Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Проблема раннего невынашивания беременности 10
1.2. Роль цитотрофобластической инвазии в 1-ом триместре физиологической беременности 15
1.3. Оценка децидуализации париетального эндометрия и маточно-плацентарной области. Эндометриальные белки 21
1.4. Нарушения цитотрофобластической инвазии и децидуализации в патогенезе неразвивающейся беременности 29
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Контингент обследованных 33
2.2. Методы исследования 34
2.2.1. Клинические данные 34
2.2.2. Иммуноферментный анализ Г. 34
2.2.3. Гистологические исследования 35
2.2.4. Иммуногистохимическое исследование 35
2.2.5. Статистические методы 41
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1. Гистологическая и иммуногистохимическая характеристика децидуализации и ее влияние на цитотрофобластическую инвазию в 1-ом триместре неосложненной беременности 42
3.2. Гистопатология и иммуногистохимическая характеристика париетального и базального эндометрия при различных вариантах эндокринопатий и эндометрите 89
3.2.1. Эндокринопатия А типа с преимущественной недостаточностью пролиферативной фазы менструального цикла 89
3.2.2. Эндокринопатия Б типа с преимущественной недостаточностью секреторной фазы 98
3.2.3. Эндометриты 112
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 125
Выводы 139
Практические рекомендации 140
Список литературы 141
- Роль цитотрофобластической инвазии в 1-ом триместре физиологической беременности
- Оценка децидуализации париетального эндометрия и маточно-плацентарной области. Эндометриальные белки
- Клинические данные
- Гистопатология и иммуногистохимическая характеристика париетального и базального эндометрия при различных вариантах эндокринопатий и эндометрите
Введение к работе
Актуальность темы
Проблема невынашивания беременности чрезвычайно актуальна в медицинском и социальном аспектах, что обусловлено высокой частотой этой патологии, а также тяжелыми последствиями для общего состояния здоровья женщины, ее репродуктивной функции.
\^рСДЇІ рмНКНХ рСПрОДуКТпВНЫХ ПОТСрЬ ДОшКНйруЮщсс ЗКаЧсНИс hmchjI
спонтанные аборты, которые составляют 80 - 90% прерывания беременности в 1-ом триместре. Суммарная частота обеих форм достигает 10-15% всех беременностей; ежечасно в мире происходит около 114 подобных эпизодов (Coulam СВ., 2000). До сих пор не ясны механизмы возникновения неразвивающейся беременности, не разработаны четкие морфологические критерии диагностики раннего невынашивания по соскобам со стенок матки, поскольку сейчас патологоанатомы лишь констатируют наличие или отсутствие маточной беременности у конкретной женщины.
Развитие ранних этапов беременности (имплантация и плацентация) осуществляется путем тесного взаимодействия погружающейся бластоциста, а затем - хориального мешка с окружающим цитотрофобластическим щитом, с децидуализированным или гравидарным эндометрием, то есть сопряженных процессов цитотрофобластической инвазии и перестройки стромальных клеток эндометрия в децидуальные.
Прогестерон-зависимый процесс децидуализации компактного и спонгиозного слоев эндометрия подробно описан в руководствах (Dallenbach -Hellweg, 1969; Топчиева О.П., 1978; Хмельницкий O.K., 1994; Глуховец Б.И, Глуховец Н.Г., 1999; Перетятко Л.П., 2005). Децидуальные клетки принимают участие в обеспечении питания эмбриона, в предотвращении иммунологического отторжения, продукции гормонов и осуществлении местного гомеостаза (BischofP., 1998). Вместе с тем, остается неясным роль децидуальных клеток в отношении цитотрофобластической инвазии, несмотря
на преобладающее мнение о сдерживающем эффекте децидуализации на глубину проникновения цитотрофобласта в эндометрий (Bischof Р., 1998, 2000; Glesson L.M., LalaP.K., 2001). Часто авторы не акцентируют внимание на фенотипических различиях децидуальных клеток, которые последовательно экспрессируют вначале десмин (маркер гладкомышечных клеток), а затем виментин (маркер экстраэмбриональной мезенхимы) в течение 1-го триместр беременности (Khong T.Y., 1986; Can A., Tekeliogli М., 1995).
