Введение к работе
Актуальность проблемы
Вирусные гепатиты являются одной из наиболее значимых проблем здравоохранения во всем мире, а гепатит В (ГВ) по-прежнему остается глобально распространенной инфекцией, поражающей печень. По разным данным, в мире насчитывается до 2 миллиардов человек, в крови которых обнаруживаются серологические маркеры перенесенного заболевания, в том числе и HBsAg, а свыше 350 млн человек являются хроническими больными и носителями вируса ГВ [Lavanchy, 2004]. До 80% случаев гепатоцеллюлярной карциномы ассоциированы с хроническим ГВ [Lai et al, 2003]. Ежегодно по всему миру от гепатоцеллюлярной карциномы погибают от 500 тыс до 1,2 млн человек [Lee, 1997, Mahoney, 1999, Bosch et al, 2005].
Ведущим мероприятием в борьбе с вирусным гепатитом В является вакцино-профилактика, проводимая в рамках национального календаря профилактических прививок, календаря прививок по эпидпоказаниям и в ходе широкомасштабных программ дополнительной иммунизации населения. В Российской Федерации зарегистрирован ряд вакцин против гепатита В, как отечественного, так и зарубежного производства, производимых методом дрожжевого синтеза. Одним из показателей надлежащего качества вакцин против гепатита В является специфическая активность, определяемая методом ИФА. Для определения специфической активности вакцин в ИФА ранее применяли иммуноферментную тест-систему (ИФТС) «Abbott Auszyme Monoclonal» (фирма «Abbott»), однако в настоящее время выпуск ее прекращен [Gif-froy et al, 2006]. В связи с этим возникла необходимость выбора отечественной тест-системы для контроля специфической активности вакцин против гепатита В, содержащих HBsAg субтипов «ad» и «ау».
Цель исследования
Изучить возможность применения отечественных коммерческих иммунофер-ментных тест-систем для выявления HBsAg с целью определения специфической активности вакцин против гепатита В.
Задачи исследования 1. Провести сравнительное изучение чувствительности и специфичности отечественных иммуноферментных тест-систем, в том числе и нового поколения, с ис-
пользованием ОСО HBsAg и референс-панелей сывороток крови человека, содержащих ау и ad субтипы HBsAg.
-
Оценить возможность использования иммуноферментных тест-систем для выявления HBsAg с целью контроля специфической активности вакцин против гепатита В по показателям валидности получаемых результатов.
-
Применить в практической работе отечественные коммерческие иммуноферментные тест-системы для контроля специфической активности вакцин против гепатита В.
Научная новизна
-
Показана возможность применения отечественных коммерческих ИФТС для определения специфической активности вакцин против гепатита В.
-
Проведен сравнительный анализ вакцин против гепатита В, зарегистрированных на территории Российской Федерации, по показателю специфической активности вакцин в отечественных и зарубежных иммуноферментных тест-системах для выявления HBsAg.
-
Дана сравнительная характеристика коммерческих и вновь разработанных высокочувствительных иммуноферментных тест-систем по показателям чувствительности к различным субтипам и вариантам HBsAg с использованием референс-панелей сывороток.
-
Показано, что отечественные коммерческие иммуноферментные тест-системы для выявления HBsAg способны выявлять его различные субтипы и варианты (как «ad», так и «ау» групп).
Практическая значимость
-
Установлено, что иммуноферментная тест-система «ГепаСтрип» (ООО «Ниармедик Плюс») полностью удовлетворяет требованиям валидности полученных результатов при изучении специфической активности вакцин против гепатита В.
-
Иммуноферментная тест-система «ГепаСтрип» производства 000 «Ниармедик Плюс» внедрена в практическое применение в ГИСК им. Л.А. Тарасевича, ЗАО «Биннофарм» и ФГУП «НПО «Микроген» для определения специфической активности вакцин против гепатита В.
-
Показано преимущество референс-панелей для контроля качества иммунофер-ментных тест-систем не только по показателям минимального предела обнаружения, но и по чувствительности к различным субтипам HBsAg.
-
Зарегистрированы иммуноферментные тест-системы нового поколения для выявления HBsAg с повышенной чувствительностью (0,01 МЕ/мл) - «ДС-ИФА-HBsAg-0,01» (ООО «НПО «Диагностические системы», ТУ 9398-091-05941003-2006) и «HBsAg-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», ТУ 9398-058-235-481-72-2007).
Основные положения, выносимые на защиту
-
Иммуноферментные отечественные тест-системы выявляют различные субтипы HBsAg, что позволяет применять их для определения специфической активности вакцин как отечественного (содержащих антиген субтипа «ау»), так и зарубежного производства (содержащих антиген субтипа «ad»).
-
Вакцины против гепатита В, зарегистрированные в Российской Федерации, различаются по показателям специфической активности, определяемой методом ИФА.
-
Тест-система «ГепаСтрип» (производства ООО «Ниармедик Плюс») полностью отвечает требованиям, предъявляемым для определения специфической активности вакцин против гепатита В.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены на ряде научно-практических конференций: XIV Международная конференция «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии», 2006 год, Украина, Крым, Ялта-Гурзуф; II Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Вакци-нология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней», 2006 год, Москва; 7-я всероссийская научно-практическая конференция "Вирусные гепатиты - проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилактики". Москва, 29-31 мая 2007 г.; Всероссийская научно-практическая конференция, посвященная 110-летию филиала ФГУП «НПО «Микроген» «Пермское научно-производственное объединение «Биомед» «Создание и перспективы применения медицинских иммунобиологических препаратов», 18-19 июня 2008 года, Пермь; III Всероссийская научно-практическая конференция с меж-
дународным участием «Вакцинология 2008. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней», 2008 год, Москва.
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, из них 1 в ведущем научном издании, рецензируемом ВАК РФ. 1 работа подана в печать в рецензируемый научный журнал.
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа в объёме 123 машинописных листа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 10 рисунками и 26 таблицами. Библиографический указатель включает 163 источника литературы (63 отечественных и 100 иностранных).
