Содержание к диссертации
Введение
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
2.1. Этиология, патогенез, клиника, диагноз, дифференциальный диагноз чумы плотоядных 9
2.2. Иммунитет и специфическая профилактика в иммунной защите животных 18
2.3. Применение средств этиотропнои, патогенетической и симптоматической терапии при лечении собак с диагнозом чума плотоядных 28
2.4. Применение ультрафиолетового облучения аутокрови (УФО-аутокрови) в гуманитарной и ветеринарной медицине 29
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 44
3.1. Материал и методы 44
3.2. Результаты исследований и их обсуждение 56
3.2.1. Состояние клинического и иммунного статуса у собак при чуме плотоядных 56
3.2.2. Состояние клеточного иммунитета у собак при чуме плотоядных 57
3.2.3. Состояние гуморального иммунитета у собак при чуме плотоядных 68
3.2.4. Коррекция ронколейкином и УФО-аутокрови клеточного иммунитета у собак до и после лечения 73
3.2.5. Коррекция ронколейкином и УФО-аутокрови гуморального иммунитета у собак до и после лечения 84
3.2.6. Биохимические показатели крови у собак при чуме плотоядных 90
3.2.7 Лечение больных собак и профилактика чумы плотоядных 94
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 97
5. ВЫВОДЫ 111
Список литературы 114
- Этиология, патогенез, клиника, диагноз, дифференциальный диагноз чумы плотоядных
- Иммунитет и специфическая профилактика в иммунной защите животных
- Материал и методы
Введение к работе
Актуальность темы. Важную роль в жизни человека играют мелкие непродуктивные животные: кошки и собаки, которые входят в его быт. Содержат этих животных, как правило, в домашних условиях. При заболевании они создают большие неудобства для владельцев, особенно, если болезнь связана с вирусной инфекцией.
В возникновении и развитии болезней животных важную роль играет иммунитет. При проникновении в организм патогенных микроорганизмов проявляется ответная реакция животных в виде специфических и неспецифических изменений.
Актуальной задачей ветеринарных специалистов является поиск новых методов лечения больных и профилактики чумы плотоядных. Большую роль в лечебно-профилактических мероприятиях имеет правильный подбор лекарственных веществ в составе средств комплексной терапии (И.П. Долгушин и соавт., 1992; П.И. Игнатов, 1994; М.В; Михайлова, 1999 и др.).
Современное представление об этиологии, клинике и патогенезе чумы плотоядных позволяет использовать синергидные лекарственные препараты и различные их сочетания.
В настоящее время в мировой медицинской практике формируется новое направление, получившее название квантовой гемотерапии. Квантовая гемотерапия включает в себя все методы терапии, в основе которых лежит внутрисосудистое или экстракорпоральное воздействие на кровь лучевой энергии, независимо от ее спектрального диапазона. Ультрафиолетовое облучение (УФО) - аутокрови широко применяется в гуманитарной медицине при различных заболеваниях: гнойно-воспалительных, эндокринных, желудочно-кишечных, сердечно-сосудистых, болезнях почек, органов дыхания и др.
Решением Ученого медицинского Совета МЗ СССР №
19-20/130-24 от 21.09.81. квантовая гемотерапия, составной частью которой является УФО-аутокрови, была разрешена для практического применения как один из способов повышения неспецифической резистентности организма.
В литературных источниках имеются отрывочные сведения о применении УФО-аутокрови при лечении диспепсии, бронхопневмонии, рахита, нарушений обмена веществ, парвовирусного энтерита и др. (О.Н. Канина, Д.Б. Каримов, 2003; К.В. Даллакян и соавт., 2005; и др.). В доступной нам литературе мы не нашли данных о применении УФО-аутокрови и иммуномодулятора ронколейкина при лечении собак, больных чумой плотоядных. В гуманитарной медицине широко применяется иммуномодулятор ронколейкин - (интерлейкин-2), который продуцируется субпопуляцией Т-лимфоцитов (Т-хелперов) в ответ на антигенную стимуляцию.
Чума плотоядных регистрируются, в основном, у молодых животных, имеющих низкую иммунную резистентность, болезнь протекает тяжело с высокой летальностью. В свете изложенного представляет научный и практический интерес коррекция иммунного и биохимического статуса у больных собак для повышения специфических и неспецифических факторов защиты организма.
