Введение к работе
Актуальность проблемы. Новообразования яичников (ДНЯ) считаются одними из наиболее часто встречающихся патологических процессов женских гениталий (Высоцкий М.М., 2005; Фролова О.Г. и соавт., 2005; Мартынова Ж.А. и соавт., 2008; Duhoux F.P. et al., 2009). Повышенный интерес исследователей к проблеме РЯ объясняется трудностями диагностики (Сергеева Н.С. и соавт., 2010; Bast R.C.Jr. et al., 2009), частыми рецидивами заболевания и неудовлетворительными результатами лечения диссеминированных форм заболевания, 5-летняя выживаемость варьирует от 5 до 25% (Горбунова В.А. и соавт., 2003; Новикова Е.Г. и соавт., 2007; Аксель Е.М., 2009; Moore R.G. et al., 2008). По данным Европейского общества медицинской онкологии (ESMO) ежегодная заболеваемость РЯ в Европе составляет 18, а смертность – 12 случаев на 100 тыс. женщин в год и увеличивается с возрастом (Aebi S. et al., 2008).
Сложность проблемы патогенеза, диагностики и лечения новообразований яичников связана с особенностями природы этого эндокринного органа, а также множеством гистологических форм РЯ и ДНЯ, которые обусловливают особенности клинического течения этих заболеваний и прогноз (Карселадзе А.И., 2000; Горелова И.А., 2008). Если же принять во внимание еще и переходные формы (Тюляндин С.А. и соавт., 2009), а также опухоли, которые представлены сочетанием двух и более гистологических типов, то количество вариантов этих новообразований значительно возрастает (Козаченко В.П., 1999; Жорданиа К.И., 2005). Однако, подавляющее большинство злокачественных опухолей яичников являются эпителиальными (Винокуров В.Л., 2004; Grant D.J. et al., 2010).
Особое внимание в последние годы исследователи уделяют изучению механизмов апоптоза (программируемой гибели клетки) с характерными морфологическими и биохимическими признаками (Сухих Г.Т. и соавт., 1999; Белушкина Н.Н. и соавт., 2004; Пальцев М.А., 2004; Thompson C.B., 1995). Нарушение процессов клеточной гибели может приводить к возникновению патологических состояний, к числу которых относятся онкологические заболевания, в том числе и РЯ (Аббасова С.Г. и соавт., 1999; Симонова В.С. и соавт., 2005; Hefler L. et al., 2000). Одной из ключевых молекул, участвующих в развитии Fas-опосредуемого апоптоза, является Fas-рецептор - трансмембранный гликопротеин 1 типа (синонимы АРО-1, СD-95), который индуцирует апоптоз в клетке после взаимодействия с Fas-лигандом (FasL) или агонистическими моноклональными антителами против Fas. Причиной устойчивости опухолевых клеток к Fas-зависимому апоптозу может быть повышенная продукция растворимого Fas (sFas) этими клетками, который является продуктом альтернативного сплайсинга полноразмерной молекулы Fas (Cascino I. et al., 1995) и способен ингибировать Fas-опосредуемый апоптоз. Повышенный уровень sFas отмечен также при гепатоцеллюлярной карциноме, раке щитовидной, молочной и предстательной желез, саркомах костей (Бабкина И.В., 2000; Скрипниченко И.В., 2002; Ирменов К.М., 2003; Вищипанова Н.Л., 2006; Jodo S. et al., 1998; Basolo F. et al., 2000). В связи этим определение концентрации sFas в сыворотке крови больных злокачественными опухолями яичников позволит выявить его взаимосвязь с основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания и прогнозом. L.Hefler et al. (2000) на основании предварительных исследований предлагают использовать этот маркер в дифференциальной диагностике РЯ и ДНЯ, а высокая концентрация sFas в сыворотке крови больных до проведения химиотерапии может служит фактором прогноза общей и безрецидивной выживаемости.
В последние годы интерес онкологов привлекает также мультифункциональный цитокин интерлейкин-6 (ИЛ-6), который регулирует рост и дифференцировку клеток различных тканей, играет важную роль в иммунном ответе в острой фазе воспалительного процесса и считается ингибитором апоптоза, в том числе и Fas-зависимого (Yamasaki K. et al., 1988; Jilka R.L. et al., 1998).
