Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 7
1.1. Воспалительные заболевания печени – гепатиты, причины возникновения, основные негативные изменения в организме 7
1.2. Биологически активные вещества гепатотропного действия 15
1.3. Формы выпуска биологически активных добавок к пище 23
1.4. Технология гранулирования в производстве биологически активных добавок к пище 24
1.4.1. Аппаратурное оформление методов влажного и горячего гранулирования 25
1.4.2. Физико-химические и механические аспекты образования гранул 29
1.5. Перспективы применения биологически активных добавок к пище в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при заболеваниях 34
1.6. Заключение по обзору литературы. Цели и задачи исследований 38
2. Организация эксперимента. Объекты и методы исследований 40
2.1. Определяемые параметры 40
2.2. Объекты исследований 43
2.3. Методы исследований 43
3. Медико-биологическое обоснование состава разрабатываемой БАД к пище. Подбор исходных компонентов. Определние формы выпуска 58
3.1. Обоснование выбора компонентов 58
3.2. Исследование спектра свободных аминокислот в плазме крови больных хроническими гепатитами 59
3.3. Определение суточной дозировки компонентов 63
3.4. Обоснование формы выпуска БАД 64
4. Исследование качественных характеристик полученного гранулята. Обоснование рациональных методов и режимов производства БАД . 65
4.1. Получение БАД методом влажной грануляции 65
4.2. Получение БАД методом горячей грануляции 70
4.3. Сравнительный гранулометрический анализ образцов 72
4.4. Определение насыпных характеристик гранулята 74
4.5. Определение сыпучести гранулята 75
4.6. Определение прочности гранул 75
4.7. Распадаемость гранул 76
4.8. Определение оптимальных режимов гранулирования методом математического моделирования 76
5. Изучение показателей окислительной порчи и микробиологической обсемененности в процессе производства и хранения разработанной БАД 88
5.1. Исследование окислительной порчи 88
5.2. Исследование микробиологических показателей 90
6. Разработка технологии производства и рекомендаций к применению БАД к пище для коррекции нарушений, происходящих при гепатитах 94
6.1. Технологическая схема производства БАД 94
6.2. Показатели качества и безопасности БАД 96
6.3. Рекомендации по применению БАД 97
7. Исследование терапевтической эффективности разработанной БАД 98
7.1. Исследование биохимических показателей сыворотки крови крыс 99
7.2. Исследование морфологических показателей печени и двенадцатиперстной кишки крыс 101
7.3. Исследование видового состава микрофлоры кишечника крыс 116
Выводы 126
Библиографический список 127
Приложения 143
- Биологически активные вещества гепатотропного действия
- Получение БАД методом влажной грануляции
- Исследование микробиологических показателей
- Исследование видового состава микрофлоры кишечника крыс
Введение к работе
Аісгуальность работы. Изучение вопросов, связанных с лечением и профилактикой заболеваний печени, имеет огромную социальную значимость. По статистике ВОЗ, среди причин нетрудоспособности и смертности существенное место занимают такие заболевания печени, как циррозы, печеночная недостаточность, гепатоциллюлярньш рак и др. Приводят к перечисленным серьезным патологическим состояниям в большинстве своем заболевания гепатитом различной этиологии (вирусный, лекарственный, алкогольный, аутоиммунный и др.). Важное значение имеют лечебно-профилактические мероприятия для коррекции заболеваний на ранних стадиях, чтобы не допустить хронизации патологического состояния и необратимых последствий.
Поддержание на постоянном уровне основных компонентов жизнедеятельности организма и обезвреживающая функция - два главных направления деятельности печени, тесно между собой связанных. Патологические изменения структуры печени, ее функций вследствие заболевания, вызывает серьезные нарушения метаболизма, иммунного статуса, детоксикации и антимикробной защиты всего организма.
Современные знания о негативных изменениях в организме, происходящих при заболеваниях печени представлены работами, основанными на многочисленных исследованиях отечественных и зарубежных ученых: Подымовой С.Д., Ивашкина В.И., Блохиной Н.П., Хазанова А.И., L.H. Blumgart, М. Feldman, СМ. Leevy, S. Sherlock, и др.
