Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 7
1.1. Антикоагулянтные родентицидные средства в дератизации:
1.1.1. Антикоагулянты как родентицидные средства 7
1.1.2. Индан-1,3-дионовые родентицидные средства 11
1.1.3. Механизм действия антикоагулянтных родентицидов 14
1.1.4. Токсические свойства антикоагулянтных родентицидов 17
1.2. Метилфенацин как действующее вещество с родентицидной активностью 19
2. Собственные исследования 22
2.1. Материалы и методы исследований 22
2.2. Скрининговые исследования индан-1,3-дионовых соединений 28
2.3. Приготовление препаративной формы родентицидов 33
2.4. Токсикологические свойства метилфенацина-0,75% 37
2.4.1 Изучение острой токсичности метилфенацина-0,75% при введении в желудок и нанесении на кожу 37
Определение острой токсичности при введении в желудок 37
Токсичность метилфенацина при нанесении на кожу 41
2.4.2. Определение порогов однократного действия метилфенацина-0,75% 42
2.4.3. Кумулятивные свойства метилфенацина-0,75% 45
2.4.4. Определение порогов хронического действия метилфенацина- 0,75% 48
2.4.5. Изучение мутагенной активности в опытах на клетках костного мозга белых крыс 52
2.4.6. Изучение кожно-резорбтивного, раздражающего и аллергического действия препарата 56
Кожно-резорбтивное действие препарата в опытах на мышах 56
Изучение раздражающего и аллергенного действия препарата в опытах на кроликах и морских свинках 57
Изучение раздражающего действия препарата на слизистые оболочки глаз кроликов 58
2.5. Гистологические изменения органов крыс при воздействии летальных
доз родентицидного препарата Метилфенацин-0,75% 59
2.6. Токсичность метилфенацина-0,75% для сельскохозяйственных животных 67
2.7. Апробация родентицидных средств на основе метилфенацина 76
3. Обсуждение результатов 77
Выводы 92
Список литературы 94
Приложения
- Антикоагулянты как родентицидные средства
- Механизм действия антикоагулянтных родентицидов
- Скрининговые исследования индан-1,3-дионовых соединений
- Определение порогов хронического действия метилфенацина- 0,75%
Введение к работе
Актуальность работы. Исследования в области борьбы с синантропными грызунами обусловлены необходимостью уменьшения ущерба, наносимого ветеринарным объектам. Мышевидные грызуны являются источником, резервуаром и механическими переносчиками возбудителей зооантропонозных (чума, туляремия, лептоспироз, листериоз, сальмонеллез, трихинеллез) и зоонозных болезней (мелиоидоз, болезнь Ауески, грипп птиц); поедают и загрязняют корма и готовую продукцию, повреждают дорогостоящие устройства, системы и материалы (А.А. Поляков, 1960; В.Г. Зацепин, 1970 -1999; Д.Ф. Траханов, 1973 -1994; И.М. Козлов, 1983; А.Н. Козлов, 1985, 1991; B.C. Пуцято, 1986; А.И. Дроздов, 1997; А.А. Нафтеев, 1997; A.M. Смирнов, 1999; А.Ф. Кадиров, 1999; Ю.М. Артеменков, 2000; В.В. Кучерук, 2000; В.А. Рыльников, 2007; М. Lund, 1977; R.J. Quy, 1992; R.M. Corrigan, 2001).
Использование комплекса родентицидных средств и инженерно-профилактических методов препятствует распространению грызунов на ветеринарных объектах. Вместе с тем, при регулярном профилактическом проведении дератизации отмечают избегание грызунами приманки (неофобия; аверсия) и появление резистентности к применяемым родентицидам (В.А. Быковский, 1990; Н.В. Бабич, 2005; А.Ф. Кадиров, 2006; В.А. Рыльников, 1990 - 2006; С.А. Клементьева, 2006; W.B. Jackson, 1975; A.D. MacNicoll, 1986; К. Nahas, 1989; P. Smith, 1994; R.A. Bevins, 1999; C.V. Prescott, 2000).