С конца 70-ых по 90-ые годы XX века сформировалось новое направление исследование роли белков беременности, в частности, эндометриальных, репродукции человека (Петрунин Д.Д., 1977; Татаринов Ю.С., 1990; Болтовск-М.Н., 2002; Bohn Н., 1980). Так, было установлено, что гликоделин " (антигенно идентичный а-2-микроглобулину фертильности, АМГФ) продуцируется эпителиоцитами эндометриальных желез и является мощны иммуносупрессором, защищающим хориальный мешок и эмбрион о иммунного ответа материнского организма. Другой белок IGFBP-1 (белок связывающий инсулиноподобные факторы роста, антигенно идентичны плацентарному а-1-микроглобулину, ПАМГ) синтезируется децидуальным клетками промежуточного типа и участвует в регуляции активност цитотрофобласта (Lee P.D. et al., 1997; Fowler D.J. et al., 2000; Glesson L.M. 2001).
Современные иммуногистохимические исследования децидуализации темпов цитотрофобластической инвазии осуществлялись фрагментарно поскольку имеются лишь отдельные попытки визуализировать эт сопряженные процессы на уровне клеток и тканей эндометрия при нормально развитии беременности (Hustin I., 1994; Han V. et al., 1996; Болтовская M.H. 2001). Вместе с тем, не оценив взаимодействия разных фенотипо децидуальных клеток и цитотрофобластической инвазии при нормально беременности, трудно расшифровать механизмы ранних репродуктивны потерь, в частности, неразвивающейся беременности эндокринного воспалительного генеза.
Цель исследования
Оценить роль иммунофенотипических изменений децидуальных клеток и пителиоцитов желез в развитии цитотрофобластической инвазии в 1-ом іиместре нормальной беременности, а также в патогенезе неразвивающейся еременности эндокринной и воспалительной природы.
Задачи исследования
определить динамику децидуализации эндометрия на пике (от 6-ой до 8-ой нед. после оплодотворения, п.о.) и на спаде первой волны цитотрофобластической инвазии (9-10 нед.).
-
Сопоставить экспрессию эндометриальных белков (IGFBP-1, гликоделин) в клетках-продуцентах с их концентрациями в сыворотке крови и гомогенатах эндометрия в течение 1-го триместра неосложненной беременности.
-
Выявить гистопатологические и иммуногистохимические особенности децидуализации эндометрия и цитотрофобластической инвазии при эндокринопатиях матери.
-
Определить значение воспалительных изменений эндометрия в патогенезе раннего невынашивания беременности.
-
Сравнить экспрессию IGFBP-1 и гликоделина в клетках-продуцентах с их концентрациями в сыворотке крови и гомогенатах эндометрия при эндокринопатиях и эндометрите.
Научная новизна
Впервые проведено сравнительное иммуногистохимическое исследование
перестройки эндометрия и активности цитотрофобластической инвазии при
нормальной и неразвивающейся беременности в сочетании с количественным
иммуноферментным анализом используемых белков-маркеров
дифференцировки стромы и эпителиоцитов в гомогенатах эндометрия.
Определены фенотипические особенности децидуальных клеток, участвующих в регуляции цитотрофобластической инвазии при неосложненной
беременности: виментин-положительные не препятствуют
цитотрофобластической инвазии (6, 7, 8 нед.), a IGFBP-1-положительные подавляют активность инвазирующего цитотрофобласта (9-Ю нед.).
