Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Основные белки, участвующие в обеспечении мышечного сокращения, и влияние полиморфизмов в генах этих белков на особенности функционирования мышечных тканей (обзор литературы). 10
1.1. Саркомерная организация мышечных волокон и основные сарко-мерные белки, участвующие в обеспечении мышечного сокращения . 10
1.2. Полиморфизмы некоторых саркомерных белков (генный полиморфизм, альтернативный сплайсинг, постсинтетические модификации и др.). 23
1.3. Биомедицинские аспекты исследований полиморфизмов саркомерных белков. 36
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований. 43
2.1. Реактивы, биологические материалы и медицинская документация, 43
2.1.1.Реактивы, 43
2.1.2. Биологические материалы. 44
2.1.3. Медицинская документация. 45
2.2. Методы электрофоретического фракционирования и анализа мышечных белков . 45
2.2.1. Приготовление препаратов мышечных белков из образцов мышечной ткани. 45
2.2.2. Модификации ПААРэлектрофореза, использованные для разделения мышечных белков. 46
2.2.3. Методы детекции и анализа электрофоретических белковых фракций. 49
2.2.4. Подготовка белковых образцов для масс-спектрометр и и и проведение анализа триптических пептидов. 50
2.3. Методы получения препаратов ДНК и формирования ДНК-коллекций. 50
2.4. Методы исследования ДНК-полиморфизмов, 51
2.4.1. Простая ПЦР и рестрикционный анализ. 51
2.4.2. Анализ одноцепочечного конформационного полиморфизма (SSCP). 53
2.4.3. Подготовка ампликонов для ДНК-секвенирования и проведение анализа нуклеотидных последовательностей. 54
2.4.4. Метод дискриминации аллелей с помощью ПЦР в реальном времени (RT-PCR). 55
2.5. Статистическая обработка результатов. 57
ГЛАВА 3. Полученные результаты и их обсуждение. 59
3.1. Электрофоретическое<фракционирование и анализ, полиморфизма некоторых саркомерных белков. 59
3.2. Общие характеристики использованных ДНК-коллекций и аннотаций на содержащихся в них препаратах (лица, составлявшие контрольные группы и спортсмены). 66
3.3. Изучение полиморфизмов в гене р тяжелой цепи миозина (MYH7) и в'гене а-тропомиозина (ТРМ1) у здоровых доноров, не занимающихся спортом, у спортсменов и пациентов с кардиомиопатиями. 68
3.4. Изучение полиморфизма R577X (rsl815739; 1747 С->Т) в гене ACTN3. 78
3.4.1. Разработка модификации рестрикционного анализа полимор физма R577X в гене ACTN3 78
3.4.2. Результаты изучения полиморфизма R577X в гене ACTN3 в группе этнических русских. 83
3.4.3. Результаты изучения полиморфизма R577X в гене ACTN3 в группах пловцов и других спортсменов, занимающихся иными видами спорта. 88
3.5. Изучение полиморфизма Т17556М (rs3731746) в гене тайтина у здоровых доноров, не занимающихся спортом, у пловцов и других спортсменов, занимающихся иными видами спорта.
3.6. Определение динуклеотидной делеции в гене кальпаина [CANP3) в семьях, отягощенных миодистрофией Эрба-Рота. 95
Заключение. 99
Выводы. 104
Список цитированной литературы. 105
Приложения. 125
Благодарности.
- Саркомерная организация мышечных волокон и основные сарко-мерные белки, участвующие в обеспечении мышечного сокращения
- Полиморфизмы некоторых саркомерных белков (генный полиморфизм, альтернативный сплайсинг, постсинтетические модификации и др.).
- Методы электрофоретического фракционирования и анализа мышечных белков
- Разработка модификации рестрикционного анализа полимор физма R577X в гене ACTN3
Саркомерная организация мышечных волокон и основные сарко-мерные белки, участвующие в обеспечении мышечного сокращения
В развитии биохимии мышц, как особой области исследований, важнейшее значение имело открытие весьма специфичной цитоархитектоники поперечнополосатых мышечных волокон, основой которой являются повторяющиеся белковые надмолекулярные образования, так называемые саркомеры [12; 29; 19; 30]. Схематически общие закономерности строения саркомеров суммированы на Рис.1 [по 30]. На основании результатов морфологических исследований считается, что типичный саркомер представляет собой цилиндрическое образование диаметром около 1,5 мкм и длиной около 2 мкм, в котором содержится около 1000 толстых белковых нитей и около 4000 - тонких [по 29].
