актуально.
Цель исследования - разработка критериев прогнозирования активности антителопродукции у доноров, иммунизированных вакциной клещевого энцефалита.
Задачи исследования:
1. Оценить иммунный ответ доноров на «Вакцину клещевого энцефалита;
культуральную очищенную концентрированную инактивированную
сухую» производства Института полиомиелита и вирусных энцефалитов,
им. М.П. Чумакова РАМН (г. Москва) по титру специфических антител в
реакции торможения гемагглютинации и по длительности сохранения титра.
Сравнить активность антителопродукции у доноров в зависимости от схемы
вакцинации.
2. Сопоставить титры специфических антител в образцах иммунной
плазмы доноров при исследовании в реакции торможения гемагглютинации и
иммуноферментном анализе.
Изучить характер распределения антигенов систем HLA, АВО, Резус у вакцинированных с разной активностью антителопродукци; исследовать выраженность иммунного ответа доноров в зависимости от пола и возраста.
Разработать функциональную модель для прогнозирования активности гуморального иммунного ответа индивида на вакцину КЭ.
Апробировать функциональную модель при вакцинации доноров на станции переливания крови ФГУ «КНИИГиПК Росздрава» и ГУЗ «Свердловская ОСПК».
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Интенсивность выработки специфических антител у лиц,
вакцинированных против КЭ, ассоциирована с лейкоцитарными антигенами.
Существует положительная и отрицательная ассоциация активности
продуцирования специфических антител к вирусу КЭ с HLA-фенотипом.
Комплектование групп иммунных доноров целесообразно осуществлять с учетом
выявленных ассоциаций.
2. Активность гуморального иммунного ответа индивида на вакцину КЭ
зависит от возраста и пола вакцинированного. Функциональная модель,
построенная на основе количественного учета комплекса присущих индивиду
признаков, в числе которых пол, возраст, антигены системы HLA, АВО, Резус,
позволяет повысить точность прогнозирования выраженности иммунного ответа
индивида на вакцину КЭ.
Научная новизна.
Впервые показана возможность прогнозирования иммунного ответа индивида на вакцину клещевого энцефалита. Выявлены факторы, влияющие на. активность антителопродукции у доноров при вакцинации. Установлена связь интенсивности выработки специфических антител с HLA-фенотипом индивида. Разработана функциональная модель, позволяющая прогнозировать иммунный ответ на вакцину КЭ путем учета комплекса присущих организму признаков. Подана заявка на предполагаемое изобретение (уведомление о положительном результате формальной экспертизы от 4.04.2005 г., МКИ G01 №33/50).
Практическая значимость.
Представляется практически важным привлекать к иммунизации с целью производства специфических препаратов потенциально активных антителопродуцентов, тем самым создаются условия для рационального распределения ограниченных донорских ресурсов. Отказ от иммунизации ареактивных индивидов позволяет избежать неоправданных антигенных нагрузок на организм донора. Рекомендуемый способ прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину КЭ обеспечивает достаточную для практических нужд точность прогноза. Его применение позволяет повысить процент
иммуноактивных лиц среди вакцинированных с 67,4±6,6% до 80±3,02%, что способствует увеличению объемов заготовки плазмы специфической направленности. Модуль для прогнозирования иммунного ответа, разработанный на Delphi (Приложение), позволяет использовать полученные в результате исследования данные в работе учреждений службы крови, занимающихся направленной иммунизацией доноров. Способ прогнозирования иммунного ответа доноров на вакцину КЭ используется при отборе доноров для иммунизации в отделе комплектования доноров СПК института и ГУЗ «Свердловская ОСПК», что позволило повысить эффективность вакцинации и увеличить титр специфических антител в иммуноглобулинах против клещевого энцефалита.
Апробация работы.
Основные положения и результаты работы доложены на научно-практической конференции «Клиника, диагностика, профилактика, лечение клещевого энцефалита» (Киров, 1999 г.), итоговых научных конференциях Кировского НИИ гематологии и переливания крови (2000 г., 2002 г.), заседании^ областного общества гематологов и трансфузиологов (2001 г., 2005 г.), научно-практической конференции "Трансфузиология - проблемы перехода к компонентному донорству" (ГНЦ РАМН, Москва, 2002 г.). По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 2 в центральной печати.
Объем и структура работы.
Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием объектов и методов, двух глав с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы и приложения. Библиография включает 187 источников, из них 111 отечественных и 76 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 9 рисунками и 19 таблицами.
Участие автора.
Автором изучена в динамике активность иммунного ответа у 558 доноров на вакцину клещевого энцефалита. В образцах плазмы крови 262 вакцинированных определены титры специфических антител методом РТГА. В
138 образцах иммунной плазмы доноров установлены титры
иммуноглобулинов класса G к ВКЭ методом ИФА. Выявлены HLA-антигены, ассоциирующиеся с разной активностью антителопродукции. Разработана и апробирована функциональная модель для прогнозирования иммунного ответа индивида на вакцину КЭ.
»
