Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Структурно-функциональная организация стенки тонкой кишки 10
1.2. Анатомо-функциональная характеристика лимфатических узлов 16
1.3. Особенности микроанатомической организации стенки тонкой кишки и лимфатических узлов при экспериментальной гиперхолестеринемии и атеросклерозе 22
1.4.Энтеросорбция и ее использование при нарушениях липидного обмена.31
1.4.1. Общая характеристика и механизм действия энтеросорбентов 31
1.4.2. Сорбент СИАЛ, его структура и свойства 37
1.4.3. Влияние энтеросорбции на лимфатический регион тонкой кишки 38
1.4.4.Использование энтеросорбентов при нарушениях липидного обмена 41
Глава 2. Материалы и методы исследования 45
2.1. Объект исследования 45
2.2. Методы морфофункциональных исследований
2.2.1. Морфологические исследования 46
2.2.2. Биохимические исследования 49
Глава 3. Морфофункциональное исследование стенки тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов, крови и центральной лимфы у кроликов в физиологических условиях и при введении сорбента СИАЛ 51
3.1. Структурная организация стенки тонкой кишки 51
3.2. Структурная организация верхних брыжеечных лимфатических узлов..56
3.3. Структурная организация подвздошных лимфатических узлов 58
3.4. Биохимическая характеристика крови 68
3.5. Биохимическая характеристика центральной лимфы 68
Резюме
Глава 4. Морфофункциональное исследование стенки тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов, крови и центральной лимфы у кроликов при моделировании экспериментальной гипер холестеринемии 70
4.1. Структурная организация стенки тонкой кишки 70
4.2. Структурная организация верхних брыжеечных лимфатических узлов..74
4.3. Структурная организация подвздошных лимфатических узлов 85
4.4. Биохимическая характеристика крови 91
4.5. Биохимическая характеристика центральной лимфы 91
Резюме 93
Глава 5. Морфофункциональное исследование стенки тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов, крови и центральной лимфы у кроликов в условиях коррекции состояния гиперхолесте ринемии энтеросорбентом СИАЛ 100
5.1. Структурная организация стенки тонкой кишки 100
5.2. Структурная организация верхних брыжеечных лимфатических узловІОІ
5.3. Структурная организация подвздошных лимфатических узлов 103
5.4. Биохимическая характеристика крови 104
5.5. Биохимическая характеристика центральной лимфы 106
Резюме 106
Обсуждение результатов 109
Выводы 132
Список литературы 134
Приложения
- Особенности микроанатомической организации стенки тонкой кишки и лимфатических узлов при экспериментальной гиперхолестеринемии и атеросклерозе
- Морфологические исследования
- Структурная организация подвздошных лимфатических узлов
- Структурная организация подвздошных лимфатических узлов
Введение к работе
/ (ftpQG
Актуальность исследования
Гиперхолестеринемия является одним из основных патогенетических факторов в возникновении атеросклеротических поражений артерий разной локализации и приводит к нарушению структурно-клеточного гомеостаза и функции сердечно-сосудистой, выделительной, пищеварительной, эндокринной и других систем организма (Аронов Д.М. и др., 1995; Borgia М.С., Medici Е, 1998; Kurth Т, 2003). Лимфатической системе отводится важная роль в осуществлении тканевого дренажа и детоксикации организма и от ее функциональной активности во многом зависит исход адаптивной реакции на любое патогенное воздействие (Бородин Ю.И., 1989). Структурно-функциональной единицей лимфатической системы является лимфатический регион, который включает в себя интерстици-апьный компонент, сосудистое звено и регионарные лимфатические узлы (Бородин Ю.И., 1997). Хорошо известно, что лишь при сохранности и морфофунк-циональной достаточности лимфатического региона возможна эффективная реабилитация органа в условиях патологии (Бородин Ю.И., 1999). Первыми оказываясь на пути транспорта холестерина из просвета кишечника в кровь и лимфу и далее во все органы и ткани, тонкая кишка и ее лимфатический регион непосредственно участвуют в регуляции поступления, выведении и в синтезе липидов. При экспериментальной экзогенной гиперхолестеринемии отток насыщенной холестерином лимфы из тонкого кишечника происходит в первую очередь в верхние брыжеечные лимфатические узлы, регионарные к месту всасывания холестерина. Изменения их структуры и цитологического состава ведут к нарушению барьерно- фильтрационной и дренажно- детоксикационной функции лимфатических узлов. Вовлеченными в патологический процесс оказываются и отдаленные от места всасывания холестерина лимфатические узлы, вследствие чего происходит изменение их функциональных возможностей (Климов А.Н., 1986; Кузнецов А.В., 1996).