Истребление грызунов на объектах и профилактика повторных заселений освобожденных зон показывает, что лучших результатов можно добиться при смене дератизационных препаратов. Возникает необходимость изыскания новых соединений для эффективной ротации ассортимента средств борьбы с грызунами с целью предотвращения появления устойчивости (В.Г. Зацепин, 1970; С.Д. Каракотов, 2005; А.Ф.
Кадиров, 2007). Необходимость исследований новых родентицидных средств также обусловлена вопросами, связанными с механизмом действия этих веществ и предотвращением развития адаптационных процессов, что оказывает влияние на эффективность родентицидного средства и позволит прогнозировать физиологическое воздействие на организм грызунов и сельскохозяйственных животных.
В этой связи, приобретают значение исследования фармако-токсикологических свойств новых средств борьбы с грызунами, оценка количественной зависимости соотношений общетоксических и специфических эффектов, а также особенностей проявления материальной и функциональной кумуляции в зависимости от режима воздействия.
Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка родентицидного средства на основе метилфенацина и изучение фармако-токсикологических свойств. Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
Разработка препаративной формы метилфенацин-0,75%, выбранного на основании результатов скрининговых исследований индан-1,3-дионовых соединений.
Изучение фармако-токсикологических свойств метилфенацина-0,75%.
Разработка методов определения метилфенацина-0,75% в препаративной форме и биологических субстратах (кормах).
Испытание метилфенацина-0,75% в производственных условиях.
Научная новизна. Разработано родентицидное средство, представляющее собой 0,75%-ный раствор метилфенацина в полиэтиленгликоле с горечью (битрекс), окрашенное водным раствором красителя.
Метилфенацин-0,75% позволяет проводить дератизацию с подбором оптимальной пищевой основы и возможностью приготовления разнообразных форм (зерновые приманки; липкие массы и др.).
Изучены фармако-токсикологические свойства метилфенацина-0,75%: определены параметры токсичности, пороги острого и хронического действия, кожно-оральный коэффициент. Изучено раздражающее, аллергическое и кожно-резорбтивное действие препарата. Определена эффективность действия метилфенацина-0,75%, разработаны режимы применения.
Практическая ценность работы.
Разработано родентицидное средство на основе метилфенацина в виде концентрата.
Установлены режимы и принципы обработки, позволившие получить эффективность дератизации не менее 95%.
Разработаны технические условия и инструкция по применению препарата метилфенацин-0,75%. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на:
- V международной научной конференции молодых ученых «Живые
системы и биологическая безопасность населения» (г. Москва, 2006)
VI Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды «Экоаналитика-2006» (г. Самара, 2006)
Заседании Ученого Совета ВНИИВСГЭ (2005-2007)
Межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (08.06.2007) Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, списка используемой литературы и приложения. Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста, содержит 23 таблицы, 13 рисунков. Список литературы включает 212 источников отечественных и зарубежных авторов.
Антикоагулянты как родентицидные средства
Современные химические средства дератизации обладают избирательной токсичностью для синантропных грызунов, малоопасны для человека и сельскохозяйственных животных. Применение таких средств позволяет поддерживать санитарное состояние ветеринарных и пищевых объектов в соответствии с Законодательством РФ (В.И. Вашков, 1957; А.А. Поляков, 1960; М.Е. Паркер, 1965; В.А. Рыльников, 1991, 2006; Н.А. Бричко, 2002; Ф. Штайнигер, 2002; А.С. Тажибаев, 2004; М.Г. Шандала, 2007; R.E. Marsh, 1980).
