Содержание к диссертации
Введение
1. Общая характеристика работы 2
2. Гепатозащитные средства природного происхождения (обзор литературы) 9
2.1 Фосфолипидные препараты 22
2.2 Растительные полифенолы 22
2.3 Комбинированное действие гепатопротекторов 41
3. Материал и методы исследования 46
4. Результаты собственных исследований 63
4.1. Антиоксидантные свойства лохеина, эплира и их комбинаций in vitro 64
4.2. Гепатопротективное действие комбинированных препаратов, содержащих эплир и лохеин 69
4.3. Гепатопротективные свойства липроксола 78
5. Заключение 97
6. Выводы 106
7. Указатель литературы 108
- Растительные полифенолы
- Комбинированное действие гепатопротекторов
- Антиоксидантные свойства лохеина, эплира и их комбинаций in vitro
- Гепатопротективные свойства липроксола
Растительные полифенолы
Легалон (международное название - силибинин) - препарат фирмы MADAUS AG (Германия), а так же его аналог карсил производства PHARMACHIM (Болгария)), полученные из семян расторопши пятнистой (Silybum marianum L. Asteraceae), содержат сумму флавоноидных соединений (под общим названием - силимарин) с фенилхромановой структурой -силибин, силикристин, силидианин [90].
При приеме внутрь легалона в драже и таблетках у человека из кишечника всасывается 35 5% силибина. Максимальная концентрация в плазме достигается через 1,3 ч. Период полуэлиминации составляет 6,3 ч. Экскреции с мочой в неизмененном виде подвергается 2-5% введенной дозы. Основная часть (около 80%) силибина выводится с желчью в виде сульфо- и глюкуроновых конъюгатов и в значительной степени участвует в энтерогепатической циркуляции. Концентрация легалона в желчи примерно в 100 раз выше, чем в крови. У крыс, получавших внутрь, внутрибрюшинно или внутривенно Н-силибин, большая часть метки накапливается в цитоплазме гепатоцитов, тогда как в связи с ядерными белками ее находится в 100-200 раз меньше. С нуклеиновыми кислотами 3Н-силибин не реагирует [130, 150, 206]. Терапевтическое действие легалона основано на мембранотропном, антиоксидантном и метаболическом эффектах. Легалон, вступая в биохимическое взаимодействие с мембранами клеток печени, нормализует в них количество фосфолипидов -фосфатидилинозитола и фосфатидилэтаноламина. Это приводит к росту резистентности мембран и уменьшенной потере составных веществ клетки. Второй путь стабилизации мембран заключается в способности легалона ингибировать фосфодиэстеразу циклических нуклеотидов и вызывать накопление цАМФ [110].
Антиоксидантное действие легалона характеризуется торможением образования свободных радикалов с прекращением цепной реакции перекисного окисления полиеновых жирных кислот [41, 180, 218].
Молекулы флавоноидов легалона имеют гидроксилы с подвижными атомами водорода, способными нейтрализовать гидроперекиси полиеновых жирных кислот и свободные радикалы кислорода [218]. Легалон, встраиваясь в липидный бислой мембран, связывает ионы железа в хелатные комплексы и подавляет образование первичных и вторичных продуктов липопероксидации [194]. Антиоксндантный эффект легалона в концентрациях, значительно меньших, чем других флавоноидов, наблюдался в тромбоцитах и эритроцитах человека при добавлении к культуре клеток парацетамола и адриабластина [196]. Легалон препятствовал продукции диеновых конъюгатов, оснований Шиффа и малонового диальдегида в печени крыс при различных этиологических формах токсического гепатита [45, 122, 130]. Одновременно терапия легалоном сопровождалась сохранением ресурсов восстановленного глутатиона и повышением функции антиоксидантной системы гепатоцитов - глутатионзависимых ферментов и супероксиддисмутазы [13, 180, 218].
Легалон, как активный антиоксидант, предохраняет от деструкции мембранные фосфолипиды гепатоцитов, тормозит в печени синтез провоспалительных простагландинов и лейкотриенов, уменьшает гипеферментемию, улучшает дыхательную функцию митохондрий, стабилизирует лизосомы [45]. Антиоксидантное влияние легалона лишь в слабой степени сопровождается улучшением антитоксической функции печени. Препарат не препятствовал деструкции цитохрома Р-450 и его конверсии в метаболически инертный цитохром Р-420, не взаимодействовал с изоформой 2Е1 цитохрома Р-450 в условиях поражения печени крыс ССЦ, аллиловым спиртом и D-галактозамином [191]. При введении легалона животным улучшались конъюгация субстратов с восстановленным глутатионом и обезвреживание билирубина связыванием с глюкуроновой кислотой, но оставались ингибированными реакции гидроксилирования и деметилирования [125, 191].