Выявлены два типа реакций эндометрия при неразвивающейся беременности, обусловленной эндокринными причинами: ретардация желез с резким падением продукции гликоделина на фоне гипоэстрогении; незавершенная децидуализация стромы с накоплением десмин-, виментин-, и IGFBP-1-положительных децидуальных клеток в случаях дефицита прогестинов.
В зонах лейкоцитарной инфильтрации и микроабсцессов (париетальный и базальный децидуит) обнаружена гибель всех типов децидуальных клеток и инвазирующего цитотрофобласта, что является одной из причин ранней потере беременности.
Практическая значимость
Выявление в соскобах со стенок матки после неразвивающейся беременности поверхностной инвазии цитотрофобласта в эндометрий матки, сочетающейся с ретардацией маточных желез, указывает на нарушение пролиферативной фазы менструального цикла (дефицит эстрогенов), в то время как обнаружение поверхностной цитотрофобластической инвазии на фоне задержки децидуализации стромы свидетельствует о нарушении секреторной фазы менструального цикла (дефицит прогестинов). Выявленные типы эндокринных нарушений следует учитывать в практической деятельности патологоанатомов для ориентации клиницистов в выборе целенаправленного обследования пациенток и адекватной прегравидарной терапии раннего невынашивания беременности.
Апробация работы
Материалы, основные положения и выводы диссертации были доложены и обсуждены на: Всероссийской Ассоциации акушеров и гинекологов (Москва, 2000 г.); 5-ом Российском научном форуме «Охрана здоровья матери и
ребенка» (Москва, 2003 г.); V Общероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Казань, 2004 г.); 7-ой Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва,- 2005 г.); научных конференциях «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии» (Москва, 2006, 2008 гг.); межлабораторной конференции в ГУ НИИ морфологии человека РАМН (октябрь, 2008).
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, из них одна s журнале, рекомендованном ВАК РФ.
Объем и структура работы
Роль цитотрофобластической инвазии в 1-ом триместре физиологической беременности
Впервые роль цитотрофобластической инвазии (ЦТИ) во время имплантации и плацентации оценили эмбриологи Boyd J.D., Hamelton W.J. (1960) [80]. Затем последовали аналогичные работы Ramsey Е.М. et al. (1976) [156], основанные на исследованиях коллекции эмбрионов, собранной в институте Эмбриологии Карнеги (Вашингтон, США).
Группа акушеров [81], впервые осуществившая биопсию плацентарного ложа матки во время операции кесарева сечения, выдвинула гипотезу, что ЦТИ приводит к так называемой физиологической перестройке бывших спиральных артерий (СА) эндометрия в расширенные маточно-плацентарные артерии (МПА), через которые осуществляется возрастающий приток материнской крови в межворсинчатое пространство.
Следующим важным шагом в понимании этой проблемы стала классическая работа Pijnenborg R. et al. (1980) [150], где были исследованы матки, ампутированные в ранние сроки беременности. Основная заслуга ученых состояла в выделении двух волн ЦТИ: первой, на 6-8 неделях гестации (п.о.) и второй, развивающейся на 16 - 18 неделях (p.m.).
После этого лавинообразно нарастало количество работ, в которых недостаточность первой и, особенно, второй волн ЦТИ расценивались в качестве основного или главного патогенетического механизма в развитии гестозов. Затем внимание в литературе акцентировалось на молекулярных механизмах взаимоотношений инвазивного цитотрофобласта и окружающих тканей эндометрия [65, 78, 85, 92 ,93, 100, 138, 146].
По современным представлениям цитотрофобластическая инвазия -ключевой процесс на ранней стадии беременности, обеспечивающий проникновение бластоцисты в строму эндометрия, формирование плаценты и возникновение гемохориального типа кровоснабжения эмбриона и плода [152а,б, 154, 156].
Инвазирующий цитотрофоблает (ЦТ) целенаправленно мигрирует в стенки СА эндометрия, лизируя их эласто-мышечные компоненты и формируя широкие устья, которые открываются в межворсинчатое пространство, и тем самым обеспечивают маточно-плацентарное кровообращение [13, 26, 153].
