Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Урогенитальная инфекция вирусного генезау беременных 12
1.1.1. Эпидемиология и патогенез развития урогенитальной инфекции 14
1.1.2. Особенности клинического течения урогенитальной инфекции 20
1.1.3. Диагностика вирусных инфекций при беременности 22
1.2. Механизмы естественного иммунитета при урогенитальной инфекции вирусной этиологии 27
1.2.1. Роль системы цитокинов в патогенезе УГИ 29
1.2.2. Клеточные факторы естественного иммунитета 31
1.2.3. Определение уровня различных цитокинов при урогенитальной инфекции и внутриутробной инфекции 33
1.3. Подходы к терапии урогенитальной инфекции вирусного генеза 36
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 41
2.1. Характеристика клинического материала 41
2.2. Выделение мононуклеарных клеток и нейтрофилов из периферической крови 47
2.3. Определение содержания цитокинов в сыворотке крови, в околоплодных водах и в культурах мононуклеарных клеток методом иммуноферментного анализа 47
2.4. Определение продукции активных форм кислорода нейтрофилами методом люминол-зависимой хемилюминесценции 49
2.5. Оценка экспрессии Toll-подобных рецепторов (TLR-9) с помощью методов молекулярной биологии 50
2.5.1. Выделение РНК из мононуклеарных клеток периферической крови. 51
2.5.2. Реакция обратной транскрипции 51
2.5.3. Полимеразная цепная реакция 52
2.6. Статистическая обработка результатов 53
ГЛАВА 3. Особенности течения беременности у женщин с урогенитальной инфекцией вирусной этиологии 54
ГЛАВА 4. Результаты собственных исследований и обсуждение 59
4.1. Сравнительный анализ цитокинов в сыворотке крови, в культуре мононуклеарных клеток и в околоплодных водах беременных с вирусной инфекцией 59
4.1.1. Изменение противовирусных цитокинов ИЛ-12 и ИФНу в сыворотке крови у беременных с УГИ 60
4.1.2. Изучение выработки ИЛ-12 и ФНОос мононуклеарными клетками периферической крови здоровых беременных и беременных с вирусной инфекцией 64
4.1.3. Оценка экспрессии TLR9 мононуклеарными клетками периферической крови и слизистой цервикального канала у беременных с УГИ вирусного генеза 68
4.1.4. Определение цитокинов в околоплодной жидкости рожениц с нормально протекающей беременностью и рожениц с УГИ вирусного генеза 70
4.2. Функциональная активность нейтрофилов периферической крови околоплодных вод у беременных с УТИ вирусного генеза 74
4.3. Оценка состояния новорожденных, родившихся от матерей с УГИ вирусного генеза 79
Заключение 85
Выводы 95
Практические рекомендации 96
Список литературы 97
- Эпидемиология и патогенез развития урогенитальной инфекции
- Определение уровня различных цитокинов при урогенитальной инфекции и внутриутробной инфекции
- Изменение противовирусных цитокинов ИЛ-12 и ИФНу в сыворотке крови у беременных с УГИ
- Определение цитокинов в околоплодной жидкости рожениц с нормально протекающей беременностью и рожениц с УГИ вирусного генеза
Введение к работе
Актуальность исследования.
В настоящее время урогенитальная инфекция (УГИ) представляет собой серьезную проблему современной медицины. Это обусловлено неуклонным ростом частоты УГИ, ее определяющим влиянием на репродуктивное здоровье человека, ведущей ролью в развитии внутриутробной инфекции, приводящей к перинатальной и младенческой заболеваемости и смертности (2,44,51,52).
Высокой частоте развития УГИ способствует: широкое распространение микроорганизмов в человеческой популяции в виде латентной персистирующей инфекции, значительная генетическая вариабельность патогенов, приводящая к формированию вирулентных и резистентных штаммов, физиологический иммунодефицит беременных, разнообразные механизмы уклонения вирусов от иммунологического надзора (7,51).
