Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Современные аспекты конструирования лекарственных форм 10
1.2. Общая характеристика, механизм биологического действия и спектр противопаразитарной активности ивермектина 17
1.3. Токсикологические свойства ивермектина 19
1.3.1. Острая и хроническая токсичность ивермектина 20
1.3.2. Репродуктивная токсичность ивермектина 22
1.4. Фармакокинетика, фармакодинамика и метаболизм ивермектина. 24
1.4.1. Фармакокинетика ивермектина 24
1.4.2. Метаболизм, распределение в организме животных и пути выведения ивермектина 30
1.5. Эффективность ивермектинов при паразитарных болезнях крупного, мелкого рогатого скота и свиней 33
1.6. Влияние лекарственной формы на противопаразитарную эффективность лекарственных средств 36
2. Собственные исследования 39
2.1. Материалы и методы исследований 39
2.2. Результаты исследований 53
2.2.1. Разработка и оценка микроколлоидной формы лекарственного средства на основе ивермектина 53
2.2.2. Физико-химические свойства препарата Ивермек 60
2.2.3. Изучение токсикологических свойств препарата Ивермек 64
2.2.3.1. Параметры острой токсичности препарата Ивермек 64
2.2.3.2. Изучение субхронической токсичности ивермека 66
2.2.3.3. Влияние ивермека на антитоксическую функцию печени 69
2.2.3.4. Влияние Ивермека на иммунный статус животных 69
2.2.3.5. Аллергизирующие свойства Ивермека 72
2.2.3.6. Репродуктивная токсичность Ивермека 75
2:2.3.7. Мутагенная активность препарата Ивермек 77
2.2.4. Фармакодинамика, фармакокинетика и метаболизм препаратов ивермектина в организме животных 79
2.2.4.1. Фармакокинетические параметры ивермека 80
2.2.4.2. Определение динамики остаточных количеств ивермектина в органах и тканях продуктивных животных 84
2.2.5. Влияние препарата Ивермек на физиологическое состояние сельскохозяйственных животных 88
2.2.5.1. Влияние Ивермека на физиологические показатели организма крупного рогатого скота 88
2.2.5.2. Влияние Ивермека на физиологические показатели организма овец 94
2.2.6. Противопаразитарная эффективность препарата Ивермек 99
2.2.6.1. Эффективность Ивермека при нематодозах и арахноэнтомозах крупного рогатого скота 99
2.2.6.2. Эффективность Ивермека при нематодозах и арахноэнтомозах овец 105
2.2.6.3. Эффективность Ивермека при нематодозах и арахноэнтомозах свиней 109
3. Обсуждение результатов исследований 111
Выводы 123
Практические предложения 125
Библиографический список 125
- Общая характеристика, механизм биологического действия и спектр противопаразитарной активности ивермектина
- Эффективность ивермектинов при паразитарных болезнях крупного, мелкого рогатого скота и свиней
- Параметры острой токсичности препарата Ивермек
- Влияние Ивермека на физиологические показатели организма крупного рогатого скота
Введение к работе
Актуальность темы. Практически важной проблемой в ветеринарии по-прежнему остается профилактика и лечение паразитарных болезней сельскохозяйственных животных, которые наносят значительный экономический ущерб. Он складывается не только из падежа животных и птиц, но и снижения мясной, молочной и яичной продуктивности, ухудшения качества шкур (Сафиуллин Р.Т., 1992; Волков Ф.А., Апалькин В.А., 1995; Абрамов В.Е., 2000; Сидоркин В.А., 2002).
Наукой и практикой накоплен значительный опыт применения в животноводстве различных антигельминтиков и противопаразитарных средств. Они относятся к различным классам соединений и, как правило, обладают эффективностью против узкого круга паразитов. Большинство из них далеко не безвредны для организма животных и небезупречны в экологическом отношении.
В последние годы разработаны и предложены к применению новые противопаразитарные препараты, которые обладают широким спектром действия против многих эндо- и эктопаразитов животных и птиц. К числу таких препаратов относится ивермектин, который является высокоэффективным лечебным средством против нематод и эктопаразитов (Miller T.W. et.all., 1979; Campbell W.C., et.all.,1984; Campbell W.C. 1989). Однако, инъекционные препараты на основе ивермектина, в которых в качестве растворителя используются такие вещества как глицероформаль, пропиленгликоль и поливинилпирроли-дон имеют ряд недостатков. Эти лекарственные формы обладают высокой вязкостью, что затрудняет инъекцию, вызывает раздражение и другие реакции в месте введения, а в результате преципитации ивермектина в тканях могут оказывать токсическое действие на организм животных.