Стало быть, сравнительный анализ основных клинико-морфологических факторов при серозных ДНЯ и РЯ с уровнями ингибиторов Fas-зависимого апоптоза sFas и ИЛ-6, а также FasL в сыворотке крови этих пациенток может иметь значение в клиническом их течении.
Цель исследования – выбор объема и доступа при хирургическом лечении новообразований яичников на основании сравнительного анализа содержания ингибиторов Fas-зависимого апоптоза - sFas, ИЛ-6, а также FasL в сыворотке крови больных серозными новообразованиями яичников, оценка их взаимосвязи с основными клинико-морфологическими характеристиками опухолей для улучшения результатов лечения.
Задачи исследования.
-
Провести сравнительное иммуноферментное определение концентрации ингибиторов апоптоза – sFas, ИЛ-6, а также FasL у больных серозными злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников.
-
Сравнить уровни sFas, ИЛ-6, FasL в сыворотке крови больных серозными новообразованиями яичников с учетом основных клинических проявлений и морфологических характеристик заболевания.
-
Проанализировать особенности содержания FasL в сыворотке крови больных серозными злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников и сопоставить его уровни с исходными показателями sFas у этой категории пациенток.
-
Провести анализ взаимосвязи содержания sFas, ИЛ-6, FasL в сыворотке крови больных серозными злокачественными и доброкачественными новообразованиями яичников и сопоставить их с таковыми показателями у практически здоровых женщин.
-
Выявить роль исследуемых маркеров (sFas, ИЛ-6, FasL) в сыворотке крови в диагностике, выборе объема и доступа при хирургическом лечении новообразований яичников.
Научная новизна исследования.
Впервые обнаружено достоверно высокое исходное содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных серозным раком яичников по сравнению со здоровыми женщинами и пациентками с серозными доброкачественными новообразованиями яичников, при этом уровень ИЛ-6 <2 пг/мл с вероятностью 88% указывает на отсутствие злокачественного характера новообразования яичника.
Показано, что содержание ИЛ-6 в сыворотке крови зависело от стадии серозного рака яичника и было достоверно выше у пациенток во II и III стадиях опухолевого процесса по сравнению с IV стадией.
Обнаружено, что в группе больных серозным РЯ и ДНЯ значения ИЛ-6 в сыворотке крови достоверно повышались с увеличением возраста пациенток, в постменопаузе и при наличии абортов в анамнезе.
Не выявлено различий в частоте выявления и исходных уровнях ингибитора апоптоза sFas в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных серозными ДНЯ и РЯ, однако частота выявления FasL в сыворотке крови выше указанных групп достоверно различалась. По сравнению со здоровыми женщинами у больных серозными новообразованиями яичников FasL выявлялся чаще. Средний уровень FasL был достоверно выше у больных серозными новообразованиями яичников в постменопаузе, у больных серозным РЯ.
Не выявлено корреляционных зависимостей между уровнями всех изучаемых маркеров в группе практически здоровых женщин, тогда как, у больных серозными ДНЯ обнаружена достоверная отрицательная зависимость между ИЛ-6 и FasL и достоверная прямая связь между FasL и sFas. У больных серозным РЯ зависимость между уровнем ИЛ-6 и sFas отсутствовала, однако выявлена прямая достоверная связь между ИЛ-6 и FasL в сыворотке крови.
Практическая значимость исследования.
Настоящая работа представляет практический интерес для анализа роли ингибиторов Fas-зависимого апоптоза sFas и ИЛ-6 у больных первичными серозными ДНЯ и РЯ при оценке клинического течения, прогноза и выбора биологически оправданного объема операции.
Впервые определен исходный пороговый уровень FasL в сыворотке крови больных серозными новообразованиями яичников относительно группы контроля равный <0,2 нг/мл, который следует использовать как дополнительный маркер в диагностике серозных новообразований яичников.
Дискриминантный анализ показал высокую эффективность использования исходных показателей ИЛ-6, sFas в сыворотке крови больных серозными новообразованиями яичников в дооперационной диагностике: специфичность теста составила 93,8%, чувствительность 70%. Применение таких клинических признаков как размер опухоли, возраст пациентки, наличие болей внизу живота повышало чувствительность теста до 80%, специфичность до 100%, а общая эффективность теста составила 95,2%.
