Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Основные свойства вирусов гриппа 7
Глава 2. Антигенная изменчивость вирусов гриппа типа А.
2.1. Основные закономерности циркуляции эпидемических штаммов вируса гриппа 17
2.2. Теории происхождения пандемических штаммов вируса гриппа 21
Глава 3. Эволюция генов эпидемических штаммов вируса гриппа 30
Глава 4. Материалы и методы 111
Глава 5. Анализ эпидемических штаммов вируса гриппа А человека серотипа H3U2, изолированных во время эпидемии 1979/1980 года 60
Глава 6. Анализ эпидемических штаммов вируса гриппа А человека серотипа НЖЕ, изолированных во время эпидемий 1979/1980 и I98I/I982 годов 83
Глава 7. Сравнительный анализ генома эталонных эпидеми ческих штаммов вируса гриппа А человека 95
Обсуждение результатов 113
Выводы 122
Список литературы 124
- Теории происхождения пандемических штаммов вируса гриппа
- Эволюция генов эпидемических штаммов вируса гриппа
- Анализ эпидемических штаммов вируса гриппа А человека серотипа H3U2, изолированных во время эпидемии 1979/1980 года
- Анализ эпидемических штаммов вируса гриппа А человека серотипа НЖЕ, изолированных во время эпидемий 1979/1980 и I98I/I982 годов
Введение к работе
Актуальность проблемы
Значительные успехи вирусологии в познании структуры, репродукции, генетики и иммунологии вируса гриппа не привели, однако, до сих пор к существенному прогрессу в борьбе с самим заболеванием. Гриппозные эпидемии ежегодно поражают десятки тысяч людей с развитием клинических признаков и тяжелых осложнений. Угроза новой пандемии гриппа, подобной пандемии 1918 года, продолжает существовать, к тому же и сейчас в индустриальных странах эпидемии гриппа занимают первое место среди причин смертности от инфекционных болезней /201, 218/. Урон, наносимый гриппом здоровью людей и экономике государств, обязывает проводить постоянное изучение проблемы гриппа во всех ее аспектах, и здесь важнейшим направлением является изучение и постоянный контроль изменчивости вирусов гриппа, поскольку этот процесс имеет прямое отношение к возникновению пандемических и эпидемических штаммов.
Уникальная способность штаммов вируса гриппа к изменению антигенных и биологических свойств существенно затрудняет использование противогриппозных вакцин. В первую очередь вышесказанное относится к вирусам гриппа А, для которых установлено два типа антигенной изменчивости: дрейф и шифт. Понятия дрейфа и шифта сложились на основании изучения антигенных свойств выделяемых штаммов вируса гриппа и включают в себя сведения об
антигенной изменчивости двух поверхностных гликопротеидов ви-риона - гемагглютинина и нейраминидазы. В последние годы существенный прогресс в изучении изменчивости вирусов гриппа был связан с расширением арсенала методов молекулярной биологии,
которые позволили характеризовать вирус гриппа по всем его структурным компонентам. Однако, до последнего времени основное внимание уделялось изучению изменчивости наружных гликопротеи-дов вируса гриппа. Имелись лишь единичные работы о том, что изменчивость может затрагивать не только гены, кодирующие гемаг-глютинин и нейраминидазу, но и внутренние негликозилированные белки /201, 218, 311/. В то же время широкое изучение изменчивости всех генов вируса гриппа в процессе циркуляции вируса в популяции людей, включая период эпидемии, крайне важно для понимания эволюции этого вируса, механизмов возникновения эпидемических штаммов и роли в этих процессах генов, кодирующих негликозилированные белки.
При изучении эволюции генов вируса гриппа и закономерностей циркуляции эпидемических штаммов важен выбор метода исследований. Широко применяемый метод картирования олигонуклеотидов целого генома и отдельных его сегментов /72, 106, 121, 204, 207, 311/ позволяет сравнивать близкородственные штаммы вируса гриппа лишь по крупным олигонуклеотидам, которые составляют не более 1/3 вирусного генома. Метод гибридизации вирусных РНК, предложенный Scholtissek и др. /104/, достаточно трудоемок и более пригоден для анализа дальнородственных вирусов гриппа. Сравнение последовательностей нуклеотидных оснований генов вируса гриппа является очень трудоемким процессом, к тому же возможно накопление артефактов при клонировании ДНК вируса в плаз-мидах. В настоящей работе мы проводили изучение гомологии отдельных генов штаммов вируса гриппа по методу, предложенному Ito и Yoklik /156/ и адаптированному для вирусов гриппа Hay и др., /276/. Этот высокочувствительный метод позволяет одновременно анализировать большое количество штаммов вируса гриппа сразу по всем генам.