В последнее время в медицинской практике интенсивно развивается направление, связанное с применением биологически активных веществ (БАВ), их комплексов, в производстве биологически активных добавок (БАД) к пище или для обогащения пищевых продуктов лечебного и профилактического питания. БАВ способны влиять на определенные функции организма, оказывая выраженное лечебно-профилактическое действие. Выпускаемые в настоящее время пищевой и фармацевтической промышленностью БАД к пище гепатотропного действия не учитывают комплекс нарушений, происходящих в организме при воспалительных заболеваниях печени и в основном направлены на коррекцию отдельных механизмов развития и прогрессирования заболевания.
Теоретическое обоснование и практическая реализация технологии создания БАД к пище, предполагающей синергетическое воздействие входящих в нее компонентов на комплекс основных негативных механизмов протекания гепатитов, является актуальной задачей, как в России, так и во всем мире.
Научные представления и практические основы в применении БАВ для создания функциональных продуктов питания, БАД к пище заложены в трудах Покровского А.А., Б.А. Шендерова, Рогова И.А., Титова Е.И., Токаева Э.С., Пилат Т.Л., Тутельяна В.А., Богатырева А.Н., Волгарева М.Н., Певзнера М.И., Уголева А.М. и др.
Цель диссертационной работы. Цель настоящей работы состоит в разработке БАД к пище для больных с воспалительными заболеваниями печени (гепатитами) и технологии ее производства.
В соответствии с поставленной целью в работе решались следующие задачи:
1. Проанализировать, систематизировать, обобщить данные об основных
нарушениях в организме, происходящих при воспалительных заболеваниях
печени различного генеза и на их основе сформулировать медико-
биологические (МБ) и технологические рекомендации к разрабатываемой БАД
к пище.
-
Определить основные классы БАВ, положительно влияющих на функционирование органов и систем организма при воспалительных заболеваниях печени. Провести клиническое исследование аминокислотного спектра плазмы крови с целью определения места аминокислот с разветвленной боковой цепочкой (АРЦ) в проектировании композиции для больных с воспалительными заболеваниями печени. Сформулировать компонентный состав БАД.
-
Обосновать форму выпуска БАД и оценить применение методов гранулирования для получения готовой формы. Провести сравнительный анализ качественных характеристик образцов, полученных различными методами грануляции и с помощью методов математического моделирования определить рациональные технологические параметры производства.
4. Исследовать динамику изменения перекисного числа,
микробиологических показателей БАД в процессе производства и хранения.
Обосновать сроки годности.
5. Разработать технологию производства БАД к пище, рекомендации по
применению.
6. Оценить гепатопротекторную эффективность разрабатываемого
продукта на лабораторных животных. Исследовать изменение микробиценоза
кишечника при воспалительных заболеваниях печени.
7. Разработать проект научно-технической документации на продукт.
Научная новизна. Проанализированы и систематизированы данные об
основных нарушениях, происходящих в организме при воспалительных заболеваниях печени (гепатитах), сформулированы МБ и технологические рекомендации к разрабатываемой БАД к пище.
В результате клинического эксперимента получены данные об аминокислотном спектре плазмы крови больных хроническим гепатитом.
Установлено влияние количества добавляемой гранулирующей жидкости на качественные характеристики готовой формы БАД. С помощью методов математического моделирования определены рациональные режимы производства БАД к пище для коррекции нарушений, происходящих в организме при воспалительных заболеваниях печени.
Определено влияние процесса производства и хранения на содержание перекисных соединений в БАД.
Выявлены гепатопротекторные свойства разработанной БАД в результате исследований на лабораторных животных.
Обнаружены негативные изменения в составе микрофлоры кишечника при исследовании модели повреждения печени у крыс. Установлено, что применение БАД поддерживало количественное равновесие представителей всех исследуемых групп микроорганизмов.
Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований создана БАД к пище для больных с воспалительными заболеваниями печени (гепатитами), разработана технология ее производства. На основании проведенных клинических исследований предложены рекомендации по использованию АРЦ в качестве компонента специализированных продуктов и БАД к пище при гепатитах. Проведенные испытания разработанной БАД на лабораторных животных показали высокую его эффективность при алкогольном повреждении печени.
На разработанную БАД создан проект научно-технической документации.
Техническая новизна предложенных решений отражена в заявке на патент № 2007145176 (049494) от 06.12.2007 «Биологически активная композиция для лечения и профилактики заболеваний печени».
Апробация работы. Результаты диссертационной работы доложены и обсуждены в период 2004 - 2007 г.г. на Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2004), Восьмом Международном Конгрессе «Парентеральное и энтеральное питание» (Москва, 2004), Восьмом Международном семинаре-презентации инновационных научно-технических проектов «Биотехнология - 2005» (Пущино, 2005), Всероссийской научной молодежной конференции с международным участием «Основные направления функционального питания и безопасность пищевых продуктов» (Улан-Удэ, 2006), Международном форуме «Фундаментальные и прикладные проблемы питания» (Санкт-Петербург, 2007), Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2007), Одиннадцатом Международном Конгрессе «Парентеральное и энтеральное питание» (Москва, 2007).
Публикации. По результатам проведенных исследований опубликовано 11 печатных работ и подана одна заявка на патент.
Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы, содержащего/%?источников,^ приложений.
Основная часть работы изложена на J4JL страницах машинописного текста, содержите" таблиц,^ рисунков.
Биологически активные вещества гепатотропного действия
Сегодня существует большое количество лекарственных препаратов для фармакологической коррекции различных заболеваний печени в зависимости от этиологических факторов, особенностей патогенеза и клинических проявлений. Некоторые из них могут вызывать разного рода осложнения и аллергические реакции, что ограничивает их применение. В последнее время в медицинской практике интенсивно развивается направление, связанное с применением БАВ и их комплексов в биологически активных добавках (БАД) к пище или для обогащения пищевых продуктов, используемых в лечебном и профилактическом питании. Такими БАВ с выраженным гепатотропным действием являются аминокислоты и их производные (лейцин, изолейцин, валин, аргинин и др.); пептиды; витамины (аскорбиновая кислота, -токоферол, -липоевая кислота и др.); гликозиды и другие антиоксиданты; фосфолипиды; олигосахариды; нуклеиновые кислоты; макро- и микроэлементы (селен, цинк и др.); цитамины; органические кислоты; БАВ растительного происхождения (силимарин, кверцитин, глицирризин); лектины; пищевые волокна и др. [62, 112].
Аминокислоты и их производные. Основными аминокислотами и их производными, применяемыми для улучшения функционального состояния печени, являются: аминокислоты с разветвленной боковой цепочкой (АРЦ): валин, лейцин, изолейцин, аргинин, орнитин, аспартат, S-аденозилметионин [26].
Существует несколько аспектов применения АРЦ. Во-первых, на фоне серьезных патологических состояний, затрагивающих гепатобилиарную систему (цирроз, обширная резекция, трансплантация печени), снижается активность окисления основных субстратов - источников энергии. Это приводит к снижению их содержания в организме, поскольку необходимая для организма энергия лишь на 30-40% может удовлетворяться за счет окисления АРЦ в других органах и тканях, в частности, в их гладкомышечных клетках, а также в скелетных мышцах. При этом усиливается катаболизм белка и у больных резко уменьшается масса тела [4, 80]. С другой стороны, на фоне заболевания печени, которая является основным местом метаболизма ароматических аминокислот (ААК), в плазме крови увеличивается концентрация последних. ААК имеют схожую с АРЦ транспортную систему прохождения через гематоэнцефалический барьер. При нарушении соотношения указанных аминокислот увеличивается поток ААК, являющихся предшественниками ложных нейротрансмиттеров, в мозг, что приводит к угнетению центральной нервной системы и развитию печеночной энцефалопатии (теория ложных нейротрансмиттеров). При экзогенном введении АРЦ концентрация их в плазме крови увеличивается, одновременно снижается содержание ААК. Устранение дисбаланса АРЦ и ААК способствует улучшению состояния больных с симптомами печеночной энцефалопатии, а также предотвращает ее развитие. АРЦ способны увеличить синтез белка в мышцах и печени, сократить его катаболизм и тем самым уменьшить отрицательный азотистый баланс [43, 78, 110, 124]. Последние исследования свидетельствуют о способности лейцина активировать синтез фактора роста гепатоцитов, плейотропической субстанции, способствующей усилению митогенной активности. Указанная субстанция вырабатывается звездчатыми клетками (клетки Купфера), что подтверждает непосредственное влияние АРЦ на клетки печеночной ткани [106, 169].
