Введение к работе
Актуальность исследования
Лечение гнойно-воспалительных процессов мягких тканей является одной из важнейших проблем хирургии (Кузин М.И. с соавт., 1991; Глянцев С.П., Павлов В.В., 1998; Белоконев В.И., Измайлов Е.П., 2009; Оболенский В.Н., 2013). Постоянное внимание к этой проблеме объясняется увеличением гнойно–воспалительных заболеваний, тяжестью их течения, прогрессирующим возрастанием антибиотикоустойчивых и антибиотикозависимых штаммов микроорганизмов (Стручков В.И., 1987; Бубнова Н.А. с соавт., 1989; Светухин А.М. с соавт., 2004; Митиш В.А. с соавт., 2012; Нузов Б.Г. с соавт., 2012; Keztesz I. et al., 1983; Koseoglu H., 2006). Среди всех хирургических больных раневая инфекция встречается у 35 – 45% (Блатун Л.А., 2011).
Успех лечения больных с гнойной хирургической инфекцией во многом зависит от местного лечения (Егоров В.А., 2001; Бордуновский В.Н. с соавт., 2004; Ефименко Н.А. с соавт., 2004; Conley J., 2003). Применяемый в настоящее время большой арсенал методов и средств не всегда обеспечивает желаемый результат. Поэтому важен поиск новых методов и средств местного лечения, обладающих разносторонним воздействием, обеспечивающим антимикробный, противовоспалительный и репаративный эффект.
Таким требованиям обладает разработанный в ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации препарат милиацил - просяное масло (Miliacylum).
Решением номенклатурной комиссии ФГК МЗ и МП от 19 июля 1995 г. препарату утверждено название милиацил. Приказом Министерства здравоохранения и медицинской промышленности Российской Федерации № 292 от 27 октября 1995 г. данный лекарственный препарат разрешен для медицинского применения и промышленного выпуска. Милиацил внесен в реестр зарегистрированных лекарственных средств номер регистрационного удостоверения 95/292/7 от 27.10.1995 г.
Работами Л.Е. Олифсона с соавт. (1989), Б.Г. Нузова (1991), Б.Г. Нузова, А.А. Стадникова (1994) установлено, что лечебный эффект милиацила обусловлен наличием в нем ряда биологически активных соединений.
Однако не до конца изучены изменения в тканях гнойных ран при использовании милиацила в аспектах ультраструктурного и молекулярно-генетического анализа (апоптоз).
Одной из причин неблагоприятного течения инфекционных заболеваний считается инфицирование возбудителем, способным секретировать биологически активные вещества, инактивирующие защитные механизмы хозяина и оцениваемые, как факторы бактериальной персистенции (Бухарин О.В., 1999; Курлаев П.П., 2001). Антилактоферриновая активность микроорганизмов является фактором персистенции бактерий, способствующим выживанию в организме хозяина (Валышева И.В., 2005). Многие патогенные бактерии обладают механизмами, направленными на управление клеточной гибелью, что позволяет им поддерживать оптимальные условия развития инфекции (Зигангирова Н. А. с соавт., 2004).
В последние годы значительно повысился интерес исследователей к изучению роли и значения нонапептидов супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса в обеспечении процессов адаптации и компенсации нарушенных функций организма.
Динамика изменения состояния нервных клеток демонстрирует связь со стадиями раневого процесса и его длительностью (Алексеева Н.Т. с соавт., 2011). Установлено, что рассинхронизация фаз секреторного цикла клеточных элементов крупноклеточных ядер гипоталамуса у экспериментальных животных, подвергнутых воздействию дестабилизирующих факторов, включая ситуации с неблагоприятным течением раневых процессов, приводит к ограничению защитно-приспособительных реакций и лимитированию репаративных процессов тканей различного генеза. И если альтеративный аспект данной проблемы (в частности, патоморфология инфекционного процесса) хорошо изучен, то вопросы регенераторно-пластических изменений, происходящих в тканевых структурах эукариот при их взаимодействиях с прокариотами, в должной мере не обозначен. Особенно это касается исследований роли и адаптивного значения нонапептидергической гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы в регуляции этих взаимоотношений (Стадников А.А., Бухарин О.В., 2012). Все выше указанное и предопределило выбор темы и конкретных объектов настоящего диссертационного исследования, а также методические подходы к его осуществлению.
Цель исследования
Цель исследования экспериментально-морфологически обосновать клиническую эффективность местного применения милиацила в лечении гнойных ран, инфицированных бактериальными патогенами с различными персистентыми свойствами с учетом адаптивной роли гипоталамической нонапептидергической нейросекреции в репаративных гистогенезах в экспериментальных условиях.
Задачи исследования
1. Сравнить влияние различных методов консервативного местного лечения (милиацил, 1% раствор диоксидина и облепиховое масло) на заживление гнойных ран, инфицированных штаммами золотистого стафилококка (S.aurеus), как обладающих антилактоферриновой активностью (АЛфА+), так и без таковой (АЛфА-), в экспериментальных условиях.