Различают родентицидные средства, относящиеся к разным биологическим группам, среди которых выделяют вещества нейротропного действия, средства на основе витаминов группы D, антикоагулянты непрямого действия. Последние получили наибольшее распространение, что открыло новые возможности в борьбе с синантропными грызунами (В.И. Вашков, 1974, В.Г. Зацепин, 1970 - 2006; М.И. Леви, 1992; Д.Ф. Траханов, 1995; Ю.В. Тощигин, 1997; А.Ф. Кадиров, 2000 - 2005; СП. Расницын, 2000, 2001; С.Д. Каракотов, 2001; В.И. Баскаков, 2003; М.А. Самуров, 2006; М. Lund, 1967; R.S. Rai, 1987; Н. Kidd, 1989; A.S. Vaziri, 1995; Anon., 2003). С антикоагулянтными родентицидами связано значительное количество разработок в области борьбы с синантропными грызунами (М.Ф. Болоховец, 1978; Д.Ф. Траханов, 1973 -1994; B.C. Пуцято, 1986; В.К. Мелкова, 1993; Г.Н. Заева, 1994; О.И. Березовский, 1994-1997; Н.А. Бричко, 1999, 2002; И.О. Константинов, 2000; А.Ф. Кадиров, 2003, 2004; С.Д. Каракотов, 2005; G.E. Gill, 1980; K.R. Hucle, 1989; S.A. Magdoline, 1994), а многие авторы считают химический метод проведения дератизации наиболее востребованным и эффективным (В.И. Вашков, 1974; А.А. Поляков, 1960; Д.Ф. Траханов, 1967; Зацепин, 1970; А. Тажибаев, 1971; И.М. Козлов, 1983; В.А. Рыльников, 1990, 2000; А.И.Дроздов, 1997; А.Ф. Кадиров, 2000; О.Н. Клименко, 2004; А.Н. Матросов, 2005; И.В. Горбунов, 2006; Л.Е. Даркова, 2006; R.M. Poche, 1986).
Впервые оксикумариновые антикоагулянты упоминаются в 20-х годах XX века при выяснении причины гибели крупного рогатого скота в Северной Америке от внутренних кровоизлияний. Было установлено, что причиной гибели послужило кормление заплесневелым сеном бобовых, в котором под действием плесневых грибов кумарин превращается в дикумарол. В результате проведенных исследований по идентификации, синтезу и изучению были предложены многочисленные аналоги данной группы соединений как средства для борьбы с грызунами (В.А. Быковский, 1990).
Выделяют антикоагулянты первого и второго поколения. Из применяемых соединений к препаратам первого поколения относят зоокумарин, куматетралил, дифенацин, этилфенацин, хлорфасинон, а к антикоагулянтам второго поколения - изоиндан, бромадиолон, бродифакум, флокумафен (табл. 1) (А. Тажибаев, 1971; Быковский В.А., 1990; СР. Белан, 2001; Н.А. Бричко, 2002). Механизм действия антикоагулянтов второго поколения отличается от традиционных антикоагулянтов большей токсичностью для грызунов, особенно по показателям острой токсичности (М.А. Федосенков, 2001; Н.А. Бричко, 2002; Ю.В. Тощигин, 2006; Anon., 2004). Характерной особенностью антикоагулянтов второго поколения является способность вызывать летальное действие после разового применения (А.Т. Столляр, 2007; Petterino, 2001).
Использование эффективных родентицидных средств и комплексный подход при проведении дератизационных мероприятий на объектах ветеринарного надзора в большинстве случаев позволяют снизить количество синантропных грызунов до безопасного в санитарном отношении уровня (И. Самсонова, 2006). Однако, однократное скармливание приманок в практических условиях не способно обеспечить полную гибель крыс на обрабатываемом объекте, поскольку эффективность обработок зависит не только от токсичности действующего вещества, но и от количества поступившего в организм препарата, количества кормов в свободном для грызунов доступе, заселенности объекта, приманкобоязни, качества организации и проведения работ и многих других факторов (Д.Ф. Траханов, 1973, 1995; А.В. Аленов, 2006). Таким образом, не смотря на эффективность при однократном поступлении антикоагулянтов второго поколения, необходимо проведение всего комплекса дератизационных мероприятий, как и при использовании антикоагулянтов первого поколения.