Одним из наиболее частых возбудителей УГИ являются вирусы: вирус герпеса простого 2 типа (ВПГ-2), цитомегаловирус (ЦМВ), энтеровирусы и другие (5, 6,60).
Иммунная защита против вирусов осуществляется в результате координированной работы адаптивной и естетсвенной систем иммунитета. (64,65).
Одним из важных обобщений иммунологии последних лет стало раскрытие механизмов функционирования системы естесвенного иммунитета, представленной клеточными (клетки макрофагально-моноцитарной системы, дендритные клетки, естественные киллеры и др.) и гуморальными (цитокины, противомикробные пептиды, комплемент, кислородные радикалы, ферменты и др.) компонентами (25,26,37,99,103). В настоящее время активно изучается роль системы естественного иммунитета
в развитии ответа на патогены при вирусных инфекциях урогенитального тракта.
Рецепторы естественного иммунитета (Toll-подобные рецепторы) представляют собой семейство сигнальных молекул, распознающих консервативные молекулярные образы различных патогенов, включая вирусы, бактерии, грибы. Показана экспрессия Toll-like рецепторов в эпителии эндометрия и эпителиальных клетках нижних отделов репродуктивной системы (66). При урогенитальной инфекции вирусного генеза беременных особое внимание уделяется TLR-9.
Особый интерес представляет изучение системы цитокинов, как регуляторов воспалительных реакций, медиаторов естественного иммунитета и важных молекул "противовирусной защиты. Несмотря на обширные исследования в этой области, полученные данные противоречивы (51, 52,53). Комплексное исследование цитокинов в сыворотке крови, в слизи цервикального канала, в околоплодных водах, в культуре мононуклеарных клеток представляется актуальным так, как может иметь диагностическую и прогностическую значимость при подозрении на внутриутробное инфицирование плода.
Околоплодные воды представляют собой биологический барьер между плодом и экстраэмбриональными структурами, являясь местом проявления локальных иммунных реакций (7). Проникновение патогенных микроорганизмов в околоплодную среду вызывает ряд биохимических, гормональных и иммунологических изменений местного характера. В связи с этим исследование уровня цитокинов и выработки кислородных радикалов в околоплодных водах несомненно является актуальным у беременных группы риска по развитию ВУИ.
Цель настоящей работы - оценка диагностической и прогностической
значимости показателей естественного иммунитета у беременных с
урогенитальной инфекцией вирусного генеза
Конкретные задачи исследования включали:
Анализ течения беременности и родов у беременных с урогенитальной инфекцией вирусной этиологии.
Сравнительный анализ уровней цитокинов (ИЛ-12, ИФН-7, ФНО-а) в периферической крови, в культурах мононуклеарных клеток, в околоплодных водах у беременных с вирусной инфекцией.
Оценка уровня экспрессии Toll-подобного рецептора (TLR-9), ответственного за связывание с вирусной ДНК, МНК периферической крови и слизистой цервикального канала здоровых беременных и беременных с вирусной инфекцией.
Определение выработки активных форм кислорода нейтрофилами периферической крови и околоплодных вод у беременных с вирусной инфекцией.
Выявление возможных маркеров реализации ВУИ у беременных с вирусной инфекцией.
Научная новизна
Исследована роль факторов естественного иммунитета, включающих противовирусные цитокины, активные формы кислорода, уровень экспрессии рецептора TLR-9, распознающего вирусную ДНК, у беременных с урогенитальной инфекцией вирусной этиологии.
Впервые получены данные об увеличении экспрессии рецептора TLR-9 на клетках слизистой цервикального канала и мононуклерных клетках периферической крови беременных с вирусной инфекцией
Проведен комплексный анализ уровня цитокинов, играющих важную роль в противовирусной защите (ИЛ-12, ФНОа, ИФНу) в сыворотке крови, в культурах мононуклеарных клеток, в околоплодных водах (ОВ) у беременных с вирусной инфекцией.