Цель и задачи работы
Цель работы заключалась в исследовании особенностей генома штаммов вируса гриппа А человека, изолированных в течение одной и разных эпидемий. В соответствии с поставленной целью в задачи работы входило:
Изучить существует ли генетическая гетерогенность среди штаммов вируса гриппа одного серотипа (HINI и H3N2), циркулирующих в один эпидемический сезон, и имеет ли место изменение генов, кодирующих негликозилированные белки.
Изучение изменения генов у эталонных дрейфовых вариантов вируса гриппа серотипа H3N2, изолированных на протяжении ряда лет с момента первичного выделения в 1968 году и до варианта 1979 года.
Провести сравнение состава генома эталонных штаммов вируса гриппа разных серотипов (HINI, H2N2 и H3N2).
Научная новизна и практическая значимость работы
Показана возможность использования и высокая чувствительность метода анализа двухцепочечных гибридов кРНК/вРНК вирусов гриппа, обработанных нуклеазой SI, с последующим исследованием с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, для выявления изменчивости отдельных генов генома штаммов вируса гриппа, входящих в один серотип. Обнаружена изменчивость генов у эпидемических штаммов вируса гриппа, циркулирующих в один и тот же эпидемический сезон и даже в одном и том же регионе, затрагивающая как гены, кодирующие гемагглютинин и нейраминидазу, так и негликозилированные белки. Показана одновременная циркуляция
в одном регионе штаммов вирусов гриппа, различающихся не только по антигенной специфичности гемагглютинина и нейраминидазы, но также по генам, кодирующим негликозилированные белки. Установлена возможность появления в популяции людей рекомбинантов меж-
- б -
ду социркулирующими штаммами разных серотипов и одного и того же серотипа.
Работа носит в основном теоретический характер, однако может оказаться полезной как для идентификации циркулирующих эпидемических штаммов, так и при анализе генома рекомбинантных штаммов вируса гриппа, являющихся кандидатами для вакциных штаммов. Установленный нами факт о возможности возникновения рекомбинантов между циркулирующими в популяции людей штаммами вируса гриппа одного и разных серотипов накладывает определенные ограничения на выбор живых рекомбинантных вакцинных штаммов, которые должны наследовать максимальное число генов от единого донора аттенуации.
Теории происхождения пандемических штаммов вируса гриппа
Гипотез много. В том числе гипотеза, о которой вспоминает Alexander /53/, предполагающая внеземное происхождение новых вирусов гриппа. Hope-Simpson /132/ полагает, что вспышки гриппа инициируются реактивацией латентного вируса. Есть гипотеза о существовании в любой популяции эпидемического вируса всех его предшественников и вирусов будущих эпидемий /12/. Предполагают также возможность реактивации интегрированного в клеточнни геном генома вируса гриппа. Однако, эти гипотезы до сих пор никаких подтверждений не получили /IV Долгое время выдвигалась гипотеза в соответствии с которой антигенный сдвиг рассматривали как результат накопления мутаций у предсуществовавшего вируса гриппа человека, которые существенно меняют конформацию белковой молекулы и вызывают перестройку всех антигенных детерминант /115/« Однако, ряд аргументов свидетельствует против такого предположения. Так, картирование триптических пептидов показало, что полипептидные цепи субъединиц гемагглютинина вирусов гриппа "азиатского" типа, выделенных в конце эры Н2, значительно отличаются по составу аминокислот от полипептидных цепей штаммов группы "Гонконг" в начале эры НЗ /185/. А сравнение нуклеотидных последовательностей генов Н2 и НЗ подтвердило существенные различия между этими генами и их продуктами, превышающие возможности мутационной изменчивости /92/.
