Введение к работе
Актуальность проблемы.
Бешенство (Rabies) - инфекционное заболевание природно-очагового типа, опасное для человека и многих видов диких и домашних животных Для него, как и для многих других зоонозных инфекций, характерно циклическое течение и наличие резервуара в дикой природе
По оценке Всемирной организации здравоохранения, бешенство входит в пятерку инфекционных болезней, общих для человека и животных, наносящих наибольший социальный и экономический ущербы. Инфекция является острой, абсолютно летальной болезнью, представляющей серьезнейшую проблему современного здравоохранения. В настоящее время бешенство регистрируется на территории более 80 стран мира, в которых ежегодно свыше 10 млн человек получают различные повреждения от животных и около 4 млн человек -специфическую антирабическую помощь Затраты на текущую профилактику и контроль за бешенством людей и животных в регионах, где наблюдается бешенство, превышают 400 млн. долларов США Ежегодно от 55000 до 70000 человек погибают после укусов животных, больных бешенством, половина из которых приходится на детей [Smith A, et al 2005, Aral YT. et al 2005]
Учитывая приведенные факты, большое значение имеет разработка национальных и межгос^дяпственных программ, наппавленных на борьбу с бешенством, основанных на всестороннем изучении современных особенностей этой инфекции Вместе с тем, научно обоснованная система контроля рабической инфекции должна быть разработана на основании знания биологических свойств вируса бешенства, изучении особенностей его экологии
Территории Новосибирской области и Алтайского края являются стационарно неблагополучными по рабической инфекции, они характеризуются регулярным проявлением эпизоотии бешенства в популяциях диких и домашних животных. Оценивая современное состояние проблемы бешенства, следует комплексно рассмотреть закономерности эпизоотического процесса и его особенностей в конкретных условиях, а также выявить экологические предпосылки к возникновению и распространению рабической инфекции.
Цель и задачи исследования.
Целью настоящей работы явилось изучение экологических и молекулярно-биологических характеристик лиссавирусов, циркулирующих на территории стационарно неблагополучной по рабической инфекции Для достижения поставленной цели нужно было решить следующие задачи*
1 Изучить динамику проявления рабической инфекции в
Новосибирской области в период 1997 - 2005 гг; 2. Выявить носительство лиссавирусов в популяции летучих мышей, обитающих в Новосибирской области и Алтайском крае,
Изучить спонтанное носительство вируса бешенства в популяции диких плотоядных в межэпизоотический период;
Молекулярно-генетическая характеристика лиссавирусов, выделенных от различных видов животных на территории стационарно неблагополучной по рабической инфекции
Положения выносимые на защиту.
Данные об экологических особенностях рабической инфекции на территории юга Западной Сибири
Определены молекулярно-генетические характеристики изолятов вируса бешенства, циркулирующих в Новосибирской области и Алтайском крае.
Получены данные, указьшающие на циркуляцию лиссавирусов генотипа 1 у насекомоядных летучих мышей, отловленных на территории Западной Сибири
Научная новизна работы.
Получены новые данные об экологических особенностях вируса бешенства на территории Новосибирской области
Впервые показана циркуляция лиссавирусов в популяции летучих мышей, обитающих на территории юга Западной Сибири, определена их принадлежность к лиссавирусам генотипа 1
Проведено молекулярно-генетическое изучение лиссавирусов, циркулирующих в Новосибирской области и Алтайском крае.
Теоретическая и практическая значимость.
Получены современные данные об экологических особенностях вируса бешенства, циркулирующих на стационарно неблагополучной территории, которые могут быть использованы для совершенствования мероприятий по борьбе с бешенством. Создана рабочая коллекция изолятов вирусов бешенства, циркулирующих на территории Новосибирской области, подготовлены проекты паспортов для депонирования в коллекции культур микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» По результатам работы в международной базе данных GenBank зарегистрированы 12 нуклеотидньгх последовательностей, которые в дальнейшем могут служить базой для конструирования праймеров для диагностики бешенства Материалы, изложенные в диссертационной работе, были использованы для издания учебного пособия
Апробация работы и публикации.