Антикоагулянтные родентициды представлены двумя химическими группами - производными 4-оксикумарина и 1,3-индандиона. В процессе поиска наиболее эффективных родентицидов, были синтезированы соединения антикоагулянтного действия; часть из них применялась ограничено (кумахлор (1953), фумарин (1951), фентолацин (1963), фторфенацон), а такие как: дифацинон (дифенацин) (1952), этилфенацин, изоиндан, хлорфацинон, пиндон (1952), куматетралил (1956), дифенакум, бромадиолон (1976), бродифакум, дифетиалон, флокумафен, получили широкое распространение (Г.Я. Ванаг, 1961; В.А. Быковский, 1990; С.А. Альбов, 1996; СР. Белан, 2001; Н.А. Бричко, 2002).
В настоящее время группа 4-оксикумаринов представлена зоокумарином (варфарином) и его натриевой солью, куматетралилом, бромадиолоном, бродифакумом, флокумафеном. Зоокумарин - родентицидное средство в различных формах, предложенное для применения в СССР в 1954 году. Существуют 1-1,5% дусты на основе талькомагнезита и других наполнителей, 3 % гель и готовые отравленные приманки на основе зоокумарина. Используется и водорастворимая препаративная форма на основе натриевой соли зоокумарина (В.И. Вашков, 1974; Д.Ф. Траханов, 1994).
Куматетралил - действующее вещество, производимое фирмой «Bayer» с 50-х годов XX века. Первый представитель 4-оксикумаринов, токсичность которого для целевого вида при многократном поступлении была на уровне 2-ацетилиндандионов-1,3. Предложен в форме 0,75 % порошка «Ракумин». Более эффективен при борьбе с варфаринрезистентными популяциями грызунов, чем другие антикоагулянтные родентициды первого поколения.
Механизм действия антикоагулянтных родентицидов
Свертывание крови сложный каталитический процесс, начинающийся с активации фактора Хагемана (ф. XII) путем контакта с чужеродной поверхностью, тканевой жидкостью и коллагеном. Активированный фактор Хагемана (ф. ХПа) активирует прекалликреин (ПК), высокомолекулярный кининоген (ВМК) и фактор XI (предшественник тромбопластина плазмы), что приводит к активации остальных факторов свертывания крови, в том числе проконвертина. Проконвертин (ф. VII) может быть активирован более коротким путем -связыванием с тромбокиназой (ф. III; тканевый фактор) в присутствии ионов Са (ф. IV). Этот путь считается основным (рис. 2). Полученный комплекс действует на два субстрата: фактор Стюарта-Провера (ф. X; проакцелерин) и антигемофилический глобулин Б (ф. IX). Их активация ведет к расщеплению протромбина (И), присоединению Ас глобулина (ф. V) и фактора Стюарта-Провера (ф. X), вследствие чего образуется тромбин. Все факторы свертывания крови отличаются высокой скоростью обмена в организме. Например, период полураспада тромбина равен 24 сек, фибриногена - 2,5 суток. Синтез факторов свертывания осуществляется преимущественно паренхиматозными клетками печени, а также тромбоцитами (ф. V, XIII) и другими клетками организма (ф. III) (В.А. Быковский, 1990; Ф.Д. Шиффман, 2001; М. Kataranovski, 1993; W.R. Colman, 1994; G.M. Kerins, 1999; A. Mary; 2005).
Принято считать, что механизм действия 4-оксикумаринов и 1,3-индандионов схож и заключается в опосредованном действии на ферментные системы печеночных клеток. Являясь антагонистами витамина К (нафтохинона), непрямые антикоагулянты нарушают его синтез, препятствуя восстановлению эпоксид-редуктазой, в активную форму (В.М.Березовский, 1973; И.А. Ионов, 1997; СП. Расницын, 2001; Ф. Дж. Шиффман, 2001; W.A. Furie, 1990). Недостаток в животном организме нафтохиноновых витаминов лишает кровь способности свертываться при повреждении ткани (В.М. Березовский, 1973).