Другой предполагаемый механизм возникновения антигенных шифтов у вирусов гриппа А человека основан на наблюдениях, указывающих на широкое распространение вирусов гриппа А у животных, и предполагает непосредственную адаптацию вирусов гриппа животных к человеку или передачу отдельных генов этих вирусов в популяцию вирусов гриппа человека. Вирусы гриппа А выделяют от млекопитающих (лошади, свиньи, собаки, кошки, рогатый скот и др.) и разнообразных отрядов диких и домашних птиц (утки, куры, индюки, чайки, крачки, фазаны, вороны и др.) /б, 27, 267/. Тяжелая эпизоотия тюленей, вызванная птичьим вирусом гриппа /233/, выделение вирусов гриппа от китов /3/, рыб, а также из зоопланктона и воды озер /15, 41, 292/ позволяет предположить, что источником распространения инфекции могут быть мигрирующие колониальные птицы /23, 31, 180, 233, 287/. Наибольшее значение в распространении гриппозной инфекции могут иметь утки, поскольку у них наряду с острой инфекцией часто наблюдается бессимптомное носительство вирусов гриппа всех известных серотипов в кишечном тракте /195, 233, 287/. Имеются прямые доказательства возможности передачи вирусов гриппа А между птицами и млекопитающими /233/. Отмечен случай заражения человека гриппом от птиц при их тесном контакте /127/. Известны отдельные факты передачи человеку вирусов гриппа лошадей /II/. Установлено также, что резервуаром вируса гриппа могут быть свиньи, которые инфицируют друг друга не только респираторным путем, но и через легочных нематод, выделяемых зараженными особями в почву и заглатываемых другими особями с земляными червями /б/. Данные серологического изучения свидетельствуют о широкой циркуляции вирусов гриппа свиней среди различных видов животных /II, 44/. Известны также случаи, когда вирусы гриппа свиней были причиной заболеваний человека /73, 154, 162, 246, 253/. Например, вспышки гриппа свиней на двух фермах штата Висконсин, США, в 1976 году. Им сопутствовали случаи заболеваний среди работников ферм, йзо-ляты вирусов гриппа от заболевших людей оказались антигенно очень сходными с вирусом HswlNl, выделенным от свиней /162, 170, 291/. В том же 1976 году, во время вспышки гриппа среди военных новобранцев в Форте Дике, штат Нью-Джерси, США, вызванной штаммом А/Виктория/3/75 (H3N2), было выявлено 14 заболеваний вызванных вирусом гриппа А/Нью-Джерси/8/76 /298/. Электро-форез вирионной РНК этого вируса в полиакриламидном геле показал, что он по всем генам близок вирусу гриппа свиней (HswBTI) (по новой номенклатуре НЗШ) /214, 216, 225/. Вспышка показала возможность передачи вируса свиного гриппа от заболевших лиц путем контакта. Случай привлек большое внимание как сигнал начавшейся циркуляции возбудителя, родственного вирусу "испанки", и потенциального агента новой пандемии. Однако вспышка свиного гриппа среди людей быстро прекратилась, не распространившись за пределы лагеря. Таким образом, имеющиеся факты позволяют сделать вывод о том, что вирусы гриппа животных могут передаваться человеку и вызывать заболевание, однако, пока нет оснований считать, что они обладают достаточным потенциалом, чтобы стать эпидемическими и пандемическими агентами.
Значительно больше фактов накоплено о выделении эпидемических вирусов гриппа человека из популяции животных. Особенно часто это имеет место после пандемий. Причем вирусы в процессе адаптации к животным утрачивают свою высокую вирулентность для человека. Таким, образом, по-видимому, перешел в популяцию свиней и Прочно закрепился там возбудитель пандемии "испанки" /33, 169, 267/. Серологическое изучение и выделение вирусов показало, что эпидемические штаммы человека всех известных серо-типов интродуцируются в популяции животных (свиней, кур, собак, кошек, телят, приматов, птиц) с последующей длительной циркуляцией у них /3, 8, 9, 17, 18, 27, 29, 120, 136, 152, 169, 258, 265, 292/. Фрагментарность генома у вирусов гриппа обеспечивает возможность появления рекомбинантов, сочетающих гены вирусов гриппа человека и животных при их одновременной циркуляции. Такие рекомбинанты обнаруживались неоднократно /3, 68/. Возможность их появления подтверждена в различных экспериментальных системах /58, 164, 277, 286/, в опытах на домашних