С развитием нового научного направления в фармации - нанотех-нологии появилась уникальная возможность конструирования новых лекарственных форм, основой которых являются микроколлоиды, мицеллы, липосомы и микроэмульсии (Kwon G.S., 2003; Goodsell D.S., 2004). Основываясь на этих исследованиях, стало возможным создание новой лекарственной формы ивермектина, удобной в применении, не токсичной в терапевтических дозах и эффективной против эндо- и эктопаразитов даже после однократного применения препарата.
Цель и задачи исследований. Целью данной работы является разработка новой эффективной и экологически безопасной лекарственной формы противопаразитарного средства на основе ивермектина для борьбы с эндо- и эктопаразитами животных. Для достижения поставленной цели нами решались следующие задачи:
разработать и стандартизировать новую лекарственную форму противопаразитарного препарата на основе ивермектина с целью повышения его эффективности, увеличения биодоступности и снижения токсичности;
разработать требования к оценке качества новой лекарственной формы противопаразитарного препарата на основе ивермектина;
изучить фармакотоксикологические свойства новой лекарственной формы противопаразитарного препарата на основе ивермектина в опытах на лабораторных животных;
определить фармакокинетические параметры и сроки выведения ивермектина из организма животных после применения новой лекарственной формы противопаразитарного препарата на основе ивермектина;
изучить влияние новой лекарственной формы противопаразитарного препарата на физиологическое состояние сельскохозяйственных животных;
- установить терапевтическую эффективность новой лекарственной формы противопаразитарного препарата в производственных условиях при гельминтозах и арахноэнтомозах сельскохозяйственных животных.
Научная новизна. Впервые разработана новая микроколлоидная (мицеллярная) лекарственная форма противопаразитарного препарата для парентерального введения, содержащая в качестве действующих веществ ивермектин и токоферола ацетат (витамин Е) — препарат Ивермек. Научная новизна подтверждена патентами Российской Федерации № 2162699 от 10 февраля 2001 года и ЕАП № 00268 от 29 августа 2002 года.
Изучены физико-химические, фармакотоксикологические свойства препарата Ивермек и определена его терапевтическая эффективность при лечении паразитарных болезней крупного рогатого скота, овец и свиней.
Экспериментально доказано, что микроколлоидная форма комбинации ивермектина и токоферола ацетата повышает биодоступность препарата и одновременно снижает его отрицательное влияние на организм животных.
Практическая значимость и внедрение. В результате проведенных исследований разработана и предложена для ветеринарии новая эффективная лекарственная форма ивермектина - препарат Ивермек для лечения гельминтозов и арахноэнтомозов сельскохозяйственных животных. Разработаны методы контроля качества препарата Ивермек и установлен срок его годности при хранении. Определены оптимальные дозы для лечения и профилактики нематодозов, саркоптоидозов и энтомозов крупного рогатого скота, овец и свиней; установлены сроки возможного использования в пищу мяса и субпродуктов после применения сельскохозяйственным животным препарата Ивермек.
8 По результатам исследований разработаны:
технические условия на препарат Ивермек 9333-017-34214729-04 (утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 15 апреля 2004 г);
наставление №13-3-04/0919 по применению препарата Ивермек при паразитарных болезнях сельскохозяйственных животных (утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 15 апреля 2004 г).
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на следующих научно-практических конференциях:
Международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета (Казань, 2000 г.);
Международной конференции, посвященной 30-летию Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии "Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях" (Воронеж, 2000 г.);
3. Научно-практической конференции, посвященной 55-летию
Краснодарской НИВС "Новые фармакологические средства для живот
новодства и ветеринарии" (Краснодар, 2001 г.);
1-го Международного конгресса "Биотехнология - состояние и перспективы развития" (Москва, 2002 г.);
Международной научно-практической конференции: "Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных" (Саратов, 2002г);
Научной конференции "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями" (Москва, ВИГИС, 2003; 2004 гг.);
Препарат демонстрировался на ВВЦ России, а также на международных выставках во многих городах России (Москве, Санкт-Петербурге, Нижнем Новгороде, Воронеже, Липецке, Орле, Казани,
9 Уфе, Екатеринбурге, Омске, Новосибирске, Краснодаре и Ставрополе)
и ближнего зарубежья (Киеве, Донецке, Алма-Ате).
Основные положения, выносимые на защиту:
дано теоретическое обоснование создания новой лекарственной формы противопаразитарного средства на основе ивермектина для борьбы с эндо- и эктопаразитами животных;
фармакотоксикологические свойства препарата Ивермек;
фармакокинетические параметры и сроки выведения ивермектина из организма животных после применения препарата;
влияние препарата на физиологическое состояние животных;
- противопаразитарная эффективность препарата Ивермек при
гельминтозах, акарозах и энтомозах крупного и мелкого рогатого скота,
свиней и лошадей.
