Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Сочетанные микотоксикозы 10
1.2. Энтеросорбенты на основе пищевых волокон, их функции и роль в -процессах токсикокинетики ксенобиотиков в частности микотоксинов 20
2. Материалы и методы исследований 37
3. Результаты собственных исследований 42
3.1. Скрининг энтеросорбентов различных групп in vitro в отношении Т-2 токсина 42
3.1.1. Оценка сорбционных свойств полисахаридсодержащих энтеросорбентов в отношении Т-2 токсина 42
3.1.2. Оценка сорбционных свойств лигниносодержащих энтеросорбентов в отношении Т-2 токсина 44
3.2. Скрининг энтеросорбентов различных групп in vitro в отношении афлатоксина В і 46
3.2.1. Оценка сорбционных свойств полисахаридсодержащих энтеросорбентов в отношении афлатоксина В і 46
3.2.2. Оценка сорбционных свойств лигниносодержащих энтеросорбентов в отношении афлатоксина В] 48
3.3. Изучение эффективности применения полисахаридсодержащего энтеросорбента «Фитосорб» для профилактики микотоксикозов на белых крысах 51
3.3.1. Клинико-гематологические показатели белых крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Фитосорб» 51
3.3.2. Биохимические показатели крови белых крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Фитосорб» 54
3.3.3. Изучение показателей неспецифической резистентности у крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Фитосорб» 61
3.3.4. Патоморфологические изменения у крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Фитосорб» 63
3.4. Изучение эффективности применения лигниносодержащего энтеросорбента «Л-3» для профилактики микотоксикозов белых крыс 70
3.4.1. Клинико-гематологические показатели белых крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-3» 70
3.4.2. Биохимические показатели крови белых крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-3» 73
3.4.3. Изучение показателей неспецифической резистентности у крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-3 » 79
3.4.4. Патоморфологические изменения у крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-3» 80
3.5. Изучение безвредности лигнин- и полисахаридсодержащих энтеросорбентов 87
3.5.1. Изучение хронической токсичности энтеросорбента «Л-3» и «Фитосорб» в опытах на белых крысах 87
3.5.2. Изучение эмбриотоксического и тератогенного действий энтеросорбента «Фитосорб» 91
3.6. Сравнительная профилактическая эффективность лигнин- и полисахаридсодержащих энтеросорбентов при микотоксикозах овец 96
3.6.1. Изучение клинико-гематологических показателей овец при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбентов 96
3.6.2. Изучение биохимических показателей крови овец при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбентов 98
3.6.3. Изучение процессов перекисного окисления липидов у овец при сочетанном Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбентов «Л-3» и «Фитосорб» 104
3.6.4. Изучение показателей неспецифической резистентности овец при сочетанном введении Т-2 и афлатоксина В і на фоне применения энтеросорбентов «Л-3» и «Фитосорб» 105
3.7. Профилактическая эффективность энтеросорбента
«Фитосорб» в производственных условиях 107
4. Обсуждение результатов исследований 111
5. Выводы 127
6. Практические предложения 129
7. Список литературы
- Энтеросорбенты на основе пищевых волокон, их функции и роль в -процессах токсикокинетики ксенобиотиков в частности микотоксинов
- Оценка сорбционных свойств лигниносодержащих энтеросорбентов в отношении Т-2 токсина
- Клинико-гематологические показатели белых крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-3»
- Изучение хронической токсичности энтеросорбента «Л-3» и «Фитосорб» в опытах на белых крысах
Введение к работе
Актуальность темы. Микотоксины относятся к одной из доминирующих в последние годы групп биогенных ядов, загрязняющих как корма, так и продукты питания (Фетисов Л.Н., 2006). При потреблении таких кормов и продуктов питания у животных и человека возникают отравления -микотоксикозы (Кузнецов А.Ф., 2001; Fink -Gremmels J., 2006; Trevor К., 2006).
Расширение масштабов экспорта и импорта зерна между странами, наблюдаемое изменение климата в мире, систематическое применение фунгицидов, пестицидов, протравителей семян, приводит к увеличению образования микотоксинов в сотни раз (Монастырский О.А., 2001; 2008) и повышению возможности одновременной контаминации корма различными микотоксинами (Jouany J-P., Diaz D.E., 2006). Причем концентрация каждого токсина в отдельности может быть ниже установленной ПДК, что затрудняет постановку диагноза, повышает тяжесть заболевания и обуславливает высокий экономический ущерб (Котик А.Н., 1999; Левченко В.Ю., Антипов В.А., 2005 Тремасов М.Я., 2002; 2005).
