Введение к работе
Актуальность проблемы. Актуальной проблемой современной инфекционной патологии является разработка высокочувствительных и специфических методов диагностики распространенных болезней плотоядных. Одной из таковых является чума собак, вызываемая РНК-содсржащим вирусом из рода морбилливирус, проявляющаяся лихорадкой, воспалением слизистой оболочки глаз, органов дыхания, пищеварения и признаками поражения нервной системы.
Несмотря на большое число публикаций, касающихся этиологии, патогенеза, симптоматики и специфической профилактики болезни, практическая ветеринария по настоящее время не имеет надежных средств прижизненной диагностики. Под диагнозом «чума» в ветеринарных клиниках проходят не только весьма сходные в клиническом проявлении инфекционные болезни, но и патология совершенно другой этиологии.
Поэтому разработка и внедрение достоверного и быстрого лабораторного метода диагностики могут привести к эффективным мерам борьбы с этой инфекцией.
Учитывая вышеизложенное, в плановую тематику лаборатории препаратов, применяемых в звероводстве ВГНКИ на 1992-1994 г. был включен вопрос о разработке тест-системы иммуноферментного анализа (ИФА) для диагностики чумы плотоядных.
Работа выполнялась в комплексе со специалистами НПО «Вектор» г. Новосибирска.
При этом нами преследовалась цель создания прижизненного метода диагностики, не требующего инструментального оснащения, легко и быстро выполнимого в условиях ветеринарных лабораторий.
Этим требованиям соответствует твердофазный точечный иммуно-фермелтиый анализ (ИФА) на нитроцеллюлозе - НЦ (dot - ИФА), с успехом использующийся в настоящее время для индикации многих вирусных антигенов (Heberling et al. (1991), Le H.W. (1990), Sfeinitz M., et al. (1991).
Для выявления антигенов вируса чумы собак - метод dot -ИФА ранее в стране не использовался.
Основной целью нашей работы было создание набора для диагностики чумы у собак, с помощью которого можно было бы подтверждать клинический диагноз заболевания у этого вида животных.
В задачи исследований входило:
-
изучение эпизоотологических и клинических особенностей проявления чумы плотоядных у собак на фоне широкого применения средств специфической профилактики и терапии болезней;
-
сравнительная оценка существующих методов лабораторной диагностики болезни;
-
определение путей и сроков элиминации вируса чумы плотоядных из организма спонтанно больных и вакцинированных животных;
-
разработка и внедрение в ветеринарную практику иммунофермент-ного метода диагностики чумы плотоядных у собак.
Научная новизна. Впервые в нашей стране разработана высокочувствительная и специфичная иммуноферментная тест-система для обнаружения вируса чумы плотоядных в секретах подозрительных по заболеванию собак.
Осуществлено конструирование конъюгирующей сэндвич-смеси для твердофазного ИФА на основании экспериментально полученных диагностических сывороток, осаждение из них глобулиновых фракций с последующей меткой пероксидазой хрена в соотношении 1:3. Работа защищена получением из ВНИИГПЭ положительного решения на получения патента РФ 93066227/14 от 23.02.96.
Впервые в стране дана сравнительная оценка некоторых методов лабораторной диагностики чумы плотоядных у собак.
Определены сроки выявления вируса чумы плотоядных в секретах из глаз и носа спонтанно больных и вакцинированных против этого заболевания собак.
Практическая значимость. Полученные результаты явились основой для разработки и внедрения нормативной документации «Тест-системы иммуноферментной для диагностики чумы плотоядных», утвержденной Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ ТУ № 9388-001-33425200 97. Разработанный метод лабораторной диагностики болезни включен в п. 1.3. "Инструкции о мероприятиях по предупреждению и ликвидации чумы плотоядных", утвержденной Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ №13-4-2/911 от 25.04.97.
Апробация работы. Материалы проведенных исследований были обсуждены на заседании:
Ученого Совета ВГНКИ, ноябрь 1994, заседаниях проблемных научно-исследовательских комиссий по вирусным препаратам ВГНКИ (1993-1997 г.г.), конференции по проблемам ветеринарной медицины (Литва, июнь 1993г., Койшидорис), 1-й Межгородской научно-практической конференции по проблемам заболеваний мелких домашних животных (Санкт-Петербург, 1995 г), IV-й Международной конференции по актуальным проблемам профилактики, диагностики и лечения болезней мелких домашних животных (Москва, март 1996 г.), VI-ом Международном конгрессе лабораторных методов исследования — 1FASA ( г. Варшава, Польша, август 1996 г.), 1-й Региональной конференции по болезням домашних животных (Новосибирск, май, 1996 г.).
Разработка демонстрировалась на ВВЦ и согласно постановлению Главного комитета отмечена золотой медалью.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, получено положительное решение на выдачу патента, принят и зарегистрирован заключительный отчет "Разработать тест-систему иммуноферментную для диагностики чумы плотоядных" № госрегистрации 01930006119.
К основным положениям диссертационной работы, выносимой на защиту относится определение породной, возрастной и половой предрасположенности собак к чуме плотоядных, разработка метода лабораторной диагностики заболевания.
Материалы диссертации изложены на 133 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, 11 глав собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и приложение.
В список литературы включены 283 работы отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 10 таблицами и 6 рисунками.