животных /288, 289, 290/ и в природе /75, 126/. Гены эпидемических вирусов, будучи инкорпорированы в геном таких рекомбинантов, могут, видимо, длительно сохраняться в природных биоценозах без существенных изменений, так как из-за быстрой смены генераций у животных действие популяционного иммунитета не столь выражено. Предполагаются, что животные могут быть своеобразными копилками генов вирусов гриппа, переставших циркулировать среди людей, и, согласно рекомбинационной теории антигенного шифта, резервом штаммов для новых пандемий /6, 14, 19, 75, 186, 193, 210, 310/. Сторонники этой теории (Жданов, Львов, Закстельская, Webster, Laver, Kilboume, Scholtissek и др.) считают, что новые пандемические штаммы формируются из единого генофонда вирусов гриппа человека и животных. Пандемические штаммы представляют собой рекомбинанты, которые наследуют определенное сочетание генов старого эпидемического штамма, определяющее вирулентность вируса для человека, а от вируса животного происхождения новый вирус получает гены, кодирующие один или оба поверхностных гликопротеида, определяющих антигенные свойства. Тот факт, что из всех антигенных подтипов, встречающихся у животных, заболеваемость человека до сих пор была связана лишь с тремя подтипами НА и двумя подтипами NA; приводит сторонников рекомбинационной гипотезы к заключению
Эволюция генов эпидемических штаммов вируса гриппа
Еще несколько лет назад серологический тест был единственным доступным методом для сравнения эпидемических штаммов и установления факта эволюции вирусов гриппа. В последнее время существенный вклад в изучение эпидемиологии гриппа внесли новые методы биохимии и иммунологии. Эти методы включают картирование пептидов /185/» электрофорез вирионных РНК и белков в по-лиакриламидных гелях /215/, РНК-РНК гибридизацию /210, 248, 276/, олигонуклеотидное картирование /202/, использование моно-клональных антител /293/, расшифровку последовательностей нук-леотидных оснований генов вирусов гриппа и их продуктов с помощью кДНК-копий вирусных РНК.
Методы молекулярной биологии позволили существенно углубить представления как об эволюции генов, кодирующих гликози-лированные белки, так и обнаружить изменения в генах, кодирующих внутренние белки вирусов гриппа. С помощью наборов моноклинальных антител выявлено быстрое накопление изменений в антигенной структуре штаммов серотипов НОТ и H3N2, изолированных в течение последних лет /16, 24, 106, 204, 207, 293/.
Так было установлено, что штамм А/Бразилия/Н/78 (HINT), получивший распространение вскоре после начала циркуляции вируса А/СССР/90/77 (НІНІ), утратил способность реагировать с моноклональными антителами по крайней мере к эпитопу 264 своего предшественника. Более поздний дрейфовый вариант А/Англия/ 333/80 (НЗШ) также не реагировал с моноклональными антителами к эпитопу 264, кроме того он утратил сходство в эпитопе НО /106, 107/.
Среди штаммов серотипа НЗЕГ2, циркулировавших в 1979-1980 гг. обнаружены варианты, утратившие общую для серотипа НЗ антигенную детерминанту /16/. Моноклональные антитела помогли обнаружить антигенные варианты, которые в ряде случаев не распознавались в серологических реакциях с гипериммуными сыворотками хорьков. Сравнение вирусов гриппа методом картирования олиго-нуклеотидов всего генома и отдельных фрагментов РЖ позволило установить возможность одновременной циркуляции штаммов одного серотипа, отличающихся по составу генома. Олигонуклеотидное картирование, молекулярная РНК гибридизация, электрофорез вирус-специфических белков и РНК показали высокую изменчивость вирусов гриппа человека не только в генах, кодирующих белки оболочки, но ив генах, кодирующих негликозилированные белки /41, 106, 121, 168, 204, 207, 213, 311/. Такие мутации обнаруживаются как при сравнении штаммо.в одного дрейфового ряда, изолированных в течение несколько лет, так и у одновременно циркулирующих штаммов. Более точную количественную оценку эволюции отдельных генов эпидемических штаммов дает сравнительный анализ последовательностей нуклеотидных оснований генов вирусов гриппа и их -продуктов. В настоящее время эти исследования находятся на стадии накопления фактов, однако определенные выводы уже можно сделать.
