Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Современные представления о клеточном составе и межклеточных взаимоотношениях в щитовидной железе 11
1.2. Полиэтиологичность и вклад токсического компонента в патологию щитовидной железы 22
1.3. Патоморфология щитовидной железы в условиях хронической интоксикации 30
Глава 2. Материал и методы исследования 38
2.1. Методы моделирования и верификации хронического эндотоксикоза 3 8
2.2. Гистологические методы исследования и верификация хронического эндотоксикоза 45
2.3. Метод электронно-микроскопического исследования щитовидной железы 49
2.4. Иммуногистохимические методы исследования 50
2.5. Определение профиля гормонов гипафизарно- тиреоидной системы методом иммуноферментного анализа 51
2.6. Методы морфометрии и математической обработки
данных 52
Глава 3. Структурно-функциональные изменения в щитовидной железе при хронической эндогенной интоксикации 57
3.1. Патоморфология щитовидной железы при хроническом эндотоксикозе с преимущественным поражением печени 57
3.2. Патоморфология щитовидной железы при хроническом эндотоксикозе с преимущественным поражением почек 66
3.3. Экспрессия маркеров ФНО-зависимого апоптоза в щитовидной железе при хроническом эндотоксикозе 70
3.3.1. Иммуногистохимическая характеристика экспрессии TRAIL-лиганда 70
3.3.2. Иммуногистохимическая характеристика экспрессии каспазы 3 73
3.4. Иммуноферментный анализ профиля тиреоидных гормонов при хроническом эндотоксикозе 76
Обсуждение полученных результатов 86
Выводы 95
Литература
- Полиэтиологичность и вклад токсического компонента в патологию щитовидной железы
- Гистологические методы исследования и верификация хронического эндотоксикоза
- Определение профиля гормонов гипафизарно- тиреоидной системы методом иммуноферментного анализа
- Патоморфология щитовидной железы при хроническом эндотоксикозе с преимущественным поражением почек
Введение к работе
Актуальность.
В настоящее время возрастает интерес к изучению механизмов повреждения и структурной перестройке органов эндокринной системы, вызванных различными патологическими агентами - физическими, химическими, лекарственными факторами [Заратьянц О.В., 2002; Павлова Т.В., 2004; Базе-люк Л.Т., 2006; Филин А.А., Даниленко В.И., 2006; Мозеров С.А. с соавт., 2007; Boelen A. et al., 2004; Kajantie Е. et al., 2006; Carr D.L. et al., 2008].
Значительное количество заболеваний в клинической практике сопровождается интоксикационным синдромом, не всегда имеющим манифестное течение. Течение хронической интоксикации при тяжелых формах соматической патологии приводит к нейроиммуноэндокринной дизрегуляции, механизмы развития которой остаются не до конца ясными [Евсеев В.А. с соавт., 2001; Акмаев И.Г., Гриневич В.В., 2003; Крыжановский Г.Н., 2004; Калашникова С.А. с соавт., 2007; Panciera D.L. et al., 2003; Tani Y. et al., 2004; Mosiienko H.P., 2007; Oertel Y.C., 2008].
Известно, что щитовидная железа является своеобразным «маркером» экзогенных воздействий (радиоактивное излучение, химические агенты и т.д.). Большинство литературных источников указывают, что в условиях длительного воздействия токсических факторов происходит формирование субклинического гипотиреоза, его частота в популяции достигает 10-12% [Абрамова Н.А., Фадеев В.В., 2005; Бронников В.И. с соавт., 2005; Crump K.S. et al., 2005; Cooper D.S., 2007; Langer P. et al., 2007]. Ряд других токсических воздействий на щитовидную железу сопровождается развитием гипертиреоза [Заратьянц О.В., 2004; Serdiuk S.E. et al., 2005].