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 8 научных работ, из них 7 в журнале «Ветеринария», в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам, получен 1 патент РФ, 1 патент ЕАП и подана заявка на получение международного патента.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 155 страницах машинописного текста, иллюстрирована 49 таблицами и 6 графиками, состоит из обзора литературы, материалов и методов работы, собственных исследований, включающих 6 разделов, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы из 313 источников, в том числе 163 отечественных и 150 иностранных авторов.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Общая характеристика, механизм биологического действия и спектр противопаразитарной активности ивермектина
Ивермектин - синтетическое производное авермектина, продуцентом которого является актиномицет Streptomyces avermitilis. По своей химической природе авермектины близки к макролидным антибиотикам, в состав которых входит лактон и дисахарид, состоящий из двух остатков олеандрозы.
При культивировании культуры Streptomyces avermitilis образуется четыре основных изоформы авермектинов - Аь А2, В і и B2. В биологическом отношении наиболее активными являются авермектины Віа и Вів, их смесь известна под названием абамектин (Campbell W.C.,1989). Ивермектин представляет собой смесь двух веществ: 5-0-диметил-22,23,-дигидроавермектин В 1а (ивермектин Bia) и 5-0-диметил-25-ди(1-метил-пропил)-22,23-дигидро-25-(1-метилэтил) авер-мектин Вів (ивермектин Вів). Молекулярный вес - 860. Брутто-формула - С480і4Н79- Максимум адсорбции УФ - 238 нм. Е2з8=27100, [a]D = +71,5; ТПЛ.=155-157С (перекристаллизованный из этанола) (Campbell W.C.,1989; Merck Index, 1996). По внешнему виду ивермектин представляет собой белый или желтоватый порошок, практически нерастворимый в воде и умеренно растворимый в органических растворителях. При установлении структуры авермектинов G. Albers-Schonberg (1981) использовал масс спектроскопию и С-13 магнитный резонанс. В целях дальнейшего подтверждения структуры и идентификации относительной и абсолютной стереохимии, другие авторы применили рентгеновскую кристаллографию. Подробным исследованием структуры авермектинов занимались так же многие зарубежные исследователи (Dubas R.A, 1983; Campbell W.C., 1984; Mrozik Н., 1985; Fisher М.Н., MrozikH., 1989).
Ивермектин обладает выраженным нематоцидным и инсектоака-рицидным действием. В одной из самых ранних работ, посвященной механизму действия ивермектина, исследователи использовали в качестве модели мышцы омара, у которого гамма-аминомасляная кислота (ГАМК) является нейромедиатором между нервными и мышечными клетками. Было установлено, что ивермектин увеличивает проницаемость мышечных клеток для ионов С1-, в результате чего происходит понижение потенциала возбуждения и резистентности, что, как предполагается, вызвано снижением проницаемости мембраны (Fritz L.C., Wang С.С, Gorio А., 1979). Эти данные подтвердились в других более поздних исследованиях (Scott R., Duce I., 1985).
Результаты изучения ингибирования и последующего восстановления в результате действия пикротоксина, являющегося блокатором каналов для ионов СГ, и аналогичный результат при воздействии бику-кулина, антагониста для ГАМК-рецепторов, показали, что ивермектин действует как агонист каналов СГ (Mellin T.N., Durch R.D., Wang С.С, 1983; Albrecht СР., Sherman М., 1987).
Исследования с использованием в качестве модели Ascaris lumbricoides показали, что ивермектин являясь агонистом ГАМК, стимулирует ее пресинаптическое выделение в тормозных синапсах. В ответ на ивермектин каналы хлора остаются открытыми, при этом одновременно усиливается приток в клетку ионов СГ и Na+. В результате стимулирующего эффекта в моторном нейроне сохраняется отрицательный заряд и при этом блокируется передача импульсов торможения или возбуждения (Kass I.S. et al., 1980; Kass I.S., Stretton A.O.W., Wang C.C., 1984). Аналогичные результаты получены при изучении механизма действия ивермектина и на других видах паразитов - Ascaris suum и Caenorhabditis elegans (Adelsberger H., Scheurer Т., Dudel J, 1997). Кроме того, имеются данные о том, что под воздействием ивермектина происходит увеличение проницаемости для ионов С1-, которое связано с ГАМК (Scott R., Duce I, 1977).
