Введение к работе
1.1 Актуальность работы
В последние годы блютанг стал международной проблемой, требующей пристального внимания ветеринарных служб всех стран. С 2006 г. в странах Северо-Западной Европы началась эпизоотия блютанга, вызванная возбудителем 8 серотипа, с клиническими проявлениями болезни у животных, в результате чего страны понесли финансовые потери в сотни миллионов долларов. Эпизоотические вспышки блютанга были зарегистрированы в Нидерландах, Бельгии, Германии, Люксембурге и Франции, затем Дании, Швейцарии и Великобритании [9]. Перемещение непривитых животных способствовало дальнейшему распространению инфекции [5, 9] и развитию последующей второй эпизоотии 2007 г. Кроме того, впоследствии, в Нидерландах, Бельгии, Германии от овец был выделен вирус блютанга 1 и 6 серотипов [9].
На конференции в Брюсселе, состоявшейся в январе 2008 г. и посвященной борьбе с блютангом, было принято решение, что наиболее эффективным способом борьбы является массовая вакцинация животных [7]. Европейская комиссия выделила значительные средства для разработки и производства инактивированных вакцин и проведению вакцинальных компаний.
Учитывая, что среди импортируемого в Россию КРС выявляли серопозитивных животных, от которых был выделен вирус блютанга, другие торгово-экономические связи с этими странами, а также изменение климатических условий, способствовавших расширению ареала переносчиков возбудителя болезни, существует реальная угроза заноса блютанга в РФ.
На начало наших исследований во ВНИИВВиМ были разработаны отечественные инактивированные вакцины против блютанга 4, 9, 12 и 16 серотипов, однако вакцины против 1, 6 и 8 серотипов, циркулирующих на территории ЕС, в РФ отсутствовали.
Поэтому исследования по совершенствованию технологии производства, конструированию вакцинных препаратов против блютанга, циркулирующего в настоящее время на европейском континенте, и изучению их эффективности являются своевременными и актуальными.
1.2. Степень разработанности проблемы
Инактивированная диэтиленимином сорбированная вакцина против блютанга овец разработана во ВНИИВВиМ В.А. Сергеевым, Н.П. Ананьевой-Рященко и Р.В. Кошелевой в 1980 г. [1, 2]. В 1996 г. в этом же институте И.Ф.Вишняков, В.И. Жестерев, М.Б. Новикова и др. изготовили инактивированную сорбированную вакцину против блютанга 16-го серотипа, где в качестве инактиванта вируса блютанга использовали 0,1% раствор А-24. В 2003 г. Сливко В.В. с соавторами [6] разработали инактивированную эмульгированную бивалентную вакцину против блютанга 4 и 9 серотипов. Эти вакцины прошли испытания на овцах, однако эффективность их применения для крупного рогатого скота не изучалась. К настоящему времени разработаны моно- и бивалентные инактивированные сорбированные вакцины фирмами Intervet (Bovilis BTV8), Merial (BTVPUR AISap), Fort Dodge (Zulvac 8 Bovis) [12]. Не изучены вопросы эффективности применения инактивированных вакцин для КРС [10]. Fort Dodge в 2009 г получила лицензию на производство комбинированных вакцин против блютанга 1 и 8 серотипов-Zulvac 1+8 Bovis и Zulvac 1+8 ovise для КРС и овец соответственно, однако технология их получения не опубликована. К этому времени нами также разработаны бивалентные инактивированные вакцины против этих серотипов. В доступной литературе нет сообщений о разработке трехвалентной вакцины против блютанга 1, 6 и 8 серотипов, хотя эпизоотическая ситуация, наблюдаемая в Европе в 2007-2008 гг., свидетельствует о необходимости и своевременности проведения исследований в этом направлении.