Клинически значимая хроническая эндогенная интоксикация чаще всего развивается при патологии, сопровождающейся дефицитом функции органов детоксикации и удаления токсинов - печени и почек. Прогрессирование их недостаточности сопровождается нарастанием концентрации эндотокси-
ческих соединений в крови [Мишнев О.Д., Щеголев А.И., 2003, 2006; Ново-чадов В.В., Писарев В.Б., 2005; Чеснокова Н.П., 2006; Gibbins I.L., 2003; Яковлев М.Ю., 2006]. Эндогенная интоксикация сопровождается иммунологическим сдвигами [Дедов И.И., 2002; Ayala A. et al., 2003], параллельно возникают дисметаболические проявления с развитием гиперхолестеринемии и гипертонии, что способствует возникновению патологии сердца, особенно у пожилых [Заратьянц О.В., 2004; Лунькова Л.К. с соавт., 2006; Кактурский Л.В., 2006; Hak А.Е. et al., 2000; Langer Pi et al., 2006; Wilson S. et al., 2006].
В отдельных работах показано, что при эндогенной интоксикации происходят нарушения структуры и функции.щитовидной железы. Однако полученные данные единичны и противоречивы. [Тупикина- Е.Б. с соавт., 2000; Доломатов СИ:" соавт., 2005; Пальцев М.А., Кветной И.М., 2006; Costamagna-Е. et al., 2006; Chang S.C. et al., 2008].
Гибель тиреоцитов в условиях хронической интоксикации- обеспечивается не только прямым воздействием эндотоксических соединений;, но'и опосредованной активацией апоптотического каскада, запускаемого под воздействием цитокинов, где ведущая роль принадлежит ФНО-а. Рядом исследователей подтверждается, что тиреоциты устойчивы к TRAIL-индуцированному апоптозу [Андросова Д.С. с соавт., 2007; Taddei S. et al., 2006].
Таким образом, весьма актуальным является определение характера, возможных механизмов и морфологических результатов воздействия хронической эндогенной интоксикации на щитовидную железу.
Цель работы — выявить основные закономерности морфофункцио-нальной перестройки щитовидной железы при хроническом эндотоксикозе.
Задачи исследования.
Изучить на светооптическом уровне морфофункциональные изменения в щитовидной железе в динамике хронического эндотоксикоза у крыс.
Охарактеризовать ультраструктурные изменения фолликулярных тиреоцитов при хроническом эндотоксикозе.
Изучить экспрессию маркеров ФНО-зависимого апоптоза (лиганда TRAIL и каспазы 3) в тиреоцитах при эндотоксикозе в зависимости от его выраженности и продолжительности.
Определить в сыворотке крови уровень тиреоидных (трийодтирони-на и тироксина) и тиреотропного гормонов и сопоставить его с патоморфоло-гическими изменениями в щитовидной железе в условиях хронического эндотоксикоза.
Научная новизна.
При исследовании щитовидной железы крыс в условиях хронического эндотоксикоза (модели с преимущественным поражением печени и почек) было< выявлено; что развитие хронической эндогенной интоксикации сопровождается комплексом сосудистых реакций, повреждением и гибелью части фолликулярных тиреоцитов с заместительной пролиферацией стромы, сохранившихся фолликулярных, а также интерфолликулярных тиреоцитов. Показано, что соотношение этих процессов зависит от характера эндогенной интоксикации (выбранной модели) и ее длительности.
На основании данных радиальной морфометрии тиреоцитов было выделено 4 типа клеток по характеру распределения оптической плотности цитоплазмы, соотношения между этими типами тиреоцитов у интактных животных и в динамике хронического эндотоксикоза5 сопоставлены с основными гистологическими изменениями.
В результате иммуногистохимического исследования маркеров ФНО-зависимого апоптоза (ФНО-зависимого лиганда - TRAIL, ключевого фермента апоптоза - каспазы 3), установлено, что одним из механизмов гибели эндокриноцитов является повышение чувствительности и запуск апоптоза за счет гиперэкспрессии TRAIL на мембране фолликулярных тиреоцитов.
Исследование гормонального профиля тироксина, трийодтиронина, тиреотропного гормона в крови, гомогенатах ткани щитовидной железы, а также тиреоглобулина в сопоставлении с морфологическими изменениями в
8 щитовидной железе позволило охарактеризовать тиреоидную дизрегуляцию при хроническом эндотоксикозе как субкомпенсированный гипертиреоз (30-60 сутки) с последующим выходом в эутиреоидную фазу, но при полной утрате центральных механизмов регуляции.