Исследована роль различных цитокинов и активных форм кислорода в околоплодных водах у беременных с вирусной инфекцией, как возможных маркеров внутриутробного инфицирования плода.
Впервые сопоставлены клинические проявления ВУИ у новорожденных с данными уровня цитокинов, продукции кислородных радикалов в сыворотке крови и в ОВ у беременных с УГИ вирусного генеза.
Практическая значимость работы
Данные о снижении выработки кислородных радикалов нейтрофилами крови и околоплодных вод, о дисбалансе в системе цитокинов сыворотки крови, околоплодных .водах и в культуре мононуклеарных клеток, а именно повышение концентрации ИЛ-12, ФИО и полное отсутствие ИФН, у беременных с урогенитальной инфекцией вирусной этиологии могут быть использованы для прогноза течения и тактики ведения беременности, родов и определения показаний к проведению иммунокоррекции.
Положения, выносимые на защиту
1. У беременных с УГИ вирусной этиологии наблюдается изменения в
системе цитокинов, проявляющиеся в отсутствии ИФН в сыворотке крови и
снижении его концентрации в околоплодных водах.
При этом у беременных с вирусной инфекцией наблюдается увеличение концентрации ИЛ-12 ,ФНО в сыворотке крови и в культурах мононуклеарных клеток по сравнению с группой здоровых беременных.
2. Увеличение выработки провоспалительных цитокинов коррелирует
с повышенной экспрессией Toll-подобного рецептора (TLR-9) клетками
слизистой цервикального канала и мононуклеарами периферической крови.
У беременных с УГИ вирусного генеза наблюдается выраженный дефицит выработки кислородных радикалов нейтрофилами периферической крови и околоплодных вод.
У здоровых и больных новорожденных, рожденных от матерей с УГИ вирусной этиологии отмечено увеличение концентрации ИЛ-12 в 3-4 раза по сравнению со здоровыми детьми, рожденными от здоровых матерей. ИФН не определялся в 100% случаев в пуповинной крови, что является показанием к назначению терапии препаратами интерферонового ряда.
Внедрение в практику
Материалы диссертационного исследования используются в практике учебно-педагогического процесса на кафедре акушерства и гинекологии лечебного факультета РГМУ и в практической работе родильного дома №10 и ГБ №8 г. Москвы.
-Ю-
Публикации результатов исследования
По теме диссертации опубликовано 4 работы.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 4-х глав собственных наблюдений, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, содержащего 64 отечественных и 50 зарубежных источников. Работа выполнена на 105 страницах машинописного текста, иллюстрирована 14 таблицами и 16 рисунками.
Эпидемиология и патогенез развития урогенитальной инфекции
Факторами угрозы инфицирования плода и развития ВУИ являются: высокая вирулентность микроорганизма, отсутствие у беременной женщины иммунитета к возбудителю инфекционного заболевания; недостаточность секреторных факторов иммунитета мочеполового тракта (секреторный Ig А и др.), наличие воспалительных изменений слизистых родовых путей (13,28). Кроме того, особую роль для возникновения ВУИ играет наличие у беременной острого или хронического инфекционного процесса. В этом отношении наибольшее значение имеют: - острые инфекционные заболевания (ветряная оспа, вирусные гепатиты, сифилис, токсоплазмоз, цитомегаловирусная и герпетическая инфекция и др.) - хронические инфекционные заболевания, чаще патология урогенитального тракта (кольпит, цервицит, цистит, пиелонефрит), заболевания ЛОР органов (хронический ринит, ларинготрахеит, тонзиллит, бронхит) и другие. Для плода источником инфекции при ВУИ любой этиологии является беременная женщина (мать), переносящая инфекцию в латентной или манифестной форме (87). В отличие от постнатально приобретенных инфекций, при которых источник инфекций часто остается неустановленным, при ВУИ можно с высокой вероятностью прогнозировать весь эпидемический процесс от источника инфекции (матери) до восприимчивого организма (плод или новорожденный). Так, у женщин серонегативных к возбудителям ВУИ, имеется высокая вероятность как собственного инфицирования и заболевания, так и заражения плода (90,126). В отличие от приобретенных инфекций, при которых прервать «эпидемиологическую цепочку» можно карантинными мероприятиями, при ВУИ сделать это не представляется возможным. Роль плода в этой ситуации пассивна, и его «судьба» всегда определяется источником инфекции (матерью).