Цели задачи исследования. Цель настоящей работы - изучить влияние УФО-аутокрови и иммуномодулятора ронколейкина в составе средств комплексной терапии на состояние иммунной активности собак при чуме плотоядных.
Для реализации поставленной цели определены следующие задачи:
1. изучить влияния ронколейкина и УФО-аутокрови на показатели лейкоформулы, белкового обмена и резервной щелочности, состояние клеточного и гуморального иммунитета у собак при чуме плотоядных;
2.определить терапевтическую эффективность применения
ронколейкина и УФО-аутокрови в составе средств комплексной терапии при лечении больных собак;
3. дать рекомендации по применению УФО-аутокрови и ронколейкина, при лечении собак, больных чумой плотоядных.
Научная новизна. Впервые в практике ветеринарной медицины было проведено лечение собак, больных чумой плотоядных, с применением в составе средств комплексной терапии УФО-аутокрови и ронколейкина. Изучено влияние УФО-аутокрови и ронколейкина на иммунобиохимический статус собак, больных чумой плотоядных. По результатам исследований разработана научно обоснованная схема патогенетической терапии с применением иммуномодулятора ронколейкина и физических методов.
Челябинским областным управлением ветеринарии утверждено «Временное наставление» по широкому испытанию УФО-аутокрови в ветеринарной медицине до 01.01.2007 года.
Теоретическая и практическая значимость работы. На основании полученных результатов о состоянии иммунитета, уровне фагоцитарной и лимфоцитарной активности в крови исследуемых животных, нами разработан комплексный метод лечения собак больных чумой плотоядных, Изучена терапевтическая эффективность УФО-аутокрови и ронколейкина при лечении больных собак. По результатам исследований даны практические рекомендации для практикующих ветеринарных врачей и клиницистов по применению УФО-аутокрови в составе средств комплексной терапии. Экспериментальным путем подтверждено иммуномодулирующее действие УФО-аутокрови и ронколейкина.
Результаты проведенных исследований дают возможность ветеринарным врачам клиницистам повысить эффективность лечебных мероприятий и сохранность больных собак. Кроме того, полученные материалы могут быть использованы при написании учебников,
методических рекомендаций, и руководств по лечению мелких непродуктивных животных.
На защиту выносятся следующие положения:
- у больных животных увеличивается уровень фагоцитарной
активности нейтрофилов, возрастает количество лейкоцитов, Т и В-
лимфоцитов, Т-хелперов и Т-супрессоров; в крови появляются юные
нейтрофилы и миелоциты, снижается число эозинофилов, увеличивается
количество лимфоцитов и сегментоядерных нейтрофилов, возрастает
уровень секреторного Ig-A и Ig-M, снижается количество общего белка и
гамма-глобулиновой фракции;
- после лечения больных животных с применением в составе средств
комплексной терапии УФО-аутокрови и ронколейкина не выявляются юные
нейтрофилы, нормализуется количество лейкоцитов, лимфоцитов,
палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, уровень общего белка и
белковых фракций, количество Т и В-лимфоцитов, соотношение Т-хелперов
и Т-супрессоров, что свидетельствует об иммуномодулирующем действии
УФО-аутокрови и ронколейкина.
Апробация результатов научных исследований. Материалы исследований доложены на: международной научно-практической конференции «Перспективные направления научных исследований молодых ученых Урала и Сибири» - Троицк, 2004); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины», посвященной 75-летию УГАВМ. - Троицк, 2005; международной научно-практической конференции - Костанайского инженерно-экономического университета им. М. Дулатова.- Костанай, 2004; международной научно-практической конференции. - Костанай, 2005.
Публикации результатов исследований. Основные положения работы опубликованы в 7 научных статьях, тезисах, материалах конференций Уральской государственной академии ветеринарной медицины
и Костанайского инженерно- экономического университета им. М. Дулатова.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы.
Работа изложена на 141 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 22 рисунком и 23 таблицами. Библиографический список включает 262 источника, в том числе 61 - иностранных авторов.
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Этиология, патогенез, клиника, диагноз, дифференциальный диагноз чумы плотоядных
Возбудитель болезни, чумы плотоядных, фильтрующийся РНК содержащий вирус из семейства Paramixoviridae рода Morbili (корнеплодный). Форма вирионов от сферической до нитевидной, диаметр колеблется от 115 до 160 нм. Внутри содержит нуклеокапсид со спиральной структурой (П.Е. Игнатов, 1994, 1995;).