її - л
Снижение концентрации холестерина в крови не только уменьшает вероятность развития атеросклероза, но и задерживает прогрессирование уже имеющихся его проявлений. При изучении возможностей нормализации уровня липидов в организме были апробированы и хорошо себя зарекомендовали сорб-ционные методы, в частности энтеросорбция (Фролькис В.В., 1994; Куликова А.И., Лукичев Б.Г. и др., 1994;РыженковВ.Е , Самойлова Н. А. идр, 1995; Мезенцева Н.Г., Мичурина О.Н., 1997; Гуревич К.Я., Климов А.Н. и др., 1998; Воробьева Е.Н., Иванова Т.В., 2000; Кутина С.Н., Покровский С.Н., 2003; Березовикова И.П., 2004). Прием энтеросорбентов регулирует дренажно-детоксикационную деятельность лимфатической системы, стимулирует отток интерстициальной жидкости и способствует снижению метаболической нагрузки на лимфатические узлы со стороны бассейна лимфосбора (Бородин Ю.И., 1995; Деденко И.К. и др., 1998; Пристяжнюк И.Е., 1998). Применение сорбентов защищает лимфатические узлы от токсического удара по ним, уменьшая всасывание токсических продуктов в лимфатические пути, что сопровождается улучшением функционального состояния органов и систем ррі амиша (Чороыппсщй В.Ю., 1998; Нур-
F ^>ОС НАЦИОНАЛЬНА» * JV
ЗДКЛИеТЕКА
мухамбетова Б.Н., 1998; Бгатова Н.П.. 1999; Ищенко И.Ю., 2003). Вопрос об использовании энтеросорбентов и, в частности, разработанного в ГУ ИКиЭЛ СО РАМН нового сорбента СИАЛ для коррекции морфофункционального состояния лимфатического региона тонкой кишки при экспериментальной экзогенной гиперхолестеринемии нигде не освещался. Отсутствие данных об особенностях структурно-клеточных преобразований в тонкой кишке, ее регионарных и отдаленных подвздошных лимфатических узлах, биохимическом составе центральной лимфы и венозной крови в ответ на введение энтеросорбента СИАЛ как в физиологических условиях, так и после длительной атерогенной диеты явилось основанием для выполнения исследований и обусловливает актуальность данной работы.
Цель исследования:
Выявить особенности морфофункциональной организации различных звеньев лимфатического региона тонкой кишки, подвздошных лимфатических узлов, биохимического состава лимфы и крови кроликов после введения энтеросорбента СИАЛ в условиях физиологической жизнедеятельности и при экспериментальной гиперхолестеринемии.
Задачи исследования:
-
Изучить морфофункциональное состояние стенки тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов, центральной лимфы и венозной крови кроликов при энтеральном введении сорбента СИАЛ в условиях физиологической жизнедеятельности.
-
Исследовать морфофункциональные преобразования в стенке тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлах, центральной лимфе и венозной крови кроликов при экспериментальной гиперхолестеринемии.
-
Выявить особенности структурно-клеточной организации стенки тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов, биохимических параметров центральной лимфы и венозной крови кроликов при энтеральном введении сорбента СИАЛ в условиях экспериментальной гиперхолестеринемии.
Научная новизна
В работе впервые проведено морфофункциональное исследование влияния энтерального введения сорбента СИАЛ на лимфатический регион тонкой кишки, подвздошные лимфатические узлы, лимфу и кровь кроликов в условиях физиологической жизнедеятельности. Показано, что при энетральном использовании сорбента СИАЛ не происходит нарушения структуры и клеточныого состава слизистой оболочки тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов, изменения биохимического состава крови и лимфы интактных кроликов.
Впервые предоставлены количественные данные о структурных и цитологических преобразованиях в стенке тонкой кишки, проведен сравнительный анализ структурно-клеточных изменений брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов при экспериментальной гиперхолестеринемии. Показано, что длительное содержание на атерогенной диете приводит к нарушению лимфотока в стенке тонкой кишки, изменениям цитоархитектоники ее слизистой оболочки. Обнаружено, что в лимфатических узлах интенсивность и характер морфофункцио-нальных преобразований при гиперхолестеринемии зависит от их регионарной
» A
1 .4* # *
локализации и функциональной специализации и во всех случаях затрагивает структурно-функциональные зоны, участвующие в формировании гуморального иммунного ответа.
Впервые изучена структурно-клеточная реакция тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов у кроликов с экспериментальной гиперхо-лестеринемией после введения сорбента СИАЛ. Установлено, что энтеральное применение сорбента СИАЛ способствует улучшению лимфотока и восстановлению цитоархитектоники стенки тонкой кишки. Отмечена более выраженная морфо-функциональная реакция брыжеечных лимфатических узлов, что проявляется увеличением в них доли Т-зависимой зоны, снижением доли транспортных синусных систем и числа клеток, участвующих в гуморальном иммунном ответе в В-зависимой зоне.
Впервые в сравнительном аспекте проанализированы изменения показателей липидного, углеводного, белкового обменов, антиоксидантной защиты в центральной лимфе и венозной крови кроликов с экспериментальной гиперхолесте-ринемией после коррекции сорбентом СИАЛ. Установлено, что сорбент СИАЛ при его введении per os корригирует липидный спектр лимфы и крови, снижает эндогенную интоксикацию.