Существуют два пути передачи инфекции от матери к плоду: . трансплацентарный путь передачи инфекции (при наличии возбудителя в крови у матери). Плацента представляет собой физиологический барьер, препятствующий проникновению инфекционного агента к плоду. Однако, на ранних этапах беременности быстро делящиеся клетки формирующегося трофобласта, имеющие высокий уровень обменных процессов, являются прекрасной средой для репликации вирусных частиц, которые могут оказывать прямое повреждающее действие на плаценту (4,130). Для проникновения из крови матери в кровь плода инфекционному агенту необходимо преодолеть ряд барьеров (синцитиотрофобласт и цитотрофобласт) ворсин хориона. Поражение плаценты (плацентит), особенно повреждение синцитиотрофобласта, обеспечивающего весь обмен между материнским организмом и плодом (дыхание, питание, выделение), приводит в конечном итоге к плацентарной недостаточности. Вследствие этого может развиться гипоксия плода, синдром задержки роста плода (СЗРП), осложнения во время беременности и родов (30,51). контактный путь передачи инфекции (через инфицированные околоплодные воды, а также интранатально). Известно, что у здоровых женщин околоплодные воды стерильны. Инфицирование околоплодных вод может произойти только при нарушении целостности плодного пузыря восходящим путем (из влагалища или шейки матки при наличии длительного безводного периода вследствие затяжных родов, обусловленных развитием аномалий родовой деятельности). Инфицированные околоплодные воды создают благоприятные условия для заражения плода контактным путем (через кожу, слизистые респираторного и желудочно - кишечного тракта). Так, вследствие аспирации и заглатывания инфицированных околоплодных вод плод может инфицироваться листериями, грибками, бактериями, вирусами. -15 Кроме того, существует нисходящий путь инфицирования (из брюшной полости, через фаллопиевы трубы), но он реализуется редко (например, при гонорейном пельвиоперионите). Интранатальный путь передачи инфекции от матери к плоду возможен при прохождении плода через инфицированные родовые пути в родах (чаще при герпетическом поражении). Внутриутробное инфицирование плода потенциально может происходить посредством любого из перечисленных путей. Однако, в зависимости от этиологии, для каждой из инфекций типичен преимущественно тот или иной путь заражения. Например, для большинства вирусных инфекции и токсоплазмоза характерен трансплацентарный путь передачи инфекции. Однако при герпетической инфекции заражение может произойти при контакте плода с инфицированными слизистыми родовых путей (2). В характере нарушений, вызванных инфекцией, имеет значение срок беременности, в котором произошло внутриутробное инфицирование. Чем меньше срок беременности, тем выше вероятность остановки развития и формирования пороков развития. Инфицирование плода в более поздние сроки развития не приводит, как правило, к формированию грубых дефектов развития, но может нарушать функциональные механизмы дифференцировки клеток и тканей (42,48).
После инфицирования и распространения инфекции в организме беременной важным патогенетическим моментом является инфицирование плаценты, которое происходит чаще гематогенным путем (1,48). Первоначально изменения наблюдаются со стороны сосудов децидуальной оболочки. Возникает васкулит и дистрофические изменения стенок. В случае распространения возбудителя в интервиллезное пространство развивается виллузит. В зависимости от тяжести процесса в синцитиотрофобласте наблюдаются дистрофические изменения или некроз. В строме пораженных ворсин увеличивается число клеток (лейкоцитов, макрофагов, гистиоцитов, лимфоцитов, плазмоцитов, фибробластов), соотношение которых зависит от фазы воспалительного процесса. Позднее ворсины подвергаются очаговому или диффузному склерозу и деформации. В исходе гематогенного инфицирования развивается облитерирующий васкулит и склерозирующий виллузит. Распространенное поражение сосудистого русла сопровождается развитием вторичных изменений в виде массивных отложений фибриноида, что приводит к склеиванию ворсин в конгломераты. Отмечается также возникновение «инфарктов» и кальцификатов в различных участках плаценты (75).