Уже в ранних работах было показано, что в составе саркомеров у позвоночных разных видов содержестя около 40% от общего мышечного белка, при этом главные белки полосы A (A band или А диска), составляющие толстые и тонкие нити были названы миозинами и актинами, соответственно [по 12; 29; 20]. В проводившихся на этом этапе экспериментах по выделению миозинов и актинов из мышечных тканей данные белки экстрагировались в виде особого актомио-зинового комплекса, что указывало на их прочное взаимодействие в клетках, и это затем убедительно подтвердилось различными методами [12; 19; 75; 30]. Кроме того, проведенные исследования установили, что типичные миозины скелетных мышц представляют собой гетероолигомеры, состоящие из пары тяжелых миозиновых цепей, обладающих фибриллярной формой, и двух пар легких миозиновых цепей (см. гл.2), а актин является глобулярным белкам (G-форма), способным образовывать фибриллярные структуры за счет олигомери-зации (F-форма).
В целом, изучение саркомерных белков стало одним из главных направлений в биохимии мышц [по 12; 207; 11; 15]. Этому во многом способствовало развитие представлений о молекулярных механизмах мышечного сокращения и, особенно, появление модели «скользящих нитей» Хаксли [105; 12; 19; 67].
Значение термина «миозин», который для обозначения главного мышечного белка появился еще в 19 веке [по 15], существенно менялось с развитием биохимии и молекулярной биологии. Если к середине двадцатого века миозиновые белки активно исследовали прежде всего, как главные компоненты толстых нитей саркомера, то уже в 60-70 годах биохимическими и иммунохимическими методами было убедительно показано, что миозиновые белки широко представлены не только в мышечных клетках, но и в клетках со многими другими типами дифференцировки [по 12; 29; 20].
В то время в качестве критериев, по которым белки обозначались как мио-зиновые, принимали наличие у бел ка-кандидата следующих основных свойств: а) характерная четвертичная структура (гетероолигомер, состоящий из пары тяжелых миозиновых цепей, в каждой из которых присутствовали глобулярный «головной» домен с сайтами связывания актина и нуклеотидов, шарнирная область и фибриллярный «хвостовой» участок, а также из двух пар легких миозиновых цепей (Рис. 2); б) общие антигенные детерминанты; в) способность к образованию упорядоченных филаментов; г) способность взаимодействовать с актином и проявлять при этом АТФ-азную активность. Однако еще в 1973 г. в почвенной амебе Acaynthamoeba castetlanli был обнаружен белок, молекулы которого состояли из одной тяжелой цепи с резко укороченным хвостовым участком и двух легких цепей [192]. Этот белок оказался глобулярным, но он обладал АТФ-азной активностью, которая повышалась при его взаимодействии с актином, что, в сочетании с рядом других свойств, позволило считать его миозином, но необычным (unconventional) или «одноголовым». В последующем был найден целый ряд подобных белков, которые объединили в отдельное семейство или миозиновый класс I. К настоящему времени разработана даже специ w альная номенклатура для обозначения выявленных у высших позвоночных, включая человека, миозинов класса I и кодирующих их генов [88].
Типичные мышечные миозины стали определять как класс II, включая в него и структурно сходные немышечные миозины; их вместе называют «обычные» (conventional) или «двухголовые», подчеркивая присутствие в молекулах двух тяжелых цепей с «головными» доменами» [44; 11; 201; 15].
Тяжелые цепи миозинов (ТЦМ) класса II несколько десятилетий остаются объектами интенсивных структурных исследований и при этом, у них был установлен целый ряд общих особенностей в строении и, в частности, их молекулярные массы оценены величинами около 200 кДа, а в первичных структурах обнаружено несколько участков, особо чувствительных к действию протеоли-тических ферментов.
Как результат, при протеолизе трипсином ТЦМ сначала расщепляются на две части: Оконцевой фрагмент - лёгкий меромиозин (LMM) и N-концевой фрагмент - тяжелый меромиозин (НИМ). НММ, в свою очередь, при протеолизе папаином распадается на два субфрагмента: субфрагмент 1 (S1) и субфрагмент 2 (S2) [29; 20; 44; 11; 201; 15], При этом в субфрагменте S1 оказывается головной домен миозина, а в составе S2 вместе с LMM обнаруживаются части аминокислотной последовательности, участвующие в образовании так называемого стержня (rod) молекулы миозина (Рис. 2Б). Этот стержневой участок молекулы представляется как почти идеальная а-спираль, длина которой оценивается около 150 нм.