Аргинин обладает большим защитным потенциалом при различных заболеваниях печени. Прежде всего, эта аминокислота играет ключевую роль в метаболизме азота, включаясь в цикл образования мочевины, который является одним из основных механизмов выведения аммиака из организма. Поэтому весьма важно использование аргинина при различных заболеваниях печени, сопровождающихся, как правило, снижением ее детоксикационной функции [4, 95, 181]. В частности, при вирусных гепатитах аргинин способствует укреплению иммунной системы организма, увеличивая число Т-лимфоцитов и их функциональную активность. Кроме Т-лимфоцитов - основного звена в развитии иммунного ответа, увеличивается число натуральных (NK) и лимфокин-активированных (LAK) киллеров - клеток, играющих огромную роль при иммунодепрессивных состояниях [172].
Так же, как аргинин, действуют орнитин и аспартат. Путем включения в цикл образования мочевины они усиливают детоксицирующую функцию печени.
Кроме этого, аспартат посредством синтеза глутамина способен связывать аммиак в органах и тканях организма, прежде всего в печени и мозге [143].
Применение S-аденозилметионина при печеночной патологии основано на снижении концентрации в плазме крови главного продукта деградации метионина - цистеина. Уменьшение суммарного пула цистеина усугубляет отрицательный азотистый баланс, снижает выработку глутатиона, препятствует протеканию реакций детоксикации. Последние, как известно, связаны с процессами трансметилирования, в которых S-аденозилметионин играет роль донора метильных групп. S-аденозилметионин метилирует не только белки, гистоны, биогенные амины, но и фосфолипиды мембран клетки, тем самым увеличивая их текучесть [4, 22, 130].
Фосфолипиды. Фосфолипиды являются главными липидными составляющими мембран клетки. Они выполняют в организме множество функций, основными из которых являются структурная, а также направленная на увеличение стимуляции активности различных ферментных систем, участие в процессах молекулярного транспорта, деления, созревания и дифференцирования клеток. Воздействие патогенных факторов (токсические вещества, вирусы, свободнорадикальные процессы и т.д.) на митохондриальные и цитоплазматические мембраны приводит к нарушению внутриклеточного метаболизма и гибели клеток [15, 64].
Среди всех фосфолипидов, содержащихся в печеночных клетках, наибольшее количество приходится на фосфатидилхолин. В настоящее время для восстановления мембран гепатоцитов применяют эссенциальные фосфолипиды (ЭФЛ), полученные с применением технологии высокой очистки из соевых бобов. Основным активным компонентом субстанции ЭФЛ является полиненасыщенный фосфатидилхолин - 1,2-дилиноленоилфосфатидилхолин. В организме на долю фосфатидилхолина подобного типа приходится около 1,3%, в остальных преобладают насыщенные и мононенасыщенные жирные кислоты [15, 112]. При экзогенном введении субстанции ЭФЛ последние встраиваются непосредственно в структуру мембран поврежденных гепатоцитов, увеличивая их текучесть, гибкость, что способствует активации мембранозависимых процессов обмена веществ в печени. Основными клиническими эффектами применения ЭФЛ являются: нормализация функций печени и ферментной активности гепатоцитов, уменьшение уровня энергетических затрат печени, восстановление и сохранение структуры органа и фосфолипидзависимых энзиматических систем, преобразование нейтральных жиров и холестерина в формы, облегчающие их метаболизм, стабилизация физико-химических свойств желчи, нормализация обмена липидов, белков и детоксикационной функции печени, замедление разрастания соединительной ткани в печени в случае развития цирроза органа [4, 15, 35, 64, 95, 111].