ЦТИ является основным моментом, определяющим особенности плодо-материнского взаимодействия на ранних стадиях беременности. Располагая 100-110 поверхностными клетками (трофоэктодерма), на 4-6 сутки п.о. свободная бластоциста способна секретировать небольшое количество хорионического гонадотропина человека (P-hCG), который стимулирует устойчивую функцию желтого тела яичника и обеспечивает возрастающий приток его гормона — прогестерона, осуществляющего децидуальную реакцию стромальных фибробластов. Начальная секреция P-hCG играет роль важного паракринного сигнала - триггера для подготовительной перестройки эндометрия в зоне будущей фиксации бластоцисты [35, 80, 117, 134, 140].
Трофоэктодерма бластоцисты образует первую генерацию инвазирующих клеток в виде симпластов, то есть многоядерных комплексов, окруженных общей плазмолеммой. Они проникают в межклеточные щели маточного эпителия, раздвигают эпителиоциты и «прорываются» сквозь базальную мембрану, в результате бластоциста погружается в строму эндометрия. Следовательно, начало инвазивного процесса по времени совпадает с имплантацией бластоцисты (7-9-е сутки п.о.).
Примитивные (преворсинчатые) симпластические комплексы, проявляя протеолитическую активность, формируют полости в окружающем эндометрии, куда изливается кровь из аррозивных капилляров матери. Эти изменения происходят на 8-9 день (п.о.) определяя начало преворсинчатой или лакунарной стадии развития плаценты [23, 74]. Это стимулирует пролиферацию трофобластических клеток (ЦТ) на поверхности зародышевого мешка; возникают цитотрофобластические колонны или первичные ворсины плаценты, покрытые уже слоем синцитиотрофобласта (СТ), образуя цитотрофобластический щит по окружности зародышевого мешка [66,77а, 776, 80]. К 14-15-му дню п.о. происходит смена функции цито- и синцитиотрофобласта. Главную пролиферативную и инвазивную активность приобретает ЦТ из основания первичных ворсин, а новые субпопуляции синцитиотрофобласта выполняют свою основную роль покровного и гормонобразующего эпителия. Сложившиеся в это время пара-и аутокринные взаимодействия служат весомой предпосылкой для первичной миграции ЦТ, поэтому эти инициальные процессы следует называть начальной инвазией [13].
По мнению Kliman H.J. (1999) [130] на ранних этапах имплантации (до образования ворсин) из трофобласта (стволовые клетки) — формируется промежуточный ЦТ, который из первичных колонн инвазирует прилежащие участки эндометрия, образуя цитотрофобластический щит. Затем формируются якорные ворсины. В течение 13-19 дней п.о. из клеточных колонн образуются вторичные (мезенхимальные) ворсины, путем врастания зародышевой мезенхимы, которая вытесняет ЦТ и образует строму ворсин. Вторичные ворсины существуют до 21 дня п.о., когда с началом васкулогенеза (появление первых капилляров) наступает период третичных ворсин [23, 74].
Оценка децидуализации париетального эндометрия и маточно-плацентарной области. Эндометриальные белки
Децидуальная оболочка, развивающаяся в эндометрии при беременности, принимает участие в обеспечении питания эмбриона, предотвращении иммунологического отторжения, сдерживании инвазии ЦТ, продукции гормонов и осуществлении гемостаза [25, 76, 106].
Децидуализация представляет собой процесс роста, биохимическую и морфологическую дифференцировку стромальных клеток в децидуальные; он начинается вокруг СА и впоследствии распространяется на весь эндометрий во время поздней фазы секреции менструального цикла и во время беременности. Клетки стромы эндометрия, подготовленные эстрадиолом, а затем под воздействием прогестерона, вырабатываемым желтым телом, включаются в процесс децидуализации [16, 77, 79]: фибробластоподобные клетки превращаются в предецидуальные, а затем трансформируются в малые ДК, средние ДК промежуточного типа и, наконец, крупные ДК эпителиоидного типа [104], а также в гранулярные клетки.