Полиморфизмы некоторых саркомерных белков (генный полиморфизм, альтернативный сплайсинг, постсинтетические модификации и др.).
Современные исследования биохимического полиморфизма белков человека обычно основываются на комплексном подходе к данной проблеме и предусматривают изучение как традиционных генетических основ полиморфизма (полилокусность и полиаллелизм), так и полиморфизма, возникающего за счет альтернативного сплайсинга, постсинтетических модификаций белков и ряда других биохимических механизмов [40; 25; 207; 201; 75], О высокой значимости различных аспектов проблемы биохимического полиморфизма убедительно свидетельствуют результаты международного проекта «Геном человека», которые показали, в частности, что из 23245 идентифицированных генных локусов 45% при экспрессии образуют более чем по одной зрелой мРНК (альтернативный сплайсинг) за счет сохранения в них различных комбинаций экзонов. Кроме того, значительная доля генов ( 28%) транскрибируется более чем с одного промотора, что еще больше увеличивает число полиморфных продуктов, особенно связанных с дифференциальной экспрессией в разных типах клеток [119]. Характеризуя в целом активно ведущиеся исследования биохимического полиморфизма белков человека, нельзя не отметить, что важное место в них принадлежит саркомерным белкам, имеющим множество родственных форм, часть из которых присутствуют и в немышечных клетках [12; 207; 201].
Убедительные сведения о биохимическом полиморфизме ТЦМ класса II у человека были получены электрофоретическими методами уже около 20 лет назад [212; 45; 206]. В различных тканях человека - и в скелетных мышцах, и в сердечной мышце, в гладких мышцах, удалось с высокой воспроизводимостью выявлять в зоне молекулярных масс 200-220 «Да 2-4 миозиновые фракции, которые различались по электрофоретической подвижности и были способны специфически взаимодействовать с анти-миозиновыми антителами. Для обозначения основных изоформ, найденных в скелетных мышцах взрослых, стали использовать символы MYHC На, MYHC Hb, MYHC Ilx/d, а две изоформы, присутствующие в сердечной мышце, назвали MYHCA или alpha изоформа и MYHCB, beta/slow изоформа, соответственно. В ряде публикаций догеномного периода было показано и то, что разные изоформы миозинов сосуществуют в одних и тех же мышечных волокнах [212; 45; 206].
Параллельно в восьмидесятые годы начались активные поиски и изучение генов, кодирующих ТЦМ класса II у человека [127; 199; 76]. Как итог, в следующем десятилетии было установлено, что на 17 хромосоме располагается кластер из б генов, кодирующих основные изоформы скелетных мышц взрослых MYHC Па, MYHC lib, MYHC Ilx/d, а также гены эмбриональных изоформ (MYHC-EMB, MYHC-PN) и тен особой изоформы для глазодвигательных мышц (MYHC-EO) [214; 241]. Несколько ранее другой кластер из двух кардиоспеци фических генов картировали в области 14qll.2-ql3 [154]. Эти и ряд других данных неоспоримо указывают, что одной из главных причин биохимического полиморфизма ТЦМ человека является полилокусность, то есть множественность соответствующих генов (Таблица 1).
В течение девяностых годов (т.е. в период активных разработок геномных проектов), как традиционными биохимическими методами, так с помощью ДНК-технологий, продолжалось изучение всего семейства ТЦМ класса II у человека. В это семейство включили уже более десятка изоформ, имевших одинаковые общие планы строения и очень похожие аминокислотные последовательности, но различавшихся по некоторым деталям структуры и по ряду биохимических свойств [159; 218; 207; 241]. Например, у всех человеческих изоформ ТЦМ класса II аминокислотные последовательности нуклеотид-связывающего центра и некоторых других функционально важных участков головного домена оказались просто идентичными, а у изоформ MYHC Ilx/d и MYHC На даже полные аминокислотные последовательности почти на 95% были идентичными [241,242]. В настоящее время детальная информация о структурных и функциональных свойствах человеческих изоформ ТЦМ класса II, включая полные аминокислотные последовательности, имеется в нескольких компьютерных базах данных, доступных пользователям Интернет [например, www.ncbi.nlm.nih.gov; http://ca.expasy.org и др.].