У нематод ивермектин стимулирует выделение ГАМК нервными окончаниями и усиливает ее связывание с послесинаптическими ГАМК-рецепторами, блокируя, таким образом, передачу нервных импульсов, что вызывает паралич и гибель паразита. У членистоногих - саркоптоидных клещей и вшей усиление ГАМК-эффекта происходит аналогично с действием ивермектина на нематод, с тем лишь отличием, что блокируется передача нервных импульсов между нервными окончаниями и клеткой мышечной ткани, что также приводит к параличу и гибели паразита. Ивермектин не оказывает заметного действия на трематод и цестод, по всей вероятности, в силу того, что у этих гельминтов ГАМК в качестве нейромедиатора не функционирует и играет незначительную роль (Wang С.С, Ponds S.S, 1982; Wang С.С., 1986).
Токсичность ивермектина для млекопитающих обоснована его действием на ГАМК-рецепторы центральной нервной системы (ЦНС). При введении препарата в терапевтических концентрациях эти рецепторы малодоступны, однако увеличение дозы более чем в 10 раз вызывает у животных конвульсии, тремор и коматозное состояние, что характерно для веществ, поражающих ЦНС. По данным Campbell W.C. (1989; 1990), Lancaster D., Campbell W.C., Benz G.W. (1984), LD5o ивермектина для лабораторных животных в зависимости от способа введения находится в пределах от 25 до 80 мг/кг массы животного. Токсический эффект после введения препарата мышам и крысам проявляется в атаксии, замедленном и поверхностном дыхании, треморе. Эти явления наблюдаются при всех способах введения, смерть животных наступает в течение первых 48 часов после применения препарата. Аналогичные данные получены и на других видах животных.
Эффективность ивермектинов при паразитарных болезнях крупного, мелкого рогатого скота и свиней
Антигельминтная активность. По данным ряда отечественных и зарубежных исследователей отмечена высокая эффективность инъекционного раствора препарата Ивомек при его подкожном применении в дозе 0,2 мг действующего вещества на 1 кг массы животного против различных видов нематод желудочно-кишечного тракта у крупного рогатого скота, включая: остертагий, гемонхов и нематодир (Шекаладзе И.А., 1985; Benz G.V., Ernst J.V., 1977; Armour J., Bairden К., Preston J.M., 1982; Barth D., 1983; Bremner K.S., Berrie D.A., Hotson I.K., 1983; Swan G.E., Gross S.J., 1985; Benz G.V., 1985; Ерболатов K.M., 1988; Шеховцов B.C. и др., 1988; Дурдусов С.Д., 1994; Patel M.R., Campbell W.C., 1997; Kotze A.C., 1998), трихостронгилид (Волков Ф.А., 1986; Хачатурян М.М., Сазанов A.M., 1990; Апалькин В.А., 1994; Апалькин В.А., 1995), хабертий и буностом (Armour J., Bairden К., Preston J.M., 1982; Benz G.W, 1985), кооперий (Barth D., 1983; Bremner K.S., Berrie D.A., Hotson I.K., 1983; Swan G.E., Gross S.J., 1985; Шеховцов B.C. и др., 1988), эзофагостом (Поникаров А.В., 1989), трихоцефал и стронги-лоидов (Vergors Н.Н., 1985; Ерхан Д.К., 1988). Ивомек относится к числу наиболее перспективных препаратов и для лечения нематодозов свиней (Волков Ф.А., 1985; Сафиуллин Р.Т., 1992; 1993). Его эффективность в дозе 1 мл на 33 кг массы животного при аскаридозе составляет 100%, эзофагостомозе - 86-100%), трихоце фалезе - 70-100% (Benz G.W., 1985; Сафиуллин Р.Т.,1986; Петрунин М.А., 1990; Тарасов В.В., 1992). О высокой эффективности ивермектина против Ascaris suum сообщают также зарубежные исследователи Adelsberger Н., Scheuer Т., Dudel J. (1997); Brownelle D.J.L., Holden D.L., Walker RJ.(1997).
При подкожном введении в дозе 0,2 мг/кг (по ДВ) Ивомек проявил 100% эффект против смешанных нематодозов пищеварительного тракта овец (Ергалиев К.Е., 1988; Шеховцов B.C., и др., 1990; Березки-на СВ., 1992; Каржаухов А.Г., 1993).
Препарат для орального введения на основе ивермектина был эффективен при остертагиозе и гемонхозе овец (Swan G.E., Gross S.J., 1985; VanWyk, Malan F.S., Alva R.M.R., 1987; VanWyk, Malan F.S., 1988). Сходные результаты получены и при трихостронгилидозе мелкого рогатого скота (Giordano at all., 1987).