По схеме, предложенной Dallenbach-Hellweg G. (1969) [99], все типы ДК и гранулярные клетки в эндометрии имеют общий, присутствующий в матке клеточный источник дифференцировки. После данной публикации отечественные морфологи приняли данную классификацию и многократно ее цитировали, в частности, Топчиева О.П. (1978) [61], Хмельницкий O.K. (1994) [64], Глуховец Б.И, Глуховец Н.Г. (1999) [6]. Использование электронной микроскопии стромальных клеток в изучении гравидарного эндометрия позволило разделить ДК на три типа в зависимости от ультраструктуры цитоплазмы и ядра, но главным критерием остались размеры этих клеток [31]: ДК первого типа (I) - это крупные (до 30 мкм), овальные или округлые формы клетки с ядром, занимающим большую часть цитоплазмы, синтезируют ламинин и коллаген IV типа; ДК П-го типа клетки крупные (до 40 мкм) с ядром, расположенным эксцентрично (синтезируют гормоны ПЛ, белки фертильности); ДК Ш-го типа - удлиненные клетки диаметром 25 мкм, с вытянутым ядром (малые ДК), они отличаются меньшими размерами, конденсированным гетерохроматином в ядрах, увеличением количества и размеров гипергранулированных ядрышек (до 3) и расширением цистерн ГЭР с накоплением белкового зернистого материала.
Как осуществляется процесс децидуализации гравидарного эндометрия, если рассматривать его с предецидуальной реакции, характерной для поздней секреторной стадии менструального цикла?
В случае наступления беременности, примерно с ее 4-5 дня, бластоциста начинает синтезировать новый гормон - хорионический гонадотропин ф-hCG), который является мощным сигнальным фактором для поддержания роста менструального желтого тела яичника и дальнейшей продукции им прогестерона [24, 64, 123, 140]. Возрастающая концентрация прогестерона является мощным стимулом децидуализации, то есть дальнейшей трансформации фибробластов стромы эндометрия и миофибробластов в адвентиции СА в сторону развития децидуальных клеток промежуточного и затем эпителиоидного типов. В зоне имплантации образование децидуальной ткани происходит наиболее интенсивно, но уже на 9-10-й день после погружения бластоцисты в слизистую матки децидуальные элементы видны вокруг СА и в остальных отделах компактного слоя эндометрия. Железы компактного слоя постепенно уменьшаются в размерах, просвет их становится щелевидным и с 8-й недели беременности - почти неразличимым. Железы спонгиозного слоя тесно прилежат друг к другу, резко извиты, выстланы высоким эпителием с сосочковыми выступами. Под эпителием сосочков находится соединительная ткань с капиллярами, оплетенными тонкими аргирофильными волоконцами. Такие железы известны под названием желез беременности Опитца [62].