Значительное внимание в геномный период уделялось также изучению особенностей экспрессии генов ТЦМ, при этом важно отметить, что именно относительная тканевая специфичность или определенные онтогенетические условия их экспрессии традиционно использовались как критерии для обозначения отдельных изоформ (Таблица 1). Так, в 90-х годах появились данные о существовании нескольких изоформ гладко мышечных ТЦМ, образующихся за счет альтернативного сплайсинга при экспрессии соответствующего единственного гена MYH11, имеющегося в геноме человека [116; 163]. Выявленный полиморфизм был обусловлен изменениями аминокислотной последовательности, как в хвостовом участке, так и в N-концевой области, что приводило к модификациям биохимических свойств у разных гладкомышечных изоформ ТЦМ.
В геномный и постгеномные периоды исследований ряд авторов публиковали .данные о полиморфизме немышечных изоформ ТЦМ класса II за счет альтернативного сплайсинга: и гена MYH10, и гена MYH14 [115; 90]. При этом сообщений о таком механизме полиморфизма у скелетно-мышечных ТЦМ пока не было. Однако возможно, что гены немышечных ТЦМ могут все же экспрессиро-ваться и в некоторых мышечных клетках. Так, по данным D Apolito et al. [71], по крайней мере, у мышей ген немышечных ТЦМ MyhlO (ортолог гена немышечных ТЦМ MYH9 человека) активно экспрессируется в мозге, легких, печени и других тканях, но в том числе и в сердечной мышце, хотя его экспрессия не была зарегистрирована в скелетных мышцах.
В геномный период были получены полноразмерные кодирующие последовательности для всех восьми саркомерных ТЦМ человека [109; 241]. Параллельно удалось охарактеризовать экзон-интронные структуры большинства генов человека, кодирующих мышечные ТЦМ класса II [109; 87; 78; 207]. Все эти структуры оказались весьма сходными, они состояли из 38-40 экзонов, при чем обычно первые два экзона и часть третьего содержали информацию о некоди-рующих 5 -концевых последовательностях мРНК, а остальные экзоны обеспечивали кодирование аминокислотных последовательностей ТЦМ. Последние экзоны, содержали также информацию о некодирующих З -концевых последовательностях. При значительном сходстве кодирующих последовательностей гены отдельных изоформ ТЦМ класса И существенно различались по некодирующим 5 -концевым и З -концевым последовательностям [по 207]. Позднее было показано, что некоторые гены ТЦМ класса II состоят из 41 экзона и уменьшение числа экзонов в генах данного семейства является отражением их дивергенции в ходе процесса эволюции позвоночных [71], что способствовало построению филогенетического древа для миозиновых белков человека [44].
В геномный период появилась целая серия работ о существовании выраженного аллельного полиморфизма у большинства ТЦМ, причем особое внимание было сконцентрировано на аллельных формах, ведущих к различным наследственным заболеваниям. По-видимому, первой в этой серии стала публикация Tanigawa G. et al. (1990) [221], в которой авторы показали, что некоторые мутации в кардиоспецифических генах MYH6 и MYH7 являются причинами семейных гипертрофических кардиомиопатий. Более подробно вопросы о полиморфизме ТЦМ при кардиомиопатиях и миопатиях будут рассматриваться в разделе 1.3.
Методы электрофоретического фракционирования и анализа мышечных белков
В работе анализировали биопсийные образцы (n=23) т. vastus lateralis полученные от спортсменов-добровольцев, которые участвовали в физиологи-ческих экспериментах (на фоне 10-недельной силовой тренировки), проводившихся ранее в Институте медико-биологических проблем РАН, а также биопсийные образцы (n=24) т. gastrocnemius, полученные при диагностических процедурах в Институте неврологии РАМН. Кроме того, использовались аутоп-сийные препараты 9 видов скелетных мышц, в том числе и две выше указанные, от лиц (п=10), погибших в результате несчастного случая (жители Москвы в возрасте 20-60 лет при сроках аутолиза 3-6 часов); аутопсийные препараты были получены из Бюро судебно-медицинской экспертизы Департамента здравоохранения г. Москвы. До начала исследований образцы обычно хранились 1-2 недели при температуре -70.