Исследования последних лет показали, что наиболее часто корма загрязняются микотоксинами грибов рода Fusarium и Aspergillus (Иванов В.Г., 1982; Смирнов A.M. и др., 1999; Кононенко Г.П. , 2003; Иванов А.В., Тремасов М.Я., Папуниди К.Х. и др., 2008).
Из множества существующих мер профилактики микотоксикозов: аграрных, правильного хранения кормов, обработке препаратами химического и биологического происхождения и т.д., в последнее время, все большее распространение находят энтеросорбенты растительного происхождения (в частности из полисахарид- и лигнинсодержащего сырья) из-за совокупности свойств предъявляемых, к профилактическим препаратам: экономичность, физиологичность, безвредность, низкий процент вводимости в рацион, избирательность сорбции и т.д.
Несмотря на успешное применение растительных энтеросорбентов при отравлении животных тяжелыми металлами, ПХБ, нитрозаминами и другими
7 токсическими соединениями экзогенного и эндогенного происхождения (Kritchevsky D.,1985; Olsen М. et al, 1991), исследования их действия при микотоксикозах единичны (Тутельян В.А. и др., 1994; Кравченко Л.В., Л.И. Авреньева, 2002, Марковский Ю.И., 2007; Косинкова И.А., 2008; Carson and Smith, 1983), и совершенно отсутствуют случаи использования их при синергичных взаимодействиях микотоксинов.
Цель и задачи исследований. Целью работы являлся скрининг энтеросорбентов для профилактики сочетанных микотоксикозов, сравнительная оценка их эффективности при длительном совместном поступлении Т-2 токсина и афлатоксина В] в организм животных
Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:
Провести скрининг и дать оценку профилактической эффективности лигнин- и полисахаридсодержащих энтеросорбентов при длительном совместном поступлении Т-2 токсина и афлатоксина В і, учитывая изменение клинических, гематологических и биохимических показателей и факторов неспецифической резистентности организма.
Провести оценку безопасности полисахарид - и лигнинсодержащих энтеросорбентов для животных.
Провести производственные испытания отобранных средств профилактики микотоксикозов.
Исследования проводились в соответствии с планом научных исследований ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по заданию: «Экотоксикологический мониторинг» (№ гос. регистрации 01200202603).
Научная новизна. Впервые экспериментально обоснована эффективность применения энтеросорбентов на основе полисахарида и лигнина при хроническом сочетанном Т-2 и афлатоксикозе животных.
В результате оценки адсорбционных свойств новых сорбентов в отношении Т-2 токсина и афлатоксина В і были отобраны энтеросорбенты «Фитосорб» и «Л-3», а также установлена их безвредность для животных. Лабораторными и производственными опытами доказано, что при добавлении
8 энтеросорбентов в корм снижается тяжесть протекания сочетанного хронического Т-2 и афлатоксикоза, в результате его положительного влияния на клинико-гематологические, биохимические показатели, естественную резистентность и выживаемость животных.
Практическая ценность работы. В качестве средств профилактики микотоксикозов животных рекомендуется включать в рацион энтеросорбент «Фитосорб» в концентрации от 0,5 до 1% от рациона, а лигнинсодержащий препарат рекомендовать как перспективный сорбент при микотоксикозах животных.
Результаты исследований использованы при составлении нормативных документов, представленных для госрегистрации.
Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР за 2005-2008 г.г., ежегодных республиканских, межрегиональных, международных научно - практических конференциях и симпозиумах (Казань 2006; 2007; Троицк 2007; Москва, 2008; Санкт - Петербург, 2008).
Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 10 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в журнале «Ветеринарный врач» (г. Казань, 2008), «Вестник военно-медицинской академии» (Санкт-Петербург, 2008), «Учёные записки КГАВМ им. Баумана» (г. Казань, 2008).
Основные положения, выносимые на защиту:
Оценка адсорбционных свойств энтеросорбентов различной природы в отношении Т-2 и афлатоксина Вь
Профилактическая эффективность применения полисахаридсодержащего препарата «Фитосорб» и лигнинисодержащего - «Л-3» при сочетанных микотоксикозах животных.