Сейчас известны полные последовательности нуклеотидных оснований гена 4, кодирующего гемагглютинин, целого ряда штаммов вируса гриппа типа А: серотипа НІ - A/WSN/33 /130/, A/PR / 8/34 /307/; серотипа Н2 - А/Япония/305/57 /92/; серотипа НЗ -А/Аичи/2/68 /59/, А/Мемфис/1/71 /254/, А/Мемфис/102/72 /268/, А/Зиктория/3/75 /102/, А/Бангкок/1/79 /84/, A/tTT/60/68 /83/, А/Англия/321/77 /208/; серотипа Н7 - А/ВЧП/Росток/34 /98/. Расшифрованы также нуклеотидные последовательности сегмента гена, кодирующего HAI штаммов серотипа HI - А/СССР/90/77, А/Бразилия/ 11/78, А/Лакланд/3/78, А/Англия/333/80 /67/; серотипа НЗ -А/Англия/42/72 и А/Порт Чалмерс/1/73 /280/, и около 20$ последовательностей 3 -конца гена НА целого набора штаммов, принадлежащих к 12 серотипам гемагглютинина /50, 62/. Установление последовательностей нуклеотидов позволило предсказать соответствующие им последовательности аминокислот в полипептиде НА. Кроме того, полные аминокислотные последовательности НА многих штаммов вируса гриппа серотипа НЗ определены с помощью прямого секвенирования полипептидной цепи НА /52, 55, 109, 188, 201, 281/.
Хорошо известно отсутствие перекрестных антигенных взаимодействий между вирусами гриппа разных серотипов в серологических реакциях, однако, уже замена одной аминокислоты в полипептиде НА может полностью изменить антигенную специфичность отдельных антигенных детерминант, поэтому важно знать степень и характер различий последовательностей НА разных штаммов.
Установление первичной структуры НА ряда штаммов вируса гриппа разных серотипов помогло выявить некоторые консервативные признаки, позволяющие считать, что все серотипы произошли от общего предшественника и сохранили основные структурные черты /304/. Так, на НН2-конце субъединицы НА2 сохраняется консервативность аминокислот. Сходство имеется и в карбоксильном конце молекулы НА2, приспособленном для заякоривания гемагглютинина в оболочке вириона /218/, На протяжении всей длины молекулы НА у штаммов вируса гриппа 12 серотипов наблюдаются многочисленные консервативные цистеиновые остатки /50/. Полипептид НА вирусов гриппа человека трех серотипов в месте соединения субъединиц HAI и НА2 содержит один аргининовый остаток /130, 280/. Сходство основных структурных черт позволяет белку НА сохранять ряд важных биологических функций, таких как адсорбция на клеточной поверхности и проникновение в клетку хозяина. В то же время сравнение представителей серотипов HI, Н2 и НЗ эпидемических вирусов гриппа человека, а также серотипов НЗ (А/Утка/Украина/1/бЗ) и Н7 (А/ВЧП/Росток/34) вирусов гриппа птиц по гену НА подтверждает, что между подтипами НА имеются значительные различия как на нуклеотидном, так и на аминокислотном уровнях. Переходных форм между подтипами не обнаружено. Эти различия ясно показывают, что антигенный шифт не является результатом накопления точечных мутаций в течение антигенного дрейфа. Сравниваемые штаммы вирусов гриппа разных серотипов значительно варьируют по длине и последовательностям сигнального пептида, нетранслируемых сегментов на 5 -конце и на 3 -конце кРНК. Штаммы вирусов гриппа различных подтипов отличаются также по количеству нуклеотидов, кодирующих субъединицы HAI и НА2, и по числу аминокислот, входящих в их состав. Так, число, кодирующих последовательностей в гене 4 составляет для серотипа HI 1695 нуклеотидов (А/йШ/33) и 1698 нуклеотидов (А/ PR/8/34); для серотипа Н2 1686 нуклеотидов (А/Япония/305/57); для серотипа НЗ 1698 нуклеотидов (А/Утка/Украина/1/63, А/Аичи/ 2/68, А/ітТ/60/68, А/Англия/21/77) и 1701 нуклеотид (А/Мемфис/ 102/72, А/Виктория/3/75).
Анализ эпидемических штаммов вируса гриппа А человека серотипа H3U2, изолированных во время эпидемии 1979/1980 года
Еще недавно считалось общепризнанным, что, как правило, возбудителем конкретной эпидемии гриппа является единственный штамм и этот возбудитель новой эпидемии полностью вытесняет предшествующий вирус из популяции людей. Лишь в последние годы появились четкие данные, что в эпидемии гриппа в ограниченном районе могут участвовать несколько вариантов вируса гриппа, относящихся как к различным серотипам /170/, так и к различным антигенным разновидностям в пределах одного серотипа /93/. Было обнаружено также, что в процессе одновременной циркуляции в популяции людей вирусов гриппа, относящихся к различным серотипам, могут возникать рекомбинанты /72/. Кроме того, появились данные о том, что эпидемические штаммц вируса гриппа одного серотипа, изолированные в различное время, могут отличаться не только по генам, кодирующим белки наружной оболочки, но и по генам, кодирующим внутренние белки вириона /228, 311/.(см. Обзор литературы).