Вирус чумы плотоядных находится в родстве с вирусом кори человека, а также имеет одностороннюю антигенную связь с вирусом крупного рогатого скота (B.C. Слугин, 1993).
В иммунологическом отношении различные штаммы вируса чумы, выделенные от больных собак в разных географических зонах, однородны и отличаются лишь вирулентностью (А.Д. Белов, Е.Н. Данилов, 1995).
Вирус чумы плотоядных устойчив к действию различных физических и химических факторов (Д.Р. Шуст, А.Д. Носкова, Т.В. Третьяк, 1993). В замороженной селезенке при температуре -24С вирус не теряет вирулентности до 5 лет, на холоде сохраняется до 8,5 месяцев, в высушенном состоянии активен до 3 месяцев. При t - 20С в органах павших животных он выживает до 6 месяцев, в крови - до 3 месяцев, в слизи носовой полости - до 2 месяцев (И.М. Беляков, В.П. Лукьяновский, 1996).
Вирус, в теплое время года в кале, моче, слизи сохраняется 7-11 дней, при минусовой температуре (-5 - 20С) - несколько месяцев (М.И. Гертман, 1998). Температура 100С убивает вирус мгновенно (М.И. Гертман, 1998).
На вирус губительно действуют 1%-ный раствор формальдегида, через три часа наступает гибель, коспос 5%-ной концентрации - гибель наступает через 2 часа, 1%-ный раствор лизола и ультрафиолетовые лучи - гибель наступает через 30 минут, 2%-ный раствор едкого натрия - гибель наступает через 60 минут. Наиболее опасным заболеванием для домашних собак является чума плотоядных (В.Д; Бойко, В.В. Туркевич, 1990; В.Н. Сюрин и соавт. 1991; П.Е. Игнатов, 1995; А.Л. Лазовская, 3.F. Воробьева, 1996; A.D. Osterhaus. 1997).
Этиология. К вирусу чумы плотоядных восприимчивы собаки, серебристо-черные, красные лисицы, песцы, норки, уссурийские еноты, белые африканские и бурые хорьки, соболи, куницы, медведи, ласки, горностаи, барсуки, выдры, леопарды, шакалы, гиены, волки, ягуары, а при искусственном заражении - котята и кролики (К.A. Alexander et. al., 1994; L. Haas et. al, 1996; M. J. Appel, et. al., 1994).
Болеют собаки всех возрастов, но особенно восприимчив молодняк (СИ. Снигирев, 1989; М. Blixenkrone- Moller et. al., 1993 и др.). Подсосные щенки заболевают реже вследствие наличия у них пассивного иммунитета за счет получения его с молозивом матери (СИ. Снигирев, 1989; В.И. Уласов и соавт., 1989; П.Е. Игнатов, 1995; P.S. Ross et. al., 1994 и др.).
Наибольший процент заболевания составляет у щенков в возрасте от 6 мес. до 1 года. До 20 процентов заболевания животных в этом возрасте, как правило, связано с наличием у них генотипа, который не способен им обеспечить адекватный иммунный ответ к вирусу чумы плотоядных. Собаки старших возрастов болеют реже, в основном поражаются собаки от 7 лет и старше. Собаки от года до семи лет обладают более высокой степенью иммунологической защиты и болеют очень редко. Щенки от вакцинированных и естественно переболевших чумой матерей, как правило, не заболевают.
Колостральный иммунитет предохраняет щенков от заболевания чумой в течение двух недель с момента отсадки от матерей, позднее, если им не сделать прививку, они также могут заболеть.
Восприимчивость собак к чуме зависит и от породы: более устойчивые - беспородные, терьеры, эрдели; менее устойчивы - ротвейлеры, пудели, колли, немецкая и южнорусская овчарки, московская сторожевая, лайки, пекинесы, некоторые декоративные, охотничьи породы животных (СИ. Снигерев, 1989; П.Е. Игнатов, 1994, 1995). Основной источник инфекции -больные, недавно переболевшие собаки, а также животные в инкубационном периоде болезни. Вирусоносительство у собак после переболевания чумой продолжается 2-3 месяца (А.Д. Белов, Е.П. Данилов, 1995).