Объём и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 156 страницах компьютерного текста и включают: введение, обзор литературы,
9 материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 32 таблицами, 29 рисунками. Список использованной литературы включает 243 источника, из них 136 иностранных.
Энтеросорбенты на основе пищевых волокон, их функции и роль в -процессах токсикокинетики ксенобиотиков в частности микотоксинов
Интенсивная урбанизация и развитие промышленности на современном этапе коррелируют с уровнем загрязнения природных сред экзотоксинами. Последние, проникая в организм животных, снижают резистентность, приводят к развитию различных по своей этиологии заболеваний, а в некоторых случаях - к смерти. Использование же человеком в пищу недоброкачественной продукции животноводства является причиной развития широкого ряда заболеваний,
В связи с этим, актуален поиск оптимальных методов, способных осуществлять общую детоксикацию организма животных с тем, чтобы с одной стороны нормализовать статус их здоровья, с другой - организовать разрыв порочной цепи перехода и кумуляции токсинов в системе ."животное -продукция животноводства - человек" (Кузнецов А.Ф., 1998).
Поиск путей снижения неблагоприятного воздействия на организм загрязнителей окружающей среды особенно актуален для таких природных контаминантов продовольственного сырья, как микотоксины. Образование микотоксинов - явление плохо предсказуемое, и полностью предотвратить их накопление в пищевых продуктах, а значит, и поступление в организм человека практически невозможно. В связи с этим наряду с мероприятиями, направленными на предотвращение попадания микотоксинов в организм, важное значение приобретает изыскание путей снижения токсичности поступивших в организм токсинов. К числу наиболее перспективных направлений относится использование пищи и ее компонентов как мощного фактора регуляции процессов токсикокинетики чужеродных соединений, включая этапы всасывания, печеночно-кишечной рециркуляции, биотрансформации и детоксикации (Тутельян В.А. и др., 1987; Galvano F. et al., 2001).
Особое внимание привлекают биологически активные добавки к пище (БАД), содержащие в концентрированной форме такие жизненно важные компоненты, как витамины, микроэлементы, биофлавоноиды, индолы, которые находят широкое применение не только для коррекции структуры питания населения, но и в профилактических целях, для повышения резистентности организма к воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды (Тутельян В.А. и др., 1996).
За последние годы значительно возросло число работ, посвященных изучению химии и технологии выделения пищевых волокон (ПВ), физиологии и использованию их в питании (Ванштейн С.Г.и др., 1988; Дудкин М.С., Громов B.C. и др., 1991; Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф., 1993; Дудкин М.С., 1994; Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф., 1995; Данилова Е.И.и др., 1996; Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф., Денисюк Н.А. и др., 1997).
Это обусловлено доказанной необходимостью потреблении ПВ с рационом питания, возможностью выделения их из различного нетрадиционного для пищевой промышленности растительного сырья, значительным влиянием на функцию желудочно-кишечного тракта и ролью в лечении и профилактике ряда заболеваний.
ПВ представляют собой комплекс биополимеров, включающий полисахариды (целлюлозу, гемицеллюлозы, пектиновые вещества), а также лигнин (высокомолекулярное соединение ароматической природы) и связанные с ними белковые вещества - Рис. 1 (Черненко В.В., 2005). ПВ формируют стенки растительных клеток и отличаются резистентностью к действию пищеварительных ферментов (Тутельян В.А. и др., 1987; Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф., 1998 в). Их можно разделить на однородные, т.е. сформированные из биополимеров одного вида (целлюлоза, лигнин, пектин и др.) и неоднородные, включающие биополимеры нескольких видов (холоцеллюлоза, целлолигнин, белково-полисахаридные комплексы и др). Одним из основных свойств ПВ, определяющих их поведение в желудочно-кишечном тракте, является их растворимость в воде. К водорастворимым ПВ относятся пектин, альгиновые кислоты, камеди, слизи и др. Малорастворимые или нерастворимые — это целлюлоза, лигнин, некоторые виды гемицеллюлоз (Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф., 1998 б).