Метаболическое воздействие легалона заключается в стимуляции биосинтеза белка и регенерации печени. Легалон, специфически стимулируя РНК-полимеразу А ядра гепатоцитов, активирует транскрипцию и ускоряет синтез РНК с увеличением количества рибосом и интенсивным образованием структурных и функциональных белков. В пораженных клетках с максимально повышенным синтезом ДНК легалон не оказывает влияния на транскрипцию, поэтому не усиливает опухолевый рост [ПО]. Наиболее значительно легалон повышал регенераторный потенциал печени после частичной гепатэктомии. В эксперименте у крыс на 25-35% увеличивался синтез ДНК, ядерных гистонов, митотическая активность гепатоцитов и звездчатых ретикулоэндотелиоцитов (клеток Купфера) [216]. Эффекты легалона сохранялись после резекции печени у животных, подвергнутых у-облучению [185]. Механизм стимуляции легалоном регенерации печени обусловлен структурным сходством фенилхроманов и клеточного активатора транскрипции [216].
Влияние легалона на обмен липидов и углеводов в значительной степени обусловлено его свойствами ингибитора фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов, способного вызывать накопление цАМФ в гепатоцитах [193]. В условиях гепатита, вызванного у крыс D-галактозамином, легалон увеличивал содержание гликогена в гепатоцитах, ускорял превращение УДФ-гексозамина в безопасный метаболит печеночной ткани У ДФ-И-ацетил гексозам и н с сохранением нормального уровня УДФ-глюкозы и УДФ-глюкуроновой кислоты [179].
Легалон препятствует формированию жировой дистрофии печени, так как тормозит синтез жирных кислот в гепатоцитах [181]. В микросомах печени крыс легалон ингибирует фермент синтеза холестерина З-гидрокси-3-метил-глутарил-коэнзим А-редуктазу с уменьшением содержания холестерина. В желчи людей, леченных легалоном, снижалась концентрация холестерина [178]. В связи с тем, что легалон тормозит биосинтез холестерина в печени и снижает его концентрацию в крови он рассматривается как потенциальное гипохолестеринемическое средство [211].
При циррозе печени у крыс, вызванном СС14, легалон вызывал рассасывание фиброзных септ, подавлял продукцию коллагена и гликозоаминогликанов (ГАГ), а также тормозил липопероксидацию, гиперферментемию, повышал содержание гликогена, активность Na+, К+-АТФ-азы и Са -АТФ-азы плазматических мембран гепатоцитов [199, 205, 206].
Легалон не обладает желчегонным действием у интактных крыс, но его терапевтический эффект при гепатобилиариой патологии сопровождается улучшением холеретической функции печени. В условиях холестаза у крыс гепатопротектор стимулировал секрецию желчи, увеличивая выделение солей, желчных кислот и билирубина [109, 130, 176].
Помимо гепатозащитного действия у легалона выявлены и другие терапевтические свойства. Он препятствовал образованию язвы и лейкоцитарной инфильтрации в слизистой оболочке желудка при ее ишемии, холодовом стрессе и перевязке привратника у крыс [183]; увеличивал выживаемость, нормализовал артериальное давление, предупреждал развитие постокклюзионной аритмии и приводил к регрессу гипертрофии левого желудочка у спонтанно гипертензивных мышей после перевязки коронарной артерии; через 4 ч после аналогичной операции у крыс препарат сокращал на 35-51% размер зоны инфаркта миокарда и оказывал противоаритмическое действие [207]; проявлял противоопухолевую активность при опухолях кожи мышей, вызванных аппликацией 1,2-О-тетрадеканоил-форбол-13 -ацетата [192].
Значительный интерес представляют клинические исследования, свидетельствующие об иммуномодулирующей активности легалона. У больных с циррозом печени алкогольной этиологии, принимавших легалон, отмечались не только значительное снижение уровня билирубина, активности АлАТ, АсАТ и 7-глУтамилтРансФеРазы (у-ГТФ) в сыворотке крови, но и уменьшение исходно повышенной фракции цитотоксических лимфоцитов СД8 (Т-супрессоров) с нормализацией показателей бластной трансформации [109].