Определение уровня различных цитокинов при урогенитальной инфекции и внутриутробной инфекции
Результаты исследований, проведенных за последнее десятилетие, дают достаточно веские основания считать, что ряд цитокинов, продуцируемых в фетоплацентарном комплексе, играют существенную роль в регуляции множества процессов, протекающих в организмах матери и плода при беременности и родах (52,66).
Важная роль в реализации иммунотрофических влияний отводится также макрофагам, которые присутствуют у беременных женщин в децидуальной и фиброзной тканях, непосредственно прилегающих к плаценте. Эти клетки также синтезируют и секретируют ряд цитокинов, способных влиять как на рост и инвазию трофобластических клеток, так и на функции лимфоцитов, присутствующих в маточно-плацентарной зоне: ИЛ-1, ФНОа, ТФРр\ гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ) (62,51)
Для каждого физиологического процесса характерно наличие определенного баланса между активацией Th 1 и Th 2, нарушение которого может приводить к развитию патологических процессов. Гиперфункция Th 1 может привести к воспалительным реакциям в эндометрии даже в условиях низкой концентрации, особенно при персистенции инфекционного агента, что нарушает адекватное межклеточные взаимодействия и может служить причиной прерывания беременности (44,54).
Генерализованный характер высвобождения цитокинов всегда свидетельствует о патологическом процессе. Персистенция бактерий и вирусов характеризуется привлечением в очаг хронического воспаления мононуклеарных фагоцитов, естественных киллеров, Т-хелперов, синтезирующих провоспалительные цитокины - ФНО-о, ИЛ-1/3, ИЛ-6. Так, на поздних этапах беременности взаимодействие бактериальной инвазии и синтеза провоспалительных цитокинов клетками амниона, хориона, плодными тканями с последующим высвобождением простагландинов сопровождается преждевременным развитием родовой деятельности. Однако под действием соответствующей терапии у беременных происходит снижение уровня провоспалительных цитокинов, причем нормализация цитокинового статуса коррелирует с пролонгированием беременности (41).
Интерфероны (ИФН), фактор некроза опухоли а (ФНО-а) и интерлейкины (ИЛ), входящие в систему цитокинов, регулируют продолжительность и силу иммунных реакций, а также реакции воспаления (23,32,42,57). Они секретируются локально и действуют как паракринные или аутокринные факторы. Поступая в микроокружение в пикомолярных концентрациях, они взаимодействуют с высокоаффинными рецепторами, которые экспрессируются на мембране клетки и приводят к изменению ее «поведения» (21,42). Известно, что система ИФН включает в себя широкие контрольно-регуляторные функции, вызывая иммуномодулирующий, противовирусный, антимикробный, антипролиферативный и другие эффекты (15,65). Поэтому система ИФН имеет важное значение в становлении клеточного и гуморального иммунитета, особенно у новорожденных. Некоторые авторы (23,41) связывают высокую чувствительность новорожденных и детей раннего возраста к инфекциям с дефицитом иммунного 7 интерФеРна в организме.