Материалы исследований были представлены на международной научной конференции «Современные проблемы эпизоотологии», (Новосибирск, 2004), сибирской международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины"» (Новосибирск, 2004), международной научно-практической конференции «Современные проблемы охотничьего собаководства», (Киров, 2004), всероссийской конференции «Сибирская
зоологическая конференция» (Новосибирск, 2004), межрегиональном совещании по вопросам профилактики особо опасных инфекций и дезинфектологии (11-15 октября 2004 года, г Новосибирск), межрегиональной научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы здоровья здоровья населения Сибири гигиенические и эпидемиологические аспекты» (Омск, 2004), сибирской международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2005), 3-ей российской научной конференции с международным участием «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера» (Новосибирск, 2006)
По теме диссертации опубликовано 6 статей, 3 из них в отечественных реферируемых журналах
Структура и объём диссертации.
Диссертация изложена на 179 страницах машинописного текста и состоит из 4 глав, введения, выводов и списка литературы (194 ссылки), содержит 8 рисунков и 14 таблиц
В работе были использованы образцы патологического материала от диких и домашних животных из Новосибирской области, Красноярского и Алтайского края Для диагностики бешенства исследовали головной мозг павших или вынужденно убитых животных с подозрением на заболевание бешенством.
Анализ эпизоотической ситуации по бешенству был проведен на основе отчетных данных і ^ г осп отребнадзора по nv^O за период с і ууЪ по 20v-* годы и Новосибирской межобластной ветеринарной лаборатории (Ї997 — 2005гг)
Сбор образцов первичного материала.
Пробы головного мозга поступали в вирусологические отделы Новосибирской областной ветеринарной лаборатории в течение 1997 - 2006 годов, в центр государственного санитарно-эпидемиологического надзора в Алтайском крае (2004 г), а затем были переданы в ГНЦ ВБ «Вектор» для подтверждения диагноза и молекулярно-генетического анализа Также в работе был использован вируссодержащий материал от человека, погибшего от бешенства в 2001 году, который был передан из Муниципальной инфекционной клинической больницы №1 в НИИ "Коллекция культур микроорганизмов "ФГУП ГНЦ ВБ "Вектор" Работа с этим материалом была одобрена этическим комитетом ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор»
Для сбора материала от летучих мышей за период с 2002 по 2006 годы было проведено 9 экспедиционных выездов Животных собирали в двух пещерах на территории Маслянинского района Новосибирской области, в 4 пещерах Алтайского района Алтайского края, на Телецком озере в окрестностях поселка Артыбаш Республики Алтай
Основные методы.
Работы по диагностике бешенства проводились на базе вирусологического отдела Новосибирской межрегиональной ветеринарной лаборатории согласно ГОСТ 26075-84, материал исследовали в реакциях иммунофлюоресценции, иммунопреципитации в агаровом геле и биологической пробы на беспородных белых мышах, также при постановке диагноза учитывались анамнестические данные Диагноз считали установленным при получении положительного результата хотя бы в одном из тестов
Параллельно выборочные пробы материала тестировали в ОТ-ПЦР с использованием праймеров на районы генов нуклеопротеина и гликопротеина вируса бешенства У 19 полученных ПЦР-продуктов были определены нуклеотидные последовательности и выведены аминокислотные последовательности фрагмента гена нуклеопротеина Определение нуклеотидной последовательности выделенного ПЦР фрагмента проводили на «Beckman CEQ2000XL DNa Analysis System» («Beckman Coulter, Inc>>) no методу Sanger et al. согласно инструкции к «Beckman sequencing Kit» Нуклеотидные и выведенные аминокислотные последовательности были анализированы с использованием программы MEGA (PSU, США) и DNASTAR (DNAStar Inc, США)
Создание рабочей коллекции кзолятов вирусов бешенства, выделенных на территории Новосибирской области
Для создания рабочей коллекции изолятов вирусов бешенства были выбраны образцы материала, поступившего из разных районов Новосибирской области от различных видов диких и домашних животных с учетом анамнестических данных и выраженности клинических проявлений болезни Выделение изолятов было проведено на беспородных белых мышах массой 6 -8 г Сбор материала проводили на пике заболевания лабораторных животных, при ярком проявлении клинических признаков, не допуская их гибели. Для каждого образца головного мозга заболевшей мыши при проведении биопробы, подтверждали наличие вируса МФА Для каждого изолята был заполнен паспорт коллекционного штамма микроорганизма для депонирования в Коллекция культур микроорганизмов Федерального Государственного Учреждения Науки Государственного Научного Центра Вирусологии и Биотехнологии «Вектор» (приложения)