Легалон эффективен при остром вирусном гепатите, хронических алкогольном, персистирующем и активном гепатитах, жировой дистрофии печени, токсических поражениях и циррозе печени [100, 111, 177]. При терапии легалоном у больных исчезают вялость, субъективный дискомфорт, боль в животе и суставах; уменьшаются гиперферментемия, гипербилирубинемия, гиперхолестеринемия; нормализуется содержание триацилглицеролов и у-глобулинов в крови, возрастает концентрация альбуминов и нормализуется синтез в печени V и VII факторов свертывания крови. Общее время пребывания пациентов в стационаре сокращается [14, 72, 85, 88, 98, 163].
В редких случаях легалон оказывает побочное действие в виде усиления холестаза, появления диспептических расстройств и аллергических реакций. Препарат противопоказан при заболеваниях печени с выраженным холестатическим синдромом [130].
Фенилхроманы, образующие легалон, наряду с флавоноидами таксифолином и кверцетином, хлорогеновой, кофейной, кумаровой и феруловой кислотами, входят в состав препарата расторопши силибора.
Комбинированное действие гепатопротекторов
Одним из путей повышения эффективности терапии гепатопротекторами является их совместное назначение. Н.П. Скакун с соавторами [131] выявили синергизм легалона и эссенциале по гепатопротективному действию при интоксикации тетрациклином (0,5 г/кг внутрь). Крысам ежедневно в течение 5 дней вводили в желудок легалон (30 мг/кг) и подкожно эссенциале (50 мг/кг), а также указанные гепатопротекторы по отдельности. Судя по величинам АсАТ, АлАТ, ЩФ, при сочетанном введении легалона и эссенциале их гепатопротективная эффективность при тетрациклиновом поражении печени нарастала, они также предупреждали угнетение тетрациклином желчеобразования, оказывали антиоксидантное и желчегонное действие. Авторы считают перспективным сочетанное использование легалона и эссенциале для профилактики и лечения поражений печени [131].
На модели иодпеченочного холестаза у крыс с перевязанным общим желчным протоком показана целесообразность комбинации эссенциале с кордиамином и витамином Е. У животных нормализовалась скорость окисления НАДН и N-демитилирования амидопирина, активность НАДФН цитохром Р-450-редуктазы, значительно активизировались монооксигеназная, глюкуронил- и глутатионтрансферазные системы печени; снижалась интенсивность свободнорадикальных процессов в большей степени, чем при монотерапии эссенциале [57].
Предлжен комбинированный препарат силицид, представляющий собой липофильный комплекс силибина с фосфатидилхолином в соотношении 1:1. Биодоступность и фармакокинетика силипида изучена в сравнении с силимарином и силибином у животных и человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). После введения силипида крысам в желудок в дозе 200 мг/кг (по силибииу) уровень силибина в плазме достигал пика через 2 ч и составлял 9,0+3,0 мкг/мл для несвязанного силибина и 93,4+16,7 для общего (связанный+несвязанный) [173, 174]. Максимальная концентрация в желчи силибина составила 2989±568 мкг/мл через 2 ч, через 24 ч она снижалась до 13% от введенной дозы. После введения силимарина содержание несвязанного и общего силибина в плазме, экскреция с желчью были в несколько раз ниже, чем после введения силипида. Относительная биодоступность силипида была в 10 раз выше, чем силимарина [174].
Высокая биодоступность силипида подтверждена на здоровых добровольцах, которым внутрь вводили препарат. Оценивали фармакокинетнческие параметры после введения силипида (120 и 80 мг по силибину) и силимарина, используя метод ВЭЖХ. Концентрация несвязанного силибина после введения 120 мг силипида достигала пика в пределах 20 нанограмм/мл у всех исследуемых. Пик концентрации связанного силибина наступал через 3,8±0,5 ч и составил 255±35 нанограмм/мл, с периодом полувыведения 3,44+0,42 ч, элиминация связанного силибина была более медленной по сравнению с несвязанным [182, 202]. После введения 80 мг средние значения AUC, концентрации в плазме, время пика для несвязанного силибина были на 30-40% ниже, чем наблюдалось после введения дозы 120 мг силипида и это свидетельствует о линейной зависимости между дозой и уровнем препарата в плазме. Приведенные данные заметно контрастируют с тем, что наблюдалось у пациентов с надпеченочным холестазом, где была отмечена значительная ретенция связанного силибина через 24 ч после введения силипида [182].
