Содержание к диссертации
ВВЕДЕНИЕ 5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 11
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 31
ГЛАВА 3. ОСОБЕННОСТИ ЭКСПРЕССИИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ И
СИГНАЛЬНЫХ МОЛЕКУЛ ФАГОЦИТАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И
ЭНДОМЕТРИЯ У ЖЕНЩИН С МИОМОЙ МАТКИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ
ТЕМПА И ТИПА РОСТА ОПУХОЛИ 38
ЗЛ. Особенности экспрессии функциональных и сигнальных молекул
фагоцитами периферической крови у женщин с миомой матки в зависимости
от темпа и типа роста опухоли 38
3.2. Особенности экспрессии функциональных и сигнальных молекул макрофагами эндометрия женщин с миомой матки в зависимости от темпа и
типа роста опухоли 45
ГЛАВА 4. ОСОБЕННОСТИ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ ФАГОЦИТОВ У
ЖЕНЩИН С МИОМОЙ МАТКИ НА СИСТЕМНОМ И ЛОКАЛЬНОМ
УРОВНЕ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ТЕМПА И ТИПА ЕЕ РОСТА 49
Особенности внутриклеточной продукции цитокинов моноцитами и нейтрофилами периферической крови женщин с миомой матки в зависимости от темпа и типа роста опухоли 49
Особенности внутриклеточной продукции цитокинов макрофагами эндометрия женщин с миомой матки в зависимости от темпа и типа роста
опухоли 56
ГЛАВА 5. ОСОБЕННОСТИ СИНТЕЗА И ПРОДУКЦИИ
ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ В ЭНДОМЕТРИИ И
ОПУХОЛЕВЫХ УЗЛАХ У ЖЕНЩИН С МИОМОЙ МАТКИ 61
5.1. Особенности содержания IL-ip, IL-8 и МСР-1 в экстрактах эндометрия у женщин с миомой матки в зависимости от темпа и типа
опухолевого роста 61
5.2. Особенности содержания IL-lp\ IL-8 и МСР-1 в экстрактах
опухолевых узлов у женщин с миомой матки в зависимости от размера и типа
роста опухолевых узлов 64
Характеристика экспрессии мРНК IL-8 в эндометриальнои ткани у женщин с миомой матки в зависимости от темпа и типа роста опухоли 67
Особенности экспрессии мРНК IL-8 в ткани миоматозных узлов в
зависимости от их размера и типа роста 70
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 73
ВЫВОДЫ '. 88
ОТ АКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 90
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 91
Введение к работе
Актуальность темы исследования
Миома матки — доброкачественная гормонально-зависимая опухоль, развивающаяся в миометрии в результате гипертрофии и пролиферации элементов мышечной и соединительной ткани [5, 32, 34]. Миома матки традиционно считается наиболее распространенным гинекологическим заболеванием, частота встречаемости которого среди женщин старше 35 лет колеблется по данным разных авторов от 25% до 50% [32, 37, 111, 70, 95]. Миома матки оказывает отрицательное влияние на менструальную и репродуктивную функции, общее состояние здоровья женщины [70, 95].
Патогенез миомы матки до конца не установлен. Исследованиями последних лет показано, что развитие миомы матки ассоциировано со значительными иммунными нарушениями [13, 14, 20, 29, 82]. Установлено, что развитие миомы матки и ее рост сопровождаются выраженным повышением уровня ряда провоспалительных цитокинов и факторов роста в ткани самой миомы [67, 111, 124]. Фагоциты являются основными продуцентами провоспалительных цитокинов [11]. Однако нет данных о том, в какой мере меняется продукция цитокинов фагоцитами при миоме матки в зависимости от темпа и типа роста опухоли.
Известно, что фагоцитарные клетки играют важную роль в поддержании клеточного гомеостаза и противоопухолевой защите, участвуя в регуляции процессов ангиогенеза, регенерации, дифференцировки и клеточной пролиферации [77, 119, 124]. Имеющиеся работы свидетельствуют о значительных нарушениях экспрессии различного рода рецепторов и цитокинового профиля фагоцитов при опухолевом росте [51, 94, 98, 109, 119]. Получены данные, свидетельствующие о вовлечении toll-like рецепторов (TLR) в регуляцию фагоцитарными клетками опухолевого роста [45, 122]. Так, по литературным данным экспрессия TLR3 и TLR4 связана с ростом аденокарциномы [45]. Известно, что этот класс рецепторов является мощным индуктором адаптивного иммунитета, проводит сигнал в клетку, запуская
цитокиновый каскад при взаимодействии со своими специфическими лигандами [12, 36, 50]. Однако отсутствуют данные о взаимосвязи между характером экспрессии TLRs, продукции цитокинов фагоцитарными клетками и ростом миомы матки.
Таким образом, определение роли фагоцитов в механизмах развития доброкачественного опухолевого роста у женщин с миомой матки является актуальной задачей современной клинической иммунологии, так как позволит уточнить иммунные механизмы, участвующие в развитии противоопухолевого ответа.
Цель исследования
На основании определения особенностей фенотипа и цитокинового профиля фагоцитов на системном и локальном уровне у женщин с миомой матки стабильно малых размеров и с быстрорастущей миомой матки, уточнить роль клеток фагоцитарного ряда в иммунных механизмах, определяющих темп и тип роста опухоли.