Выявлены наиболее значимые корреляционные связи между показателями эндогенной интоксикации, концентрацией гормонов в сыворотке крови и показателями морфометрии щитовидной железы, в связи с чем показана неоднородность участия отдельных эндогенных токсических соединений в опосредовании патологии щитовидной железы при изучаемом процессе.
Научно-практическая значимость.
Полученные данные расширяют современные представления о хроническом эндотоксикозе с позиций вовлечения в его развитие механизмов ти-реоидной дисфункции. Они мотивируют врачей клинической практики на поиск скрытой патологии,щитовидной'железы у лиц с хроническими заболеваниями, сопровождающимися эндогенной интоксикацией. С другой стороны, на основании работы обосновывается поиск хронической эндогенной интоксикации в случаях неясной патологии щитовидной железы, как возможной причины заболевания.
Использование материалов работы в преподавании физиологии, патофизиологии, патологической анатомии и эндокринологии в высших учебных4 заведениях позволяет повысить качество подготовки современного врача.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Морфологические изменения в ткани щитовидной железы при-хроническом эндотоксикозе представляют собой совокупность сосудистых реакций, последствий гибели фолликулярного эпителия и компенсаторной перестройки в виде пролиферации стромы, интерфолликулярного и сохранившегося фолликулярного эпителия.
Изменения гормонального статуса и строения щитовидной железы при хроническом эндотоксикозе находятся во* взаимосвязи с длительностью процесса и концентрацией отдельных эндогенных токсических соединений.
При хроническом эндотоксикозе утрачивается взаимосвязь между количественными характеристиками строения щитовидной железы, ее гормональным статусом и уровнем тиреотропного гормона. .
Апробация работы и публикации.
Основные результаты исследования» докладывались и обсуждались на X и XI региональных:конференциях молодых исследователей Волгоградской области* (Волгоград, 2005, 2006); Всероссийском'симпозиуме «Эндотоксикоз: природа, диагностика- и принципы коррекции» (Волгоград, '2005); II Всерос-: сийской конференции «Клинико-морфологические аспекты эндокринопатий» (Белгород,; 2006); конференции' с международным участием? «Современные проблемы; клинической: и; экспериментальной: морфологии» (Тверь, 2006); Российской научной конференции с международным- участием: «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (Курск, 2006); VII общероссийской конференции с международным участием «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Москва, 2006); II съезде Российского об-ва патологоанатомов; (Москва, 2006); ИЗ Всероссийской конференции; с международным участием «Новые информационные- технологии в медицине» (Волгоград, 2007); международной;конференции «Структурные преобразования; органов и тканей^в норме и.при*воздействии- антропогенных факторов» (Астрахань, 2007). Апробация работы осуществлена на расширенном заседании: сотрудников кафедры, патологической анатомии Волгоградского государственного медицинского университета и отдела общей и экспериментальной патологии Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области и 23 декабря 2007 года.
10 По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 1 статья в журнале «Бюллетень экспериментальной биологии и медицины» действующего «Перечня ... ВАК».
Внедрение результатов работы.
Материалы диссертации внедрены в учебный процесс кафедр патологической анатомии и судебной медицины Волгоградского государственного медицинского университета. Практические рекомендации используются в работе ГУ «Волгоградского научного центра» РАМН и администрации Волгоградской области, Волгоградского областного патолого-анатомического бюро, МУЗ «ЦРБ Алексеевского муниципального района» и МУЗ «ЦРБ Су-ровикинского муниципального района» Волгоградской области.
Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста, содержит 16 таблиц, иллюстрирована 15 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка использованной литературы. Список литературы содержит 194 источника (88 на русском и 106 - на иностранных языках).
Полиэтиологичность и вклад токсического компонента в патологию щитовидной железы
Рост заболеваемости ЩЖ во многом обусловлен процессами урбанизации, развитием промышленности, ухудшением экологической обстановки, радиационной загрязненностью, появлением так называемых болезней «цивилизации», связанных с изменением образа жизни, а, следовательно, включающего питание, гиподинамию, увеличение числа вредных привычек и т.д [Авдеенко Ю.Л. с соавт., 2001; Дедов И.И. с соавт., 2004; Малиевский О.А., 2006; Manji N. et al., 2006; Radetti G. et al., 2007].