Теоретическая и практическая значимость работы
Полученные сведения о структурно-функциональных изменениях в стенке тонкой кишки и ее регионарных лимфатических узлах при длительном введении избытка холестерина позволяют оценить адаптационные возможности лимфатического региона тонкой кишки и степень его участия в компенсаторных процессах, направленных на снижение поступления и усиление выведения холестерина из организма.
Полученные данные о различной степени структурных преобразований в регионарных к тонкой кишке и отдаленных лимфатических узлах при экспериментальной гиперхолестеринемии позволяют расширить представление о морфологических основах нарушения процессов лимфодетоксикации в различных звеньях лимфатической системы при данном патологическом состоянии.
Выявленные морфофункциональные изменения в стенке тонкой кишки, ее регионарном лимфатическом аппарате и подвздошных лимфатических узлах после введения сорбента СИАЛ при экспериментальной гиперхолестеринемии позволяют дополнить имеющиеся представления о механизме действиия энте-росорбентов при нарушениях липидного обмена.
Полученные данные о коррекции липидного спектра и снижении показателей эндогенной интоксикации в крови и лимфе после введения сорбента СИАЛ при гиперхолестеринемии свидетельствуют о перспективности дальнейшей его разработки с целью внедрения в практическую медицину в качестве вспомогательного средства для профилактики и лечения нарушений липидного обмена.
Положения, выносимые на защиту
1. Энтеральное введение сорбента СИАЛ в условиях физиологической жизнедеятельности не оказывает повреждающего действия на структурную организацию стенки тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов и не нарушает метаболического равновесия в организме.
2 При экспериментальной гиперхолестеринемии в стенке тонкой кишки происходят структурно-клеточные преобразования, свидетельствующие об изменении функциональной активности, нарушении барьерных свойств и интерстици-ального транспорта. Характер и выраженность структурно-клеточных преобразований в брыжеечных и подвздошных лимфатических узлах зависит от их регионарной локализации и функциональной специализации и свидетельствует об активизации В-звена иммунитета и изменении транспортной функции. Нарушение липидного обмена отражается на липидном спектре как крови, так и лимфы.
3. Энтералыюе введение сорбента СИАЛ при экспериментальной гиперхолестеринемии способствует снижению отека в стенке тонкой кишки, восстановлению цитоархитектоники собственной пластинки слизистой оболочки тонкой кишки и подвздошных лимфатических узлов, ослаблению интенсивности В-зависи-мых, активизации Т-зависимых иммунных реакций и оптимизации транспорта лимфы в брыжеечных лимфатических узлах, уменьшению проявлений дислипи-демии и эндогенной интоксикации.
Апробация результатов исследования
Основные результаты исследования доложены и обсуждены на Научно-практической конференции «Первичная профилактика и медицинская реабилитация больных ишемической болезнью сердца углекислыми мышьяковистыми водами» Владивосток, 1996: Международном симпозиуме «Проблемы лимфологии и эндоэкологии», Новосибирск, 1998; Всероссийской конференции «Сорбцион-ные, электрохимические и гравитационные методы в современной медицине», Москва, 1999; I Всероссийской конференции по проблемам атеросклероза, посвященной 100-летию со дня рождения А Л. Мясникова, Москва, 1999; Международном симпозиуме «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии», Новосибирск, 2000.
Публикации: По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, из них патент на изобретение-1.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 156 страницах машинописного текста, содержит 23 рисунка, 10 таблиц, 9 графиков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований с подглавами, обсуждения, выводов, списка литературы, содержащего 201 отечественных и иностранных источников. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.
Особенности микроанатомической организации стенки тонкой кишки и лимфатических узлов при экспериментальной гиперхолестеринемии и атеросклерозе
Межэпителиальные лимфоциты являются тимусзависимыми лимфоцитами и мигрируют в эпителиальный покров кишки в ответ на действие и навстречу антигенам кишечного содержимого, однако они не мигрируют в просвет кишечника (Boll G., Reimann К., 1991; Kiyono Н, Мс Ghee J.R., 1994). Межэпителиальные лимфоциты составляют 9-20 % от числа. энтероцитов (Douglas А.Р., Weetman А.Р., 1975). В основном в эпителиальном слое тонкой кишки встречаются малые лимфоциты, хотя у основания ворсинок и в области крипт часто можно обнаружить средние лимфоциты и бластные клетки. Показано, что они обладают цитотоксичностью, образуют цитокины и выполняют регуляторную роль (Matsueda К, Yamada G., Tsuji Т, 1991; Fujihashi К. et al., 1993), могут ингибировать пролиферацию и дифференцировку эпи-телиоцитов тонкой кишки мышей в условиях физиологической регенерации при изменении соотношения между Т- и В- популяциями в лимфоидной ткани в пользу Т-клеток (Шмаков А.Н. и др., 1986; Апарович Г.Г., 1989).