В задачу настоящего раздела работы входило детальное изучение состава генома штаммов вируса гриппа, изолированных во время эпидемического сезона 1979/1980 года в городах СССР (Москве и Риге) и ГДР. Анализ эпидемических изолятов проводили в сравнении с вирусами гриппа, принятыми в качестве международных эталонных эпидемических штаммов последних лет. Это штаммы серотипа H3N2: А/Виктория/3/75 и его антигенный аналог штамм А/Москва/406/76, циркулировавшие в Москве в последнюю эпидемию перед появлением в 1977 году штаммов серотипа НШІ, А/Техас/ 1/77, выделенный в США в 1977 году, когда одновременно циркулировали штаммы серотипов HINI и H3N2; А/Бангкок/1/79 и его антигенная разновидность А/Бангкок/2/79 - эталонные штаммы эпидемий 1979 и 1980 годов.
Эпидемические изоляты сравнивали между собой и с эталонными штаммами в реакции торможения гемагглютинации, по способности репродуцироваться при повышенных температурах, по электрофо-ретической подвижности вирусспецифических белков и путем анализа гомологии индивидуальных генов, .при котором получали двухце-почечные комплексы кРНК/вРНК, обрабатывали их SI нуклеазой и изучали с помощью электрофореза в ПААГ.
Среди исследованных штаммов вируса гриппа, изолированных в Москве в эпидемию 1979/1980 года, по данным реакции торможения гемагглютинации два штамма (1366/79 и 2175/79) обладали гемагглютинином HI (см. гл. 6), остальные штаммы, выделенные в Москве, Риге и городах ГДР, - гемагглютинином НЗ. Изоляты штаммов серотипа НЗК? исследовали в реакции торможения гемагглютинации более подробно с антисыворотками к эталонным вирусам гриппа этого серотипа и к некоторым свежевыделенным вирусам. Данные, представленные в таблице 4, показывают, что среди вирусов гриппа выделенных в Москве штамм 1472/79 имеет гемагглюти-нин антигенно сходный с гемагглютинином штамма А/Бангкок/1/79. Гемагглютинины штаммов 1192/79 и 1849/79 антигенно идентичны штамму А/Техас/1/77. Штаммы 1662/79, 2146/80, 28/80 и 29/80 по антигенной специфичности гемагглютинина наиболее близки штамму А/Москва/40б/76, хотя несколько от него отличаются. Все штаммы выделенные в Риге (см. также табл. 5), за исключением изо лята А/Рига/2/79, имеют гемагглютинин антигенно сходный со штаммом А/Бангкок/1/79. Гемагглютинин штамма А/Рига/2/79 антигенно бли В литературе имеются данные о распространении в природе штаммов вируса гриппа человека, отличающихся по степени темпе-ратурочувствительности /28, 209, 212/. Все изучаемые в нашей работе эпидемические изоляты были проверены на способность размножаться в куриных эмбрионах при температурах 36, 40 и 42С. В табл. б представлены результаты одного из трех опытов, показавших сходные результаты. Полученные данные свидетельствуют, что ни один из исследованных штаммов серотипа НЖ не обладал способностью размножаться в куриных эмбрионах при 42С. Выявлена группа штаммов, изолированных в одном районе Москвы (1662/79, 2146/80, 28/80, 29/80), и группа штаммов, выделенных в другом районе (1192/79 и 1849/79), которые хорошо размножались как при 36, так и при 40С подобно эталонному вирусу А/ Техас/1/77. В то же время изолят 1472/79 из Москвы, все изоляты из эпидемий в Риге и ГДР, а также стандартные штаммы АДіос-ква/406/76, А/Бангкок/1/79 и А/Бангкок/2/79, не репродуцировались при 40С. Для этой группы штаммов оптимальной для размножения была температура 36С.