Фармакокинетическое исследование на 14 пациентах с вторичным холестазом и надпеченочной желчной обструкциеіі (каждый пациент получал внутрь 120 мг силипида по силибину) свидетельствует, что желчная обструкция сопровождается повышением клиренса связанного силибина, возможно, в связи с усилением экскреции в желчь [209].
Экскреция с желчью силипида (120 мг внутрь), по сравнению с силимарином, была исследована у 9 пациентов с холецистэктомией с Т-образным желчным дренажем [210]. После введения силипида концентрация силибина в желчи регистрировалась уже через 1 ч и достигала пика через 2-4 ч, затем снижалась очень медленно, достигая минимума к 24-48 ч. После приема силимарина его содержание в желчи было в несколько раз ниже. Экспериментальная оценка гепатозащитного и антиоксидантного эффекта силипида проведена на различных моделях острого и хронического гепатита у крыс. Силипид проявил дозозависимый протективный эффект при гепатите, вызванном тетрахлорметаном, празеодимием, этанолом и D-галактозамином. Силибин и фосфатидилхолин, введенные по отдельности, не оказали защитного действия на моделях гепатита [175]. При остром и хроническом алкагольном гепатите у крыс предварительное введение силипида в опытах in vitro и in vivo снижало захват гидроксиэтиловых радикалов микросомами. Этот эффект обусловлен не вмешательством в метаболизм этанола цитохрома Р-450, а способностью молекулы снлибина в силипидс подавлять гндроксиэтиловые радикалы; она теряется у чистого снлибина из-за низкой биодоступности. Способность силипида подавлять радикалы дериватов алкоголя, наряду с его антиоксидантної! активностью, полезна при заболеваниях печени, вызванных алкоголем [208].
Антиоксидантная и антирадикальная активность силипида установлена на крысах, отравленных тетрахлорметаном и метилгидразином [217]. В экспериментах на изолированных гспатоцитах, выделенных из печени крыс, силипид вызывал дозозависимое подавление липопероксидации, индуцированной АДФ и Fe3f. Кроме того, силипид полностью предотвращал продукцию МДА и защищал изолированные гепатоциты от токсических прооксидантов, таких как аллиловый спирт, бромтрихлорметан, без активации механизма детоксикации ксенобиотиков. Чистый силибин был неэффективен [195].
Силипид в большей степени, чем силибин, усиливал влияние цисплатины на рост опухолевых клеток in vitro и in vivo на мышах. Введение силипида и цисплатины повысило противоопухолевую активность до 90%, масса животных восстанавливалась в более ранние сроки по сравнению с животными, лечеными цисплатиной [212].
Для оценки гепатозащитного и антиоксидантного эффекта силипида 20 пациентам с ХАГ назначали препарат (240 мг по силибину) в течение 7 дней. Отмечено существенное уменьшение АсАТ, АлАТ, у-ГТФ, общего билирубина, ЩФ. Существенных изменений со стороны МДА, содержания Си, Zn в сыворотке не было. СИЛИПИД предотвращал гепатоцеллюлярный некроз и/или повышал стабильность мембран у пациентов с ХАГ [171].
Представленные данные свидетельствуют о целесообразности сочетанного применения гепатопротекторов различного происхождения, что побудило нас разработать комбинированный препарат, состоящий из эплира и лохеина. Как известно, общим свойством большинства гепатопротекторов является их антиоксидантная активность. Наибольшей способностью тормозить ПОЛ в мембранах гепатоцитов обладает лохеин [126]. Эплир активнее других препаратов влияет на антитоксическую функцию печени и вместе с тем способствует синтезу в микросомах и митохондриях фосфатидилэтаноламина, необходимого для создания микроокружения цитохрома Р-450, глюкозо-6-фосфатазы и ферментов цикла трикарбоновых кислот [15]; оба препарата по многим параметрам превосходят эталонные гепатопротекторы.