Многими исследователями указывается на мультифакториальность развития патологии ЩЖ. Тиреоидный гомеостаз обеспечивается многими факторами, и сбой хотя бы в одном из них, приводит к нарушению процессов регуляции и функционирования ЩЖ. Из экзогенных причин, стоящих на первом месте и связанных нередко с алиментарным фактором и/или особен ностью географического расположения остается патология, связанная с не достаточностью йода. Эндемические районы, которыми является Волгоград и
Волгоградская область, выходят на первое место по заболеваемости ЩЖ по сравнению со всей эндокринной патологией в данном регионе. В целом же по России заболевания ЩЖ находятся на втором месте среди всех эндокринопа-тий, уступая место только сахарному диабету [Фадеев В.В., Абрамова Н.А., 2004; ШирмановаЕ.В. с соавт., 2006; Tijn D. A. et al., 2007].
В связи со сложившейся ситуацией, возросла частота послеоперационного или ятрогенного гипотиреоза, являющегося следствием хирургического лечения заболеваний ЩЖ. Интересно отметить, что у детей, матери которых не имели клинических проявлений заболеваний ЩЖ, но проживали в местности эндемичной по йододефициту, тиреоидной патологии выявлено не было [Хмельницкий O.K., Иванова А.Ю., 2001]
Однако не только недостаточность йода приводит к развитию тиреоидной патологии, но и дефицит таких микроэлементов как цинк, марганец, селен, молибден и медь, что обусловлено тесным участием их в активных центрах ферментов йодного обмена. Цинк и марганец влияет на выработку гормонов ЩЖ, селен входит в состав фермента дейодиназы, способствуя отщеплению от Т4 молекулы йода, превращая его в ТЗ, медь влияет на синтез Т4 и половых гормонов. При сочетанном дефиците селена и йода заболевания ЩЖ не поддаются лечению йодосодержащими препаратами [Фадеев В.В., 2004; Косьянова Н.А., Свириденко Н.Ю., 2006; Toft А., 2001].
Помимо этого постоянно используемые в быту прямые антагонисты йода способствуют возникновению тиреоидной патологии. Так, например, хлорирование воды приводит к дефициту йода, применение зубной пасты с фтором - повышает экскрецию йода с мочой, блокирует дейодиназу и, соответственно, перевод Т4 в ТЗ [Балаболкин М.И.,2005].
Отдельное место занимает патология, такая как опухолевые поражения ЩЖ и гипофиза, сопровождающиеся повышенной продукцией ТТГ, аутоиммунные заболевания.
Этиология данных патологических состояний остается до конца не изученной и, нередко, связана с проблемами классификации тиреоидной патологии. Так, например, в советское время активно велась профилактика йо-додефицитных состояний и было объявлено о полной ликвидации заболеваний обусловленных недостаточностью йода. Все выявляемые заболевания, связанные с недостаточностью йода, были отнесены в группу аутоиммунной патологии. В настоящее время проблемы классификации остаются до конца не решенными, что находит свое отражение в научных публикациях за период 2000-2007 гг. как со стороны отечественных, так и со стороны зарубежных авторов. Предложены различные принципы классификации тиреоидной патологии, основанные на этиологических, патогенетических принципах, в зависимости от функциональной активности, по морфологическим критериям и т.д. Однако универсальной, объединяющей, отвечающим всем критериям, помогающим точной диагностике и правильной постановке диагноза, классификации в настоящее время не существует [Дедов И.И. с соавт., 2001; Касаткина Э.П. с соавт., 2003; Исламбеков Р.К., 2004; Трошина Е.А с соавт., 2006].
Современные представления о патологии ЩЖ все более придают значимость развитию латентного или субклинического гипотиреоза, который составляет 10 % у женщин и 3% у мужчин среди всех заболеваний ЩЖ, который приводит к более выраженным патоморфологическим изменениям в органах в виду длительности течения и отсутствия лечения [Петунина Н.А., 2007; Ortiga-Carvalho Т.М. et al., 2005; Erem С, 2006; Cooper D.S., 2007].
Гипотиреоз в зависимости от патогенетических механизмов принято подразделять на первичный (тирогенный), вторичный, третичный и периферический [Мельниченко Г.А., 2007].
