Содержание к диссертации
ВВЕДЕНИЕ 4-8
ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9-47
Глава I. ИММУНИТЕТ К ВИРУСУ ГРИША 9-32
1.1. Факторы неспецифического иммунитета 9-23
1.2. Ингибиторы тканей и секретов 24-28
1.3. Секреторные антитела класса 28-31
Глава П. ПРШЕНЕНЙЕ ОРГАННЫХ КУЛЬТУР ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ 32-47
2.1. Метода получения органных культур 32-37
2.2. Чувствительность органных культур различного происхождения к вирусам гриппа. 37-41
2.3. Гистоморфология гриппозной инфекции в органных культурах человека й животных 42-44
2.4. Изучение противогриппозного иммунитета с использованием органных культур 44-47
ЧАСТЬ П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава Ш. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 48-59
Глава ІУ. ИЗУЧЕНИЕ ПР0ТЙВ0ГЙШП03НЫХ ТКАНЕВЫХ ИНГИБИТОРОВ В ТКАНЯХ РАЗЛИЧНЫХ ОРГАНОВ ДО И В ПРОЦЕССЕ ИХ ЭКСПЛАНТАЦИИ 60-94
4.1. Определение противогриппозных ингибиторов в тканях плода человека и цыплят к различным штаммам вируса гриппа 60-67
4.2. Изучение влияния физико-химических факторов на тканевые противогриппозные ингибиторы. 68-76
4.3. Характеристика тканевых противогриппозных ингибиторов методом гельфильтрации и
электрофореза в полиакрилами дном геле. 76-81
4.4. Радиоиммунологическое исследование механизма взаимодействия тканевых
ингибиторов с гемагглютинином вируса гриппа. 81-94
Глава У. ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОГРИППОЗНЫХ ТКАНЕВЫХ В ПРОЦЕССЕ ЭКСПЛАНТАЦИЙ ЗАРАЖЕННЫХ ОРГАННЫХ КУЛЬТУР. 95-109
5.1. Динамика синтеза противогриппозных тканевых ингибиторов в процессе эксплантации зараженных вирусами гриппа органных культур тканей плода человека и цыплят 96-100
5.2. Изучение влияния физико-химических факторов на противогриппозную активность культуральных жидкостей зараженных вирусами гриппа органных культур І0І-І05
5.3. Изучение противогриппозной активности культуральных жидкостей зараженных тканей. ;
с помощью . 105-109
Глава УІ. ИЗУЧЕНИЕ ДИНАМИКИ РАЗМНОЖЕНИЯ ВИРУСОВ И ГЙСТШАТ0Л01ИИ ГРИППОЗНОЙ ИНФЕКЦИИ В ОРГАНШХ КУЛЬТУРАХ В СОПОСТАВЛЕНИИ С
УРОВНЕМ ТКАНЕВЫХ ИНІИЕИТОРШ ІІ0-І38
6.1. Изучение динамики репродукции вируса гриппа в органных,культу pax ІІ0-ІШ
6.2. Изучение гистопатологии гриппозной инфекции на органных культурах легких
морских свинок II8-I27
6.3. Изучение гистопатологии гриппозной инфекции на органных культурах почек морских свинок. J27-I38
ОБСУЖДЕНИЕ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ 139-150
ВЫВОДЫ I5I-I52
ЛИТЕРАТУРА 153-1
Введение к работе
В настоящее время ни у кого не вызывает сомнения тот факт, что термолабильные вируснейтрализующие бета-ингибиторы сыворотки и секретов носовой полости играют определенную защитную роль при ряде вирусных инфекций (И.Х.Щуратов и др.,1967; Т.Я.Лузяни-на и др.,1969; Г.Н.Неведомская и др.,1972; А.С.Шадрин и др., 1972).
Что касается роли сывороточных термостабильных вируснейтра-лизующих гамма-ингибиторов в защите от гриппа, то, по мнению А.А.Смородинцева (1975), она значительно менее существенна.
Отделяемое слизистой носа, трахеи, бронхов, слюнных желез также проявляют антигемагглютинирующую и вируснейтрализующую активность против многих вирусов. Противовирусное действие секретов характеризуется выраженной термостабильностью (П.Н.Косяков, З.И.Ровнова, 1972; А.А.Смородинцев и др.,1975) и отсутствием корреляции между подавляющим гемаїгглютинацию и нейтрализацию вируса свойствами (R.Eosaen et al ,1965; Г.Н.Неведомская и др., 1972).
Тем не менее, некоторые исследователи отмечают зависимость резистентности человека и животных к гриппу от наличия ингибиторов в отделяемом верхних дыхательных путей и слюны (М.С.Бердин-ских, П.Н.Косяков, 1958; В.П.Мищенко, А.С.Горбунова, 1963; S.Baron et al ,1963).
Позднее выяснилось, что защитные свойства секретов слизистой носовой полости носят комбинированный характер: наряду с неспецифическими ингибиторами в секретах содержатся специфические секреторные иммуноглобулины A/sigA/. Молекула aig А отличается большим содержанием нейраминовой кислоты,что позволило предположить наличие у »lg А не только специфической, но и неспецифической активности (B.Rossen et al ,1966; E.H.Alford et al 1967; И.Х.Щуратов, 1976). субстанции обнаружены и в экстрактах тканей легких, слюнных желез, почек мышей, белых и хлопковых крыс (Т.Я.Дузянина, 1961; М.Й.Бисенова, 1963; uVbotouzinska .Krj.zanQva 1966; Л.И.Шахворостова и др.,1982). Показано отсутствие корреляции между титрами ингибиторов в сыворотках и экстрактах тканей животных (М.А.Яхно, 1961; М.Й.Бисенова, 1963).