Заражение собак происходит воздушно-капельным путем, алиментарно и при непосредственном контакте на выставках и выгульных площадках. Болезнь регистрируется в течение всего года, но чаще - весной и осенью (В.Д. Бойко, В.В.Туркевич, 1990; В.А. Мишина, 1993 и др.).
Иммунитет и специфическая профилактика в иммунной защите животных
Иммунитет (Immunitas, Immunitatis - освобождение от чего-либо) - защитная реакция организма от генетически чужеродной информации, которая может быть в виде микробов и вирусов, чужеродных белков, гаптенов и др.
Способность к таким реакциям носит наследственный характер или приобретается в течение жизни живого организма.
Иммунная система. Макфарлейн Бернет (1990), один из создателей современной теории иммунитета, определяет его как «способность» распознавать вторжение в организм чужеродного материала и мобилизовать клетки и образуемые ими вещества на более быстрое и эффективное удаление этого материала.
Чужеродное вещество, вызывающее образование антител, называется антигеном или иммуногеном. Обычно антиген представляет собой белковую или полисахаридную молекулу. У млекопитающих сформировались клеточные и гуморальные факторы иммунитета.
Такое разделение функций иммунной системы обусловлено двумя типами лимфоцитов -Ти В-клетками. Лимфоциты обоих типов образуются из клеток предшественниц. В формировании иммунологической компетентности Т-клеток решающую роль играет тимус (вилочковая железа). Что касается В-клеток, то полагают, что аналогичное влияние на их развитие оказывают плацента или костный мозг и печень плода. Клетки каждого из этих двух типов обладают колоссальной способностью «узнавать» какой-либо из миллионов существующих антигенов. Реакция антиген - антитело направлена на то, чтобы связать антиген, инактивировать его и предотвратить таким образом, его вредное действие на организм животного или человека.
Будущие Т-лимфоциты, приобретают способность функционировать лишь после того, как пройдут через ткань тимуса. Механизм созревания Т-лимфоцитов еще не вполне ясен. Известно, что тимус выделяет тимопоэти-ны, которые способствует созреванию Т-клеток. Корковое вещество тимуса насыщено тимоцитами. Большинство тимоцитов - незрелые клетки, но некоторые из них способны взаимодействовать с антигеном. В результате такого взаимодействия Т-лимфоциты начинают размножаться и синтезировать сложные молекулы лимфокины, которые помогают атаковать и уничтожать чужеродные частицы. Зрелые иммунокомпетентные Т-лимфоциты способствуют также созреванию В-клеток и выработке ими антител.
Т-клетки при жизни животного постоянно выходят из тимуса и поступают в лимфатические узлы и селезенку, где в случае встречи со специфическим антигеном распознают его, образуя клоны идентичных клеток, способных узнавать антиген и реагировать с ним. Когда «сенсибилизированный» лимфоцит узнает комплементарный к его рецептору антиген, он присоединяется к нему (подобно тому, как ключ входит в замок) и разрушает. Т-клетки регулярно переходят из лимфоидных тканей в циркулирующую кровь и тканевую жидкость, благодаря чему увеличивается вероятность их встречи с антигеном и либо его уничтожения, либо активации В-клеток к синтезу иммуноглобулинов.
Известно пять классов иммуноглобулинов: Ig-M - антитела первого класса, появляющиеся в сыворотке крови после введения антигена, ответственные за первичный иммунный ответ; Ig - G- антитела основного класса, их находится в сыворотке крови до 80 %, ответственные за вторичный иммунный ответ; Ig - А-антитела основного класса, выделяемые с такими секретами, как слюна, слезы, бронхиальная и кишечная слизь; Ig-D-антитела, связанные с мембранами; Ig-E - участвуют в аллергических реакциях.
Материал и методы
Экспериментальная часть работы выполнена в течение 2002-2005 гг. в иммунологическом отделе Челябинской областной больницы, на базе ветеринарной клиники и Фонда Зоозащиты «Спаси меня» города Челябинска.
Диссертационная работа является самостоятельным разделом научно-исследовательской работы: Уральской государственной академии ветеринарной медицины, № гос. регистрации 01200002915.
