Введение к работе
Актуальность цроблемы. Разносторонние подходы к изучении мо-Еонуклеарных фагоцитов как по методическим приемам, так а по уровню исследования дают зозмояность'уточнить известные функции и изучить их механизмы, раскрыть новые свойства этих клєїїок, обладающих широким спектром функциональных возможностей и играющих уникальную роль б разнообразных формах проявления защиты организма. В настоящее время не вызывает сомнения особое значение ыононуклеариых фагоцитов в процессинге антигенов, кооперативном взаимодействии с Т- и 3-лимфоцитами в процессе реализации антигенной информации, в создании дополнительного сигнала в виде интерлейкина-1 для стимуляции лимфоцитов в неспецифической резистентности макрофагов /Мечников Й.И.,1954; Петров Р.В., 1969; Петров Р.В., Хаитов P.M., Аттаулахаяов Р.И.,1933; Кульберг А.Л., 1985: Петров Р.В. .с соавт., 1987/.
Ваануга роль в реализации ишунокомпетентных свойств мононукле-арных фагоцитов играют их лизосомы и лизосомкые ферменты, от активности которых зависят многие функциональные проявления этих клеток, в том числе результат внутриклеточного процессинга антигенов /Учитель К.Я., 1973; Фрейдлін И.С., 1984; Медуницын Н.В., 1937/. При этом проявление актквностл лизесомных фермзнтов определено строго во-времени и пространстве, что связано с компартменталазадией лизссом п определяется функциональным состоянием лизосошшх мембран /Ііокроз-ский.А.А., Тутельян В.А., 1976/, в частности, таких их функций, как пгоницаеиость и стабильность.
Проведенные глубокие биохимические исследования роли стабильности леэосокных мембран в функционировании лизосом й в целом клеток показали возможность регуляции этой функции лизосом гормонами, Kef'-^» медиаторами опосредовано через циклические нуклеотиды /Коровин .'.-, 1982; Панин Л.Е., Маянская R.H., 1987;Isnnrro L. , 1974; WeUn 4,.
- I -
1934/, зависимость процесса лабилнзацни лязосомных мембран от акїизации лизосомных фосфодипаз /De Wolf к.- е. а, , 1977/,
Стиечено, что лабилизация лдзосошшх мембран фагоцитирующих клеток является необходимой в процессе слияния первичных ЛИЗОСОИ с фагосомами / Boiognani ь. е. а. ,Х982 / и,в связи с этим,важна для проявления фагоцитарной активности клеток. Вероятно результата иммунофизиологичеокЕХ исследований, свидетельствующие о возможности регулирования силы иммунного ответа иа начальных этапах иммуногенеза на уровне макрофага, посредством веществ, в том числе гормонов, Г-їеюших точку нрилоаения к циклическим нуклеотЕдам /Денисенко Я.П. с соавг., 1979; Ксрнева JS.A., 1979, 1982; Лазарева д.Н. с соавт., 19в5/, другие функциональные проявления фагоцитирующее клеток могут быть так- э связаны с изменением стабильнсс-ти лизосомных ыембран фагоцитирующих клеток.
Однаїсо, целенаправленного изучения этого вопроса до настоя
щего времени не проводилось. Не известны закономерности изменения
стабильности лизосомных мембран фагоцитирую .их клеток при фагоци
тозе, в динамике таїунного ответа, влияние антигенов, поглощенных
фагоцитами, на стабильность лизосомных мембран последках, влияние
окрунаодих макрофаги клеток, в первую очередь лимфоцитов, на со-
стояние их лизосомных мембран, зависимость силы иммунного ответа
с? изменения стабильности лигосоагаыз мембран мононуклеараых фаго
цитов, перерабатывающих антигены, особенности изменения стабиль
ности лизосомных кэмбран и связанные с ними ні.ушваяя фун/евдй
фагоцитирующих клеток при заболеваниях, имеете с тем, вакне -ь
исследования поставленных вопросов очезвдна как із теоретическом,
так и в практическом отнесении. \ ч
Usjf, ксследовлгия. Экспериментально выявить закономерности тішення стабильности лязосоюш ьзибран фягоцптарущах клеток ь.процесс»? их функционального п-тязлеккя, определить на ьтоіі
основе возможность целенаправленной регуляции функций фагоцитирующих клеток, разработки вопросов Еммуноаллергодиагноотикн, скрининга мембраяотрошшх и радиопротектавных препаратов. Задачи исследования.
