Значение активности иммунорегуляторных Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток в противоопухолевом иммунном ответе у больных хроническим лимфолейкозом Акинфиева, Ольга Викторовна

Введение к работе

Актуальность проблемы. Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) является наиболее распространенным видом лейкоза среди всех неопластических заболеваний кроветворной и лимфатической ткани (Лебедев В.Н., 1972). В настоящее время морфологическое строение и клинические проявления ХЛЛ описаны достаточно подробно и детально, однако патофизиологические характеристики этой формы лейкоза окончательно не уточнены и являются предметом многих исследований (Akbari О. et al., 2003). При ХЛЛ иммунологическая недостаточность обусловлена опухолевым поражением лимфоидной ткани, а также воздействием химиотерапии на гемопоэз, в результате чего происходит угнетение клеточного и гуморального звена (Волкова М.А., 2001). Показано, что при ХЛЛ происходит изменение физиологической активности важнейших эффекторных клеток как системы естественной резистентности организма - естественных киллерных клеток (NK-клеток), нейтрофильных гранулоцитов, моноцитов, макрофагов, так и системы адаптивного иммунитета - CD3⁺CD8⁺ цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ), функционирующих в режиме иммунологического надзора над опухолевым процессом (Тотолян А.А., 2000). В последние годы все больше внимания исследователей уделяется изучению минорных субпопуляций иммунорегуляторных Т-лимфоцитов - CD3⁺/CD16/56⁺ NKT-клеток (natural killer T-cells) и CD3⁺CD4⁺CD25^h,sh+ естественных регуляторных Т-лимфоцитов (naturally occurring regulatory T-cells, Т_ге8-клеток), - играющих, несмотря на малочисленность, ключевую роль в регуляции противоопухолевого иммунного ответа (Skold М. et al., 2003). Установлено, что NKT-клетки стимулируют реакции противоопухолевого иммунитета, тогда как Т_ге8-клетки, напротив, подавляют активность эффекторных Т-лимфоцитов и способствуют опухолевому росту (Chatila Т.А., 2005). В последние годы была доказана эффективность клеточной терапии, основанной на активации NKT-клеток и ингибировании T_reg-клеток в организме пациентов с солидными злокачественными

новообразованиями (Ishikawa Е. et al., 2005). Несмотря на возрастающий интерес исследователей к особенностям функциональной активности NKT-клеток и T_reg-лимфоцитов и их участию в противоопухолевом иммунном ответе, на данный момент количество и динамика этих минорных субпопуляций Т-клеток в организме пациентов с онкогематологическими заболеваниями практически не изучены. Учитывая вышеизложенное, изучение взаимосвязи уровня NKT-клеток и Т^-лимфоцитов с различными показателями клеточного и гуморального звена иммунитета, а также исследование регуляции этими клетками иммунного ответа при ХЛЛ являются актуальными в настоящее время.

Целью настоящего исследования явилось установление роли иммунорегуляторных Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток в патогенезе ХЛЛ, и значимости их определения для прогнозирования течения заболевания и оценки эффективности терапии.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить содержание NK-, NKT-клеток и Т_гев-лимфоцитов в
периферической крови и костном мозге пациентов с симптоматической и
асимптоматической формами впервые выявленного ХЛЛ, с рецидивом
заболевания и достигших ремиссии.

1. Изучить субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови и костного мозга больных и оценить активность гуморального звена иммунитета.

2. Исследовать влияние содержания иммунорегуляторных Т-лимфоцитов на функциональную активность NK-клеток, нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов периферической крови больных.

3. Исследовать апоптотическую активность клеток опухолевого клона и установить ее взаимосвязь с уровнем иммунорегуляторных Т-клеток для прогнозирования течения заболевания и оценки эффективности терапии.

Научная новизна исследования. Впервые проведен анализ уровня иммунорегуляторных Т-лимфоцитов в периферической крови и костном мозге у больных ХЛЛ в ходе опухолевой прогрессии и в зависимости от варианта

течения заболевания, позволивший доказать определяющую роль NKT-клеток в активации противоопухолевого иммунного ответа у больных ХЛЛ и влияние T_reg-клеток на супрессию противоопухолевого иммунитета при данном заболевании.

Установлено влияние иммунорегуляторных Т-лимфоцитов на функциональную активность важнейших факторов противоопухолевого иммунного ответа - NK-клеток, нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов - на разных этапах опухолевой прогрессии и при различных формах течения ХЛЛ.

Впервые полученные новые сведения об изменении продукции активных форм кислорода (АФК) нейтрофилами в динамике опухолевого процесса у пациентов с ХЛЛ свидетельствуют о модифицирующем воздействии опухолевых клеток на периферические иммунные клетки, приводящем к смене противоопухолевой активности нейтрофилов на проопухолевую и избыточной продукции нейтрофилами АФК, обладающих канцерогенным действием.

Показана прямая зависимость спонтанной апоптотической активности опухолевого клона В-лимфоцитов больных ХЛЛ от содержания NK- и NKT-клеток и от активности NK-клеток в периферической крови больных.

На основе всестороннего анализа полученных результатов исследований установлено значение уровня NK- и NKT-клеток как прогностического фактора течения заболевания.

Практическая значимость. Предложен новый прогностический критерий для определения характера клинического течения ХЛЛ. Доказана значимость определения содержания иммунорегуляторных Т-лимфоцитов в периферической крови больных ХЛЛ для прогнозирования течения заболевания.