Другой цитокин — ФНОа, являющийся плейотропным медиатором клеточного иммунитета и взаимодействующий с системами ИФН и ИЛ, также играет важную роль в воспалительных и иммунных реакциях организма. Основными продуцентами ИФН и ФНО являются макрофаги, активированные микробными патогенами (вирусами, бактериями). Ряд авторов рассматривают повышение концентрации данного цитокина в ОВ как ранний маркер развития сепсиса у младенцев, рожденных в преждевременных родах, считая при этом данный показатель единственным достоверным для диагностики раннего развития сепсиса. (165)
В связи с этим Самсыгиной Г.А. и соавт. (42) были изучены особенности ИФН-статуса и уровни продукции ФНО у 102 новорожденных гестационного возраста 28-35 недель. Способность клеток к продукции иммунного 7-интерферона у 68% новорожденных с ВУИ была понижена. При этом наиболее высокие уровни ФНО и сывороточного ИФН определялись у новорожденных с инфекционно-септическим шоком, язвенно- некротическим энтероколитом, тяжелой анемией, перинатальными повреждениями ЦНС, а также с респираторными расстройствами.
В исследованиях разных авторов доказано, что размножение патогенных микроорганизмов в ОВ приводит к повышению уровня липополисахаридов, которые, активизируя деятельность клеток фетального трофобласта, приводят к усиленному синтезу ими цитокинов (7, 49). Они, в свою очередь, создавая условия для увеличения метаболизма циклического аденозинмонофосфата (цАМФ), выступают посредниками в развитии воспалительных и иммунных реакций в системе мать - плацента - плод (7,49). Вследствие установления этих взаимосвязей многие исследователи в своих работах пытались применить определение уровней цитокинов в ОВ при доношенной и особенно недоношенной беременности для диагностики ВУИ (96). Надо отметить, что рядом авторов обсуждается роль таких цитокинов, как ИЛ-8, ИЛ-6, ИЛ-1 в патогенезе синдрома разрыва околоплодных оболочек и возможность использования оценки концентрации данных цитокинов в ОВ для прогнозирования преждевременных родов(96). Тем не менее необходимо отметить, что, несмотря на значительный прогресс, достигнутый в области исследования роли цитокинов в регуляции родовой деятельности и при развитии различных патологических состояний, результаты части исследований в настоящее время являются противоречивыми, что обуславливает необходимость дальнейшего поиска в данном направлении.
Таким образом, комплексное исследование видового состава микроорганизмов родовых путей, ОВ, плаценты, новорожденного, определение антигенов и антител к предполагаемому возбудителю в пуповинной крови и околоплодных водах, гистологическое исследование последа, позволяет определить путь инфицирования ребенка, природу возбудителя и уточнить объем дополнительных диагностических процедур и лечебно-профилактических мероприятий в раннем неонатальном периоде. Поиски и совершенствование новых методов диагностики ВУИ являются актуальными в настоящее время.
Изменение противовирусных цитокинов ИЛ-12 и ИФНу в сыворотке крови у беременных с УГИ
В течение всей беременности система цитокинов играет важную роль в регуляции воспалительных реакций, межклеточных взаимодействий в эндометрии, а также в процессе инвазии трофобласта. Однако при различных воспалительных заболеваниях эта система функционирует еще и как защитный агент. При воздействии специфических антигенов на ткани эндометрия происходит дифференцировка Т-хелперов на 2 популяции: Т-хелперы первого типа (ТЫ) и Т-хелперы второго типа (Th2). Нормальное течение беременности является результатом преобладания ТЪ2 в эндометрии, благодаря которому становится возможной продукция блокирующих антител, скрывающих антигены трофобласта от распознавания иммунной системой матери. ТЫ и Th2 находятся в антагонистических отношениях. Это объясняет наличие высокого уровня Th2 при нормально протекающей беременности (102). Гиперфункция ТЫ может привести к воспалительным явлениям в эндометрии даже в условиях низкой концентрации, особенно при персистенции инфекционного агента, что нарушает нормальные межклеточные взаимодействия и может служить причиной выкидыша и преждевременных родов (53,54).
