Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя Курчева, Светлана Александровна

Разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя
<
Разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя Разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя Разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя Разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя Разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя
>

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Курчева, Светлана Александровна. Разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.01.06, 03.02.03 / Курчева Светлана Александровна; [Место защиты: Ставроп. науч.-исслед. противочумный ин-т].- Ставрополь, 2011.- 187 с.: ил. РГБ ОД, 61 11-3/1172

Введение к работе

Актуальность проблемы. Туляремия – природно-очаговая инфекция, относящаяся к особо опасным инфекционным болезням, крупные вспышки и спорадические случаи которой периодически регистрируются во многих странах мира, в том числе в России (Никифоров В.В., Кареткина Г.Н., 2007; Splettsfoesser W.D., Tomaso H., Al Dahouk S. et al., 2005).

Природные очаги туляремии отличаются длительностью существования, стойкостью и способностью проявлять активность через много лет эпизоотического и эпидемиологического спокойствия. Особенностью эпидемиологии туляремии является большое разнообразие источников, носителей, переносчиков, факторов передачи возбудителей, механизмов заражения, входных ворот инфекции (Олсуфьев Н.Г., 1975; Новиков Н.Л., Попов В.П., Жуков В.И. с соавт., 2003; Онищенко Г.Г., Дроздов И.Г., Федоров Ю.М. с соавт., 2003; Онищенко Г.Г., 2006; Онищенко Г.Г., Смоленский В.Ю., 2009 и др.). Возбудитель туляремии обладает высокой экологической пластичностью и вследствие этого высокой устойчивостью в объектах окружающей среды, а по своим биологическим свойствам отнесен к высшей категории «А» среди наиболее опасных патогенных микроорганизмов – потенциальных агентов биологического оружия (Мещерякова И.С., Демидова Т.Н., Горшенко В.В., 2007; Романова Л.Н., 2008).

Диагностика туляремии складывается из индикации и идентификации возбудителя или его специфических антигенов и определения сывороточных антител у человека и восприимчивых животных, при этом, как правило, на практике предпочтение отдается иммунодиагностике, характеризующейся экспрессностью, высокой специфичностью и чувствительностью. К настоящему времени для диагностики туляремии отечественными и зарубежными учеными предложено значительное количество эффективных иммунодиагностических тестов. Однако большая их часть – экспериментальные разработки (Сырова Н.А., Терешкина Н.Е., Девдариани З.Л., 2008).

В связи со сказанным, исследования, направленные на совершенствование и разработку туляремийных иммунодиагностикумов, налаживание производственного выпуска сертифицированных препаратов, не утрачивают своей актуальности.

Цель исследования – разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для идентификации Francisella (F.) tularensis и лабораторной диагностики туляремии.

Основные задачи исследования:

  1. Осуществить подбор штаммов F. tularensis для получения специфических антигенов (водорастворимый белковый комплекс и липополисахарид (ЛПС)).

  2. Получить специфические, высокоактивные гипериммунные сыворотки при различных схемах иммунизации кроликов-продуцентов и выделить из них иммуноглобулины класса G (IgG).

  3. Разработать производственную биотехнологию получения эритроцитарных туляремийных диагностикумов (иммуноглобулинового и антигенного) и разработать стандартный образец (СО) ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора сыворотки диагностической туляремийной.

  4. Получить флуоресцирующие иммуноглобулины для идентификации возбудителя туляремии в реакции иммунофлуоресценции (РИФ) и иммунопероксидазные конъюгаты для выявления F. tularensis и сывороточных антител против возбудителя туляремии в иммуноферментном анализе (ИФА).

  5. Разработать иммуномагнитные сорбенты (МИС) для мониторинга возбудителя туляремии в объектах окружающей среды.

  6. Провести лабораторные и полевые испытания разработанных медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП), определить их диагностическую ценность.

Научная новизна работы. Разработанные методические подходы и приемы по извлечению антигенного материала, получению иммунных сывороток и выделению иммуноглобулинов, оптимизация параметров конъюгации лигандов и маркеров, лигандов и твердофазных носителей позволяют унифицировать биотехнологию производства МИБП для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя: диагностикумов эритроцитарных, тест-систем иммуноферментных, иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих, тест-системы диагностической магноиммуносорбентной. Для мониторинга открытых водоемов на наличие возбудителя туляремии с применением МИС сконструировано техническое устройство «Аквадиамаг», на которое получен патент РФ на полезную модель № 64784 от 10.07.2007 г. «Установка для микробиологического мониторинга объектов водной среды».