При маточной беременности в децидуальной оболочке различают следующие отделы: decidua parietalis, decidua basalis, decidua capsularis . Decidua parietalis выстилает стенки матки на всем ее протяжении, за исключением зоны имплантации бластоцисты. По мере развития беременности в ней отчетливо различаются компактный и спонгиозный слой. На ранних стадиях развития беременности в нем среди ДК выделяют малые или промежуточные ДК. Они имеют веретенообразную форму, вытянуты по длиннику до 15-20 мкм. Цитоплазма малых ДК базофильна, ядро плотное, небольших размеров (3-5 мкм). Эти клетки являются малодифференцированными стромальными элементами, из которых образуются большие ДК. К 3-х месячному сроку беременности толщина компактного слоя равна 5-7 мм, а величина ДК - 30-40 мкм. В процессе созревания появляются большие ДК, (25-30 мкм) вплоть до 12-13 недели беременности в них увеличивается количество цитоплазматических органоидов, гипертрофируется аппарат Гольджи. В зрелых больших ДК цитоплазма содержит в изобилии включения гликогена и нейтрального жира. Гранулы выводятся в межклеточное пространство мерокринным способом -отделяются вместе с цитоплазмой. Большие ДК синтезируют и секретируют пролактин, идентичный гипофизарному. Ядра больших ДК имеют диспергированный хроматин и ядрышки [61,64]. Зрелые ДК обладают «аурой» или венчиком. Иммуногистохимическим методом выявлено, что зрелые ДК у человека синтезируют и депонируют в околоклеточном пространстве компоненты базальной мембраны [67, 157, 171]. Они включают коллаген IV типа, ламинин, гепарансульфат протеогликан, фибронектин [23] и образуют характерную капсулу только вокруг дифференцированных ДК. Определены функции этой капсулы: активная организация и стабилизация интерстициального матрикса МПО. Наличие ауры является признаком зрелости децидуальных клеток (ДК), то есть финала процесса децидуализации [65, 66]. Decidua basalis или маточно-плацентарная область (МПО) является частью децидуальной оболочки, расположенной под нижним полюсом имплантировавшейся бластоцисты, а затем - хориального мешка, в этом участке происходит прикрепление ворсин хориона к эндометрию и образование плаценты. Ткань компактного слоя dec. basalis в своей основе имеет такое же строение, как и dec. parietalis, но отличается от нее наличием характерных компонентов: 1) отложений фибриноида; 2) клеток ЦТ, проникших в децидуальную ткань [61, 64]. Именно здесь разворачивается ЦТИ, описанная в разделе 1.2. Имеются ли какие-то особенности децидуализации в этой части эндометрия в сравнении с d. parietalis, остается не ясным.
Клинические данные
При выполнении медицинского аборта после выскабливания кюреткой содержимое полости матки промывалось водой через сито, из соскоба выделялись кусочки эндометрия, которые дополнительно промывались в 10% забуференном физиологическом растворе для освобождения от остатков материнской крови. Во время вводного наркоза из вены взяты образцы сыворотки крови матери (СК). Образцы (1 - сыворотка крови и 2 - ткань эндометрия) в отдельных пробирках замораживались при тепературе -40С. Остаток соскоба фиксировался в 10% нейтральном формалине. Биопробы 1, 2 размораживали, подсушивали на фильтровальной бумаге, взвешивали; из биопробы 2 готовили гомогенаты эндометрия (ГЭ). После центрифугирования отбирали супернатанты.
Для количественной оценки гликоделина и IGFBP-1 в пробах, взятых из двух сред (1, 2), использовали твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), «сэндвич» - вариант, на основе моноклональных антител, полученных в лаборатории клеточной иммунопатологии и биотехнологии (рук. д.б.н. М.Н. Болтовская).
Из соскобов выбирали фрагменты эндометрия, фиксировали их в 10% формалине, заливали в парафин (точка плавления - 54-56С), готовили срезы по 5-7 мк и окрашивали их гематоксилином и эозином. После гистологического просмотра препаратов отбирали блоки с париетальным и базальным эндометрием, т.е. с МПО (по наличию якорных ворсин, слоя фибриноида, инвазирующего ЦТ и маточно-плацентарных артерий). Из отобранных блоков готовили серийные срезы, которые размещали на покрытых адгезивом стеклах.