Анализ эпидемических штаммов вируса гриппа А человека серотипа НЖЕ, изолированных во время эпидемий 1979/1980 и I98I/I982 годов
Как сообщалось в обзоре литературы (гл. 2), в 1977 году, во время циркуляции вирусов гриппа серотипа H3N2, после 20-летнего отсутствия вновь появился и быстро распространился в популяции людей вирус гриппа серотипа НІНІ (штамм А/СССР/90/77) /299/. В последующие годы ситуация не изменилась: совместная циркуляция штаммов серотипов НШІ и H3N2 продолжается. В Москве, во время эпидемии 1979/1980 г. наряду со штаммами серотипа H3N2, анализ генома которых приведен в главе 5, заболеваемость гриппом вызывали также штаммы серотипа НІНІ, Так, в октябре 1979 года от больного был выделен штамм вируса гриппа серотипа НИЛ 1366/79, а в декабре - штамм серотипа НИИ 2175/79. В сезон І98І/І982 гг. в СССР эпидемии гриппа не было зарегистрировано, хотя и отмечались спорадические случаи заболеваемости /25/. В этот период в Москве наряду с вирусами серотипа H3N2 было выделено несколько штаммов вируса гриппа, относящихся к серотипу HINI. Среди них изоляты 45/81, 46/81, 9058/81, 9085/82. Анализ штаммов серотипа НІВГІ, выделенных в 1979/1980 и I98I/I982 гг., проводили при использовании описанных в гл. 4 методов. Эпидемические изоляты сравнивали со стандартными, штаммами серотипа HINI, циркулирующими в популяции людей с 1977 года: А/СССР/90/77, А/Бразилия/П/78 и А/Англия/333/80 /72, 170, 207, 299/. В анализ включен также эталонный штамм эпидемии гриппа 1947 года серотипа НШ A/FM /1/47. выделенных в 1979/1982 гг.,в реакции торможения гемагглютинации с крысиными антисыворотками к эталонным вирусам А/СССР/90/77 и А/Бра з ил ия/П/78, представлены в таблице 8. Видно, что штамм 1366/79 имеет гемагглютинин антигенно сходный с гемагглютинином штамма А/Бразилия/11/78. Группа штаммов 45/81, 46/81, 9058/81, 9085/82 в РТГА с антисыворотками к вирусам А/СССР/90/77 и А/Бразилия/П/78 реагирует приблизительно так, как эталонный вирус А/Англия/333/80.
Штамм 2175/79 оди- наково хорошо реагирует с антисывороткам к вирусам А/СССР/90/77 и А/Бразилия/П/78. Изучение изолятов вируса гриппа серотипа НШІ по способности к репродукции в куриных эмбрионах при температурах 36, 40 и 42С показало (табл. 9), что все изоляты вирусов, также, как эталонные штаммы серотипа НИЛ, не размножались при повышенных температурах 40 и 42С. Оптимальной для репродукции была температура ЗбС. Анализ генома штаммов серотипа HINI, выделенных от больных в течение последних лет, проводили при использовании описанного выше метода электрофореза в ПААГ двухцепочечных РНК, полученных при гибридизации комплементарных РІЖ исследуемых штаммов с ви-рионными РНК эталонных штаммов вируса гриппа серотипа НПП: А/СССР/90/77, А/Бра з ил ия/П/78 и А/Англия/333/80. Результаты экспериментов представлены на рисунках 10, II, 12, 13 и обобщены в таблице 10. Анализ эпидемических штаммов серотипа НІНІ начали со сравнения между собой эталонных штаммов, включая эталонный штамм А/рц/1/47, выделенный в 1947 году. Сопоставление электрофоретических подвижностей дцРНК, полученных в результате гибридизации вРНК штамма А/СССР/90/77 с гомологичной кРНК и с кРНК штаммов А/Бра з ил ия/П/78 и А/Англия/ 333/80, показало (рис. 10), что между штаммами А/СССР/90/77 и А/Бра зил ия/П/78 (дорожки С и Б) имеются лишь небольшие различия в подвижности гена 7, кодирующего белок М. По генам I, 2, 3, 4, 5, 6 и 8 штаммы А/СССР/90/77 и А/Бра з ил ия/П/78 не различались. Между штаммами А/СССР/90/77 и А/Англия/333/80 (дорожки С и А) отмечены более выраженные отличия по генам 4, 5 и 7 и некоторые различия в подвижности гена I, кодирующего белок полимеразного комплекса Рв2. Фрагменты РНК 2, 3, 6 и 8 обоих штаммов по электрофоретической подвижности были сходны.
![Чувствительность эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к химиопрепаратам [Электронный ресурс]](/i/i/4453/177401.png "Чувствительность эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к химиопрепаратам [Электронный ресурс] Шевченко Елена Сергеевна")