Образцы венозной крови (3-4 мл) получали методом венепункции при обязательном соблюдении принципа добровольности в ходе проведения интервьюирования спортсменов/а также при обследованиях других лиц, которые составили различные контрольные группы. В качестве антикоагулянта обычно использовали 1 мл стандартного раствора глюгицира (2% цитрата натрия и 3% глюкозы). Пробы сразу же маркировали шифрами, присвоенными в процессе "интервью", и охлаждали-до 4 С , а при необходимости хранения - замораживали при температуре - 20 С. В дальнейшем из собранных проб выделяли геномную ДНК, как описано ниже.
Сбор образцов венозной крови осуществлялся совместно с сотрудниками Института биохимии им. А.Н. Баха РАН - Е.Б. Столяровой и А.И. Князевым в рамках выполнения заданий Комплексного проекта ЖС-КП.6/002. «Медико-биологические технологии повышения работоспособности человека в условиях напряженных физических нагрузок» (Министерство образования и науки РФ) и при сотрудничестве с Федеральным центром лечебной физкультуры и спортивной медицины МЗ РФ, благодаря чему были получены также как различные информационные материалы от нескольких групп профессиональных спортсменов (в частности, сборные РФ по лыжам и водному поло). Кроме того, аналогичное сотрудничество при активной поддержке проф. О.Л. Виноградовой (зав. лабораторией Института медико-биологических проблем РАН) осуществлялось с некоторыми другими специалистами по спортивной медицине, тренерами и спортивными врачам различных команд (проф, В.И Тхоревский, Рос. Гос, Университет физкультуры [баскетболисты]; В.А. Измаилов, ДЮШ Олимпийского резерва СКА, С-Петербург, [пловцы]; О.А. Сараев [гребцы]). ДНК-коллекции в контрольных группах были составлены, благодаря сотрудничеству с Московской областной детской психоневрологической больницей (зам. главврача к.м.н. Н.И. Шаховская) и с Московским НИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РФ (зав. отделением к.м.н, В.В. Давыдкин и зав. отделением проф. П.В. Новиков).
Всем перечисленным коллегам приношу свою глубокую благодарность за предоставленные материалы и сотрудничество.
При формировании коллекций биоматриалов для составления аннотаций образцов использовались выписки из амбулаторных карт и из историй болезни пациентов, находившихся под наблюдением в меди ко-спортивных и медицинских учреждения, перечисленных выше. Кроме того, с этеми целями собирали медицинскую информацию об обследуемых лицах при проведении «интрервью» или методом анкетирования. Использовавшая при этом, специально разработанная анкета представлена в Приложении 1.
Для одномерного электрофореза препараты мышечных белков готовились, как описано Locker и Wild [142], с некоторыми модификациями. Вначале 100 мг свежей мышечной ткани гомогенизировали в 5 миллилитрах 0,5 тМ раствора ЭДТА (при проведении части экспериментов раствор содержал также 0,5 тМ phenylmethylsulphonyl - fluoride) на ручном пестиковом гомогенизаторе. Затем отбирали 0,5 мл гомогената и смешивали его с 0,5 мл буфера следующего состава : 0,25 тМ трис, 75 тМ глицин, 2 тМ DDT, 2% SDS, рН 8,8. Полученную смесь сразу же прогревали при 50 С в течение 20 минут в микротермостате бис (модель 206). После прогревания 67 мкл полученного таким образом экстракта мышечных белков смешивали с 33 мкл глицерина (для утяжеления). Конечную смесь сразу же вносили в гель.
Разработка модификации рестрикционного анализа полимор физма R577X в гене ACTN3
Первым шагом и важным условием для рестрикционного анализа SNP s является проведение амплификации участка гена, содержащего соответствующий SNP внутри сайта рестрикции какой-либо эндонуклеазы. В случае SNP 1747С-Л" в гене ACTN3 для этой цели в пионерской публикации была использована рест-риктаза Ddel [174]. Однако ни в этой работе, ни в другой доступной литературе не удалось найти описаний структуры праймеров, необходимых для проведения амплификации нужного участка в гене ACTN3. Таким образом, потребовалось проанализировать нуклеотидную последовательность гена ACTN3, которая была найдена через Интернет в компьютерном банке данных NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). При этом несколько неожиданным оказалось то, что при сопоставлении этой последовательности с соответствующей последовательностью иРНК а-актинина-3 (М86407) с целью определения границ экзонов SNP 1747С-Л был найден в экзоне 15, а не в экзоне 16, как указывалось в исходной публикации (результат этого анализа приведен в приложении 2). Соответственно, далее с помощью компьютерной программы «Oligo» поиск потенциальных праймеров провели в полной последовательности экзона 15 совместно с протяженными фланкирующими последовательностями. По результатам этого поиска отобрали несколько участков, потенциально пригодных для «посадки» потенциальных праймеров. Их структуры представлены в таблице 8.