Важным свойством ПВ также влияющим на поведение и различные эффекты в желудочно-кишечном тракте является водоудерживающая способность: сильно, средне - и слабо водосвязывающие. ПВ оказывают значительное влияние на минеральный, витаминный и др. виды обмена в организме животных и человека. Доказано, что они способны связывать и выводить из организма как чужеродные вещества (нитраты, нитриты, формальдегид, тяжелые металлы, фенолы, формальдегид, пестициды и микотоксины), так и необходимые организму микро - и макроэлементы, витамины, и оказывают влияние на обмен липидов (холестерин, холиевые кислоты) и т.д. В связи с этим, по мнению, авторов (Дудкин М.С., Щелкунов Л.Ф., 19986), ПВ по сорбционным способностям можно систематизировать в таком порядке - Катиониты: сильные (более 3 мэкв сорбата на 1 г ПВ), средние (1-3 мэкв сорбата на 1 г ПВ), слабые (до 1 мэкв сорбата на 1 г ПВ).
Оценка сорбционных свойств лигниносодержащих энтеросорбентов в отношении Т-2 токсина
Аналогично выше описанным экспериментам была проведена оценка сорбционной способности лигииносодержащих энтеросорбентов в отношении Т-2 токсина, результаты которых представлены на рисунках 6 и 7.
Из рисунков видно, что максимальную- адсорбционную способность энтеросорбенты проявили в кислой среде (при температуре 37С), при повышении рН происходило снижение их способности к адсорбции.
Так, при температуре близкой к температуре желудочно-кишечного тракта и при рН=7 у большинства сорбентов сорбционная активность была незначительной и составила для «Л-2» - 5,4; «Л-1» - 10,7; «Л-4» - 11,6%. Сорбенты под шифрами «Л-5» и «Л-3» сорбировали 46,4 и 57,1%, соответствено.
Напротив, при понижении рН до 2 происходило резкое повышение адсорбирующей способности у сорбентов под шифрами «Л-1», «Л-2», «Л-3», «Л-5» и «Л-4» до 88,9; 88,9; 83,7; 74,5 и 46,5%, соответственно.
В слабощелочной среде сорбенты «Л-1» и «Л-2» показали десорбцию адсорбированного микотоксина до 33 и 37,2% соответственно, что вероятно указывает на нестабильность связей в образованных комплексах «сорбент+микотоксин», и служит доказательством того, что высокая эффективность адсорбции в кислой среде вовсе не гарантирует низкую десорбцию в щелочной.
Тогда как у сорбентов под шифрами «Л-5», «Л-3», «Л-4» десорбция составила: 4; 4,3 и 13,8%, соответственно.
Таким образом, с учетом процента истинной сорбции, наибольшую адсорбционную способность в отношении Т-2 токсина энтеросорбенты показали в следующей последовательности: «Л-3» - 79,4; «Л-5» - 70,5; «Л-1» -55,9; «Л-2» - 51,7 и «Л-4» - 32,7%.
Оценка сорбционных свойств полисахаридсодержащих энтеросорбентов в отношении афлатоксина Bi Результаты сравнительной адсорбционной способности к афлатоксину В і исследуемой группы энтеросорбентов в нейтральной среде (рН = 7), в кислой (рН = 2) и слабощелочной среде (рН = 8) при температуре желудочно-кишечного тракта (37С) представлены на рисунках 8 и 9. pH=7 Рисунок 8 - Адсорбционная способность полисахаридсодержащих энтеросорбентов в отношении афлатоксина В] в нейтральной среде при температуре 37С 1рН=2 1рН=8 I истинная сорбция Рисунок 9 - Адсорбционная способность полисахаридсодержащих энтеросорбентов в отношении афлатоксина В і в кислой и слабощелочной среде Где сорбенты под шифрами: 1. «П-1»; 2. «П-2»; 3. «П-3»; 4. «П-4»; 5. «П-5»; 6. дрожжевой сорбент «Микосорб», производства компании «Оллтек». Из данных рисунка 8 следует, что в нейтральной среде при температуре
37С энтеросорбенты проявили свою адсорбирующую способность в отношении афлатоксина В і в следующей последовательности: «Микосорб» -83,4; «П-4» - 79,9; «П-3» - 77,6; «П-5» - 66,8; «П-2» - 45,3 и «П-1» - 21,8%.
Со снижением рН до 2 почти у всех сорбентов, кроме 4 образца и сорбента «Микосорб», наблюдалась тенденция повышения адсорбционной способности, которую сорбенты проявили в следующей последовательности: «П-1» - 82,1; «П-2» - 81,2; «Микосорб» - 79,5; «П-5» - 76,7; «П-4» - 74,7 и «П-3» - 73,3%.