Количественное определение ингибиторов апоптоза sFas и ИЛ-6 в сыворотке крови у больных серозными новообразованиями яичников в сочетании с другими клиническими и биохимическими показателями позволит дифференцированно подходить к выбору методов лечения этой категории пациенток.
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Исходные уровни sFas в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных серозными ДНЯ и РЯ не различались, однако отмечено достоверное различие в частоте выявления маркера между выше указанными группами.
-
Достоверно высокие показатели ИЛ-6 обнаружены в сыворотке крови больных серозным РЯ во II и III стадиях по сравнению с IV стадией.
-
У больных серозным РЯ и ДНЯ значения ИЛ-6 в сыворотке крови достоверно повышались с увеличением возраста, в постменопаузе, при наличии абортов в анамнезе.
-
Частота выявления FasL в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных серозными ДНЯ и РЯ достоверно различалась. При этом, средний уровень FasL был достоверно выше у больных серозным РЯ по сравнению с контролем и больными серозными ДНЯ.
-
Показатель FasL 0,2 нг/мл в сыворотке крови может быть использован как дополнительный маркер в диагностике серозных новообразований яичников.
-
В группе контроля не выявлено корреляционных зависимостей между уровнями всех изучаемых маркеров. У больных серозными ДНЯ обнаружена достоверная зависимость между ИЛ-6 и FasL, а связь между FasL и sFas была прямой и достоверной. У больных серозным РЯ зависимость между уровнем ИЛ-6 и sFas отсутствовала, однако отмечена прямая достоверная зависимость между ИЛ-6 и FasL в сыворотке крови.
-
Дискриминантный анализ показал высокую эффективность использования исходных показателей ИЛ-6, sFas, FasL в сыворотке крови больных новообразованиями яичников при дооперационной диагностике: специфичность теста составила 93,8%, чувствительность 70%. Дополнительно применение таких признаков как размер опухоли, возраст пациентки, наличие болей внизу живота повышало чувствительность теста до 80%, специфичность до 100%, а общая эффективность теста составила 95,2%.
-
Исходное содержание ИЛ-6 в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных серозными ДНЯ и РЯ достоверно различалось, при этом уровень ИЛ-6 <2 пг/мл с вероятностью 88% указывает на отсутствие злокачественного характера новообразования яичника, что позволяет оперировать этих пациенток с использованием лапароскопического доступа.
Внедрение результатов исследования.
Метод исследования ингибиторов Fas-зависимого апоптоза - sFas, ИЛ-6, а также FasL в сыворотке крови больных серозными новообразованиями яичников с целью выбора объема и доступа при хирургическом лечении новообразований яичников для улучшения результатов лечения внедрен в практику хирургического отделения гинекологи больницы Ценросоюза РФ г.Москвы.
Апробация диссертации.
Материалы диссертации доложены на конгрессе «Национальные дни лабораторной медицины России» (7-9 октября Москва, 2008г.); XII Российском онкологическом конгрессе (Москва, 18-20 ноября 2008г.); Всероссийской конференции с международным участием «Molecular Oncology» (Новосибирск, 1-3 октября 2008г.); на XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 18-22 апреля 2009г.); на XXII Международном конгрессе с курсом эндоскопии «Новые технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний» (Москва, 8-11 июня 2009г.); на VI Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 10-11 ноября 2009г.).
Апробация диссертации проведена на совместной научной конференции сотрудников кафедры акушерства и гинекологии лечебного факультета МГМСУ 12 апреля 2010 года.
Личный вклад.
Автор лично проводил забор материала для иммуноферментного определения сывороточных маркеров ингибиторов Fas-опосредованного апоптоза (sFas, ИЛ-6, FasL) у 78 первичных больных серозными новообразованиями яичников. В ходе сбора материала для диссертационной работы К.А.Бахоевой были освоены методы иммуноферментного определения выше указанных маркеров. Диссертант самостоятельно проводила статистическую обработку данных и их анализ с использованием современных статистических методов.
Публикации результатов исследования.
По материалам диссертации опубликованы 10 научных работ, 3 из них в журналах, рекомендуемых ВАК Минобрнауки.
Структура и объем работы.