У кроликов больше всего лимфоцитов в эпителиальном слое у основания ворсинок (11 на 100 эпителиоцитов), а в эпителии верхушек ворсинок в среднем на 100 эпителиоцитов приходится 9 лимфоцитов (Четвертных В.А., 1981).
Пограничной и барьерной структурой между эпителием и подлежащей соединительной тканью является базальная мембрана. Она укрепляет эпителиальный пласт, через нее осуществляется питание эпителия (Gudewicz P.W. et al., 1994).
Собственная пластинка слизистой оболочки тонкой кишки образована рыхлой волокнистой соединительной тканью и содержит гладкомышечные клетки, лимфоциты, плазматические клетки, макрофаги, фибробласты, тучные клетки, эозинофилы (АминоваГ.Г. и др., 1997). В собственной пластинке слизистой оболочки тонкой кишки кроликов обнаружены также ретикулярные клетки, причем их фагоцитарная активность снижается по мере удаления от эпителиального покрова (Четвертных В.А., 1981). Лимфоциты в основном представлены Т-хелперами и В-лимфоцитами, причем их количество намного меньше, чем в эпителиальном покрове (Мавлян-Ходжаев Р.Ш., 1995; Хмельницкий O.K., 1996). Установлено, что сенсибилизированные антигенами лимфоциты пейеровых бляшек мигрируют в брыжеечные лимфоузлы, а оттуда через грудной проток и кровеносные сосуды - в собственную пластинку слизистой тонкого кишечника (Tomasi Т.В. et al., 1984). Тучные клетки собственной пластинки слизистой оболочки тонкой кишки пролифериру-ют под действием Т-лимфоцитов, паразитов, а также при кишечной гиперчувствительности к различным антигенам. Им отводится особая роль в местной регуляции микроциркуляторного гомеостаза и проницаемости интерсти-ция (Ventura-Juarez J. et al., 1990). Макрофаги собственной пластинки слизистой оболочки тонкой кишки принадлежат к группе тканевых макрофагов, важнейшей функцией которых является участие в защитных реакциях организма. Кроме того, они играют большую роль в процессах транспортировки и утилизации липидов и, в частности, холестерина при экспериментальной гиперхолестеринемии (Серов В.В., Шехтер А.Б., 1981; Правоторов Г.В., Новиков В.Д., 1996).
Барьерно-защитная функция слизистой оболочки тонкой кишки осуществляется благодаря сочетанию трех тесно взаимосвязанных уровней: про-светного, эпителиального и соединительнотканного (Мавлян-Ходжаев Р.Ш., 1995; Хмельницкий O.K., 1996). Просветный уровень представлен секретом бокаловидных клеток и клеток Панета (пепсин, слизь, биологически активные вещества), пристеночной микрофлорой, а также мигрировавшими микро-и макрофагами. Эпителиальный уровень представлен эпителиоцитами, ба-зальной мембраной эпителиальной выстилки, бокаловидными клетками, а также межэпителиальными иммунокомпетентными клетками (Russel M.G., Stockbrugger R.W., 1996). Соединительнотканный уровень включает основное межклеточное вещество, волокна и клетки, синтезирующие компоненты межклеточного вещества, иммунокомпетентные клетки собственной пластики слизистой, а также структурные компоненты стенок микрососудов.
Подслизистая основа кишки представлена рыхлой неоформленной соединительной тканью, мышечная оболочка - двумя слоями гладкомышечных клеток, образующих циркулярный и продольный слой. Пучки мышечных волокон в обоих слоях ориентированы спиралеобразно. Серозная оболочка, являясь висцеральным листком брюшины, имеется на всем протяжении тощей и подвздошной кишки, за исключением места перехода висцеральной брюшины с кишки на брыжейку.
В собственной пластинке слизистой оболочки ворсинки тонкой кишки располагается центральный млечный синус. Он слепо начинается под эпителием и представляет собой лимфатический капилляр, выстланный одним слоем эндотелиальных клеток со слабо выраженной базальной мембраной, которая может отсутствовать вовсе (Шахламов В.А., Цамерян А.П., 1982; Карелина Н.П. и др., 1984). У основания ворсинки он распадается на 2-3 капиллярных лимфатических русла, которые анастомозируют с такими же капиллярами, образуя поверхностную сеть лимфатических капилляров слизистой оболочки. От этой сети отходят капилляры, соединяющиеся с капиллярами глубокой лимфатической сети, расположенной под дном кишечных крипт, над мышечной пластинкой слизистой оболочки. Лимфатические капилляры подслизистой основы соединяются с лимфатическими капиллярами слизистой оболочки и циркулярного слоя мышечной оболочки, а также с лимфатическими сосудами подслизистой основы. Лимфатическое русло мышечной оболочки слагается из капиллярных сетей циркулярного и продольного слоев и межмышечной соединительной ткани, в которой расположено сплетение лимфатических сосудов. Лимфатическое русло серозной оболочки представлено сетью лимфатических капилляров, находящихся на границе этой оболочки с продольным мышечным слоем, и сплетением лимфатических сосудов (Nerlich A.G., Schleicher Е., 1991; Бородин Ю.И., 1995; Пищальников Э.А., 1996). Кровеносное микроциркуляторное русло слизистой оболочки тонкой кишки представлено подэпителиальной сетью капилляров и посткапиллярной венулой. Капиллярам принадлежит главная роль в поддержании трофического обеспечения деятельности клеток, снабжения их пластическими и энергетическими материалами, дренаже тканей. Развитая капиллярная сеть слизистой оболочки тонкой кишки служит выражением ее значительных метаболических потребностей для обеспечения процессов всасывания и транспортировки веществ.