Инъекционные растворы ивермектина (Ивомек и Ивомек-плюс) также показали высокую эффективность против диктиокаул (легочных нематод) у телят (Benz G.W., Ernst J.V., 1978; Сулаберидзе Н.П., и др., 1985; Benz G.W., 1981; 1985; Лемехов П.А., 1987; Ерболатов К.М., 1988; Архипов И.А., 1990; Волков Ф.А. 1995).
Практически во всех работах, посвященных лечению Ивомеком диктиокаулеза овец, отмечается 100%) терапевтическая эффективность (Матчанов Н.М., и др., 1985; Benz G.W., 1985; Сулаберидзе Н.П., и др., 1985; Надыкто М.В., Полуэктов В.Ш., Тимофеев Б.А., 1986; Тотиков З.Д., ,1991; Каржаухов А.Г., 1993;).
Ивомек и Ивомек-плюс обладают высокой терапевтической эффективностью и против нематодозов крупного рогатого скота с иной локализацией гельминтов: микроонхоцерков (91-100%), причем действие является пролонгированным до 181 суток (Архипов И.А., 1987; 1988; 1995; Архипов И.А., Архипова Д.Р., 1990; Chroust К., 1996), па рафилярий (91-97%) (Swan G.E., 1983) и телязий (90-100%) (Ерболатов К.М., 1988; Липицкий С.С., 1990; Дашанимаев Б.Ц., 1993; Архипов И.А., 1992; 1995;). Хорошие результаты получены после применения Ивомека «pur on» при телязиозе (Архипов И.А., 1995) и Ивомека-плюс при эуритрематозе крупного рогатого скота (Городович Н.М., Дурдусов Н.В., 1991). Инсектоакарицидная активность. Препараты на основе ивер-мектина являются эффективными средствами для лечения арахно-энтомозов крупного рогатого скота. Имеется ряд сообщений о высокой эффективности Ивомека при псороптозе (Алексеев Е.А., 1988; Волков Ф.А., Апалькин В.А., Козяков B.C., 1991; Волков Ф.А., Димов С.К., Апалькин В.А., 1994; Дурдусов С.Д., 1994; Симецкий М.А.и др., 1994; Волков Ф.А., Апалькин В.А., 1995; Сштіе В., 1997; Волков Ф.А, 1999; Offidani A., et al., 1999), сар-коптозе и хориоптозе (Bailey , 1981 Gulliot, Wright, Oehler, 1986;), а также демодекозе крупного рогатого скота (Скосырских, 1987; Якубовский, Ананчиков, 1989).
О высокой эффективности Ивомека при гиподерматозе крупного рогатого скота (личинок всех стадий) в дозе 0,2 мг действующего вещества на 50 кг массы животного сообщают многие исследователи (Апалькин В.А., Корешков Н.М., 1991; Архипов И.А., 1992; Волков Ф.А., Апалькин В.А., 1991; Волков Ф.А. , Димов С.К., Апалькин В.А., 1994; Дурдусов С.Д., 1994).
Эффективно применение Ивомека при сифункулятозе (Miller T.W., 1981; Benz G.W., Roncalli R.A., Gross S.J., 1989). Причем, при данной болезни, для достижения высокого эффекта ивермектинсодер-жащие препараты часто назначают в повышенных дозах - 0,3 мг/кг двукратно (Miller T.W., 1981). Хороший эффект при указанных заболеваниях получен и при однократном применении Ивомека «pur on» (Архипов И. А., 1992).
Ивермектинсодержащие инъекционные препараты успешно применяются и против эктопаразитов овец. Например, при псороптозе (Ремез В.И., 1984; 1987; 1989; Benz G.W., 1985; Benz G.W., Roncalli R.A., Gross S.J., 1989; Колесников В.И., Башкатов Г.А., Оробец В.А., 1990; Колесников В.И., и др., 1991;) и эстрозе (Roncalli R.A., 1984; 1989; Букштынов В.И., 1987; Еналиева Н.Х., 1988; Толоконников В.П., Золотухина Л.З., Мозуляка Н.С., 1992). И.А. Архипов получил 100% эффективность Ивомека плюс при псороптозе и эстрозе овец (Архипов И.А., Ларионов СВ., Аксенова И.Н., 1996). R.A. Roncalli (1989) испытал оральную форму ивермектина (Орамек) при эстрозе овец. После двукратного применения препарата в дозе 2,5 мл/50 кг живой массы 98% овец полностью освобождались от личинок Oestrus ovis.