Антиоксидантные свойства лохеина, эплира и их комбинаций in vitro
По современным представлениям многие жизненно важные метаболические и физиологические процессы, протекающие в организме, тесно связаны со свободнорадикальным окислением (СРО). Свободными радикалами называют молекулы или структурные фрагменты молекул, имеющие на внешней орбитали неспаренный электрон. Поскольку для устойчивого состояния молекула должна содержать на наружной орбитали два электрона, свободные радикалы активно стремятся отнять недостающий электрон от других молекул, что придает им повышенную реакционную способность. Свободные радикалы отличаются от обычных молекул не только высокой химической активностью, но и способностью вступать в цепные реакции.
Свободнорадикальное окисление влияет на физико-химические свойства биологических мембран, их проницаемость, структуру, что отражается на обмене веществ, функциональном состоянии клеток и организма в целом. Свободные радикалы участвуют в поддержании гомеостаза, аккумуляции и биотрансформации энергии, обеспечивают защитные функции, в частности детоксикацию чужеродных соединений (как поступающих извне, так и образующихся в организме), обладают бактерицидными свойствами, влияют на иммунитет и т.д.
Все организмы оснащены разнообразными механизмами для целенаправленной генерации активных форм кислорода. По некоторым оценкам, даже в покое 10-15% всего потребляемого кислорода подвергается одноэлектронному восстановлению, а в условиях стресса, когда активность генерирующих ферментов возрастает, интенсивность восстановления кислорода увеличивается еще больше [20].
Таким образом, в животных и растительных тканях постоянно обнаруживаются некоторое количество свободных радикалов различного происхождения и продукты, образующиеся при перекисном окислении лииидов. В то же время при избытке свободных радикалов наблюдается их взаимодействие с белками, нуклеиновыми кислотами, ферментами и образуются межмолекулярные сшивки, что ведет к потере биологической активности. Перекисные продукты ннгибируют созревание и пролиферацию клеток, обладают общетоксическими и канцерогенными свойствами. Избыток свободных радикалов и перекисей вызывает структурные и функциональные повреждения биологических мембран.
Нарушение регуляции свободи орадикалы і ых процессов обычно сопровождается развитием ряда болезней, так называемых свободнорадикальных патологий, к которым относят: преждевременное старение, лучевую болезнь, токсикозы и др. заболевания, вызванные неблагоприятными факторами внешней среды (ионизирующее излучение, загрязнители атмосферы, питьевой воды и пищевых продуктов), а также болезни курильщиков, заболевания воспалительного генеза (например, ревматоидный артрит), патологии сердечно-сосудистой системы (атеросклероз, ишемия и инфаркт миокарда, гипертония, инсульт), диабет и различные виды злокачественных опухолей (прежде всего, меланомы, рак легких, рак пищевода и желудка), броихолсгочные и нейродегенеративные заболевания, катаракту и некоторые другие глазные болезни [19, 84 , 141]
Приведенные сведения позволяют рассматривать СРО как необходимое звено метаболизма, нарушение регуляции которого является ранним, универсальным механизмом повреждения, лежащим в основе развития различных заболеваний. Коррекция этого процесса во многих случаях помогает предотвратить прогрессирование патологии или существенно облегчает ее течение.
Очевидно, для предупреждения повреждающего действия СРО на биомембраны гепатоцитов и молекулы жизненно важных биополимеров (белки, нуклеиновые кислоты) целесообразно использовать мембраностабилизирующие средства, обладающие антиоксидантной активностью. Как известно, антиоксидантом является «любая субстанция, присутствующая в незначительной концентрации по сравнению с окисляемым субстратом, значительно сдерживающая или полностью подавляющая окисление данного субстрата» [187]. К числу антиоксидантов относятся витамины (Е, С, Р, Р-каротин), низкомолекулярные тиолы, пирокатехины и др.
Многочисленные работы последних десятилетий свидетельствуют о большом значении биоантиоксидантов в обеспечении защитно-приспособительных реакций организма, что обусловлено их способностью регулировать состояние клеточных мембран [3,23,24,62,118,165].