Морфологические исследования
Относительные размеры краевого синуса составляют 1,40±0,29%, капсулы 1,95±0,17%, трабекул 0,62±0,11% от общей площади подвздошного лимфатического узла (Таблица 7).
Клетки в герминативных центрах вторичных лимфоидных узелков подвздошных лимфатических узлов интактных животных представлены малыми лимфоцитами (38,07±3,28%), средними лимфоцитами (37,14±1,98%), бластами (14,24+1,73%). Относительное содержание ретикулярных клеток достигает 2,61 ±0,63%, макрофагов- 6,13±0,71%, клеток в состоянии митоза-1,81 ±0,30%.
Структуру паракортикальной зоны образуют в основном малые лимфоциты (70,63±1,95%), а также средние лимфоциты (19,32±0,79%), бласты (1,13±0,22%), макрофаги (2,95±0,17%) и ретикулярные клетки (5,97±0,29%).
Мозговые тяжи представлены зрелыми (24,44±1,56%) и незрелыми (2,82±0,71%) плазматическими клетками, а также бластами (0,57±0,22%). Кроме того, в мозговых тяжах подвздошных лимфатических узлов встречаются малые и средние лимфоциты, макрофаги, ретикулярные клетки. На их долю приходится соответственно 48,25±1,90%, 11,64±0,87%, 4,67±0,42% и 7,61±0,49%. В мозговых синусах встречаются малые и средние лимфоциты, зрелые и незрелые плазмоциты, содержание которых 50,88±1,14%, 17,28±0,71%, 1,35±0,14% и 0,46±0,04% соответственно. На долю ретикулярных клеток приходится 22,01±1,24%, макрофагов- 6,34±0,30%. Также встречаются 0,43±0,08% бластных клеток и в единичных количествах нейтрофилы и клетки с фигурами митозов (Таблица 8).
У кроликов с пероральным введением сорбента СИАЛ удельная площадь коркового и мозгового вещества, а также отдельных структурно-функциональных зон и численная плотность лимфоидных узелков в подвздошных лимфатических узлах достоверно не отличаются от аналогичных показателей интактной группы животных (Таблица 7). По своей структурно 68
функциональной специализации подвздошные лимфатические узлы данной экспериментальной группы соответствует фрагментированному типу, как и у интактных животных.
По сравнению с группой интактных животных клеточный состав герминативных центров вторичных лимфоидных узелков, паракортикальной зоны, мозговых тяжей и мозговых синусов подвздошных лимфатических узлов кроликов после введения сорбента СИАЛ также не имеет статистически значимых изменений. Однако наблюдается тенденция к снижению относительного содержания плазматических клеток в мозговых тяжах (Таблица 8).
По нашим данным содержание общего белка в венозной крови кроликов интактной группы составляет 49,66±2,57 г/л, альбумина 35,97±1,41 г/л. Концентрация общего холестерина достигает 1,53±0,12 мМоль/л, а-холестерина 0,81±0,06 мМоль/л, триглицеридов 1,14±0,10 мМоль/л, р липопротеидов 1343,33±131,34 у.е., коэффициент атерогенности при этом достигает 0,91±0,08 у.е.. Содержание холестерина в желчи составляет 2,62±0,19 мМоль/л (Рис.2). Содержание глюкозы в крови 6,96±0,45 мМоль/л, мочевой кислоты 19,00±1,50 мкМоль/л, мочевины 5,50±0,30 мМоль/л, креа-тинина 105,58±4,83 мкМоль/л. Активность каталазы 44,71±5,24 Ед/л (Таблица 9).
Энтеральное введение сорбента СИАЛ интактным кроликам не вызывает статистически значимых изменений биохимических показателей крови (Таблица 9), а также концентрации холестерина в желчи (рис.2).
В центральной лимфе интактных кроликов содержится 39,80±3,56 г/л общего белка и 26,65±1,97 г/л альбумина. Концентрация общего холестерина составляет 0,75±0,14 мМоль/л, а-холестерина 0,51±0,06 мМоль/л, триглицеридов 2,90±0,57 мМоль/л, р-липопротеидов 1167,00±270,52 у.е. Содержание глюкозы достигает 23,11±2,15 мМоль/л, мочевой кислоты- 68,10±6,16 мкМоль/л, мочевины- 6,97±0,85 мМоль/л, креатинина- 129,00±6,63 мкМоль/л. Рис.2. Содержание холестерина в желчи кроликов при пероральном введении сорбента СИАЛ в физиологических условиях и при экспериментальной ги-перхолестеринемии (M±Atm).