Показана зависимость глубины дисфункции основных звеньев иммунитета от фазы ХЛЛ, а также от варианта течения заболевания, что имеет значение для определения терапевтической тактики у больных ХЛЛ на ранних стадиях заболевания.

Внедрены методы исследования функциональной активности NK-клеток, нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов периферической крови с

использованием двух- и трехпараметрической проточной цитофлуориметрии. Данные методы позволяют проводить высокоинформативную оценку клеточного звена иммунной системы.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Уровень важнейших активаторов противоопухолевого иммунного ответа -NK- и NKT-клеток - резко снижен у больных с впервые выявленным ХЛЛ и с рецидивом заболевания, тогда как при достижении ремиссии содержание этих клеток значительно повышается. У пациентов с асимптоматической формой впервые выявленного заболевания содержание NKT-клеток в периферической крови значительно выше, а Т^-лимфоцитов существенно ниже, чем у больных с симптоматической формой ХЛЛ как в периферической крови, так и в костном мозге. Наиболее высокое соотношение NKT:T_reg установлено у больных в ремиссии и с асимптоматической формой ХЛЛ, а наиболее низкое - в рецидиве заболевания, что свидетельствует о значимости соотношения данных клеток для поддержания активного состояния противоопухолевого иммунитета.

2. У больных с пониженным уровнем NK- и NKT-клеток выявлено угнетение клеточного и гуморального звена иммунного ответа, тогда как у пациентов с повышенным содержанием этих клеток показано восстановление функциональной активности факторов противоопухолевого иммунитета.

3. Эффективность индуцированного специфической терапией апоптоза опухолевого клона зависит от уровня NK- и NKT-клеток и от активности NK-клеток в периферической крови больных ХЛЛ: низкая спонтанная апоптотическая активность сочетается с более высоким уровнем NK- и NKT-клеток и более высокой функциональной активностью NK-клеток, что является прогностическим фактором положительного ответа на терапию.

4. Установленный дисбаланс содержания Т-хелперов и ЦТЛ у пациентов в ремиссии, заключающийся в значительном увеличении уровня CD3⁺/CD8⁺ Т-клеток и снижении количества CD3⁺/CD4⁺ Т-лимфоцитов, свидетельствует

об активации противоопухолевого иммунного ответа и превалированию

процесса апоптоза трансформированных клеток над пролиферацией.

Апробация и внедрение результатов исследования. Основные положения диссертационной работы представлены на Всероссийской научно-практической конференции «Инфекционные осложнения при иммунодепрессиях» (2010г., СПб); на Всероссийской научной конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (2010г., СПб); на 4-м Международном Симпозиуме по трансплантации гемопоэтических стволовых клеток памяти P.M. Горбачевой (2010г., СПб); на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Современные проблемы гематологии и трансфузиологии» (2011г., СПб).

В работу лаборатории иммуногематологии РосНИИГТ внедрен способ оценки функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов с помощью метода определения фагоцитоза частиц латекса, меченных флуорохромом FITC, и метод исследования цитотоксической активности NK-клеток периферической крови с использованием флуоресцентного красителя CFSE с помощью проточной цитометрии.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, из них 4 - в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 167 страницах машинописного текста и состоит из введения, 6 глав собственных исследований, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, который включает 304 источника. Диссертация иллюстрирована 31 рисунком и 22 таблицами.

Похожие диссертации на Значение активности иммунорегуляторных Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток в противоопухолевом иммунном ответе у больных хроническим лимфолейкозом

Клиническое значение иммунологического фенотипа и пролиферативной активности опухолевых лимфоцитов при множественной миеломеНазарова, Ирина Николаевна

Значение апоптотической активности опухолевых клеток костного мозга у больных множественной миеломой для прогноза течения и оценки эффективности терапииЧубукина Жанна Викторовна

Функциональные особенности антигенпрезентирующих клеток и активированных лимфоцитов у больных апластической анемиейАрчуадзе Шорена Зурабовна

Исследование экспрессии гранзима В в CD4+ лимфоцитах и Т-регуляторных клетках у пациентов после трансплантации аллогенного костного мозгаДроков Михаил Юрьевич

Эффективность инфузий донорских лимфоцитов для профилактики и лечения рецидивов лейкозов после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клетокСлесарчук, Ольга Александровна

Восстановление лимфоцитов периферической крови у пациентов с гематологическими заболеваниями после аллогенной неродственной трансплантации гемопоэтических стволовых клетокВавилов Владимир Николаевич

Стабильность лизосомных мембран фагоцитирующих клеток: функциональная роль в иммунном ответе, иммуноаллергодиагностическое значение при некоторых видах патологииШаронов, Анатолий Степанович

Клиническое значение активности митохондриальных ферментов лимфоцитов при воспалительных заболеваниях кишечника у детей.Климова, Светлана Вячеславовна

Клинико-патогенетическое значение исследования активности ксантиноксидазы, ксантиндегидрогеназы, 5''-нуклеотидазы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных системной красной волчанкойХафиз Эйса Сибхан Азраг

Клинико-диагностическое значение исследования активности гуаназы, гуанозиндезаминазы, гуанозинфосфорилазы, пуриннуклеозидфосфорилазы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных остеоартроГригорьянц Сергей Робертович