В период с 2002 по 2004 г.г. нами было подвергнуто исследованию 150 подозрительных по заболеванию чумой плотоядных собак различных пород в возрасте от 2 месяцев до 3 лет, владельцы которых обращались за помощью в ветеринарную клинику Фонда Зоозащиты «Спаси меня», г. Челябинска. Животных подвергали клиническим исследованиям, клинический материал (кал, носовые и фаренгальные смывы, кровь) от этих животных подвергали ИФА на содержание АГ вируса чумы плотоядных, проводили гематологические, биохимические, имунологические исследования.
Окончательно диагноз на чуму собак ставили на основании лабораторной верификации данных иммуноферментного анализа. При постановке диагноза у собак использовали тест-систему, представляющую собой набор для выявления антигена вируса чумы плотоядных иммуноферментным анализом (ИФА) в биологическом материале от больных и экспериментально зараженных животных (производитель НПО «Нарвак», Москва). Для дифференциальной диагностики мы исключали бактериальные инфекции, а также парвовирусную и аденовирусную инфекции собак (иммуноферментным методом, наборы для выявления антигена, НПО «Нарвак», Москва).
Породный состав больных животных: немецкие овчарки 11 животных, кавказские овчарки 10, ротвейлеры 7, мастиффы 3. Подбор животных в опытные группы проводили по методу приближенных аналогов. Всего было сформировано 3 группы собак по 10 животных в каждой: первая группа -контрольная (здоровые животные), которые служили контролем; вторая и третья группы - опытные (животные, которым был поставлен диагноз "чума плотоядных"). Возраст животных варьировал от 2-х до 6 месяцев.
Собак второй и третьей опытных групп лечили комплексно, в составе средств комплексной терапии были подобраны синергидные лекарственные препараты. Собакам второй группы в составе средств комплексной терапии 3-х кратно подкожно вводили иммуномодулятор ронколейкин в дозе 10 000 МЕ/кг массы животного, подкожно, трехратно с интервалом 24 часа. Животных третьей группы лечили аналогично, но дополнительно проводили УФО-аутокрови. Для этого у собак брали кровь в количестве 2,0 мл/кг массы, стабилизировали ее гепарином и проводили облучение ультрафиолетовыми лучами в аппарате «Фотон», (изготовленным на кафедре терапии УГАВМ), при длине волны 254 нм, доза облучения крови составляла 640±40 Дж/м . Облучение крови проводили в кювете из кварцевого стекла. Аутокровь, облученную УФ-лучами, вводили животным внутривенно. Курс лечения рассчитан на три сеанса через день. Наши исследования механизмов лечебного действия терапевтической эффективности, роли и места УФО-аутокрови в системе лечебных мероприятий при той или иной патологии у животных проводились параллельно в Уральской государственной академии ветеринарной медицины и Мордовском государственном университете им. Н.П. Огарева. Кровь у здоровых животных исследовали однократно, у больных кровь исследовали до начала лечения и после их выздоровления. Нами проводились исследования иммунного статуса у животных, больных чумой собак по выяснению отдельных звеньев клеточного и гуморального иммунитета.
1. Больных собак перевели в теплое, сухое помещение, где они содержались в период болезни, вплоть до выздоровления.
2. Больным собакам внутрь назначили раствор ригидрона 3-4 раза в день. 1 (пакет растворяли в 1-ом литре кипяченой воды).
3. Глаза промывали максидином (глазные капли), 2 раза в день в течение 10 суток.
4. Нос от корочек освобождали настоем ромашки аптечной, приготовленным по правилам Государственной Фармакопеи (Г.Ф.-1989).
5. Назначали клизму, приготовленную из настоя ромашки аптечной, отвара риса, и раствора перманганата калия 1x1000. Действие настоя из ромашки аптечной основано на том, что настой из соцветий ромашки используют в качестве противовоспалительного, антисептического и обезболивающего средства. Показано применение настоя ромашки при желудочно-кишечных заболеваниях, как средства уменьшающее воспалительные процессы. Уменьшение воспалительных процессов происходит благодаря наличию в растении и его соцветиях сесквитерпенового лактона хамазулена и его предшественника прохамазулена; сесквитерпеновых углеводородов фарма-зена и кадинена; сесквитерпеновых спиртов - бизабола, бизабилолоксида, кетоспирта; сесквитерпеновых лактонов соцветий - матрицина, флавоноидов, кумаринов, ситостерина, холина, полисахаридов, каротина, аскорбиновой и изовалериановой кислот.