Витамин К необходим для пострибосомального карбоксилирования терминальных остатков глутаминовой кислоты витамин К-зависимых факторов коагуляции: - протромбина (фактор II), - проконвертина (ф. VII), : - антигемофилического глобулина Б (ф. IX; тромбопластин плазмы), - фактора Стюарта-Провера (ф. X), - а также двух ингибиторов факторов свертывания - С и S (V. J. Marder, 1994; Н. J. Joist, 1994). У млекопитающих авитаминоз К наблюдается редко из-за синтеза витамина К кишечной микрофлорой. Однако, нафтохиноновые витамины не обладают высокой специфичностью. Антигеморрагическая активность свойственна не только природным производным 2-метил-1,4-нафтохинона с боковой цепью в положении 3, состоящим из различного количества насыщенных и частично насыщенных изопреноидных звеньев, но и отдаленным природным и синтетическим аналогам (П.Д. Улитина, 1948; В.М. Березовский, 1973).
Непрямые антикоагулянты крови имеют сходную с витамином К химическую структуру. Их введение в метаболизм не влияет на потребление витамина К печенью или его субклеточное распределение, но вызывает накопление метаболита - 2,3-эпоксида витамина К. Этот эпоксид имеет такую же активность, как и витамин К, в стимулировании синтеза протромбина у животных с дефицитом витамина К, но не обладает необходимыми биохимическими свойствами для синтеза К-зависимых факторов свертывания (Г.Г. Базазьян, 1948; В.А. Быковский, 1990; R.G. Bell, 1973; G.M. Kerins, 1999).
Антикоагулянты, попадая в организм животных, изменяют одну из стадий свертывания крови, нарушая, тем самым, весь механизм гемостаза, вызывают замедление свертывания крови, а также повреждение стенок периферических кровеносных сосудов. Изменения в организме наступают в течение нескольких дней, когда за счет естественных процессов разрушения витамин-К зависимых факторов проявляется их острый дефицит в организме. Развиваются желудочно-кишечные и полостные кровотечения, гематурия, подкожные кровоизлияния и гематомы (Ф.Д. Шиффман, 2001; М.Е. Mount, 1989; D.I. Feinstein, 1994; R. Lasseur, 2007).
Таким образом, свертывание крови является биологически лабильным процессом, который зависит от взаимной комплементарное и количества каждого фактора свертывания крови. Сведения о токсичности родентицидов-антикоагулянтов встречаются в литературе довольно часто, но зачастую значительно различаются и могут служить лишь ориентировочной оценкой препаратов (А.Н. Козлов, 1985; С.Д. Каракотов, 2005).
Антикоагулянты обладают рядом преимуществ по сравнению с родентицидными соединениями других механизмов действия: избирательная высокая токсичность для грызунов, отсутствие условно-оборонительной реакции, эффект кумуляции, наличие антидота, незначительная степень опасности для человека и сельскохозяйственных животных (В.И. Вашков, 1974; А.А. Поляков, 1960; Н.А. Бричко, 2002).
Одной из характерных особенностей антикоагулянтов является наличие к ним видовой чувствительности. Относительно высокую восприимчивость к зоокумарину проявляют серые крысы, они погибают от доз 0,4 мг/кг в сутки, потребляемых в течение нескольких дней подряд, тогда как куры без видимого вреда переносят ежедневно дозы в 2 г (А. Тажибаев, 1971). DL5o дифенацина и этилфенацина для крыс составляет 2-3 мг/кг, а у поросят в дозах 30 и 60 мг/кг вызывают увеличение протромбинового времени, которое приходит в норму через 4 сут (А.Н. Козлов, 1991). Не смотря на колебание уровня чувствительности, в зависимости от рассматриваемого соединения, в целом для сельскохозяйственных животных уровень смертельных доз находится выше, чем для грызунов.
Скрининговые исследования индан-1,3-дионовых соединений
Разработка новых эффективных соединений широко используемой группы индан- 1,3-дионовых препаратов является важной задачей развития производственной базы родентицидных средств в России. Нами, совместно с ООО НПП «Аратамус» и ЗАО «Щелково-Агрохим», были проведены скрининговые исследования 13 образцов индан-1,3-дионовых соединений, отличающихся положением радикала в фенильном кольце (nRx), с целью определения наиболее перспективных и разработка на их основе формы родентицидного средства . Кроме того, была проведена сравнительная оценка уже используемых в практике веществ с целью определения факторов, влияющих на эффективность препаратов и определения путей повышения эффективности при использовании данных соединений.