Витамины. Положительное влияние на организм при заболеваниях печени в основном оказывают витамины С (аскорбиновая кислота), Е (-токоферол) и N (-липоевая кислота - АЛК). Действие данных витаминов проявляется, как известно, в усилении антиоксидантного, антитоксического эффекта и повышении иммунитета организма.
Витамин С - мощный водорастворимый антиоксидант, действующий как внутри клеток организма, так и вне их. Как прекрасный источник электронов аскорбиновая кислота может отдавать электроны свободным радикалам, снижая их реактивность. Известна способность витамина С защищать другие антиоксиданты, в том числе и витамин Е, от окисления. Антитоксический эффект витамина С при заболеваниях печени заключается в стимулировании в организме (и прежде всего в печени) ферментных систем, ответственных за детоксикацию. Защищая иммунную систему организма, аскорбиновая кислота помогает бороться с инфекцией посредством стимулирования активности антител и клеток иммунной системы - лимфоцитов и макрофагов [4, 39, 105].
Действие витамина Е заключается в торможении и ингибировании процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и полиненасыщенных жирных кислот, входящих в состав мембран клетки. Взаимодействуя с фосфолипидами биологических мембран, витамин Е оказывает влияние на структуру печеночных клеток, поддерживая целостность и стабильность внутриклеточных мембран и оболочек гепатоцитов [4, 39].
Получение БАД методом влажной грануляции
Принципиальная схема проведения эксперимента:
1. формулирование композиции;
2. измельчение до оптимальных размеров и перемешивание сухих компонентов в ножевой мельнице;
3. грануляция на лабораторном грануляторе;
4. внесение гранулирующей жидкости (спиртового раствора фосфатидилхолина), отработка оптимального увлажнения сухих компонентов смеси;
5. сушка гранулята;
6. определение качественных характеристик гранул.
Исходя из суточных дозировок компонентов продукта сформулирована рецептура БАД (табл. 9).
Исходный размер частиц смеси влияет на качественные характеристики готового гранулята (прочность, насыпная плотность и др.), поэтому перед процессом грануляции сухие компоненты смеси измельчались и перемешивались на ножевой мельнице IKA A11basic (Retch, Германия) при скорости 19500 об/мин.
По данным исследований оптимальный размер частиц для влажной грануляции лежит в пределах от 20 до 80 мкм – при размерах частиц менее 10 мкм возникают сложности при увлажнении, процесс трудно контролировать, при размерах частиц более 100 мкм полученные гранулы имеют низкую прочность [100, 127, 137, 164, 168]. Размер частиц исходных компонентов для грануляции после измельчения контролировали с помощью системы анализа изображений Leitz Tass Plus (табл. 10).
Оптимальная степень увлажнения сухих компонентов смеси лежит в широких пределах и определяется экспериментально. Если увлажнителя мало – гранулы после сушки рассыпаются, если много – масса будет вязкой, липкой и трудно гранулируемой. Вследствие специфических технологических характеристик фосфатидилхолина, в качестве увлажнителя решено использовать спирт и вводить в смесь в виде спиртового раствора фосфатидилхолина различных концентраций, для определения оптимальной степени увлажнения [107, 113, 114, 121, 144, 151, 179].
Для определения оптимальной степени увлажнения готовили растворы различных концентраций и объемов. Т.к. процентное содержание фосфатидилхолина в смеси определено, раствор готовили с постоянным его содержанием по массе (табл.11). Грануляцию проводили на лабораторном смесителе-грануляторе Collette MicroGral при скорости импеллера 800 об/мин и скорости чоппера 1500 об/мин.
Контроль за грануляцией осуществляли по кривой потребления мощности (обобщенная зависимость представлена на рис. 13), которая характеризуется несколькими принципиальными фазами.
