Введение к работе
Актуальность проблемы. Вирусный гепатит С (ВГС-инфекция) является актуальной проблемой здравоохранения Около 3% человеческой популяции в мире инфицировано вирусом гепатита С (ВГС) Заражение ВГС в 60-80% случаев ведет к развитию хронического гепатита, заканчивающегося в 10-20% случаев циррозом и в 1-5% - гепатоцеллюлярной карциномой До настоящего времени не разработана эффективная вакцина для профилактики ВГС-инфекции, а лечение препаратами интерферона или интерферона в сочетании с рибавирином дает положительный эффект лишь у 30 - 40 % больных [Балаян МС, 1999, Шахгильдян ИВ, Михайлов МИ, Онищенко Г Г , 2003, Шляхтенко Л И , 2003, Турьянов М X , 2004]
Одной из основных проблем в создании вакцины для профилактики вирусного гепатита С и новых средств лечения инфекции было отсутствие методически простых и экономически рентабельных экспериментальных моделей продуктивной ВГС-инфекции в культурах клеток и у лабораторных животных В 1997 году в НИИ вирусологии им Д И Ивановского РАМН были получены доказательства способности ВГС реплицироваться в культурах клеток и в организме лабораторных животных, используя принципы культивирования вирусов семейства Flavivindae Также как и другие флавивирусы, цитопатогенные варианты ВГС, выделенные из крови ВГС-инфицированных людей, размножались в культурах клеток почек эмбрионов свиньи (СПЭВ), почек африканской зеленой мартышки (Vero), фибробластов куриных эмбрионов (ФЭК) после селекции в первичных клетках головного мозга сосунков беспородных белых мышей [Дерябин П Г , Исаева Е И , Вязов СО, Львов Д К, 1997]
Изучение экспериментальной ВГС-инфекции in vitro в культурах клеток различного происхождения [Дерябин П Г , 1997, 1999, Bartenschlager R , and V Lohmann, 2000, 2001, Trujillo-Munllo Kdel С, 2004, Tscherne DM, 2006, von
Hahn T , 2006, Yi M , 2006], а также in vivo у шимпанзе, древесных землероек, новорожденных беспородных белых и трансгенных мышей с трансплантированными человеческими гепатоцитами [Балаян МС, 1998, Дерябин ПГ, 1997, Полещук ВФ, 2006, Forns X, 1999, Abngnani S, 1999, Lanford R E , 2001, Mercer D F , 2001, Bukh J , 2004, Shin E С , 2005, Kneteman N M , 2006] позволило получить новые данные о биологических свойствах ВГС и некоторых особенностях патогенеза экспериментальной ВГС-инфекции Высокая стоимость предложенных биомоделей ВГС-инфекции in vivo ИІЖІШ сложность методических подходов ограничивали исследования в данной области, что заставляли исследователей искать альтернативные варианты моделей инфекции Потребность в методически простых и экономически рентабельных экспериментальных моделях ВГС-инфекции у лабораторных животных продолжает оставаться очень актуальной Такие модели необходимы для выяснения причин длительной персистенции вируса при ВГС-инфекции, для изучения протективных свойств разрабатываемых вакцин, для экспериментальной оценки противовирусной активности различных соединений на моделях ВГС-инфекции in vivo
Таким образом, мало исследованными и исключительно важными являются вопросы изучения возможности моделирования персистентной ВГС-инфекции in vivo, органного тропизма вируса гепатита С, динамики продукции специфических антител и длительности вирусемии Представляется актуальным разработка достоверных методов регистрации маркеров ВГС-инфекции у мышей обнаружение РНК ВГС и определение инфекционной, гемагглютинирующей (ГА) активностей вируса, непосредственно в органах, где активно накапливается антиген, а также выявление различных видов специфических антител
Цель и задачи работы: моделирование персистентной инфекции у взрослых мышей с использованием выделенного варианта ВГС, изучение закономерностей патологического процесса при экспериментальной ВГС-инфекции и получение доказательств способности цитопатогенного варианта
ВГС размножаться в различных органах и тканях беспородных белых мышей В соответствии со сформулированной целью были определены следующие задачи исследования
-
Моделирование экспериментальной персистентной ВГС-инфекции у взрослых беспородных белых мышей
-
Обследование в динамике внутренних органов и тканей животных, зараженных ВГС на наличие РНК ВГС
-
Изучение динамики развития инфекционной, ГА и антигенной активностей ВГС в крови и тканях внутренних органах лабораторных животных при персистентной ВГС-инфекции
-
Выявление гепатотропных, лимфотропных и нейротропных свойств цитопатогенного варианта ВГС при экспериментальной хронической инфекции у беспородных белых мышей
-
Проведение патоморфологических исследований ткани печени мышей в условиях персистентной инфекции, вызванной ВГС
-
Изучение динамики антителообразования при экспериментальном хроническом вирусном гепатите С у беспородных взрослых белых мышей
Научная новизна исследований.
-
Впервые продемонстрирована возможность моделирования персистентной инфекции, вызванной вирусом гепатита С, в организме взрослых беспородных мышей
-
Впервые обнаружена способность ВГС накапливаться в различных органах и тканях хронически инфицированных мышей
-
Показано, что основными маркерами ВГС инфекции у мышей могут служить РНК ВГС, инфекционная и ГА активности вируса
-
Выявлена динамика накопления инфекционного ВГС и его антигенов в крови и тканях внутренних органов животных по мере развития и
становления хронической инфекции, свидетельствующая о медленно-прогрессирующем характере инфекции у животных
-
Впервые получены данные о способности ВГС преодолевать гематоэнцефалический барьер у животных
-
Выявлены особенности динамики специфического антителообразования при ВГС-инфекции у мышей
Практическая ценность исследований.
-
Полученная экспериментальная модель ВГС инфекции in vivo может быть успешно использована для проведения доклинических испытаний противовирусной активности химиопрепаратов, индукторов интерферона и других иммуномодуляторов
-
Способность ВГС, содержащегося в различных органах и тканях зараженных животных, агглютинировать гусиные эритроциты открывает перспективу использования РГА и РТГА для диагностики гепатита С
-
Экспериментальная модель инфекции, вызванная ВГС в организме мышей, может быть использована для оценки способности разрабатываемых против гепатита С вакцин защищать животных от инфекции