К лекарственным веществам, обладающим антиоксидантными свойствами, относятся многие гспатопротекторы [130]. Действие последних направлено на предупреждение или устранение одного из ведущих механизмов патогенеза поражений печени - дестабилизации мембран гепатоцитов, зависящей от инициирования свободнорадикального окисления липидов биомембран. Фосфолипиды, образующие бнслойную липидную мембрану, вследствие их высокой ненасыщенности являются преимущественным субстратом, подвергающимся повреждающему действию кислородных радикалов [22, 83, 93] Следствием этого являются нарушение ассоциации и активности мембранно-связанных ферментов, окисление SH-групп трансмембранных белков и образование комплекса окисленных лшшдов с белками, что способствует полимеризации белковых молекул [21, 34, 73, 74].
Происходит подавление гликолиза и разобщение окислительного фосфорилирования, блокирование синтеза белка и нуклеиновых кислот, конверсия микросомалыюго цитохрома Р 450 в неактивную форму Р 420, ингибирование ативности ряда мембраносвязанных ферментов [83]. Указанный спектр молекулярной патологии вследствие активации свободнорадикального окисления ведет к цитолизу - разрушению субклеточных и клеточных мембран гепатоцитов при заболеваниях печени [118]. В опытах in vitro лохеин и эплир тормозят свободнорадикальное окисление (табл. 2). Добавление этих гепатопротекторов в окисляющийся при 60С в инициированном режиме кумол приводит к появлению выраженного периода индукции (т) в поглощении кислорода (рис. 2), величина которого зависит от концентрации препаратов в пробах. После расходования антиоксидантов реакция выходит на неингибировапный режим. Эффективность торможения процессов окисления кумола лохеином и эилиром количественно характеризуется величиной константы скорости ингибирования К7, равной 2,62 и 1,84 соответственно.
Проявляя свойства антиоксидантов, они являются типичными акцепторами пероксидных радикалов, что обусловлено, по-видимому, присутствием в лохеине флавоноидов, в эплире - каротиноидов. Судя по литературным данным [16], биофлавоноиды реализуют свое влияние на СРО через систему фенол-семихинон-хинон. В этой системе важнейшая роль отводится нестойкому семихинонному радикалу, играющему роль «ловушки» для других реакционноспособных радикалов.
При наличии в системе окисления нескольких антиоксидантов характер их сочетанного действия может быть аддитивным и взаимонезависимым, либо ингибиторы могут взаимодействовать в ходе реакции, что приводит к эффектам синергизма или антагонизма. В литературе описан синергизм а-токоферола с дибунолом и антагонизм в системе а-токоферол + тирозол [132]. Нами исследовано совместное антиоксидантное действие лохеина и эплира при разных концентрациях в инкубационных пробах (табл. 2). Для всех исследованных комбинаций препаратов их совместное действие (т2) превосходит теоретический аддитивный эффект индивидуальных антиоксидантов (Хт;), т.е. xs Цтлохеина + тэплира), что свидетельствует о проявлении ими синергизма. Судя по величине Ах, которую оценивали по разности между экспериментально определяемым эффектом комбинации т и теоретическим Хт; (в условиях аддитивного действия ингибиторов Ет, = лохеина + Тэплира)? степень синергизма в комбинациях с постоянным количеством лохеина нарастает с увеличением концентрации эплира и достигает максимума при равных концентрациях обоих антиоксидантов (Дт = 81,1 мин)
Таким образом, эплир и лохеин, содержащие ингибиторы свободнорадикального окисления, являются синергистами по антиоксидантному действию - универсальному механизму терапевтического эффекта гепатопротекторов. Эти результаты послужили основанием исследовать гепатопротективное действие сочетаний лохеина и эплира при экспериментальном гепатите, вызванном тетрахлорметаном.
Гепатопротективные свойства липроксола
Нами исследована гепатопротективная активность липроксола в сравнении с раздельным влиянием входящих в его состав эплира и лохеина при токсическом поражении печени, вызванном тетрахлорметаном. Липроксол, эплир и лохеин в оптимальных дозах (130, 30 и 200 мг/кг соответственно) вводили в желудок крысам в форме суспензии на 1% крахмальной слизи за 2 ч до гепатотоксина. Животные контрольной группы (нелеченые) получали тетрахлорметан и эквиобъемное с гепатопротекторами количество растворителя. Крыс декапитировали под легким эфирным наркозом. Гепатопротективный эффект препаратов оценивали по влиянию на выживаемость животных, длительность гексеналового сна, морфологические (количество некротизированных гепатоцитов, степень жировой дистрофии) и биохимические показатели печени и сыворотки крови. В сыворотке крови определяли ретенцию БСФ, активность аминотрансфераз и ЩФ, содержание общего и конъюгированного билирубина, липидов, белка, глюкозы; в липидиых экстрактах печени - содержание ДК, оснований Шифа, общее количество и содержание отдельных фракций фосфолипидов; в гомогенатах печени - кинетику образования аскорбат- и НАДФН-зависимого малонового диальдегида; в микросомальной фракции - содержание цитохромов Р-450 и Р-420. Стабильность цитохрома Р-450 оценивали по его превращению в цитохром Р-420 в процессе инкубации микросом в течение 10 мин при 37С.