После проведения исследований по определению процента десорбции было выявлено, что при рН=8 энтеросорбенты десорбировали микотоксин в следующей последовательности: «Микосорб» - 5,4; «П-3» - 9,4; «П-4» - 10,6; «П-2» - 17,9; «П-1» - 18,4 и «П-5» - 18,5%.
Подсчет процента истинной сорбции показал, что наибольшую адсорбционную способность в отношении афлатоксина В! энтеросорбенты показали в следующей последовательности: «Микосорб» - 74,1; «П-4» - 64,1; «П-3» - 63,9; «П-2» - 63,3; «П-1» - 63,7 и «П-5» - 58,2%.
Из рисунков видно, что максимальную адсорбционную способность энтеросорбенты проявили в кислой среде (при температуре 37С), при повышении рН происходило снижение их способности к адсорбции.
Так, при температуре близкой к температуре желудочно-кишечного тракта и при рН=7 у большинства сорбентов сорбционная активность была незначительной и составила для «Л-2» - 9,4; «Л-1» - 17,5; «Л-4» - 19,3%. Сорбенты под шифрами «Л-5» и «Л-3» сорбировали 54,8 и 60,3%, соответствено.
Подобно опыту с Т-2 токсином, описанном ранее, при понижении рН до 2 происходило резкое повышение адсорбирующей способности у сорбентов под шифрами «Л-1», «Л-2», «Л-3», «Л-5» и «Л-4» до 79,6; 75,8; 87,4; 69,5 и 57,5%, соответственно.
В слабощелочной среде (рН=8, 37 С) сорбенты «Л-1» и «Л-2» показали десорбцию адсорбированного афлатоксина В і до 40,1 и 40,5% соответственно, что вероятно что вероятно также указывает на нестабильность связей в образованных комплексах «сорбент+микотоксин.
Тогда как у сорбентов под шифрами «Л-3», «Л-5», «Л-4» десорбция составила: 5,7; 6,5 и 19,1%, соответственно.
С учетом процента истинной сорбции, наибольшую адсорбционную способность в отношении афлатоксина В і энтеросорбенты показали в следующей последовательности: «Л-3» - 81,7; «Л-5» - 63; «Л-1» - 39,5; «Л-4» -38,4 и «Л-2»-35,3%.
Клинико-гематологические показатели белых крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-3»
У всех крыс, получавших токсин без сорбента, наблюдались выраженные клинические признаки токсикоза уже на 10 сут эксперимента в виде снижения аппетита, угнетения, анорексии и диареи, в то время как, менее выраженная клиническая картина была у животных третьей и четвертой групп, которая стабилизировалась к 20 сут эксперимента.
Изменения массы тела крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-З» представлены в таблице 11.
Из таблицы 11 следует, что крысы, потреблявшие токсичный корм по сравнению с данными контрольной группы на протяжении всего эксперимента существенно отстают в росте. Так к 10 сут у животных второй группы средняя живая масса была ниже на 5,2; к 20 сут - на 11,8 (р 0,05), к 30 сут - на 23,8% (р 0,001). В профилактируемых группах отставание в росте было менее выражено, что подтверждают следующие данные: в третьей и четвёртой группах снижение массы тела на 20 сут эксперимента составило 6,7 и 4,1%; на 30 сут- 16,4 и 6,1%.
Результаты гематологических исследований крови белых крыс, при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-3», представлены в таблице 12.
По данным таблицы 12 видно, что во второй группе крыс, содержание эритроцитов в крови по сравнению с контролем на 10 сут повысилось незначительно на 2,6%, затем - на 20 сут и 30 сут эксперимента произошло уменьшение их на 9,7 и 23,6% (р 0,01) соответственно. У животных третьей группы отмечалось снижение количества эритроцитов в те же сроки на 5,1; 8,4 и 15,8% (р 0,05), соответственно. У крыс четвертой группы отмечалось уменьшение количества эритроцитов на 10, 20 и 30 сут исследований на 5,1; 4,1 и 12,6%, соответственно.
Из таблицы 12 следует, что содержание лейкоцитов в группе крыс, получавших токсичный корм, на 10, 20 и 30 сут уменьшалось на 10,2; 18,2 (р 0,05) и 29,4% (р 0,01) соответственно. В третьей и четвертой группах у животных, профилактируемых введением в рацион энтеросорбента регистрировали снижение содержания лейкоцитов на 10 сут - на7,8 и 5,5%, на-20 сут- на 142 (р 0,05) иЛ0;3%, на 30 сут- достоверно на:20;6 иЛ6,6%. Таблица 12 - Происходило достоверное снижение количества гемоглобина на 20 и;-30 сут исследования; которое у животных второй труппы составило 17,1 и 21,8%.