Гистологические методы исследования и верификация хронического эндотоксикоза
Гистологическое исследование проводилось с использованием оборудования лаборатории «Морфологии и иммуногистохимии» ГУ Волгоградский научный центр» РАМН. У животных, выводившихся из эксперимента путем передозировки нембуталового наркоза, забирали аутопсийный материал сразу же после констатации признаков смерти. ЩЖ извлекали вместе с участком трахеи и помещали в 10%-й нейтральный раствор формалина на 48 часов. После этого материал промывали в проточной воде с целью избавления от излишнего фиксатора. Затем проводили обезвоживание и уплотнение материала в батарее спиртов нарастающей концентрации, начиная с 50-60% до абсолютного (100%). Время пребывания в каждом спирте от 4 до 6 часов. Кусочки помещали в равнопроцентную смесь абсолютного спирта и хлороформа на 6 часов и последовательно в первый чистый ксилол и второй чистый ксилол на 1-3 часа в каждый. Замещение обезвоживающего раствора хлороформом, способного растворяться в парафине обеспечивало оптимальное уплотнение и пропитывание кусочков парафином. Заливка парафином осуществлялась в несколько этапов (2 порции расплавленного парафина) с пребыванием в каждой порции по 2 часа первоначально при температуре 37С, а затем при 56С. Затем на санном микротоме (МС-2) изготавливали парафиновые срезы толщиной 7 мкм с последующей депарафинизацией и окрашиванием гематоксилином и эозином, по ван Гизону.
Окрашивание гематоксилином и эозином. В раствор гематоксилина Гарриса помещали парафиновые срезы на 5-10 мин, затем под проточную воду на 5-Ю мин, дистиллированную воду 1-2 мин, раствор эозина 1-10 мин, дистиллированную воду на 1-3 мин, спирты 70-96-100 на 1-2 мин, карбол-ксилол 1-3 мин (для удаления спирта и просветления), ксилот 1-3- мин (для удаления карболовой кислоты и просветления срезов). Окрашенные срезы заключали в канадский бальзам под покровное стекло. В общем количестве от экспериментальных животных было получено 325 блоков, изготовлено по 2 микропрепарата с каждого блока, всего 650 стекол.
Окраска гематоксилином и эозином-является самой распространенной в гистологической практике и позволяет получить «обзорную» картину представленного микропрепарата и выявить основные нарушения гистоархитек-тоники органа, а также развитие типовых патологических процессов. Окраска по ван Гизону позволяет выявить компоненты соединительной ткани (колла " . 47 ген). При окраске по методу ванТизон употребляют два раствора: а) железный: гематоксилин Вегейрта и б) вместо эозина кислую смесь пикрофуксина. Гистологическое исследование органов-мишеней при хроническом ЭТ с целью дополнительной верификации развития данного патологического процесса проводилось с применением стандартного гистологического метода исследования и методов количественной патанатомии.
Таким образом, используя данные окраски, вшечени при развитии хронического ЭТ (ТХМ+ЛПС)» была выявлена жировая, и вакуольная дистрофия гепатоцитов, некроз,.регенерация- гепатоцитов, умеренная»лимфомоноцитар-ная инфильтрация и прогрессирующие явления гепатофиброзаіна 90-е сутки эксперимента: В почках; наблюдалась смешанная дистрофия нефротелия дис-тальных канальцев с частичной обтурацией просвета канальцев слущенным эпителием, а также явления- нефросклероза; наиболее выраженные к 90-м суткам? эксперимента; Морфометрические критерии, подтверждающие развитие эндотоксикоза представлены в таблице 4.
Установлено, что при развитии хронического ЭТ в печени к 90-м суткам прогрессирует стромальная пролиферация, сопровождающаяся увеличе нием ОД соединительной ткани (превышающим показатели контроля в 5,3 раза) и уменьшением ОД паренхимы.
При морфометрии почек было выявлено, что к 90-м суткам эксперимента наблюдались явления нефросклероза, характеризующиеся увеличением ОД интерстиция на 12,5%. Что касается других показателей, то объем мочевого пространства не имел достоверных отличий по сравнению с контрольной группой, а канальцевый индекс несколько снижался к 90-м суткам эксперимента, оставаясь неизменным еще на 60-е сутки.