-
Выявить возможность изучения лизосомомймбранотропного действия различных факторов - веществ, антигенов, физических воздействий, первичного отбора радиопротекторов на модели оценки стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток.
-
Определить характер изменения стабильности лизосожшх мембран фагоцитирующих клеток в зависишоти от фагоцитарного процесса.
-
Изучить степень зависимости состояния стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток от присутствия других клеток, в частности, лн.фоцитоз, составляющих микроокругений.
-
Провести изучение зависимости стабильности лизосомных мембран фагоцитирущих клеток от процесса активации фагсцитирур~ щпх клеток, перераспределения клеток при введении антигенов в какроорганизм.
о. Оценить стабильность лизосомных иембран иононуклеарных фагоцитов в процессе иммунной перестройки какроорганизш ин випо в эксперименте с учетов влияния антигена на стабильность лизосомных мембран мононуклеарных фагоцитов, дифференциально проанализировать роль ранних и поздних изменений стабильности лизооомных иеибран фагоцитирующих клеток и их связь о силой иммунного ответа.
С. Экспериментально показать возможность модулировать функ-цв-нальнув активность мононуклеарных фагоцитов и изменять силу иммунного ответа путем коррекции стабильности лизосомных мембран этих клеток.
7. Показать клиническую значимость оценки изменения стаохл» пости лизосошшх мембран моноцитов крова при некоторых заболеш> птях.
В. На оснозе полученного экспериментального материала разработать гипотезу о ролл и механизме изменения состсянчя стабильности лизосомлюс мембран Лагоцптлрутаих клеток ъ функциональном проявлении последних.
Научная новизна, Зизрачз проведено всестороннее изучение ролл стабильности лизоосмных мембран .фагоцитирующих клеток, показавшее, что стабильность лизосомныу мембран этих клеток динамичные процесс, отражающий зоьокугаость действия разнонаправленных факторов: фагоцитарного процесса, поглощенных антигенов, микроокруже-пг-я, активации СЗ компонента ксмплзмента. Обнаружено стабилизирующее и лабшшзирующео в отношении лизосомкых мембран фагоцитпрущих клеток действие фагоцитируемых антигенов.
Показана взаимосвязь изменений показателя стабильности лизо-сомных мембран /ИОЛЩ/ фагоцитирупдих клеток, дифференцированных на рагаше и аоздігие изменения, с динамикой нарастания антител в эксперименте при иммунизации крыс и у больных гриппом, зависящая от стабилизирующих- и лабилкзирущих cbokcte антигенов. Виявлена более тесная связь ранних изменений !!Ш фагоцитирующих клетог: ври введении антпгеноз, определяемых активацией фагоцитирующих клеток, с уровней антптелообразова-ия. Отмечено, что суаествечным признаком поздних изменений 1КЖ фагошітируюлих клеток в процессе жлупиза-ции является проявление специфической лабилизацни лпзесскшх мембран втпх kjbtck ари повторной встрече с антигеном. Выявлена возможность изменять багош'.тари^ю активность и с« лу крупного ствета путем коррекции стабильность' лпзосомішх кембран.