Как выше указано (раздел 4.2), липроксол, лохеин и эплир предотвращают гибель животных (в контрольной группе крыс, отравленных тетрахлорметаном, выживаемость животных составляла 87%). Токсический гепатит характеризуется удлинением гексеналового сна в 2 раза - до 45,8 мин (в норме - 22,4 мин), дискомплекцией печеночных пластинок, отеком вокругсинусоидных пространств, лимфоидно-гистоцитарной инфильтрацией и накоплением в центральной и периферической зонах печеночной дольки капель нейтрального жира (степень ожирения 4,87 балла), колликвационным некрозом 16,1% гепатоцитов (в норме - 0,8%). Исследуемые препараты препятствовали нарушению гистоархитектоники печени, существенно уменьшали стеатоз (до 3,64, 3,75 и 4,30 баллов соответственно), количество некротизированных гепатоцитов (до 2,8, 4,9 и 5,1%) и длительность гексеналового сна (до 25,2, 31,2 и 35,1 мин соответственно). Более выраженный эффект проявляет липроксол, который статистически достоверно превосходит эплир и лохеин по антинекротическому действию в 1,8 и 1,7 раза, замедлению биотрансформации гексенала в 1,4 и 1,2 раза соответственно (табл. 4).
Увеличение активности ферментов в сыворотке крови является объективным показателем поражения паренхимы печени. У интактных животных концентрация ферментов в гепатоцитах значительно выше, чем в сыворотке крови. При повреждении гепатоцитов этот плазменно-клеточный градиент резко нарушается [106]. Цитолиз паренхимы печени сопровождается увеличением проницаемости клеточной мембраны гепатоцитов и мембран клеточных органоидов, при этом в циркуляторное русло транспортируются ферменты цитоплазмы, митохондрий, ЭПР, лизосом [ 109].
Обычно индикатором цитолиза является рост активности печеночноспецифических ферментов - уроканиназы, лактатдегидрогеназы, а также аминотрансфераз, у-ГТФ и ЩФ. Эти ферменты локализованы в различных компартментах клетки, поэтому отличаются условия их диффузии в кровь [126].
В норме в небольших количествах в крови находятся индикаторные ферменты - аминотрансферазы (АлАТ и АсАТ), катализирующие реакции переаминирования с а-аминокислот на кетокислоты. АлАТ локализована в цитоплазме, АсАТ - в цитоплазме и митохондриях гепатоцитов.
Экскреторным ферментом является щелочная фосфатаза, которая представляет собой совокупность изоэнзимов разных тканей, с преобладанием ферментов печеночного, костного и кишечного происхождения. Печеночные изоформы ЩФ выделяются в кровь в повышенных количествах при холестазе [106].
Более высокая гепатопротективная активность липроксола получила подтверждение при оценке его влияния на синдром цитолиза.
В наших экспериментах тетрахлорметан вызывал гиперферментемию, повышая активность в крови АлАТ в 3,7, АсАТ в 2,6 раза, ЩФ в 4,1 раза по сравнению с показателями интактных животных. Все гепатопротекторы препятствовали выходу ферментов в кровь. Однако липроксол превосходил эплир и лохеин по степени предупреждения нарушений цитоплазматических мембран. Липроксол снижал активность специфических маркеров цитолиза АлАТ в 2,6 раза, АсАТ в 2,0 раза по сравнению с активностью ферментов при остром ССЦ-генатите. Под его влиянием активность АлАт и АсАТ повышалась лишь на 44% и 32% по сравнению с соответствующими показателями у интактных животных. Эплир и лохеин снижали уровень АлАТ в 1,9 и 1,6 раза, АсАТ в 1,6 и 1,5 раза по сравнению с активностью ферментов при остром СС14-гепатите. Липроксол практически нормализовал прогностически важный коэффициент де Ритиса, повышая его до 1,2 (у интактных животных 1,3), эплир и лохеин повышали отношение АлАТ/АсАТ до 1,1 и 1,0 соответственно. Липроксол эффективнее эплира и лохеина препятствовал поступлению в кровь маркера холестаза - ЩФ (снижение активности в 3,6, 3,2 и 2,5 раза по сравнению с показателем при остром ССЦ-гепатите соответственно). Увеличение активности ЩФ по сравнению с нормой иод влиянием липроксола составляло всего 14% (табл. 7, 5).