Гистологическое исследование органов-мишеней в модели с преимущественным поражением почечной паренхимы выявило наличие признаков хронического ЭТ, о чем свидетельствовало развитие выраженных явлений нефросклерозе на поздних сроках эксперимента и во вторую очередь изменения ткани печени. В данной модели показатели, характеризующие изменения в почечной паренхиме претерпевали более выраженные изменения, чем при введении ТХМ и ЛПС. ОД интерстиция неуклонно нарастала к 90-м суткам экспери мента, превышая контрольные показатели на 15,5%. Мочевое пространство увеличивалось по сравнению с контролем на 0,27 усл.ед., а канальцевый индекс на 0,12 усл.ед. Морфометрия печени также показала развитие явлений гепатофиброза с увеличением ОД соединительной ткани на 4,9% и уменьшением ОД паренхимы на 12,7%.
Определение профиля гормонов гипафизарно- тиреоидной системы методом иммуноферментного анализа
Для комплексной оценки секреторной активности щитовидной железы метод иммуноферментного анализа наряду с гистологическими, гистохимическими и электронно-микроскопическими является одним из наиболее значимых.
Деятельность щитовидной железы находится под контролем центрального звена регуляции — гипоталамо-гипофизарной системы, которая осуществляет свой «надзор» за всеми органами эндокринной системы по принципу положительной и отрицательной обратной связи.
Определение концентрации тиреотропина и гормонов щитовидной железы является ведущим диагностическим критерием при выявлении тиреоид-ной патологии.
Существует ряд методов, которые позволяют определить концентрацию гормонов в сыворотке крови (радиоизотопный и иммунорадиометриче-ский). Однако, по сравнению с методом иммуноферментного анализа (ИФА) они имеют ряд недостатков: радиоактивное загрязнение окружающей среды; непродолжительный срок жизни радиоактивной метки ( 1-60 сут); потреб ность в относительно дорогостоящем специальном оборудовании для регистрации радиоактивности.
В связи с этим для определения концентрации гормонов в сыворотке крови мы остановили свой выбор на твердофазном варианте иммунофер-ментного анализа - ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) с использованием спектофотометра Stat Fax 2100 и вошера Stat Fax 2600 (AWARENESS Technology, USA) с помощью тест - систем «Вектор-Бест» (Новосибирск, Россия), «DRG» (Germany). В отношении набора ТЗ и Т4 разработчиками было подтверждено отсутствие видовой специфичности. Применяемость ТТГ тест-системы для определения концентрации гормонов у грызунов была доказана сопоставлением данных контрольной- сыворотки человека и разведением (1:1; 1:3) сывороток интактных крыс с построением соответствующих калибровочных графиков [Таранов А.Г., 2002].
При определении тироксина и трийодтиронина использовали определение общей фракции данных гормонов. Некоторые исследователи уделяют внимание определению свободной! фракции данных гормонов, объясняя это тем, что при различных патологических состояниях изменяется! количество транспортных белков крови или их связывающая способность [Косьянова НА., Свириденко Н.Ю., 2006].
Морфометрическое исследование было проведено в соответствии с принципами системного количественного анализа [Автандилов Г.Г., 2002] с использованием автоматического анализатора изображений «Видеотест-Морфо» (СПб., Россия). Из множества предложенных критериев количественной морфометрии (Хмельницкий O.K., 2002), были отобраны наиболее значимые и достаточно информативные морфометрические показатели. В ткани щитовидной железы определяли средний наружный диаметр фолликула (мкм), высоту фолликулярного эпителия (мкм), диаметр ядер тиреоидного эпителия (мкм), относительные объемы (%) коллоида, фолликулярного и интерфолликулярного эпителия, стромы и сосудистого русла. Данные показате ли отражают характеристику эпителиального компонента, коллоида, стромы и косвенно степень пролиферативной активности. Представленные морфо-метрические показатели, позволяют составить достаточно полное представление об изменении морфометрических показателей щитовидной железы при хроническом ЭТ.