Эктопаразиты свиней также высокочувствительны к воздействию Ивомека, и он успешно испытан при саркоптозе в дозе 0,3 мг/кг (Ремез В.И., 1984; Березкина СВ., 1988) и гематопинозе в дозе 0,2 мг/кг (Ремез В.И., 1984; Drummond R.O., 1985).
Параметры острой токсичности препарата Ивермек
Острую токсичность Ивермека определяли на двух видах животных: белых мышах и крысах. Ивермек вводили в желудок и внутрибрюшинно (интраперитонеально) мышам в дозах (по действующему веществу) от 15 до 40 мг/кг массы животного, крысам от 20 до 80 мг/кг массы животного. Наблюдение за общим состоянием животных, состоянием шерстного покрова, подвижностью и чувствительностью к внешним раздражителям проводили до и в течение 7 дней после введения Ивермека. Клинические признаки токсического действия препарата проявились в резком снижении двигательной активности, атаксии, треморе, угнетение дыхания. Гибель животных наступала в течение первых трех суток после введения препарата. Результаты изучения токсичности Ивермека при однократном введении белым мышам и крысам представлены в таблицах 13 - 15. Установлено, что ЛД5о Ивермека для белых мышей при перораль-ном способе введения составила 2680+260 мг/кг, что составляет в пересчете на действующее вещество 26,8±2,6 мг/кг массы, а при внут-рибрюшинном введении соответственно 3020+310 мг/кг и 30,2±3,1 мг/кг массы животного.
Примечание: цифра в числителе - количество погибших животных; цифра в знаменателе - количество животных в группе. При внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении препарата крысам существенных различий в степени токсичности не установлено (таблица 14): ЛД5о Ивермека составила 5420±450 мг/кг массы животного. Таким образом, согласно ГОСТ 121.007-76, препарат Ивермек по степени воздействия на организм белых мышей может быть отнесен к умеренно опасным веществам (3 класс опасности), а на организм белых крыс - к малоопасным веществам (4 класс опасности). Субхроническую токсичность препарата Ивермек изучали в опытах на поросятах 5-месячного возраста массой 25±3 кг. Препарат вводили животным внутримышечно в дозе (по ДВ) 0,7 мг/кг массы (двукратная терапевтическая доза), пятикратно с интервалом 3 суток. Анализ результатов исследований, представленных в таблицах 16-17, показал, что в процессе эксперимента гибели животных не было. Физиологические показатели (температура тела, частота дыхательных движений и сердечных сокращений), а также основные клинические показатели крови у поросят в течение опыта находились в пределах физиологической нормы и достоверно (р 0,05) не отличались от контроля. Среднесуточные привесы поросят до опыта в опытной и контрольной группе составляли 355+30 г и 332±32 г соответственно. В период эксперимента среднесуточный привес поросят контрольной группы колебался от 330 до 380 г. После первого введения Ивермека животным опытной группы, среднесуточный привес у поросят снизился в среднем на 25 % (на 85 г), и в дальнейшем находился на уровне 260-295 г. Через 3 дня после последнего введения препарата показатели привеса достигли исходных уровней и достоверно не отличались от показателей поросят контрольной группы.
В опытах на белых крысах при оценке детоксицирующей функции печени установлено, что при введении Ивермека подкожно в терапевтической и в пять раз увеличенной дозах достоверного снижения антитоксической функции печени не наблюдается (таблица 18), о чем свидетельствует уровень достоверности полученных данных (Р 0,05). Известно, что гельминтозы сопровождаются супрессией клеточного звена иммунитета. Степень клеточной иммуносупрессии находится в прямой зависимости от интенсивности инвазии. Следует также отметить, что введение любого вещества в организм животного вызывает определенные сдвиги в иммунной системе, обуславливая активизацию хелперной или супрессорной активности иммуннокомпетентных клеток. Имуннотоксичность Ивермека определяли по характеру влияния препарата на Т - и В-клеточные звенья иммунной системы организма животных. Оценку Т-клеточного звена иммунитета проводили по выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и аутологичным розеткообразующим клеткам (ауто-РОК). Результаты определения выраженности реакции ГЗТ в опытах на мышах линии СВА представлены в таблице 19. Изменения в динамике аутологичных розеткообразующих клеток у мышей дает представление о влиянии препарата на клеточный иммунитет, что выражается в снижении или повышении функциональной активности Т-лимфоцитов.
При применении препарата интактным мышам кинетика ауто-РОК характеризовалась снижением в крови в течение 10 дней как абсолютного, так и относительного количества розеткообразующих клеток на 16,3% к первоначальному значению и на 45% по отношению к контролю, а начиная с 10 дня после введения препарата начиналось их увеличение, к 20 дню практически достигающее количества клеток у контрольных животных (2,9 против 3,3).