Усовершенствован методический подход г.ммун юптчесгс'х и вирусологических исследований: раьо&ботан новий ал-ергологпчєскпГі :.«?-тод, основанный на оценке ПСИ культивированных со опзцз:фпчеста: аллергеном и без аллергена фагоцитирующих клеток / Удостоверенье на отраслевое рацпредложение !' 0-273S от ИЗ.II.85/, становлена
его диагностическая значимость дни туберкулезе, крабовой аллергии, подтвержденная в экспериментах на крысах. Создан способ выделения /Авторское свидетельство на изобрете-иле .'а 1341773 от 1.СЗ.СІ7/ г получен препарат аллергена из крабов, нополизоваиндн б спецдричес-кой диагностике крабовой аллергии в методе oneиди ЛИСТ.', и других общеприняты:: методах. Утверддез кал дзо^ретенде "Слсооб получения номилекоа 2АС 1,4,2 для количественного определения глуддцпонал;н:л активности СЗ ураксти коїділемента" /Авторсное свидетельство ни изобретение ." 1077277 от , .Чьі.т.-. '-.'З/, лснолъзсванттг?. для кзучекия рели 03 компонента комплемента з изменении стабильности лнзосомндх мембран ірагоцгтлрусітах клеток у хслъннн с изученной патологией. Впервые для определения вирусоз нопользсаана ИД способность лабнлдзировать лдзосомнпе кемйран'', ;-.гэ гск, что задпдедо авторским свидетельством н« изобретение .''; ІІЙ23І ov 15.І2.е4,Бплд. .V -.:>.
Теоретическая значимость, з результате проделанной работд била выявлена возможность дп!>>ргнцнтевятъ антигена до способности лабилизировать пли стабилизировать лизосемнне мембрани фаго-д-Г-я-руетда клзто.ч при их эндоцптозг и внутриклеточном процессангз.чгс молно расценивать как новое свойство антигенов. Разработан .мегоди-.ческин подход для оценки отого езо-'отва антигенов.
Показана принідігиадінал зозмо-тдооть регулировать уровень э.н-
тнтелообразеванпя путем целенаправленно? коррекд—" стге'йдьнэо-гн
лнаосомн"х мембран лггоцитирул'г.и д-вток в раннзд дзрдод инду-
ктивно* iJasH иммуногегеза о уютом лнзойсмомембраяотрошЕПс свойств слягд"знов.
Шгяв sm ста<5дднзчруіт:ая а отнесении rsocxa-raz імайрак -гдптнру'тлд клз'.:ок аг.тизлесть лдуосчгюв, особенно дх Ь-догг;.ч-ї-7Ндтт, и рассчитана степень этого влгшян.0 через коэтУ^язкят стазедтаедд.:,.
he. основании ."уогед".глтнд ьг.саэрглектпльких дссдедсзггді! sj-
сказана гипотеза об изменении количества "якорей" для лкэосомкых фэрмезтов при активации фагоцитирукцих клеток, что определяет стабилизацию ели лабилЕзацшо ех лкзосомных мембран.
Цоак-гичеекая значимость. Разработанный способ определения показателя стаби.чьности лизосомчых мембран фагоиггпоуоткх клеток, ут-вердденный как отраслевое рацпредложение, был положен в основу утвержденных Ъ.04.Н9г. *В СССР методических рекомендаций "Оценка изменений стабильности лизоссмнюс мембран мояснуклааркых Фагоцитов как метод пмцуноаллергодкаиіосі'ики и скрининга иембранотропных и радиодротективных препаратов", Ьта методические рекомендации могут быть полезны при изучении стабилизирующей к лабялязЕрукцей лизосо-MEse мембраны активности различных '5акторсв /физических, химических, бгологаческпх/, улучшают диагностику инфекционных /грипп, ОРВИ, туберкулез/ и аллергических /крабовая аллергия/ заболеваний.
Методические материала диссертация вокли в написанную б соавторстве с Н.С.МотавгошоЯ и Б.".Ковалевы:,: монографию "Микроме годы в имнунологки" /Владивосток, издательство Дальневосточного Университета, I9S7/.
Полученный широко апробированный препарат аллергена из крабов позволил разработать специфическую диагностику крабово" аллергии с использованием выявленных его лизосомомембранотропннх.свойств.
Результати исследования воили во внедренные-на региональном уровне созданные в 1Э87 г. "Рекомендации по профилактике, лечению, диагностике крабовой аллергии v окоЭтачковых ааболвваниЗ у риба -sob", использование которых создает э:соном>.чес:суя объективность 107244,2 рублей в год при применении на 4 плавзаводах Управте кия производственный флотилкаг/. "Дальиорепродукт".
Материалы по соверпзнстьозагаы мзтодтческогс под-ода к опенке СЗ хоіііокента комплемента окспэкирот»алпзь ж ЗГЛ- ^ССГ в Т">8Сг.
и используется в практическом здравоохранении.