2. Изучить особенности динамики гистологических изменений в тканях гнойных ран под влиянием указанных методов лечения в зависимости от персистентных свойств штаммов S.aureus с антилактоферриновой активностью (АЛфА+) и без таковой (АЛфА-).
3.Установить на экспериментальном материале иммуноцитохимическую идентификацию экспрессии проапоптотических белков р53, caspasе-3, антиапоптотического белка bcl-2, а также белка Ki-67 - маркера пролиферации, для оценки характера и выраженности репаративных гистогенезов.
4. Определить антилактоферриновую активность штаммов S.aureus для оценки течения раневого процесса.
5. Изучить морфофункциональные изменения в гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системе (супраоптические и паравентрикулярные ядра) при различных способах местного лечения гнойных ран, инфицированных штаммами S.aurеus с различными персистентными свойствами в экспериментальных условиях.
Научная новизна полученных результатов
Впервые проведена на экспериментальном материале иммуноцитохимическая идентификация экспрессии проапоптотических белков р53, caspasе-3, антиапоптотического белка bcl-2 и белка Ki-67 для установления характера течения и прогнозирования репаративных процессов в гнойных ранах.
На основе определения антилактоферриновой активности S.aurеus дана оценка течения раневого процесса.
Установлено, что местное применение милиацила оптимизирует фазы репаративных гистогенезов, оказывает выраженное противоапоптозное действие, приводит к быстрой элиминации патогенной микрофлоры, предотвращает повторное инфицирование ран.
Было изучено морфофункциональное состояние гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы при различных способах местного лечении гнойных ран, вызванных штаммами S.aureus с различными персистентыми свойствами, и показано влияние гипоталамических нонапептидов на репаративные гистогенезы.
Научно-практическая значимость работы
Полученные научные данные расширяют представления о позитивном влиянии милиацила на репаративные гистогенезы гнойных ран, которые могут быть использованы в качестве фундаментальной основы при разработке новых подходов к комплексному лечению пациентов с гнойно-воспалительными процессами.
Разработанный способ прогнозирования течения гнойно–воспалительных процессов мягких тканей на основе иммуноцитохимической идентификации экспрессии проапоптотических белков р53, caspasе-3, антиапоптотического белка bcl-2, а также белка Ki-67 открывает новые перспективы в хирургической практике.
Определение антилактоферриновой активности S.aureus дает возможность оценить течение раневого процесса.
Полученные научные данные расширяют представления о механизмах гипоталамической нейроэндокринной регуляции репаративных гистогенезов гнойных ран.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
1. Местное лечение гнойных ран милиацилом оптимизирует фазы репаративных гистогенезов, оказывает выраженное противоапоптозное действие, приводит к быстрой элиминации патогенной микрофлоры, и предотвращает повторное инфицирование ран.
2. Обоснован способ прогнозирования репаративных процессов в гнойных ранах на основе иммуноцитохимической идентификации экспрессии синтеза про- и антиапоптотических протеинов.
3. На основе определения антилактоферриновой активности микроорганизмов можно оценить течение раневого процесса.
4. Определено участие гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы как регулятора репаративных гистогенезов и выявлены изменения в ней при различных способах лечения гнойных ран, инфицированных S.aureus с различными персистентыми свойствами.
Внедрение результатов исследования
Результаты исследования используются в учебном процессе на кафедрах факультетской хирургии, гистологии, цитологии и эмбриологии ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации. Разработанный способ прогнозирования течения гнойно–воспалительных процессов мягких тканей на основе иммуноцитохимической идентификации экспрессии проапоптотических белков р53, caspasе -3, антиапоптотического белка bcl-2, а также белка Ki-67 может быт использован в хирургической практике. Для оценки течения раневого процесса можно использовать определение антилактоферриновой активности штаммов S.aurеus.
Апробация работы
Основные результаты исследований доложены и обсуждены на II Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Пироговские чтения» (Челябинск, 2012, работа отмечена дипломом); на ежегодной областной молодежной научно–практической конференции в секции «Медицина» (Оренбург, 2012, работа отмечена дипломом); на II региональном молодежном инновационном конвенте (Оренбург, 2012, работа отмечена дипломом); на VIII Международной (XVII Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2013); на II Всероссийской конференции студентов и молодых ученых в рамках «Дней молодежной медицинской науки ОрГМА», посвященной памяти чл. - корр. АМН СССР, профессора Ф.М. Лазаренко (Оренбург, 2013); на Всероссийской конференции с международным участием «Доклинические исследования в инновационной медицине и биотехнологиях» (Самара, 2013).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них 5- в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения и четырех глав (обзор литературы, материалы и методы исследования и двух глав собственных исследований), обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающий 215 источников, в том числе 165 работ отечественных и 50 – иностранных авторов. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 27 рисунками.