Выполняли на парафиновых срезах непрямым иммунопероксидазным методом. Для точной идентификации интерстициального ЦТ на парафиновых срезах применена иммуногистохимическая реакция на цитокератин-(Novocastra, ЦК-8, клон CKTS1, ready to use) методом непрямого иммунопероксидазного окрашивания. Для оценки степени децидуализации стромы эндометрия и определения разных типов ДК использовали первичные моноклональные антитела против десмина (Novocastra, клон DER-11, разведение 1:50), виментина (Novocastra, клон Vim3B4, разведение 1:200) и оригинальные моноклональные антитела против IGFBP-1 (НИИ МЧ РАМН, клон ПВ-4, культуральный супернатант, разведение 1:600). Для качественного и количественного определения функционального состояния эндометриальных желез, их секрета и эпителиоцитов применяли моноклональные антитела против гликоделина (НИИ МЧ РАМН, клон A4f8, культуральный супернатант, разведение 1:400). После депарафинирования в качестве демаскирующего приема проводили нагревание стекол со срезами в 0,01 М цитратном буфере (рН 6,0) в течение 15 минут в СВЧ-печи (цитокератин, гликоделин, IGFBP-1, см. протокол №1), а также обработку трипсином (десмин, виментин, см. протокол №2) при температуре 37С в течение 30 минут в термостате. Активность эндогенной пероксидазы блокировали 3% водным раствором перекиси водорода. Во избежание неспецифической адсорбции первичных антител проводилась инкубация с 10%-ной нормальной лошадиной сывороткой в течение 30 минут. Инкубацию с первичными моноклональные антителами, проводили при температуре +4С в холодильнике в течение ночи. После каждой процедуры обработки срезы промывали в трис HCL буфере - 0,05 М (рН 7,6). Для визуализации реакции использовали систему детекции Ultra Vision TL-015-HD (Lab Vision). Хромогеном служил 3,3-диаминобензидин тетрахлорид (ДАБ), срезы докрашивали гематоксилином Майера. Контроль неспецифического окрашивания осуществляли: 1) замещением первичных антител 10% раствором лошадиного сывороточного альбумина; 2) исключением вторичных антител.
Учитывая разрозненный характер материала и невозможность применения полноценной морфометрии, использована обобщенная оценка степени иммуноокрашивания желез, распространенности разных типов ДК и ЦТИ. Результаты иммуногистохимических реакций (уровень экспрессии маркеров) оценивали полуколичественным способом в баллах/плюсах: 0 (-) отрицательная реакция, 1 (+) - небольшое, 2 (++) - умеренное, 3 (+++) -большое количество маркер позитивных клеток (рис. 1). От каждой женщины исследованы по 2-4 кюретажных фрагмента. Микропрепараты просматривали в микроскопе «Ortoplan Leica» (лаборатория патологии женской репродуктивной системы, руководитель — член-корреспондент РАЕН, Заслуженный деятель науки, проф. А.П. Милованов).
Бальная оценка экспрессии белков с антителами к виментину: а) +; б) ++; В) +++; х400. 7. Инкубация с нормальной неиммунной сывороткой 30 мин при комнатной температуре во влажной камере. Стекла по одному вынимали из контейнера, аккуратно убирали излишки буфера, промокнув фильтровальной бумагой, оставляя срезы влажными. Затем гидрофобным карандашом обводили срезы и стряхивали стекло перед нанесением нормальной сыворотки. Наносили 60-80 мкл нормальной блокирующей 10% (лошадиной) сыворотки и помещали во влажную камеру. Такую последовательную процедуру соблюдали с каждым стеклом, время засекали с момента нанесения сыворотки на первое стекло и с него же начинали следующий этап.
Гистопатология и иммуногистохимическая характеристика париетального и базального эндометрия при различных вариантах эндокринопатий и эндометрите
В данную группу вошли восемь женщин с диагнозом: неразвивающаяся беременность по типу анэмбрионии (5 случаев, 62,5%) и гибели эмбриона (3 случая, 37,5%). Они имели длительный отягощенный акушерско-гинекологический анамнез, в том числе и множественные аборты, а в двух случаях - единичные роды. Все пациентки страдали рядом заболеваний: аднекситом, поликистозом яичников, хроническим пельвиоперитонитом, сопровождавшихся нарушением менструального цикла (дисфункциональные маточные кровотечения, олигоменоррея, ановуляторный цикл).