В практику научных исследований п практического здравоохранения внедреин созданные з процессе выполнения диссертация 3 рац. предложения отраслевого и 4 местного значения.
Совокупность представленных материалов предполагает перспективность исследования нового направления на основе разработанной методологии к оценке функционирования фагоцитирующих клеток во взаимосвязи с состоянием стабильности их лпзосомных мембран в плане создания подхода к регуляции иммунного и патологического процесса з организме через лпзосомомембранотропнке средства, скрининга безвредных для организма однонаправлэнно действующих лпзосо-момеибранотрспичх факторов, дальнейшего совершенствования нмыуко-аллзргоднагностики различных заболеваний.
Апьобачия натериалов диссертации. Ьлтериалы диссертации били представлены па: Всесоюзно:.; сс-дозиуке, посвященном АОО-лэтип создания К.і:. Мечниковым фагоцитарной теории иммунитета "Фагоцитоз и иммунитет" / Москва, 1983/; ІУ Всесоюзной конференции "Мировой Океан" /Владивосток, 1983/; Юбилейной научной колієренции Владивостокского Государственного медицинского института /Владивосток, 1984/; *П, їШ, ІІ Зональных научных конференциях "Фактори клэточ-. ного и гуморального иммунитета при различите физиологических и патологических состояниях" /Челябинск, 1584, 1986, 1?88/; научно-технической конференции "Совершенствование средств и кэтедоз ох-раїш здоровья работников водного транспорта" /Ленинград, J.985/; комиссии по морской медицине Бассейновой секции "Тихий Океан" ^ііО АН СССР /Владивосток, 1385/; заседании Приморского отделения Всесопзного общества тиу пологов /Владивосток, 1Э86, 1988/; Зо-налъж ?. конфедашг.к "Актуальные проблемы иммунологии: иммутюдефи-цитн и Ем^гунокоррекцил" /Владивосток, W87/; Всесоюзной консервации "іієтодс.лсгиа, организация и итоги ».яссовнх Иімунологическісі
обследований" /Ангарск, 1987/; Всесоюзной конференции "Система кощлемента. Ь1ехакпз«ы активации и регуляции. Значение в биологии г ыедгцннг. /КгроЕ, 1987/; Зональной научной конференции "Медике— социальные аспекты проблемы Человек-Океая" /Владивосток, 1988/; конференции "Экспериментальная и клиническая иммунология на Востоке страны" /Красноярск, 1986/; сешии Ш /молекулярная иммунология/ Ученого Совета Института Иммунологии i.!3 СССР /15 октября 1937 г./; ЛІ а^здународноц симпозиуме по пищевой аллергии /Авигнон, Франция, 1933/.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 работ / J монография, в журналах и депонировано в ВИНИТИ - ,7 , описания изобретений - 1 , проспект ЗДКХ СССР - I, методические рекомендации - 2, в сборниках - ц.
Объем г структура диссертации. І.їатериал диссертации изложен ка J72 страницах каяинопнеи, из них текст занимает 233 страниц, диссертация состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов, списка литература, включатхзего 333 работ / из них 143 отечественных и 190 иностранных/. иллюстративный материал представлен Б8 рисунками и 16 таблицами.
Районные'положения. Еыносиг/ые на зациту:
-
Состояние стабильности лкайсс-лих мембран фагоцитирующих r-лоток определяется влияниеv микроокруьеная, гормонов и нейромс-диаторов, СЗ компонента комплемента, изменяется при реализации фагоцитарной активности и при активации этих клеток.
-
Антигени дифференцируются по способности стабилизировать или лаоализЕронагь лизослгные мембраны фагоцитирующих клеток, сто свойство антягенсв реализуется при пы-гунизацин в ранний период индуктивной фазы юкуногєнеза г. могет бить использовано для целе-яапр&влзкЕог регуляции антвтелообрааоваккя.
3. Исследование ПСЛМ фагоцитирующих клеток является осиоеной нового подхода в иммуноаллергодяагностике инфекционных /гршш, ОРВИ, туберкулез/ я аллергических заболеваний /крабовая аллергия/ и при скрининге мембранотпсиных и радиопротективных препаратов.