После введения сорбента СИАЛ биохимические показатели в лимфе интактных кроликов не изменяются (Таблица 10).
Полученные нами данные, касающиеся структуры и цитологического состава стенки тонкой кишки, морфофункциональной организации брыжеечных и подвздошных лимфатических узлов кроликов интактной группы, согласуются с имеющимися в литературе (А.Р. Douglas, А.Р. Weetman 1975; Трясучев П.М. и др., 1978; Аруин Л.И., Шаталова О.Л., 1982; К.И. Расулев 1990; Краюшкин А.И., 1995). Клеточный состав структурно-функциональных зон лимфатических узлов свидетельствует о протекании в них процессов пролиферации, бласттрансформации, макрофагальной реакции. При сравнении биохимических показателей венозной крови и центральной лимфы у интактных кроликов выявлено значительно большее содержание в последней глюкозы и мочевой кислоты. Пероральное введение в течение 10 дней сорбента СИАЛ кроликам в условиях физиологической жизнедеятельности не приводит к значимым структурно-клеточным изменениям в стенке тонкой кишки, брыжеечных и подвздошных лимфатических узлах, не оказывает влияния на биохимический состав крови и центральной лимфы и не влияет на содержание ХС в желчи.
При длительном содержании кроликов на атерогенной диете высота ворсинок слизистой оболочки тонкой кишки имеет тенденцию к уменьшению, а глубина крипт тенденцию к увеличению. Вследствие этого соотношение крипта/ворсинка увеличивается на 26,8%. В слизистой оболочке стенки тонкой кишки наблюдается расширение прелимфатических путей и лимфатических капилляров (Рис.3). Толщина подслизистой основы достоверно не изменяется, в то время как толщина мышечной оболочки увеличивается на 36,8%, при этом в ней наблюдается отек тканевого интерстиция (Рис.4). При изучении клеточного состава эпителиального слоя кишечной ворсинки и крипты отмечается увеличение в них числа бокаловидных клеток на 48,3% и на 69,8%о по сравнению с интактными животными. Количество межэпителиальных лимфоцитов при этом возрастает соответственно на 41,4% и на 72,3% (Рис.5).
В собственной пластинке слизистой оболочки кишечных ворсинок наблюдается выраженная тенденция к снижению относительного количества плазматических клеток и макрофагов и увеличению числа клеток с деструктивными изменениями. При этом относительное количество лимфоцитов увеличивается на 17,6% (р 0,05).
В собственной пластинке слизистой оболочки кишечных крипт относительное количество макрофагов и эозинофилов снижается соответственно на 29,4%о и 62,5%, а лимфоцитов и клеток с деструктивными изменениями увеличивается на23,2% и 55,0% (Таблица 4).
Структурная организация подвздошных лимфатических узлов
В мозговых синусах подвздошных лимфатических узлов наблюдается снижение относительного количества малых лимфоцитов на 24,3%), увеличение содержания средних лимфоцитов и макрофагов соответственно на 20,6% и на 50,6%. по сравнению с интактной группой (Рис.25,26,27).
Также как и в брыжеечных, в подвздошных лимфатических узлах обнаруживаются скопления макрофагов в корковом плато по периферии лим-фоидных узелков, на границе коркового и мозгового вещества, а также в мозговых тяжах (Рис.28).
Длительное содержание кроликов на атерогенной диете приводит к изменению липидного спектра крови. Содержание общего холестерина возрастает на 95,7%, (3-липопротеидов - на 92,5%, триглицеридов- на 62,0%. При этом концентрация а-холестерина не изменяется. Индекс атерогенности возрастает на 98,5%). Наблюдается увеличение концентрации ХС в желчи на 44,8% (Рис.2). Содержание общего белка увеличивается на 21,1%, в то же время уровень альбумина не изменяется. Значительно, на 90,2% возрастает концентрация в сыворотке крови мочевой кислоты, на 30,3% растет содержание креатинина. Имеет место тенденция к увеличению уровня мочевины и глюкозы. Резко, на 45,3% возрастает активность каталазы (Таблица 9).
Длительное поступление избытка холестерина с пищей оказывает влияние на биохимический состав центральной лимфы. Так, концентрация общего холестерина увеличивается на 88,4%), (3-липопротеидов на 79,7%. В то же время содержание а-холестерина снижается на 71,6% вследствие чего коэффициент атерогенности возрастает на 98,9% . Содержание триглицеридов, общего белка, альбумина и глюкозы остается неизменным. По сравнению с кровью, в лимфе наблюдается менее резкое, на 39,5%, увеличение концентрации мочевой кислоты. На 49,2% возрастает содержание креатинина (Таблица 10).