У крыс в. профилактируемых группах снижение количества гемоглобина .было менее значительным и составило; на 20 и 30 сут эксперимента в третьей группе 7,8;и1756%,в четвертой-5;5 и 12,3%; Скорость.оседания.эритроцитовувеличивалась во второй группе крыс на 10, 20 и 30 сут опыта на 34,1; 104 (р 0,01)и 154% (р 0і001) соответственно. В; кровиживотных третьей группы СОЭ увеличивалась,на; 10 сут - на 10,6; на 20 сут - на 46 (р 0,05) и на 30 сут - на 35,5 (р 0,01)%. У животных четвертой группы на 10 сут эксперимента наблюдали незначительное понижение СОЭ на 3,5%), относительно данных биологического контроля, однако уже на 20 и 30 сут эксперимента произошло увеличение данного показателя на 21,7 и 18,5% соответственно.
На 10, 20 и 30 сут эксперимента провели определение содержания общего белка и его фракций в сыворотке крови, данные представлены в таблице 13. Таблица 13 - Содержание общего белка и его фракций в сыворотке белых крыс при сочетанном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-3»Из данных таблицы 13 видно, что наиболее выраженное нарушение белкового обмена зарегистрировали у крыс, получавших токсичный корм, так во второй группе содержание общего белка в сыворотке крови крыс по сравнению с контрольными данными снизилось на 10, 20 и 30 сут на 10,2; 16,1 (р 0,05) и 26,0% (р 0,05), соответственно. Введение в рацион сорбента предотвращало белковый дисбаланс, так третьей группе происходило снижение общего белка на 10, 20, 30 сут на 3,5; 8,2 и 12,6%(р 0,05) соответственно; в четвёртой - на 1,8; 6,4 и 8,1%, соответственно.
Снижение содержания альбуминов в сыворотке крови крыс относительно группы биологического контроля происходило практически во всех группах. Во второй группе снижение на 10 сут составило 8,6%, а уже на 20 сут и 30 сут достоверно снижалось - на 18,2 и 24,1% соответственно. В профилактируемых группах наиболее выраженное снижение данного показателя происходило на 20 и 30 сут эксперимента, которое у крыс третьей группы составило 12,6 и 13,8% соответственно, а в четвертой группе в те же сроки исследования - 7,3 и 5,1%.
Содержание а-глобулинов, в течение всего эксперимента, у опытных крыс было выше контроля. Так, статистически достоверное увеличение данной фракции белка происходило у крыс второй группы на 20 и 30 сут исследования на 22,3 и 35,6%, соответственно. В третьей и четвертой группах животных к 10 сут эксперимента произошло увеличение исследуемого показателя - на 8,6 и 4%; к 20 сут - на 12 и 6,3% и к 30 сут - на 12 и 7,4%.
При исследовании сыворотки крови крыс второй группы содержание р-глобулинов по сравнению с данными первой группы на 10 сут исследований повысилось на 34,6; на 20 сут - на 63% (р 0,05) и на 30 сут - на 102,5% (р 0,001). Тогда как у животных третьей группы увеличение данной фракции белка к 10 сут составило 24,5; к 20 сут - 41,5 и к 30 сут- 53,5% (р 0,05), в четвертой группе к 10 сут-7,5; к 20 сут-31,1 и к 30 сут-21,1%.
Снижение содержания в белке крови у-глобулинов, относительно данных биологического контроля, регистрировали на протяжении всего эксперимента, которое на 10, 20, 30 сут эксперимента во второй группе крыс составило 12,1; 20,2 (р 0,05) и 32,3% (р 0,01). Тогда как у крыс третьей группе снижение данной фракции белка к 10 сут составило 10,2; к 20 сут- 10,1 и к 30 сут- 15,1%; в четвертой группе к 10 сут- 7,1; к 20 сут-9,1 и к 30 сут- 8,1%.
В ходе исследования провели определение активности ферментов, содержания холестерина и глюкозы в сыворотке крови белых крыс при сочетапном хроническом Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбента «Л-3», результаты которых даны в таблице 14.