Препараты вводились белым крысам-самцам в виде раствора на растительном масле или полимерных носителях. На основании результатов исследований, представленных в таблице 3 и 4 наибольшей токсичностью (I класс) обладали следующие соединения: метилфенацин, броминдан и фториндан.
Биологическая активность данных соединений различалась в зависимости от содержания действующего вещества и изомерного состава исследуемых соединений. Наибольшая токсичность отмечалась у соединений, имеющих один радикал на фенильном кольце молекулы. При этом, расположение радикала оказывает значительное влияние на токсичность молекулы: наибольшая биологическая активность отмечалась у соединений, с преимущественным присоединением радикала в пара-положении фенильного кольца. Отсутствие радикала у дифенацина незначительно снижает токсичность молекулы, но делает ее независимой от положения радикала. Например, изоиндан, с присоединенной в пара-положении изопропильной группой, значительно превышает дифенацин по значению токсичности, однако уступает дифенацину, если изопропильный радикал находится преимущественно в орто-положении.
Токсичность молекул, имеющих на фенильном окончании два и более радикала в 30-300 раз ниже, причем положение радикала не оказывает большого значения на изменение токсикологических свойств соединения. Отмечали также зависимость токсичности от массовой доли действующих веществ: более высокая токсичность отмечалась у химически чистых соединений. В целом, активность технических продуктов синтеза оказалась несколько ниже расчетной, что может быть связано с присутствием инертных и биологически неактивных соединений, в значительной степени снижающих токсичность. Однако, при изучении галогенпроизводных фтор- и броминдана, наблюдалась обратная картина. Технические продукты лишь незначительно уступали по значению токсичности очищенным аналогам. Данное свойство технических соединений может быть использовано с целью повышения экономической составляющей при синтезе родентицидных средств, однако требует более подробного изучения причин, связанных, вероятно, с высокой токсичностью побочных продуктов синтеза.
Согласно данным Реестра лекарственных средств для животных и кормовых добавок (2007), препаративные формы на основе дифенацина, этилфенацина, изоиндана и хлорфацинона зарегистрированы и используются в качестве родентицидных средств.
В качестве объекта дальнейших исследований нами был выбран метилфенацин. По сравнению с фторинданом и броминданом метилфенацин с содержанием 98% обладает наибольшей токсичностью для грызунов. Токсичность технического метилфенацина несколько ниже аналогичной у броминдана, однако метилфенацин перспективен с точки зрения уменьшения балластных нетоксичных соединений в техническом продукте и повышения токсичности и эффективности в качестве родентицидного средства. Кроме того, метилфенацин уже исследовался в качестве родентицидного средства, были получены положительные результаты.
Опыты по разработке родентицидного средства в виде препаративной формы, содержащей метилфенацин, проводились на базе ООО НПП «Аратамус». Опытную партию родентицидного средства изготовили из технического метилфенацина с содержанием действующего вещества 54 % по сумме индандионов. В качестве растворителя действующего вещества были испытаны растительное масло, полиэтиленгликоль 400, пропиленгликоль и глицерин.
Учитывали степень растворимости, длительность растворения, температуру и длительность нагревания, гомогенность полученного раствора, отсутствие или наличие осадка. Удовлетворительные результаты были получены только при использовании полиэтиленгликоля 400. Полученный раствор коричневого цвета, прозрачный, равномерно окрашен по всему объему. Содержание действующего вещества - 0,75%. Данная концентрация была выбрана, как оптимальная для получения готовых отравленных приманок с рекомендуемым для данной группы содержанием действующего вещества 0,015% - 0,02% (А.Ф. Кадиров, 2005). Полученная форма обладает эффективностью при добавлении 2% к пищевой основе. При этом изменение органолептических характеристик кормов находятся на минимальном уровне, что может оказывать значительное влияние на поедаемость кормов грызунами.