Анализ полученных результатов показал, что Ивермек не оказывает выраженного отрицательного действия на Т-клеточное звено иммунитета. Оценку В-клеточного звена иммунной системы проводили определением антителообразующих клеток (АОК), кинетики В -лимфоцитов и титров гемагглютининов в сыворотке крови мышей. Результаты определения АОК в опытной группе составили в среднем 10,2, в контроле - 12,4; индекс стимуляции — 0,8, что свидетельствует лишь о незначительном угнетении трансформации В-лимфоцитов в АОК в селезенке. Содержание ЕАС - розеткообразующих клеток в крови мышей контрольной группы в течение всего периода наблюдения составляло 17,2±0,6 - 19,4+1,8%. После применения Ивермека наблюдали достоверное снижение ЕАС-РОК с 1-го по 5-й дни исследования (до 14,7±1,8%), затем их количество увеличивалось и достигало 19,0+4,8%. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что препарат Ивермек незначительно снижает иммунный ответ в течение 5 дней после однократного введении.
Сопоставляя полученные нами результаты с литературными данными о результатах изучения имуннотоксических свойств ивермек-тинсодержащего препарата Ивомек (Даугалиева Э.Х., Филлипов В.В., 1991; Сивков Г.С. и др., 1998), можно сделать вывод о том, что Ивермек вызывал снижение количества В-лимфоцитов в меньшей степени, чем его аналог. Результаты изучения гуморального иммунного ответа на введение Ивермека в опытах на мышах, представлены в таблице 20 и свидетельствуют о том, что титры антител (AT) у подопытных и контрольных животных находятся на одном уровне, и разница в их содержании статистически недостоверна.
Влияние Ивермека на физиологические показатели организма крупного рогатого скота
Разработанная нами лекарственная форма ивермектина - Ивермек в отличие от существующих аналогов, в качестве антиоксидантного средства содержит токоферола ацетат, а также полимерный эмульгатор, сорастворители и консерванты, которые могут оказать влияние, как на биологические, так и токсикологические свойства препарата. Учитывая это, до испытания противопаразитарной эффективности препарата на продуктивных животных, нами было изучено его влияние на физиологическое состояние различных видов сельскохозяйственных животных. Опыт по изучению влияния Ивермека на общеклинические и гематологические показатели крупного рогатого скота проводили в КФХ "Большой Север" Лысогорского района Саратовской области на 20 коровах черно-пестрой породы в возрасте 5-8 лет. Животных разделили на 4 группы по 5 голов в каждой. Коровам 1, 2 и 3 групп Ивермек вводили однократно внутримышечно в дозах 0,2; 0,6 и 1,0 мг/кг массы (по ДВ) соответственно, т.е. в терапевтической, в три и пять раз увеличенных дозах. Животные 4 группы служили контролем.
Все исследования проводили за сутки и через 1, 3 и 5 суток после введения препарата. Полученные результаты свидетельствуют о том, что колебания показателей клинического состояния подопытных животных, после введения Ивермека в дозах 0,2 и 0,6 мг/кг массы тела по ДВ, были в пределах физиологической нормы и достоверно не отличались от показателей контрольной группы (табл. 37-40). У одной из пяти коров 3 группы после введения Ивермека в дозе 1,0 мг/кг массы тела по ДВ наблюдали угнетенное состояние в течение первых суток после применения препарата (табл.38). На вторые сутки после введения Ивермека в 5-кратной терапевтической дозе отклонений в общеклиническом статусе животных не наблюдали. Колебания в количестве эритроцитов и лейкоцитов в 1 мкл крови, содержание гемоглобина и лейкоцитарная формула крови крупного рогатого скота всех опытных групп в течение всего периода исследований были в пределах нормы и достоверно не отличались от показателей животных контрольной группы. Все исследуемые показатели общего состояния и крови у животных контрольной группы в течение всего опыта были на одном уровне и существенно не менялись. Таким образом, в процессе изучения влияния Ивермека в терапевтической дозе (0,2 мг/кг), а также в 3 раза увеличенной дозе (0,6 мг/кг) гибели животных, отрицательного влияния препарата на физиологиче ские показатели (температура тела, частота сокращений рубца), а также основные клинические показатели крови не установлено.