В фазе I происходит увлажнение смеси путем добавления гранулирующей жидкости. В этой фазе не наблюдается образование жидких мостиков между частицами и потребление мощности не изменяется. Во второй фазе начинается процесс образования гранул, образуются жидкие мостики между увлажняемыми частицами. Потребление мощности резко возрастает. Третья фаза характеризуется заполнением пустот между сухими частицами гранулирующей жидкостью, большая часть гранул сформирована. Потребление мощности на этой фазе растет незначительно. В четвертой фазе процесс образования гранул завершен, потребление мощности в дальнейшем не изменяется. Данная закономерность применима для диапазона увлажнителя (спирта) от 10 до 16 % масс. смеси. При большем увлажнении потребление мощности резко падает, т.к. вместо гранул образуется суспензия. Время гранулирования составляло 14,5 – 25 мин (табл. 12).
После окончания процесса грануляции влажный гранулят выгружали из установки и сушили слоем в 1 см при температуре 30-35С 2-3 часа в сушильном шкафу.
Исследование микробиологических показателей
Образцы хранились при комнатной температуре после выработки на 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330, 360, 390, 420, 450, 480, 510 сутки хранения. Образцы подвергали микробиологическим исследованиям на обязательные показатели, предусмотренные СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов».
Исследование микробиологической безопасности проводили по следующим параметрам с использованием соответствующих методов анализа:
1. Определение содержания КМАФАнМ (КОЕ/г) проводили по ГОСТ 10444.15-94 (норматив по СанПиН 2.3.2.1078 не более 5,0 х104 КОЕ/г).
2. Определение содержания бактерий группы кишечных палочек в 0,1 г продукта проводили по ГОСТ Р 50474-9З (норматив по СанПиН 2.3.2.1078-01 не допускается в 0,1 г).
3. Определение содержания E.coli в 1,0г продукта проводили по ГОСТ 30726-2001 (норматив в СанПиН 2.3.2.1078-01 не допускается в 1,0г).
4. Определение содержания сальмонелл проводили по ГОСТ Р 50480-9З (норматив по СанПиН 2.3.2.1078-01 не допускается в 10 г продукта).
5. Определение содержания дрожжей и плесневых грибов (КОЕ/г) как показателей, характеризующих стабильность в хранении, проводили по ГОСТ 10444.12-88 (норматив по СанПиН 2.3.2.1078-01 не более 100КОЕ/г ).
Пробы отбирались асептически, все анализы повторялись трижды.
Предположительные сроки годности: 15 месяцев.
В процессе хранения, при указанных выше температурах, образцы характеризовались полным благополучием и стабильностью по микробиологическим показателям безопасности вплоть до окончания исследований на 510-е сутки:
- для санитарно-показательных микроорганизмов (величина КМАФАнМ не превышала 5х102 КОЕ/г; в образцах ни разу не было обнаружено БГКП - в 0,1 г);
- для условно-патогенных микроорганизмов ( E.coli – не обнаруживались в 1,0 г);
- для патогенных микроорганизмов, (сальмонеллы не обнаружены в 10 г);
- для микроорганизмов порчи (во всех исследованных образцах не обнаружено плесневых грибов и дрожжей в 1,0 г).
Исследование видового состава микрофлоры кишечника крыс
Нормальная микрофлора является обязательным и полноправным участником многих физиологических процессов, протекающих в органах и тканях хозяина: пищеварения, выделения, дыхания, дифференцировки клеток, регуляции газового состава полостей и жидкостей, водно-солевого обмена, физико-химического гомеостаза, метаболизма углеводов, белков, липидов, стероидов, желчных кислот, детоксикации экзо- и эндогенных субстратов и метаболитов, продукции биологически активных соединений [12, 16, 38, 48, 60, 61, 142]. Многие заболевания сопровождаются синдромом дисбактериоза кишечника. Это проявляется в количественных изменениях соотношений микроорганизмов, относящихся к различным группам, и в качественных сдвигах популяций микроорганизмов, выделяемых из испражнений людей и животных [40, 41]. В связи с этим, проводились бактериологические исследования состава микрофлоры слепой кишки экспериментальных животных при алкогольном повреждении печени с целью выявления негативных изменений, а также эффективности разработанного БАД на количественные и качественные сдвиги нормофлоры. Изучение видового состава микрофлоры крыс проводили бактериологическим методом. Результаты средних значений количества клеток исследуемых микроорганизмов при изучении содержимого слепой кишки крыс контрольных и опытных групп, представлены на рисунках 45, 46, 48, 49, 52, 53, 54, 55.