Исследование тиреоцитов дополняли методом радиальной морфомет-рии, разработанным в Волгоградском научном центре РАМН и администрации Волгоградской области [Новочадов В.В., 2005]. На основании данного исследования эндокриноциты разбивали на группы в зависимости от радиальных структурных свойств цитоплазмы, что связывали с функциональной активностью клетки.
Рис. 1. Разбиение тиреоидного фолликула программой «Бугров-2005» для радиальной морфометрии. Показано 16 сегментов и 4 зоны. Окр. гематоксилин и эозин, ув. х 400.
Дополнительно использовали оригинальный метод радиальной морфо-метрии, разработанный в Волгоградском научном центре РАМН. Данная программа удобна для измерения объектов, имеющих на срезе геометрически округлую форму. После указания фаниц объекта и его логического центра (нами был выбран геометрический центр фолликула), профамма самостоятельно разбивала объект на выбранное число секторов и зон. Для фолликулов ЩЖ эмпирически было подобрано 36 секторов и 10 зон - всего 360 участков (рис. 1).
Патоморфология щитовидной железы при хроническом эндотоксикозе с преимущественным поражением почек
Патоморфологические изменения в щитовидной железе характеризовались мозаичностью, в отдельных случаях были минимально выражены, в других, напротив, характеризовались выраженной перестройкой структуры ЩЖ (рис. 7).
На 30-е сутки в щитовидной железе наблюдались геморрагические изменения, которые были значительно менее выражены, чем в модели хронического ЭТ с введением ТХМ. Железа, сохраняла нормопластический тип строения с единичными фолликулами крупного или мелкого размера. Гемор рагические явления характеризовались умеренным полнокровием сосудов, единичными кровоизлияниями в интерфолликулярное пространство и коллоид отдельных фолликулов. Также в ткани отмечались единичные лимфоциты и макрофаги. В полости фолликула - десквамированные тиреоциты. Отдельные клетки находились в состоянии дистрофии (рис. 7А).
На 60-е сутки геморрагические явления сменялись пролиферацией ти-реоцитов, которая затрагивала как экстра-, так и интрафолликулярные клетки. Пролиферация фолликулярного эпителия в просвет фолликула была умеренной с образованием подушечек Сандерсона. «Дочерних» фолликулов практически не наблюдалось. Значительное количество тиреоцитов находилось в состоянии вакуольной дистрофии. Ядра в отдельных случаях были уплощены, клетки имели неровные очертания. В полости фолликула наблюдались десквамированные клетки. Коллоид окрашивался бледно, создавая впечатление неоднородного секрета (рис. 7Б).
На 90-е сутки в щитовидной железе наблюдались явления стромальной пролиферации, имеющие место уже на 60-е сутки. Соединительнотканные прослойки были заметно утолщены, фолликулы обособлены в группы. Склеротические процессы затрагивали не только тиреоны, но и отдельные фолликулы. Склеротические процессы на начальном этапе носили очаговый характер, создавая предпосылки для активной пролиферации тиреоцитов, как приспособительно-компенсаторного процесса. К 90-м суткам процесс носил диффузный характер, распространяясь по ходу соединительно тканных септ, заканчивающихся слепо в паренхиме органа (рис. 7В).
При морфометрическом исследовании ЩЖ было установлено, что показатели среднего наружного диаметра фолликулов постепенно снижались к 90-м суткам по сравнению с контрольной группой на 31,2 мкм, причем наи более выраженное падение отмечалось на сроках между 60-ю и 90-ми сутками эксперимента (табл. 8).
Аналогичная тенденция прослеживалась и в отношении высоты фолликулярного эпителия, показатели которой к 90-м суткам снижались в 2 раза по сравнению с контролем. Средний диаметр ядер уменьшался к 30-м суткам, достигая минимальных значений к 90-м суткам.
Содержание коллоида практически не изменялось на 30-е сутки, но к 90-м его относительный объем был уменьшен в 1,5 раза. Наряду с уменьшением относительного объема фолликулярного эпителия к 90-м суткам, происходило нарастание относительного объема-интерфолликулярного эпителияв 1,6 раза. Наиболее значимые количественные изменения в щитовидной железе при хроническом эндотоксикозе были представлены в процентном соотношении, где показатели контрольной группы были приняты за 100% (рис. 8).