После введения Ивермека в пятикратно увеличенной терапевтической дозе (1,0 мг/кг) у одного из пяти животных в течение первых суток после лечения наблюдалось угнетенное состояние. Влияние Ивермека на организм овец изучали в ЗАО ПЗ «Алтайский» Новоузенского района Саратовской области на 40 клинически здоровых овцах цыгайской породы, в возрасте 2-4 года. Животных разделили на 4 группы по 10 голов в каждой. Овцам 1, 2 и 3 групп Ивермек вводили однократно внутримышечно в дозах 0,2; 0,6 и 1,0 мг/кг (ДВ) массы животного соответственно. Полученные результаты исследований (таблицы 41-44) свидетельствуют о том, что Ивермек в при введении животным терапевтической, 3-кратной и 5-кратной терапевтической дозах не оказывает отрицательного влияния на общеклиническое состояние овец. Показатели гематологического и физиологического статуса овец 1 и 2 опытных групп достоверно не отличались от показателей контрольной группы (Р 0,05) У отдельных животных третьей группы было отмечено увеличение частоты сокращений рубца до 7 за 2 минуты (табл.41). Гематологические показатели у овец всех подопытных групп существенно не изменялись, в течение всего периода наблюдений находились в пределах физиологической нормы и практически не отличались от таковых у контрольных животных (Р 0,05). Таким образом, Ивермек, в терапевтической дозе, 3-кратной и 5-кратной терапевтической дозах не оказывает отрицательного влияния на гематологические показатели овец. При введении препарата в 5-кратной терапевтической дозе у овец отмечено незначительное усиление моторики желудочно-кишечного тракта.
Оценку эффективности препарата Ивермек провели при основных гельминтозах (диктиокаулезе, стронгилятозах желудочно-кишечного тракта, стронгилоидозе и телязиозе) и арахноэнтомозах (псороптозе, гиподерматозе и сифункулятозе) крупного рогатого скота. Препарат применяли внутримышечно или подкожно в различных дозах: при гельминтозах и гиподерматозе - однократно, при сифункулятозе и псороптозе - однократно или двукратно. На базе КФХ "Большой Север" Лысогорского района и СПК "Сталь" Петровского района Саратовской области в опыте на 76 телятах, больных диктиокаулезом установлена высокая антигельминтная эффективность препарата при его однократном введении в дозе 1 мл на 50 кг массы животного, которая составила 95,7-99,8 % при одновременном снижении количества личинок в 1 г фекалий с 116,7±9,2 экземпляров (до дегельминтизации) до 2,5+0,5 экземпляров (после дегельминтизации). На базе колхоза им. "XVIII партсъезда" Ершовского района Саратовской области в опыте на 48 телках, спонтанно инвазированных стронгилятами желудочно-кишечного тракта, установлено, что при внутримышечном и подкожном введении Ивермек в дозе 1 мл на 50 кг массы животного обеспечил соответственно 100% и 99,7% эффективность (таблица 45), что свидетельствуют о высокой эффективности препарата против стронгилят желудочно-кишечного тракта. Опыт по изучению эффективности Ивермека при стронгилоидозе крупного рогатого скота проводили на базе колхоза им. "К.Маркса" Ба-лаковского района Саратовской области, на 48 коровах черно-пестрой породы в возрасте 3-5 лет, спонтанно инвазированных Strongyloides papillosus. В результате исследований установлено, что эффективность Ивермека в испытанной дозе при стронгилоидозе крупного рогатого скота составила 97,8 % при одновременном снижении интенсивности инвазии с 98,0+9,4 до 8,0 яиц в 1 г фекалий.
На базе СПК "Сталь" Петровского района Саратовской области испытание Ивермека при телязиозе провели на 92 телках с клиническими признаками инвазии (слезотечение, кератоконъюнктивиты, бельмо, светобоязнь) и наличием в смывах из конъюнктивальной полости нематод Thelazia rhodesi . Телок с клиническими признаками перевели на стойловое содержание и 60 голов из них лечили Иверме-ком в дозе 1 мл на 50 кг массы животного, 8 телкам препарат не применяли (контроль). Клиническое обследование животных провели через 10, 20 и 30 дней после введения препарата. При исследовании смывов конъюнктивальных полостей подопытных животных обнаруживали, по 0,2±0,1 экз.; у контрольных - 8,4±1,7 экз. телязий. Признаки телязиоза у контрольных животных были более выраженными, чем до начала опыта. Улучшение клинического состояния леченых животных отмечали через 10 дней после введения Ивермека, через 20 дней полное выздоровление наступило у 57 из 60 леченых; терапевтическая эффективность препарата составила 95%. Животным с конъюнктивитом, осложненном секундарной инфекцией (гнойный кератоконъюнктивит), наряду с Ивермеком применяли антибиотики, что обеспечило полное выздоровление еще двух животных. Терапевтическая эффективность препарата при его применении в комплексе с антибактериальными средствами при телязиозе крупного рогатого скота составила 96,6%.