У всех женщин перед абортом была взята венозная кровь, а в соскобе выделены плотные кусочки эндометрия и методом иммуноферментного анализа (см. главу 2) определены концентрации двух секреторных эндометриальных белков - гликоделина и IGFBP-1. Поскольку в этой подгруппе невозможно уточнить срок гестации по КТР эмбриона, а постменструальный расчет оказывается не совсем точным, то мы объединили результаты измерения концентрации гликоделина и IGFBP-1 от 6 до 10-ой нед. п.о., чтобы сопоставить их при аналогичном исследовании биопроб у женщин с эндокринопатиями А типа .
По сравнению с группой контроля у пациенток с эндокринопатией А типа отмечалось снижение содержания эндометриальных белков: гликоделина и IGFBP-1 как в сыворотке крови, так и в гомогенате эндометрия (см. табл. 4).
Это соответствует гистологической картине париетального и базального эндометрия, где отмечено явное отставание в развитии желёз, их микрокистозная трансформация и атрофия эпителиоцитов.
Париетальный эндометрий. Во всех восьми наблюдениях основной гистологической находкой в париетальном эндометрии были преимущественно атрофические процессы на фоне резкого расширения просвета большинства желез спонгиозного слоя эндометрия. Вместо компактно расположенных желез с пилообразным внутренним рельефом, которые преобладали во всех сроках медицинских абортов, в данном типе эндокринопатий выявлена микрокистозная трансформация железистого аппарата (рис. 34). Эпителиоциты представляли собой атрофичные, либо десквамированные клетки, которые практически не окрашивали гликоделин, за исключением очагового иммуноокрашивания отдельных, относительно сохранных эпителиоцитов. Это соответствовало достоверному снижению его концентрации в гомогенате эндометрия .
Эндокринопатия А типа. Париетальный эндометрий: а) микрокистозная трансформация отдельных желез среди обычного спонгиозного слоя; тотальное расширение просвета и атрофия эпителиоцитов; окраска г-э; хЮО; б) отсутствие экспрессии гликоделина в эктазированных железах с атрофичным эпителием (-). Иммунопероксидазная реакция с моноклональным антителом к гликоделину; х200. Особое внимание вызывала характеристика процесса децидуализации в строме париетального эндометрия. Если судить по иммуновизуализации десмина, то были отмечены лишь единичные десмин-положительные клетки в адвентиции некоторых СА и в ДК компактного и, отчасти, спонгиозного слоев. Иными словами, речь идёт лишь о его следовом присутствии в париетальном эндометрии (рис. 35 а). В отношении виментин-положительных клеток можно говорить о более выраженной реакции на виментин в компактной части эндометрия, где были видны ДК промежуточного типа, в большем количестве выявляемые непосредственно под маточным эпителием (рис. 35 б) и в меньшей степени среди эктазированных и атрофичных желез спонгиозного слоя. Полуколичественная оценка иммуноэкспрессии этих эндометриальных белков представлена в табл. 5.
Важным морфологическим фактом оказалось отсутствие IGFBP-1-положительных клеток в париетальном эндометрии при А типе эндокринопатий, что в значительной степени отличало этих женщин от пациенток с прерванной физиологической беременностью (табл. 3). Очевидно, отсутствие IGFBP-1 -положительных клеток в париетальном эндометрии внесло свой вклад в значительное уменьшение концентрации этого белка в гомогенате эндометрия (см. табл. 2).
Маточно-плацентарная область. У всех восьми обследованных женщин в соскобах эндометрия при выявлении фрагментов МПО было обнаружено явное снижение активности первой волны ЦТ инвазии. На срезах, окрашенных гематоксилином и эозином, редко выявлялись якорные ворсины с пролифератами ЦТ в их основаниях.