Задачи исследования
Установить закономерности изменения фенотипа клеток фагоцитарного ряда на системном и локальном уровне при миоме матки в зависимости от темпа и морфологического типа роста опухоли.
Определить особенности экспрессии сигнальных молекул TLR-2 и TLR-4 на поверхности клеток фагоцитарного ряда у женщин с миомой матки с различным темпом и типом роста опухоли.
Выявить особенности синтеза и продукции цитокинов (IL-ip, IL-12, INFy, IL-8, IL-10) фагоцитами периферической крови и эндометрия у женщин с миомой матки в зависимости от темпа и типа роста опухоли.
Определить особенности содержания ряда цитокинов и уровень экспрессии генов цитокинов в миоматозных узлах у женщин с быстрорастущей миомой матки в зависимости от типа роста опухоли.
5. На основании выявленных особенностей клеток фагоцитарного ряда женщин с миомой матки разработать иммунологические критерии темпа роста опухоли.
Научная новизна
Установлено, что миома матки вне зависимости от темпа роста опухоли характеризуются повышенным содержанием IL-10+ моноцитов/макрофагов и TLR4+ фагоцитов, как в периферической крови, так и в эндометрии и сниженным уровнем моноцитов, экспрессирующих HLA-DR, CD lib и CD 16 молекулы.
Показано, что быстрый рост миомы матки происходит на фоне снижения уровня CDllb+ макрофагов в эндометрии, увеличении количества фагоцитов крови и эндометрия, продуцирующих внутриклеточно провоспалительные цитокины, и повышенной экспрессии мРНК IL-8 в ткани эндометрия.
Установлено, что нерастущая миома матки характеризуется высоким уровнем CD 16+ и низким - HLA-DR+ макрофагов в эндометрии, а также снижением уровня IL-1J3+ и IL-8+ фагоцитов как на системном, так и на локальном уровне.
Показано, что отличительной чертой «истинного» типа роста миомы матки за счет усиления пролиферации является высокое содержание CD 105+ нейтрофилов в периферической крови, а «ложного» типа роста за счет отека -низкое содержание CD105+ моноцитов, а также высокий уровень эндометриальньтх INF7+ и IL-12+ макрофагов, повышенное содержание IL-8 и МСР-1 в экстрактах эндометрия при усиленной экспрессии мРНК IL-8 в эндометрии.
Установлено, что в миоматозных узлах больших размеров отмечается высокое содержание IL-ip и 1L-8 и усиленная экспрессия мРНК IL-8 по сравнению с неизмененным миометрием; при «истинном» типе роста миомы матки характерно высокое содержание IL-ip, IL-8, МСР-1 в миоматозном узле
и высокий уровень экспрессии мРНК IL-8 в ткани опухоли, а при «ложном» — низкое содержание IL-8 и м-РНК IL-8 в ткани миоматозного узла.
Выявлены закономерности изменения содержания моноцитов, продуцирующих IL-8, в зависимости от темпа роста миомы матки, на основании чего предложен новый прогностический критерий быстрого роста миомы матки.
Практическая значимость
Установлены новые патогенетические механизмы развития миомы матки, определяющие темп и тип ее роста.
Установлены новые иммунологические критерии, позволяющие оценить темп и тип роста миомы матки.
Разработан новый способ прогнозирования быстрого темпа роста опухоли, основанный на определении в периферической венозной крови содержания TL8+ моноцитов (положительное решение о выдаче патента РФ от 15.05.2008 г.).
Реализация результатов работы
Результаты диссертационной работы внедрены в практику гинекологической клиники и консультативно-диагностической поликлиники ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н.Городкова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи».
Апробация работы
Диссертация прошла апробацию на совместной конференции сотрудников ФГУ «Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова Росмедтехнологий» 23 июня 2008 года. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции молодых ученых «Неделя науки - 2006» (Иваново, 2006), на X Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-
Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006), на научно-практической конференции молодых ученых «Неделя науки - 2007» в рамках областного фестиваля «Молодая наука - развитию Ивановской области (Иваново, 2007), на 2-й Российской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты» (Сочи, 2007), в областном конкурсе научных работ среди молодых ученых в номинации «Естественные науки» (Иваново, 2007); на XI Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2007); в научных чтениях, посвященных памяти академика В.И. Кулакова (Москва, 2008), на конференции ФГУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова Росмедтехнологий» (Иваново, 2008), на Объединенном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008).
Основные положения, выносимые на защиту
Развитие доброкачественной опухоли в миометрии ассоциировано с увеличением периферического и эндометриального пула М2 моноцитов/макрофагов при нарушении экспрессии на поверхности фагоцитов функциональных и сигнальных молекул. Быстрый рост миомы матки связан с усилением продукции цитокинов фагоцитами крови и эндометрия, определяющим повышение содержания провоспалительных цитокинов в ткани опухоли. Пролиферативный тип роста миомы матки определяется высоким уровнем периферических нейтрофилов, экспрессирующих эндоглин, и высокой локальной продукцией провоспалительных цитокинов в миоматозных узлах.
Повышение количества IL8+ моноцитов в периферической крови ассоциируется с быстрым ростом миомы матки.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ
Структура и объем диссертации
Материалы диссертации изложены на 105 страницах, состоит из введения, обзора литературы, методов исследования, 3 глав результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 18 рисунками и 22 таблицами. Список литературы включает 130 источников, в том числе 87 публикаций иностранных авторов.