Теоретическая и практическая значимость работы. Проведенные исследования по конструированию иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и детекции ее возбудителя, базирующиеся на особенностях антигенной структуры туляремийного микроба и иммунного ответа животных при инъецировании его антигенов, свойствах матриц биотической и абиотической природы, позволили составить алгоритм микробиологических и биотехнологических манипуляций процесса производства и контроля различных туляремийных диагностических препаратов.

Разработаны производственные биотехнологии ряда МИБП для идентификации F. tularensis и диагностики туляремии, стабильно отвечающие требованиям, предъявляемым к диагностическим и индикационным препаратам. На все разработанные МИБП составлена нормативная документация: промышленный регламент (ПР) № 1879-07 и фармакопейная статья предприятия (ФСП) № 9168-08 на диагностикум эритроцитарный туляремийный антигенный жидкий; ПР № 1313-03 и ФСП № 9169-08 на диагностикум эритроцитарный туляремийный иммуноглобулиновый жидкий; получены регистрационные удостоверения от Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития № ФСР 2011/10270 от 05.03.2011 г. и № ФСР 2011/10271 от 05.03.2011 г., соответственно; пусковой регламент (ПУР) № 01897080-07-09 и Технические условия (ТУ) 9388-010-018978-2009 на Набор реагентов тест-системы диагностической для выявления возбудителя туляремии в иммуноферментном анализе (протокол № 7 от 09.06.2009 г. заседания Ученого совета ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора), № ФСР 2010/06744 от 05.02.2010 г.; СО № 001-9389-2008 ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора сыворотки диагностической туляремийной адсорбированной сухой (одобрен Ученым советом и утвержден директором института, протокол № 4 от 16.04.2009 г.); ПУР № 01897080-10-10 и ТУ 9389-017-01897080-2010 на иммуноглобулины диагностические туляремийные флуоресцирующие (протокол № 6 от 28.05.2010 г. заседания Ученого совета ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора); ПУР № 01897080-04-09 и ТУ 9388-006-17897080-2009 на тест-систему диагностическую магноиммуносорбентную для выявления возбудителя туляремии в иммуноферментном анализе (протокол № 4 от 16.04.2009 г. заседания Ученого совета ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора).

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. Разработанные биотехнологии обеспечивают получение высококачественного биологического сырья, пригодного для производства туляремийных МИБП.

  2. Сконструированные эритроцитарные, иммуноферментные, иммунофлуоресцентные, магноиммуносорбентные туляремийные диагностикумы отвечают требованиям, предъявляемым к диагностическим и индикационным препаратам.

  3. Лабораторные и полевые испытания разработанных туляремийных МИБП демонстрируют их высокую чувствительность, специфичность, соответствие нормативной документации, что позволяет наладить производство сертифицированных препаратов.

Апробация работы. Результаты диссертации доложены, обсуждены, опубликованы в материалах Всероссийской научной конференции, посвященной 210-й годовщине Военно-медицинской академии «Теоретические основы эпидемиологии. Современные эпидемиологические и профилактические аспекты инфекционных и массовых неинфекционных заболеваний» (Санкт-Петербург, 2008); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 80-летию со дня основания ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России» «Диагностика, лечение и профилактика опасных и особо опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология» (Киров, 2008); X Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ «Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ» (Ставрополь, 2010); III научно-практической школы-конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора «Современные технологии обеспечения биологической безопасности» (Оболенск, 2011).

Апробация диссертации состоялась 6 апреля 2011 г. на расширенном заседании научно-производственной лаборатории препаратов для диагностики особо опасных и других инфекций ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена самостоятельно. Отдельные этапы работы были выполнены совместно с д.б.н. Жарниковой И.В., к.б.н. Ждановой Е.В., д.м.н. Зайцевым А.А.

Публикации. Основное содержание диссертации, выполненной в рамках НИР (№№ Госрегистрации 01.2008 02135; 01.2009 52158; 01.2009 52157) и федеральной целевой программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009-2013 гг.)», контракт №117-Д от 11.08.2009 г., отражено в 11 научных работах, две из которых опубликованы в журналах, рекомендуемых «Перечнем ВАК».

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 187 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, шести глав собственных исследований, заключения, выводов, приложения; иллюстрирована 28 таблицами и 27 рисунками. Список литературы включает 288 источников, из них 181 - отечественных и 107 - зарубежных.

Похожие диссертации на Разработка биотехнологии производства иммунобиологических препаратов для диагностики туляремии и индикации ее возбудителя