1.3 Цель и задачи исследований
Целью данной работы является совершенствование средств специфической профилактики блютанга крупного и мелкого рогатого скота на основе актуальных для РФ штаммов вируса блютанга 1, 6 и 8 серотипов и оценка их эффективности.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
- определить наиболее технологичные культуры клеток и оптимизировать условия культивирования 1, 6 и 8 серотипов вируса блютанга монослойным и суспензионным методами;
- изучить биологические свойства штаммов вируса блютанга 1, 6 и 8 серотипов, используемых при изготовлении инактивированной вакцины;
- провести сравнительную оценку эффективности сорбированных и эмульгированных форм экспериментальных образцов вакцин на животных;
- определить дозы и способ введения эмульгированных и сорбированных моно- и поливалентных вакцин против вируса блютанга, обеспечивающих формирование иммунитета у КРС, овец и коз;
- изготовить экспериментальные серии эмульгированных и сорбированных поливалентных вакцин против блютанга на основе штаммов вируса блютанга 1, 6 и 8 серотипов и изучить их иммунобиологические свойства;
- испытать в производственных условиях эффективность применения эмульгировнной вакцины против блютанга 8 серотипа на КРС и оценить влияние вакцинации на морфологические и биохимические показатели крови животных.
1.4 Научная новизна результатов исследований
Впервые в России сконструированы бивалентная и трехвалентная инактивированные вакцины против блютанга 1 и 8 серотипов и 1, 6 и 8 серотипов соответственно и изучены их иммунобиологические свойства в опытах на крупном и мелком рогатом скоте, а также влияние вакцинации на состояние организма животных.
Определены вирусрепродуцирующие и технологические характеристики перевиваемых клеточных культур ПС, ПСГК-60 и ВНК-21/13 и научно обоснованы перспективы их использования для получения вируссодержащего сырья вируса блютанга 1, 6 и 8 серотипов с целью изготовления инактивированных вакцин.
Усовершенствована технология изготовления инактивированной вакцины против блютанга, заключающаяся в использовании штаммов вируса блютанга 1, 6 и 8 серотипов, представляющих наибольшую опасность заноса в Россию; перевиваемой линии клеток - ПС, изменении режима инактивации препаратом А-24 и применении в составе вакцины адъюванта - Montanid ISA -70.
1.5 Практическая значимость работы
Усовершенствована технология изготовления инактивированной эмульгированной вакцины против блютанга в моно-, би- и трехвалентных вариантах с использованием адъюванта Montanid ISA -70, позволяющая снизить расход вирусного сырья в 4,3 раза по сравнению с сорбированной вакциной, и в выборе универсальных взаимозаменяемых перевиваемых культур клеток. Для культивирования штаммов вируса блютанга 1, 6 и 8 серотипов наряду с перевиваемой культурой клеток ВНК-21/13 предложена культура клеток ПС, обеспечивающая стабильное накопление вирусного антигена.
Разработаны безвредные и иммуногенные бивалентные (против 1 и 8 серотипов) и трехвалентные (1, 6 и 8 серотипов) инактивированные сорбированные и эмульгированные вакцины против блютанга, которые рекомендованы для профилактики этой болезни у жвачных животных.
1.6 Апробация работы
Результаты исследований, выполненных по теме диссертационной работы представлены, заслушаны и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии (Покров 2008-2011гг.), Международных научно-практических конференциях ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии (г. Покров, 2009 г.), ГНУ ВНИТИБП (г. Щелково, 2009 г.), РФФИ (г. Сергиев Посад, 2009 г.), Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (п. Краснообск, 2010 г.).
1.7 Соответствие содержания диссертации паспорту специальности, по которой она рекомендуется к защите
В соответствии с формулой специальности 03.02.02 - вирусология, занимающейся проблемами противовирусного иммунитета, инфекционности вирусов, разработкой мер и средств предупреждения, вызываемых вирусами заболеваний, включающей область исследований: изучение гуморального иммунитета, проблемы частной вирусологии, разработку мер предупреждения и иммунопрофилактики вирусных инфекций.
Полученные соискателем научные результаты соответствуют пунктам 7, 9, 10 паспорта специальности 03.02.02 - вирусология.
1.8 Публикации
По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
1.9 Структура и объем диссертации
