Введение к работе
Актуальность исследования. Организм человека обладает мощными защитными механизмами для поддержания гомеостаза внутренней среды. Сохранение целостности кожного покрова и его быстрейшее восстановление при различных повреждениях является важным звеном этой системы. Раневой процесс сопровождается сложными морфологическими, иммунологическими и биохимическими изменениями на молекулярном, клеточном, органном и организменном уровнях, которые до конца еще не изучены [И.А. Буланкина и соавт, 2002; Г.В. Хомулло, Г.А. Базанов, 2004; Ю.К. Абаев, 2006; F. Ме-hendale, P. Martin, 2001; М. Shi et al., 2004]. Продолжается активный поиск оптимальных методов стимулирования репаративных процессов с учетом индивидуальных особенностей организма [Л.Н. Сернов и соавт., 2004; В.И. Ноздрин и соавт., 2006; СБ. Серединин, В.А. Крайнева, 2009]. Для сокращения сроков репарации используются различные фармакологические препараты, в том числе средства, корригирующие активность иммунной системы. К веществам этой фармакологической группы относятся препараты, созданные на основе цитокинов. Одним из них является комплекс природных цитокинов, получивший название «Суперлимф» [Л.Е. Теплинская и соавт., 2005; А.В. Мотренко, 2009]. Однако до сих пор у соединений этого типа не вскрыты многие стороны фармакодинамики, в частности, механизм реализации регенерационных и репарационных свойств, не установлена корреляция между морфологическими изменениями и сдвигами иммуно-биохимических показателей сыворотки крови и грануляционной ткани. По-видимому, выяснение подобных взаимосвязей позволит определить как отдельные стороны механизма действия «Суперлимфа», так и эффективность вещества в различные периоды восстановления тканей, целесообразность его применения в качестве репаранта. В настоящее время в качестве базисного параметра регуляции иммунных процессов у человека рассматривают баланс Т-хелперов 1-го типа (ТЫ) и Т-хелперов 2-го типа (Th2) [D. O'Gor et al., 2003]. Установлено также, что интерлейкин-1 (IL-1), интерлекин-6 (IL-6) обладают провоспалительным действием, а интерлекин-4 (IL-4), интерлейкин-10 (IL-10) - противовоспалительным. Несмотря на большое количество исследований в этом направлении, молекулярные механизмы процессов, происходящих на местном и организменном уровнях и лежащие в основе смены фаз регенерации, остаются до конца не изученными.
В связи с изложенным представляет интерес изучение динамики цитоки-нового профиля сыворотки крови и грануляционной ткани при спонтанном течении раневого процесса и воздействии комплекса цитокинов - препарата «Суперлимф», примененного местно. Изучение уровней неоптерина, лизоци-ма, SH-групп в сыворотке крови и гомогенате грануляционной ткани в процессе
репарации раны позволит судить о функциональном состоянии различных звеньев иммунных реакций и их изменениях в ходе заживления раны.
Цель исследования: оценка влияния «Суперлимфа» на комплекс иммуно-биохимических показателей и морфофункциональных изменений, происходящих при заживлении экспериментально созданных полнослойных дефектов кожи.
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи.
-
Изучить влияние «Суперлимфа» на заживление экспериментальных ран с учетом динамики изменений уровня IL-2, IL-10, неоптерина, SH-rpynn и лизоцима в сыворотке крови крыс.
-
Выявить влияние «Суперлимфа» на содержание IL-2, IL-10, неоптерина, SH-групп и лизоцима в гомогенате грануляционной ткани крыс в ходе заживления ран.
-
Определитьсоотношениехарактерныхизмененийиммуно-биохимических показателей грануляционной ткани раны и сыворотки крови в различные периоды репарационного процесса, происходящих под воздействием «Суперлимфа».
-
Проанализировать влияние «Суперлимфа» на степень выраженности фазы воспаления раневого процесса. Изучить влияние «Суперлимфа» на морфофункциональные особенности течения заживления ран на клеточном, тканевом и органном уровнях.
-
Выявить взаимосвязь между содержанием IL-2, IL-10, неоптерина, SH-rpynn, лизоцима в грануляционной ткани и морфофункциональными изменениями в заживающей ране при местном применении «Суперлимфа». Научная новизна. Впервые установлено влияние препарата «Суперлимф»
на динамику содержания IL-2, IL-10, неоптерина, SH-групп, лизоцима в сыворотке крови крыс и гомогенате грануляционной ткани, что объясняет механизм стимулирующего действия этого цитокина на фазу воспаления процесса регенерации. Впервые показано влияние препарата «Суперлимф» на морфофункциональные изменения в ходе заживления ран и их корреляцию с уровнем содержания IL-2, IL-10, неоптерина, SH-групп, лизоцима в сыворотке крови крыс и гомогенате грануляционной ткани. Полученные количественные значения этих биохимических показателей и их динамика позволяют достоверно оценить эффективность местного применения «Суперлимфа», а также других медикаментозных и немедикаментозных способов лечения ран.
Научно-практическая значимость. Полученные результаты устанавливают у раствора иммуномодулятора «Суперлимф» стимулирующий эффект при осуществлении репаративных процессов в коже и позволяют выявить пути реализации его положительного воздействия. Выявленное снижение содержания восстановленных тиоловых групп и неоптерина, увеличение уровня IL-2, сопровождающие ускорение заживления ран, могут быть показателями
характеристики действия «Суперлимфа» и служить обоснованием выбора наиболее эффективного режима использования препаратов цитокинового ряда в качестве стимуляторов репарации полнослойных дефектов кожи. Материалы экспериментальных исследований могут быть использованы при поиске генетических факторов, определяющих секрецию цитокинов и экспрессию рецепторов к ним. Результаты проделанной работы дают основание оптимизировать методические подходы выявления у биологически активных веществ способности к стимуляции репаративных процессов. Основные положения, выносимые на защиту:
-
Местные аппликации раствора «Суперлимф» ускоряют заживление ран на 2,0 ± 0,5 дня.
-
Применение «Суперлимфа» изменяет цитокиновый спектр и иммуно-биохимические параметры (содержание неоптерина, лизоцима, суль-фгидрильных групп) регенерирующих тканей, оптимизируя тем самым пролиферативные процессы в месте повреждения при сохранении последовательности течения этапов посттравматической регенерации тканей кожи, но сокращая сроки их осуществления.
-
Препарат «Суперлимф» обладает модулирующим действием на воспалительный этап раневого процесса.
Апробация работы. Материалы и основные результаты работы доложены и обсуждены на V Российской научной конференции (Уфа, 2007); IX Конгрессе международной ассоциации морфологов (Бухара, 2008); международной конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте» (Тюмень, 2008); на совместных заседаниях кафедр фундаментальной и клинической фармакологии и биологии ГОУ ВПО Тверская ГМА (Тверь, 2008, 2009).
Публикации. По теме диссертации опубликовано шесть научных работ, в том числе три - в изданиях, рекомендованных ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста. Состоит из следующих разделов: общей характеристики работы, обзора литературы, двух глав результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 21 рисунком, в том числе 6 микрофотографиями, содержит 15 таблиц. Библиографический указатель включает 330 источников (206 - отечественных и 124 - иностранных).