Мозговые тяжи и мозговые синусы (сужены по сравнению с группой интактных животных) подвздошного лимфатического узла кролика с экспериментальной гиперхолестеринемией. Окр. гематоксилин-эозин. Ок.10, об.Ю. Рис.24. Отек и разволокнение трабекулы подвздошного лимфатического узла кролика с экспериментальной гиперхолестеринемией. Окр. гематоксилин-эозин. Ок.10, об.10.
Длительное поступление избытка холестерина с пищей приводит к увеличению в тонкой кишке кроликов толщины мышечной оболочки и индекса крипта/ворсинка. В эпителиальной выстилке стенки тонкой кишки увеличивается содержание бокаловидных клеток, участвующих в синтезе защитного гликопротеина муцина, а также межэпителиальных лимфоцитов, контролирующих иммунный гомеостаз слизистой оболочки тонкой кишки, причем рост количества бокаловидных клеток и межэпителиальных лимфоцитов более выражен в крипте, чем в ворсинке. В собственной пластинке слизистой оболочки крипты наблюдается рост относительного количества клеток с деструктивными изменениями и снижение доли макрофагов и эози-нофилов. Увеличение содержания лимфоцитов выявляется как в собственной пластинке слизистой оболочки ворсинки, так и в крипте, причем в последней в большей степени. Наблюдается отек слизистой оболочки тонкой кишки.
Атерогенная диета способствует главным образом увеличению доли поверхностной коры в брыжеечных и подвздошных лимфатических узлах. Причем, если в брыжеечных лимфатических узлах это происходит за счет вторичных лимфоидных узелков, то в подвздошных лимфатических узлах за счет коркового плато и первичных лимфоидных узелков. Одновременно уменьшается доля паракортикальной зоны в брыжеечных лимфатических узлах. Наблюдается ухудшение транспортных возможностей подвздошных лимфатических узлов вследствие уменьшения в них доли мозговых синусов. Увеличение относительных размеров краевого синуса в брыжеечных лимфатических узлах сопровождается уменьшением количества клеток в мозговых синусах, что указывает на активацию прямого пути транспорта лимфы через них вследствие усиления лимфопродукции в дренируемой области. Увеличение доли соединительнотканного каркаса в подвздошных лимфатических узлах обусловлено в основном отеком трабекул и капсулы.
Анализ клеточного состава структурно-функциональных зон лимфатических узлов выявил плазмоцитарную реакцию и рост митотической активности в брыжеечных лимфатических узлах. В мозговых тяжах обоих лимфатических узлов наблюдается увеличение относительного содержания ретикулярных клеток и макрофагов на фоне снижения относительного числа малых лимфоцитов. При этом в мозговых синусах брыжеечных лимфатических узлов также увеличивается относительное содержание ретикулярных клеток на фоне снижения доли макрофагов. В то же время в мозговых синусах подвздошных лимфатических узлов относительное содержание макрофагов увеличивается.
Из биохимических показателей крови и центральной лимфы в большей степени изменения касаются липидного спектра и параметров, косвенно свидетельствующих о развитии эндогенной интоксикации, активации процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты. Имеет место увеличение концентрации ХС в желчи.
Структурная организация подвздошных лимфатических узлов
У животных с экспериментальной гиперхолестеринемиеи после приема сорбента СИАЛ высота ворсинок и глубина крипт слизистой оболочки тонкой кишки, индекс крипта/ворсинка, а также толщина подслизистой основы и мышечной оболочки достоверно не изменяются. Тем не менее, высота ворсинки по сравнению с интактными животными становится меньше на 17,2%, что является статистически значимой разницей. Вследствие этого индекс крипта/ворсинка превышает значения интактных животных на 31,8% В то же время, толщина мышечной оболочки перестает достоверно отличаться от интактной группы (Таблица 2). В эпителиальном слое ворсинки количество бокаловидных клеток и межэпителиальных лимфоцитов сохраняется на уровне, характерном для животных с гиперхолестеринемиеи, хотя и имеет тенденцию к снижению. В эпителиальном слое крипты количество бокаловидных клеток снижается на 74,1% и достигает нормальных показателей. Прием сорбента СИАЛ хотя и способствует снижению содержания межэпителиальных лимфоцитов в крипте на 30,9%, однако, их количество по-прежнему достоверно, на 60,0%, превышает аналогичные показатели интактных животных (Рис.5).
В собственной пластинке слизистой оболочки кишечных ворсинок после введения сорбента СИАЛ на 64,4% уменьшается относительное содержание клеток с деструктивными изменениями, что ниже исходных показателей на 55,2%о. Относительное количество плазматических клеток снижается на 31,2% и становится меньше по сравнению с интактной группой на 46,1%о. Увеличивается доля нейтрофилов на 51,1%, что на 45,5% выше, чем у интактных животных. Относительное количество лимфоцитов и эозинофилов после введения сорбента СИАЛ достоверно не изменяется (Таблица 4).