В ряде работ указывается на преобладание в децидуальной ткани и сыворотке крови противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-10) при нормально протекающей беременности, тогда как при патологическом течении гестационного процесса на фоне урогенитальной инфекции отмечается увеличение в периферической крови цитокинов с провоспалительной активностью, таких как ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-а и ИФН-у (5,7,51). Уровни цитокинов в сыворотке или других биологических жидкостях отражают текущее состояние работы, иммунной системы, т.е. синтез цитокинов клетками организма in vivo. Определение уровней продукции цитокинов мононуклеарами периферической крови (МІЖ) показывает функциональное состояние клеток и может служить одним из признаков супрессии иммунного ответа. Оценка уровней цитокинов позволяет получить данные о тяжести воспалительного процесса, его переходе на системный уровень и прогнозе; функциональной активности клеток иммунной системы, о соотношении Т-хелперов 1 и 2 типов, что очень важно при дифференциальной диагностике ряда инфекционных и иммунопатологических процессов. В настоящей работе проведен сравнительный, анализ. уровней цитокинов в сыворотке крови, в культуре мононуклеарных клеток периферической крови, в околоплодных водах здоровых беременных и беременных с вирусной инфекциейі
Известно что при вирусных и бактериальных инфекциях наблюдается активация макрофагально-моноцитарнош системы, которая; взаимодействуя с патогенами вызывает индукцию выработки: провоспалительных цитокинов, в частности ИЛ-12 (65,64). Нами был определен уровень ИЛ-12 в сыворотке периферической крови; здоровых женщин, здоровых беременных и беременных с УТИ вирусного генеза. Во время беременности отмечено достоверное увеличение ЙЛ-12 по сравнению со здоровыми небеременными донорами. Наши данные подтверждают тот факт, что . продукция ИЛ-12 значительно возрастает у беременных с вирусной инфекцией, причем результаты статистически достоверно отличаются как, от здоровых доноров, так и от здоровых беременных. Это связано с активацией механизмов противовирусной защиты. Как известно ИЛ-12 является ключевым цитокином, определяющим направление дифференцировки Т лимфоцитов по пути ТЫ. Этот путь обеспечивает включение цитотоксических киллерных механизмов, направленных на элиминацию вирус-инфицированных клеток (23).
В норме концентрация ИЛ-12 достаточно невелика. Как видно на рисунке №3 концентрация ИЛ-12 у здоровых доноров составляла 30,1±6,2 пкг/мл и статистически достоверно отличалась от концентрации ИЛ-12 у здоровых беременных ( 94,2±22,4 нкг/мл р 0.05). ИЛ-12 у здоровых доноров определялся в 25% (4 дон.) случаев, тогда как у здоровых беременных - в 100% (44 бер.) случаев. Во время беременности в связи с активацией многих механизмов иммунной, в том числе и противовирусной защиты, наблюдается возрастание концентрации ИЛ-12. При УГИ вирусного генеза наблюдается активация макрофагально-моноцитарной системы, которая реагирует на патогены усилением выработки цитокинов, в частности ИЛ-12. Наши результаты подтверждают тот факт, что продукция ИЛ-12 повышена у беременных с вирусной инфекцией. Причем результаты статистически достоверно отличаются как от здоровых доноров, так от и от здоровых беременных (рис. 3). Концентрация ИЛ-12 у беременных с вирусной инфекцией составила 181,5+37,3 пкг/мл (р 0,05). С одной стороны, ИЛ-12 при инфекционном процессе необходим для стимуляции функций натуральных киллеров, Т-хелперов первого типа и цитотоксических Т-лимфоцитов, с другой стороны, гиперстимуляция Т-хелперов первого типа (Thl) неблагоприятно влияет на течение беременности. Воздействуя в более высоких концентрациях, ИЛ-12 также индуцирует выработку ИФН.