Изучение хронической токсичности энтеросорбента «Л-3» и «Фитосорб» в опытах на белых крысах
В соответствии с заданной целью было сформировано 4 группы овец по 3 животных в каждой. Первая группа - служила биологическим контролем, вторая - получала «токсичный корм», контаминированный Т-2 токсином (в дозе 0,3 мг/кг корма) и афлатоксином В і (в дозе 0,3 мг/кг корма). Третья -получала с рационом Т-2 токсин и афлатоксин В] сочетано в дозах 0,3 мг/кг корма и энтеросорбент «Л-3» в количестве 0,5% от рациона. Животные четвертой группы получали с рационом Т-2 токсин и афлатоксин В] сочетано в дозах 0,3 мг/кг корма и энтеросорбент «Фитосорб» в количестве 0,5% от рациона.
За животными вели клиническое наблюдение в течение 30 дней и на 10, 20 и 30 сут проводили исследования динамики гематологических и биохимических показателей. Признаки интоксикации регистрировали только у животных, получавших токсичный корм, которые проявлялись апатией, сниженной реакцией на внешние раздражители, снижением аппетита, кратковременным расстройством желудочно-кишечного тракта на 25 сут эксперимента.
Результаты исследования морфологического состава крови представлены в таблице 24. По данным таблицы 24 видно, что на 10 сут во второй, третьей и четвертой группах, относительно данных группы биологического контроля, происходило незначительное увеличение количества эритроцитов на 2,5; 1,74 и 2,1%, соответственно. Однако в дальнейшем наметилась тенденция к снижению, и к 20 сут уменьшение количества эритроцитов в тех же группах составило 8,2; 3,5 и 4,5%, соответственно; а на 30 сут - 12,4; 7,2 и 7,9%, соответственно.
На 10 сут исследования во второй, третьей и четвертой группах овец, содержание лейкоцитов в крови по сравнению с данными контрольной группы увеличилось на 4,15; 1,8 и 0,9%, соответственно. На 20 сут отмечалось снижение количества лейкоцитов в тех же группах на 18,9; 6,7 и 8,8%, соответственно; а на 30 сут - 22,9 (р 0,05); 7,3 и 11,8%, соответственно. Таблица 24 - Гематологические показатели овец при сочетанном Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбентов
На 10 сут эксперимента отмечалось несущественное повышение содержания гемоглобина в крови овец второй и третьей групп, относительно первой, на 1,1 и 0,2%. Однако, уже на 20 сут эксперимента произошло снижение содержания гемоглобина в тех же группах на 6 и 2,1%, которое к 30 сут составило 11,05 и 5,1%, соответственно. В четвертой же группе содержание гемоглобина на 10, 20 и 30 сут исследования, относительно данных группы биологического контроля, снизилось на 0,19; 6 и 8,6%, соответственно.
К 10 сут эксперимента отмечали снижение СОЭ у овец второй и третьей групп, относительно данных контроля на 10 и 4,3%, соответственно ,а третьей произошло повышение - на 2,8%.
Уже на 20 сут регистрировали повышение СОЭ в тех же группах на 35 (р 0,05); 6 (р 0,05) и 6,2% (р 0,001), соответственно; и на 30 сут во второй, третьей и четвертой группах значение СОЭ было выше относительно данных биологического контроля на 53 (р 0,01); 16 и 16,8% соответственно.
3.6.2. Биохимические показатели крови овец при сочетанием Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения энтеросорбентов «Л-3» и «Фитосорб»
С результатами исследования белкового обмена у овец при сочетанном Т-2 и афлатоксикозе на фоне применения растительных энтеросорбентов можно ознакомиться в таблице 25.
Количество общего белка в крови овец исследуемых групп постоянно снижалось, и на 20 сут эксперимента снижение данного показателя в сыворотке крови у овец второй группы относительно данных группы биологического контроля, составило 8,2; в третьей - 3,3 и в четвертой - 5%.
Однако самое значительное снижение содержания общего белка наблюдалось на 30 сут, которое во второй группе составило 15,3 (р 0,05), третьей - 5,8 и четвертой - 7,8%, относительно группы биологического контроля.
О благотворном влиянии энтеросорбентов на нарушение белкового обмена у овец при действии токсичного корма свидетельствуют также показатели белковых фракций испытуемых групп.
Так, содержание альбуминов у животных второй опытной группы по сравнению с биологическим контролем к 10 сут эксперимента снизилось на 5; к 20 сут - на 56; к 30 сут - на 35%.
