Введение к работе
Многие лекарственные вещества являются белковыми соединениями. Ввиду? сложности структуры белковой молекулы их пока невозможно получить химическим синтезом. На первом этапе такие белки получали из человеческих источников, таких как кровь (фактор свертываемости крови и другие белки крови) или гипофиз (человеческий гормон роста). Вследствие дороговизны и трудности получения человеческих тканей, эти белки могут производиться в малых количествах и к тому же могут оказаться переносчиками вирусов, таких как вирус гепатита н другие. На втором этапе, с развитием молекулярной генетики, были созданы так называемые рскомбинантные микроорганизмы, которые выращивают в специальных биореакторах и способны производить ценные фармакологические вещества, такие как инсулин, кровесвертывающие факторы (против гемофилии), человеческий гормон роста.
В последние годы появилась возможность использования животных как живых биореакторов со способностью продуцировать ценные лекарственные белки, например, антитромбин -III (Meade at al. 1997), ИГФ - I (Brcni et al:, 1994), протеин С (Velander et al., 1992) и биологически активные вещества для перерабатывающей промышленности, как химозин (Эрнст и др. 1997, Прокофьев М.И., Юткин Е, В. 1999). Стратегия в использовании животных как биорсакгоров состоит в том, что с помощью трансгенной технологии можно снабдить клетки животного генами, которые у них в норме отсутствуют и в этом случае вызвать у них синтез лекарственных белков, которые они в норме не производят. С этой целью в ядро зародыша на стадии зиготы вводят чужеродный ген, который в последующем обеспечивает выработку определенного белка и регулирует его выделение с молоком.
Ввиду того, что от животных может быть получено большое количество молока, не. причиняя животному неудобств, этот метод означает огромный прогресс в получении ценных фармакологических веществ.
Выбор животного для трансгенеза определяется, прежде всего, потребностью планируемого продукта на мировом рынке и сроками, требуемыми для производства трансгенкых животных, чтобы удовлетворить потребность рынка.
В наших экспериментах для получения у - интерферона были выбраны кролики, так как потребность в этом препарате не высокая, а короткие сроки получения лактирующих гутяипр гти^довлетвореиия
\ ЦЕНТР. - у vTTq
потребности в этом продукте составляют 7-8 месяцев, тогда как на крупном рогатом скоте 40 и более месяцев.
Совершенствование эффективности трансгенеза у кроликов. Получение трансгенных кроликов, продуцирующих с молоком у -интерферон.
ЇАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
-
Разработка наиболее эффективного способа вызывания сулеровуляцни у кроликов,
-
Изучение возраста доноров, способов извлечения эмбрионов и схем гормональных обработок иа эффективность выхода эмбрионов.
-
Выявление оптимальных сроков получения зигот кроликов после обработки ХГ.
4. : Влияние микроинъекцин гена в зиготы на выживаемость в
процессе беременности.
5. Получение трансгенных кроликов после пересадки
микроинъецированных зигот реципиенту и изучение экспрессии гена у
трансгенных кроликов.
Выявлены наиболее эффективные типы и дозы препаратов СЖК
для вызывания суперовуляции у кроликов. Установлен оптимальный
возраст кроликов - доноров для получения наибольшего числа зигот.
Показано, что 4-х кратная гормональная обработка и хирургическое
извлечение зигот у одного и того же кролика повышает число
овуляций в 5,4 раза по сравнению с одной спонтанной овуляцией и в
3 раза по сравнению с одной гормонально вызванной овуляцией.
' Продемонстрирована возможность повышения суперовуляции у
крольчих после предварительной обработки аналогом
простаглакдина. Определены оптимальные сроки извлечения зигот
для микроинъекции гена после обработки ХГ. Показано негативное
влияние микроинъекции гена на развитие эмбриона в организме
самки. Впервые получены трансгенные кролики, продуцирующие с
молоком у - интерферон. ='--..
Показано, что наиболее эффективным препаратом СЖК для вызывания суперовуляции у кроликов является Сергон, а возраст самок не менее 4-х месяцев. Применение техники 2-3-х кратного извлечения зигот по сравнению с убоем более чем в 2 раза повышает выход зигот на одного кролика и почти вдвое сокращает величину затрат на их получение. Наблюдалось повышение эффективности вызывания суперовуляции у кроликов после предварительной
обработки аналогом простагландини. Продемонстрирована новая
техника получения у - интерферона с молоком трансгенных
кроликов. ' ;
Материалы диссертации были представлены на третьей
международной конференции "Актуальные проблемы биологии в
животноводстве" (ВНИИФБиП с-х животных,,Боровск 2000),и на
международной научной конференции "Актуальные проблемы ДНК-
технологий и клеточной инженерии сельскохозяйственных
животных" <ВИЖ, Дубровицы 2001). ; ,,
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов
и методов исследования, результатов собственных исследований,
обсуждения, выводов, практических предложений, списка
литературы. Объём диссертации $4 страницы машинописи, включая
20 таблиц н 1 рисунок. Список литературы включает 190
публикаций, из них 177 на иностранных языках. . L..
Похожие диссертации на Разработка технологии получения трансгенных кроликов, продуцирующих с молоком -интерферон