Синтезированные соответствующие олигонуклеотиды были опробованы в качестве праймеров для простой полимеразной реакции во всех четырех возможных комбинациях. Наилучший результат (отсутствие неспецифичных продуктов и высокий выход) получился для пары I и IV, которая и использовалась в дальнейшей работе (Рис.22).
Важным доводом в пользу выбора праймеров I и IV для разрабатываемой методики исследования SNP 1747С- Т стали также результаты предварительного анализа их мест «посадки» на ген ACTN3. Как видно из Рис. 23, ампликон, который при использовании данной пары праймеров должен стать продуктом ПЦР, будет содержать не один, а два сайта рестрикции для Ddel. Таким образом, благодаря присутствию второго (мономорфного сайта) каждый получаемый ампликон при обработке рестриктазой Ddel должен подвергнуться рестрикции (что ведет к повышению электрофоретической подвижности относительно контроля) и это автоматически становиться своеобразным внутренним контролем на качество рестрикции в каждой анализируемой пробе.
Из приведенной структуры ампликона следует, что ожидаемая длина первичного продукта ПЦР составляет 269 пар нуклеотидов, а при успешном проведении рестрикции Ddel от 3 - конца всегда будет отщепляться фрагмент длиной 50 пар нуклеотидов. Проведенные эксперименты подтвердили сделанные расчеты.
Как видно из представленной электрофореграммы (Рис. 24)., все обработанные эндонуклеазой Ddel ампликоны подверглись рестрикции, что выразилось в появлении характерных ДНК-фрагментов с увеличенными электрофоретическими подвижностями по сравнению с контрольной пробой (дорожка 12). При этом пробы с генотипом RR (дорожки 2, 3, 10, 11) содержали по одному относительно крупному ДНК-фрагменту с очень быстро мигрирующей ДНК-фракцией (которая, возможно, представляет собой продукт рестрикции по мономорфному сайту, поскольку она присутствовала и во всех других рестриктированных пробах). Соответственно, XX гомозиготность проявлялась в виде двух фрагментов и быстро мигрирующей ДНК-фракции (дорожки - 1 и 13), а гетерозиготность - в виде трех фрагментов и быстро мигрирующей ДНК -фракции (дорожки - 4, 5, 6, 7). Таким образом, удалось разработать модификацию рестрикционного анализа SNP 1747С- Т, позволяющую четко дифференцировать различные генотипы, и вполне пригодную для дальнейших исследований.
Полученные результаты о встречаемости аллелей SNP 1747С-Л" гена ACTN3 и распределении генотипов в изученной выборке этнических русских оказались достаточно близкими к соответствующим данным для европеоидов, например, Ахметов И.И., с соавт. (2006) [2] в своей контрольной выборке встречаемости генотипов RR, RX и XX оценили как 36,2%, 49,7% и 14,1%. Более того, Yang N. et al. (2003) [247] при исследовании выборки жителей Австралии, которые являлись здоровыми белыми европеоидами, профессионально не занимающимися спортом, определили встречаемости генотипов RR, RX и XX практически теми же величинами, которые были получены для нашей выборки, - 30%, 52% и 18%, соответственно. [247]. Своей статье авторы отметили, что в других популяциях распределение генотипов может быть существенно иным, в частности, встречаемость генотипа XX составляет менее 1% у африканской популяции Банту и до 25% в азиатских популяциях. В базе данных SNP s «Applied Biosystems» для европеоидов приведены частоты аллеля X - 0,43 (по AGI) и 0,36 (по АВ) тоже близкие к нашим данным - 0,415.
Таким образом, близкое сходство полученных данных о распределении генотипов SNP 1747С- Т гена ACTN3 и частот аллелей в изученной выборке этнических русских с литературными материалами для европеоидов позволило перейти к соответствующим обследованиям групп профессиональных спортсменов.