О роли тканевых .ингибиторов в развитии гриппозной инфекции конкретных, четких данных нет. Имеются лишь единичные сообщения.
Н.А.Максимович и др.,(1969) показали,что ингибиторочувст-вительные штаммы вируса гриппа A/H2N2/ с низкой элюирующей активностью у мышей вызывали более выраженные изменения эпителия дыхательных путей, чем ингибиторорезистентные штаммы с высокой элюирующей активностью. Изучение процесса проникновения вируса гриппа А/Гонконг/І/68 /Н3№2/ в бронхиальной, альвеолярный эпителий мышей показало,что в течение первых 12 минут вирусы обнаруживаются в тесной связи с клетками бронхиального эпителия, продуцирующими слизь. В этих же клетках обнаружено максимальное проникновение вирусов (G.Lemeroier,R.Pontang«I974).
Противогриппозные ингибиторы сывороток и секретов достаточно полно охарактеризованы в отношении физико-химических и биологических свойств, динамики образования и содержания, а также влияния на указанные процессы гриппозной инфекции. Эти данные обобщены в обзорах и монографиях (П.Н.Косяков, З.И.Ровнова, 1972; А.А.Смородинцев и др.,1975; П.Н.Косяков, 1982).
Имеющиеся сведения о противогриппозных тканевых ингибиторах касаются в основном только констатации наличия ингибирующей активности в экстрактах тканей. Такое положение по-видимому обусловлено отсутствием подходящей модели для изучения тканевых ингибиторов. В качестве такой модели наше внимание привлек метод органных культур тканей, разработанный С.Д.Иржановым (1971) и обеспечивающий тканеспецифические функции морфологических структур. Применение органных культур дает исследователю своеобразный инструмент определения реакции органо- и тканеспецифических морфологических структур на самые разнообразные внешние воздействия. Эта модель широко используется вирусологами в изучении ответа ткани на вирусную инфекцию, когда желательно в максимально приближенных к структуре органа условиях исключить воздействие нейрогуморальних и физиологических воспалительных реакций организма, а также возможность вторичного бактериального заражения. Преимущества органных культур проявились особенно ярко при изучении деталей патогенеза респираторных вирусных инфекций (С.Д.Иржанов и Я.Е.Хесин, 1977; А.С.Новохатский, 1979; В.М.Жданов и С.Я.Гайдамович, 1982).
Цель работы. Все вышеуказанное послужило основанием для проведения настоящего экспериментального исследования, посвященного характеристике тканевых неспецифических противогриппозных ингибиторов в органных культурах различных тканей плода человека, цыплят и морских свинок.
В соответствии с основной целью задачами наших исследований являлись:
I. Определение наличия, изучение биологических и физико-химических свойств тканевых ингибиторов различных органов плода человека, цыплят, белых крыс и морских свинок до и в процессе эксплантации.
2. Изучение динамики образования, биологических и физико-химических свойств ингибиторов в процессе эксплантации зараженных вирусами гриппа органных культур тканей плода человека и цыплят.
3. Изучение динамики репродукции вирусов гриппа и гистопатологии гриппозной инфекции в органных культурах в сопоставлении с уровнем тканевых ингибиторов.
Научная новизна работы. Впервые определен и обоснован научный подход к изучению тканевых противогриппозных ингибиторов на модели органных культур, максимально сохраняющих структурные и функциональные особенности органа, в то же время исключающих влияние нейрогуморальных и общих физиологических факторов,имеющих место в целом организме.
Выявлены и изучены противогриппозные ингибирующие субстанции в экстрактах широкого круга тканей человеческого и животного происхождения.
Впервые изучена динамика накопления тканевых ингибиторов при эксплантаций органных культур до и после заражения вирусами гриппа. Дана гельхроматографическая и физико-химическая характеристика свойств тканевых противогриппозных ингибиторов. Впервые предпринята попытка изучения роли тканевых ингибиторов в гриппозной поражении органных культур путем сопоставления динамики репродукции вируса гриппа и патоморфологических изменений с уровнем ингибирующих субстанций в органных культурах тканей.
Научно-практическая ценность работы. Разработана модель,пригодная для изучения тканевых противогриппозных ингибиторов. Она может быть использована для изучения роли названных ингибиторов в патогенезе гриппа и других вирусных инфекций. Кроме того,модель органных культур, по-видимому, может обеспечить изучение влияния различных химиопрепаратов на патогенез вирусных инфекций. Данные репродукции вирусов гриппа и патоморфологйческих изменений в органных культурах тканей легких, почек и мозга, свидетельствуют о возможности осложнений со стороны указанных органов при гриппозной инфекции.
Считаю своим приятным долгом выразить искреннюю благодарность моим научным руководителям докторам медицинских наук И.Х.Щуратову и С.Ыржанову за предоставленную возможность и постоянную научно-методическую помощь при выполнений настоящей работы.