Определение цитокинов в околоплодной жидкости рожениц с нормально протекающей беременностью и рожениц с УГИ вирусного генеза
Проанализирована структура патологии новорожденных, родившихся от пациенток, включенных в исследование. Подробный анализ структуры патологии новорожденных, рожденных от матерей 1- ой и 2- ой и групп представлен в таблице 13. Таблица 13 Структура патологии новорожденных, родившихся от матерей с УГИ вирусного генеза (1-ая группа) и здоровых матерей (2-ая группа). указана достоверность различий для средних значений признаков с использованием параметрического критерия Стьюдента; уровни значимости различий р 0.05, р 0.01 и обозначены и соответственно. От 127 матерей родились живыми 127 новорожденных, из которых 81 детей родились доношенными (в сроке 38-40 недель) и 46 новорожденных родились недоношенными (в сроке 32-37 недель). Дети, рожденные от матерей 1-ой группы, имели в среднем вес 2 кг 960 грамм ± 0,96, рост 49,5 ± 0,56 см; во 2- ой группе - вес 3 кг 500 грамм ± 0,89 и рост 51,8 см ± 0,38 см. Таким образом, дети, рожденные от матерей с высоким риском развития ВУИ плода, имели меньший росто - весовой показатель, в отличие от детей, родившихся от здоровых матерей. УГИ во время беременности также является фактором риска развития внутриутробной гипоксии плода и асфиксии новорожденного в родах. Во время беременности развитие хронической внутриутробной гипоксии плода диагностировалось по клиническим данным (ухудшение сердцебиения плода, уменьшение его подвижности и др.) и данным ультразвукового и кардиотокографического исследований плода. Находившиеся в стационаре беременные получали соответствующее лечение, на фоне которого показатели со стороны плода улучшались. Гипоксия плода в родах развивалась у 12 роженицы 1-ой группы (14,5%). Среди детей, родившихся от здоровых матерей 2-ой группы гипоксия в родах не наблюдалась. Диагноз устанавливался на основании ведущего симптома -окрашивание околоплодных вод меконием, частота которого при головном предлежании плода составляет 9-20% в популяции и достигает 35% при родах высокого риска (45). Наиболее тяжелым последствием прекращения или уменьшения поступления кислорода является развитие асфиксии новорожденного. По данным нашего исследования асфиксия была зарегистрирована у 2 новорожденных, родившихся от матерей 1-ой группы (2%). В обоих случаях в родах произошло преждевременное излитие околоплодных вод, имел место патологический прелиминарный период, длительный безводный период, развилась первичная слабость родовой деятельности. Сложившаяся акушерская ситуация послужила показанием для оперативного родоразрешения. Подобный неблагоприятный фон послужил причиной развития гипоксии плода и асфиксии новорожденного. Среди новорожденных, родившихся от матерей 2- ой группы данное осложнение не отмечалось. Следствием перенесенной гипоксии плода является поражение ЦНС. Иммунологические исследования ОВ с целью прогнозирования развития и выявления ВУИ в настоящее время являются малочисленными и противоречивыми. В связи с этим в дальнейших исследованиях нами был проведен сравнительный анализ содержания цитокинов в ОВ рожениц, родивших здоровых детей и детей с признаками ВУИ. Результаты представлены в таблице. Прогностическими критериями реализации ВУИ у рожениц с УГИ вирусного генеза можно считать увеличение концентрации ИЛ-1 выше 107,0 пкг/мл, значительное снижение ИФН-7 до 3,0 пкг/мл.
Особое внимание обращает на себя увеличение ИЛ-4 более (чем в 5 раз) в ОВ рожениц, родивших детей с ВУИ, по сравнению с уровнем ИЛ-4 в ОВ здоровых рожениц. Не исключено, что в будущем эти дети войдут в группу риска по развитию аллергических заболеваний. Это необходимо учитывать при дальнейшем ведении этих новорожденных.
![Оценка риска и прогнозирование внутриутробного инфицирования плода у беременных со специфической урогенитальной инфекцией [Электронный ресурс]](/i/i/4426/207601.png "Оценка риска и прогнозирование внутриутробного инфицирования плода у беременных со специфической урогенитальной инфекцией [Электронный ресурс] Железова Мария Евгеньевна")