Таким образом, по мембраностабилизирующему эффекту липроксол превосходит эплир и лохеин при монотерапии.
Печень играет важную роль в обмене билирубина: печеночные клетки осуществляют захват из крови билирубина, связывание его с глюкуроновой кислотой и выведение связанного пигмента в желчные капилляры. Свободный непрямой билирубин освобождается от альбуминов плазмы в обращенной к синусоидному капилляру цитоплазматической мембране гепатоцитов, затем транспортируется внутриклеточными белками в ЭПР. На мембранах этого органоида происходит перенос активированной УДФ глюкуронилтрансферазы. Продукты коньюгации билирубина моно- и дпглюкуронид выделяются в кровь с помощью мембраны бнлиарного полюса гепатоцитов, лизосом и пластинчатого комплекса Гольджи. Для оценки эффективности глюкуронирования рассчитывают коэффициент глюкуронирования - отношение связанной фракции пигмента к общему количеству пигмента. Подобно билирубину, введеный в вену БСФ активно переносится в гепатоциты, связывается в их цитоплазме с глутатионом и цистеином, в форме коньюгатов выводится в желчь. При токсическом гепатите на фоне выраженной гипербилирубинемии снижается глюкуронирование и увеличивается ретенция БСФ [126].
По нашим данным при остром ССЦ-гепатите возрастает уровень общего билирубина в 3,3 раза, связанного в 2,1 раза по сравнению с интактными животными, коэффициент глюкуронирования билирубина снижается до 53,5% (у интактных 82,6%). Экскреция бромсульфалеина уменьшается в 4,1 раза (табл. 7).
Все гепатопротекторы уменьшали вызванные тетрахлорм етаном нарушения экскреторной функции печени. Липроксол снижал уровень общего билирубина в 2,4 раза, конъюгированного - в 1,7 раза, повышал коэффициент глюкуронирования билирубина до 75%, увеличивал скорость очищения крови от бромсульфалеина в 3,1 раза по сравнению с соответствующими показателями при ССЦ-гепатите. Эплир и лохеин в оптимальных дозах слабее препятствовали повышению общего и связанного билирубина (в 2,3 и 2,0 раза и 1,7 и 1,5 раза соответственно), они также слабее повышали коэффициент глюкуронирования билирубина (до 71,6 % и 68,1%) и экскрецию бромсульфалеина (в 2,7 и 2,5 раза по сравнению с острым гепатитом) (табл. 6, 7).
Таким образом, липроксол более эффективно, по сравнению с раздельным введением эплира и лохеина, устраняет расстройства экскреторной функции печени: препятствует развитию гипербилирубинемии, ускоряет коньюгацию билирубина и выведение его с желчью.
![Применение антиоксидантов при консервативном и хирургическом лечении хронических вирусного и токсического гепатитов [Электронный ресурс]](/i/i/4488/179903.png "Применение антиоксидантов при консервативном и хирургическом лечении хронических вирусного и токсического гепатитов [Электронный ресурс] Хуснутдинов Тагир Рамзиевич")
![Эффективность применения ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента у больных хронической обструктивной болезнью легких при сочетании легочной и артериальной гипертензии [Электронный ресурс]](/i/i/4231/188862.png "Эффективность применения ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента у больных хронической обструктивной болезнью легких при сочетании легочной и артериальной гипертензии [Электронный ресурс] Чернов Сергей Юрьевич")
![Исследование антиульцерогенной эффективности комбинированного применения омеза и сайтотека с мексидолом в эксперименте [Электронный ресурс]](/i/i/4323/212524.png "Исследование антиульцерогенной эффективности комбинированного применения омеза и сайтотека с мексидолом в эксперименте [Электронный ресурс] Гришкина Ольга Петровна")