Согласно Методических рекомендаций по оценке эффективности, токсичности и опасности родентицидов (1995), обязательна цветовая маркировка родентицидных средств. Поскольку ПЭГ-400 плохо окрашивается большинством растворителей, в рецептуру при разработке формы было добавлено 20% воды. Включение воды позволило использовать водорастворимые красители и способствовало снижению температуры кристаллизации. Данные характеристики препарата существенно расширяют возможности его использования и хранения. В качестве цветовой гаммы была выбрана сигнальная окраска красного цвета, которая достигалась добавлением пищевого красителя кармуазина.
Определение порогов хронического действия метилфенацина- 0,75%
При изучении хронического действия метилфенацина-0,75% было испытано несколько доз. Первая доза составила 1/10 порога острого действия (Limac) и составила 1 мг (1/250 DL50). Последующие дозы уменьшали в 2 раза.
Из данных таблиц 11, 12 и 13 следует, что при хроническом введении метилфенацина-0,75% крысам, на уровне 1 мг/кг (1/250 DL5o) и 0,5 мг/кг (1/500 DL5o) наблюдается изменение интегральных показателей морфологического состава крови, печеночных показателей, белка в моче, суммационно-порогового показателя, а также протромбинового времени, что свидетельствует от комплексном воздействии препарата на системы органов. Изменение количества сульфгидрильных групп и гиппуровой кислоты в сыворотке крови указывает на нарушение обменных процессов в печени, где происходит синтез витамин К-зависимых факторов свертывания крови. Достоверное снижение эритроцитов и гемоглобина в крови указывает на изменение морфологического состава крови в результате поступления метилфенацина-0,75%» и нарушения гемостаза.
На уровне 0,25 мг/кг (1/1000 DL5o) отмечали достоверные изменения показателей суммационно-порогового показателя, белка в моче и протромбинового времени. Показатель суммационно-порогового показателя свидетельствует о изменении реакции центральной нервной системы на раздражитель, что подтверждается результатами клинического осмотра животных, которым вводили исследуемый препарат. Увеличение количества белка в моче при поступлении 0,25 мг/кг метилфенацина указывает на нарушение действия выделительной системы животных при постоянном воздействии метилфенацина. При длительном поступлении в организм или поступлении доз на уровне DL5o, повышение белка в моче сменяется снижением. При введении наименьшей действующей дозы 0,07 мг/кг (1/3500 DL50) метилфенацина-0,75% изменялось только протромбиновое время. На основании проведенных исследований, порогом хронического специфического действия препарата является 0,07 мг/кг (1/3500 DL50).
Оценка мутагенной активности метилфенацина-0,75% проводилась с помощью анализа клеток костного мозга белых беспородных крыс на стадии ана- телофазы. При оценке степени мутагенности химических веществ целесообразно учитывать несколько показателей, из которых основными являются -величина максимального эффекта и величина дозы, его вызывающей; величина минимальной дозы; индуцируемый эффект; характер дозовой зависимости.
Мутагенная активность метилфенацина определялась в двух сериях эксперимента. В 1-ой серии - исследования проводились на животных, подвергавшихся однократному воздействию препарата. Во 2-ой серии цитогенетический анализ проводился на клетках костного мозга животных, подвергавшихся хроническому воздействию препарата. На первом этапе опытов при дозе, составляющей 1/2 DL5o (125 мг/кг), определялся наиболее чувствительный срок фиксации клеток, при котором наблюдался максимальный выход перестроек хромосом. При выборе сроков фиксации учитывалась высокая кумулятивность препарата и возможный факт позднего развития патологии клеток, так называемый «отставленный эффект» родентицидов. Поэтому сроками фиксации клеток костного мозга выбраны - 48, 72 и 96 часов после однократного воздействия в дозе 125 мг/кг.
Похожие диссертации на Фармако-токсикологические свойства родентицидного средства на основе метилфенацина