В собственной пластинке слизистой оболочки крипты восстанавливается относительное содержание эозинофилов, увеличиваясь на 56,1%, а также лимфоцитов, макрофагов и клеток с деструктивными изменениями, число которых перестает достоверно отличаться от значений интактной группы. Относительное количество плазматических клеток становится меньше, чем в интактной группе на 31,2% (Таблица 4). В слизистой оболочке тонкой кишки прием сорбента СИАЛ способствует снижению отечных явлений (Рис29).
Слизистая оболочка стенки тонкой кишки кролика с жэксперимен-тальной гиперхолестеринемией после энтерального введения сорбента СИАЛ (отек менее выражен). Окр. гематоксилин-эозин. Ок.10, об.40.
Введение кроликам с гиперхолестеринемией сорбента СИАЛ приводит к переходу брыжеечных лимфоузлов от фрагментированного к промежуточному типу, росту корково-мозгового индекса до 1,32±0,11, что обусловлено увеличением относительных размеров коркового и снижением размеров мозгового вещества. Изменение параметров коркового вещества происходит вследствие увеличения на 32,4% относительной площади Т-зависимой паракортикаль-ной зоны при недостоверных изменениях структур поверхностной коры (Рис.6). При этом доля, приходящаяся во вторичных лимфоидных узелках на герминативный центр, хотя и снижается на 37,2%, но по-прежнему на 65,5% превышает значения, характерные для интактных животных. Численная плотность первичных лимфоидных узелков перестает достоверно отличаться от исходных значений. Параметры мозгового вещества изменяются за счет мозговых синусов, доля которых снижается на 20,8% (Рис.21, 30). Наблюдается снижение на 60,3%), до исходных значений, относительных размеров краевого синуса (Таблица 5, Рис.21).
Присутствие энтеросорбента в рационе кроликов с гиперхолестерине-мией способствует дальнейшему росту в герминативных центрах брыжеечных лимфатических узлов доли средних лимфоцитов, относительное количество которых на 20,7% превышает аналогичные показатели у интактных животных, что является статистически значимой разницей. Наблюдается снижение до исходных значений, на 39,8%, относительного количества клеток с митозами. Дальнейшее увеличение числа макрофагов хотя и не является статистически значимым, однако, достоверно (на 46,8%) превышает аналогичные показатели у интактных животных (Таблица 6).
В паракортикальной зоне имеет место дальнейшая тенденция к росту доли средних лимфоцитов, вследствие чего их содержание достоверно (на 19,1%) превышает исходные значения.
В мозговых тяжах на 14,9%) увеличивается относительное число малых лимфоцитов, достигая значений интактных животных. Уменьшается до исходных значений, на 36,7%, доля зрелых плазматических клеток (Рис. 12,13).
В мозговых синусах брыжеечных лимфатических узлов прием сорбента СИАЛ приводит к снижению относительного количества зрелых и незрелых плазматических клеток до исходных значений, соответственно на 51,4% и 52% и к росту числа макрофагов на 35,3%. Относительное содержание малых лимфоцитов остается на 13,0% ниже, а ретикулярных клеток на 45,0% выше, чем у интактных животных (Рис. 12,13). 5.3. Структурная организация подвздошных лимфатических узлов.
После приема сорбента СИАЛ в течение 10 дней тип подвздошного лимфатического узла не изменяется, оставаясь фрагментированным, с величиной корково-мозгового индекса 0,82±0,05. Изменения морфометрических характеристик паракортикальной зоны, коркового плато, вторичных лимфо-идных узелков, краевого синуса, мозговых тяжей и мозговых синусов, а также соединительнотканных элементов каркаса не являются статистически значимыми. Снижение относительной площади первичных лимфоидных узелков на 31,6%) обусловлено снижением их численной плотности на 51,4%. Наблюдается уменьшение суммарной площади, занимаемой В-зависимыми зонами на 12,2% , без изменения площади Т-зоны (Таблица 7).
Присутствие энтеросорбента в пище кроликов приводит к снижению в герминативных центрах подвздошных лимфатических узлов доли бластов- на 41,4%о и увеличению доли макрофагов на 44,5%, что, однако, не отличается от аналогичных показателей у интактных животных. Имеет место тенденция к росту относительного количества малых лимфоцитов и снижению митоти-чески делящихся и ретикулярных клеток (Рис.31,32).
В паракортикальной зоне наблюдается снижение относительного количества средних лимфоцитов на 35,8%) при недостоверном изменении содержания остальных клеточных элементов.
В мозговых тяжах подвздошных лимфатических узлов кроликов с ги-перхолестеринемией прием сорбента СИАЛ приводит к уменьшению на 42,7% доли макрофагов и росту на 25,0% доли малых лимфоцитов, что соответствует их уровню у интактных животных. Отмечается снижение на 22,4% относительного числа ретикулярных клеток, однако их содержание по-прежнему выше, чем у интактных животных (Рис.25,26).
В мозговых синусах подвздошных лимфатических узлов до исходных значений снижается содержание средних лимфоцитов (на 24,4% ) (Рис. 25,26). Соотношение остальных клеточных элементов изменяется недостоверно. 5.4. Биохимическая характеристика крови.