Известно, что пусковая фаза серьезных нарушений дисбактериоза — ярко выраженный дефицит бифидобактерий и дисбаланс качественного и количественного состава кишечных палочек, который выражается в увеличении доли лактозонегативных или цитрат ассимилирующих вариантов. Лактобациллы ведут себя по-разному: их количество может соответствовать физиологической норме, может уменьшаться, а может просто снизиться их кислотообразующая активность. Все это препятствует нормальной деятельности микрофлоры, и, как следствие, в кишечнике начинают размножаться патогенные микроорганизмы — плазмокоагулирующие стафилококки, протеи и т.д. [17, 47, 50].
Выявлено, что после периода приема раствора этанола кишечная микрофлора крыс контрольной группы характеризовалась патологическим состоянием. Прежде всего, это проявлялось в снижении количества бифидобактерий, лактобактерий. Содержание бифидо- и лактобактерий составляло в среднем lg(6,75±0,5) и lg(6,427±0,5984), что на два три порядка ниже, чем у крыс здоровых и опытных групп (рис. 45 и 46). Бифидо- и лактофлора слепой кишки крыс опытной группы слабо реагировали на действия алкоголя. Хотя их средние значения количества клеток незначительно уступают с данными значениями у здоровых крыс, интервалы отклонения от этих значений полностью пересекаются в одном диапазоне. Результаты снижения количества молочнокислых микроорганизмов в слепой кишке крыс контрольной группы, по сравнению с их количеством у крыс опытной группы приведены на рисунке 47.
Содержание энтерококков (фекальные стрептококки) снизилось у крыс контрольной группы, а у опытной группы их количество соответствовало физиологической норме (рис. 48). Вероятно, снижение энтерококков связано с увеличением других аэробных представителей микробиоценоза, в частности резким увеличением энтеробактерий. Стафилококковая флора не реагировала на действие алкоголя (рис. 49). Более того, в микрофлоре слепой кишки крыс не обнаруживались плазмокоагулирующие и гемолитические стафилококки, а только их сапрофитные формы.
После 22 дня у крыс контрольной группы увеличивалось количество энтеробактерий, цитрат ассимилирующих, гемолитических бактерий и клостридий (рис. 52, 53, 54, 55). Следует отметить, что качественные изменения микрофлоры при дисбактериозах характеризуются появлением микроорганизмов с измененными биологическими свойствами. Дисбаланс качественного и количественного состава энтеробактерий выражался в увеличении доли лактозонегативных или цитрат ассимилирующих вариантов (60-70% от общего числа), т.е. полноценные бактерии группы кишечной палочки замещались бактериями родов Klebsiella, Citrobacter, Proteus и т.д (остаточная флора) (рис. 50). У крыс опытной группы количество энтеробактерий не увеличивалось, а остаточная флора обнаруживалась в незначительных количествах (6-10%). Таким образом, результаты бактериологических исследований показали, что введение раствора этанола крысам в течение 22 дней привело к явному негативному сдвигу качественных и количественных показателей микрофлоры кишечника у контрольной группы, также отмечено корригирующее действие исследуемой БАД на микробиоценоз слепой кишки животных, что заключается в поддержании количественного равновесия представителей всех исследуемых групп микроорганизмов, а, прежде всего, содержания лакто- и бифидобактерий.
Основываясь на результатах биохимических, морфологических и бактериологических исследованиях можно сделать вывод о высокой гепатопротекторной, цитопротекторной и пребиотической эффективности исследуемой БАД на фоне создания модели алкогольного повреждения печени у крыс.
