Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ В ОБЛАСТИ ХИМИИ И ФАРМАКОЛОГИИ ПОСКОННИКА КОНОПЛЯНОГО (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) 11
1.1 Ботаническая характеристика посконника; 11
1.2 Состояние изученности химического состава посконника конопляного 14
1.3 Использование посконника в медицине и других отраслях 21
Заключение по обзору литературы 26
ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ 28
2.1 Объекты и материалы исследования 28
2.2 Методы и методики исследований 29
2.2.1 Исследование фенольных соединений 29
2.2.1.1 Хроматографический анализ 29
2.2.1.2 Капиллярный электрофорез 30
2.2.1.3 Исследование кумаринов 31
2.2.1.4 Исследование флавоноидов 32
2.2.1.5 Исследование фенолкарбоновых кислот 33
2.2.1.6 Исследование дубильных веществ 33
2.2.2 Исследование алкалоидов ! 34
2.2.3 Исследование органических кислот 35
2.2.4 Исследование аминокислотного состава 36
2.2.5 Исследование макро- и микроэлементного состава 37
2.2.6 Исследование полисахаридов 37
2.2.7 Микробиологические методы исследования 39
2.2.8 Микроскопическое исследование 40
2.2.9 Определение числовых показателей качества сырья 41
2.2.10 Определение сроков хранения сырья 41
2.2.11 Определение упруго-вязко-пластичных свойств мазей 41
2.2.12 Определение осмотической активности мазей 42
2.2.13 Определение термостабильности мазей 43
2.2.14 Определение коллоидной стабильности мазей 43
ГЛАВА 3 ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОСНОВНЫХ ГРУПП ВЕЩЕСТВ ТРАВЫ ПОСКОННИКА КОНОПЛЯНОГО 44
3.1 Исследование качественного состава фенольных соединений 44
3.1.1 Исследование кумаринов 44
3.1.2 Исследование флавоноидов 45
3.1.3 Исследование фенолкарбоновых кислот 46
3.1.4 Электрофоретическое исследование фенольных соединений 46
3.2 Исследование количественного содержания фенольных соединений... 48
3.2.1 Исследование кумаринов 48
3.2.2 Разработка методики количественного определения флавоноидов и фенолкарбоновых кислот 50
3.3 Исследование дубильных веществ 61
3.4 Исследование алкалоидов 61
3.5 Исследование органических кислот '. 61
3.6 Исследование аминокислотного состава 63
3.7 Исследование макро- и микроэлементного состава 64
3.8 Исследование полисахаридов 66
Выводы по главе 71
ГЛАВА 4 ВЫЯВЛЕНИЕ ДЕЙСТВУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ И УСТАНОВЛЕНИЕ НОРМ КАЧЕСТВА ТРАВЫ ПОСКОННИКА КОНОПЛЯНОГО 72
4.1 Выбор экстрагента 72
4.2 Выявление действующих веществ травы посконника конопляного 74
4.3 Товароведческий анализ травы посконника конопляного 82
4.3.1 Макро- и микроскопический анализ травы посконника конопляного82
4.3.2 Определение числовых показателей травы посконника конопляного88
4.4 Нормирование качества травы посконника конопляного 89
Выводы по главе 93
ГЛАВА 5 РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И НОРМИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА СУХОГО ЭКСТРАКТА ТРАВЫ ПОСКОННИКА КОНОПЛЯНОГО 95
5.1 Теоретические основы экстрагирования. Современные способы производства сухих экстрактов 95
5.2 Технологические показатели вальцованной травы посконника конопляного 98'
5.3 Разработка технологии сухого экстракта из травы посконника конопляного 105
5.4 Изучение химического состава и нормирование качества сухого экстракта травы посконника конопляного 110
Выводы по главе 115
ГЛАВА 6 РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И НОРМИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА МАЗИ С СУХИМ ЭКСТРАКТОМ ТРАВЫ ПОСКОННИКА КОНОПЛЯНОГО 116
6.1 Разработка и технологическое обоснование состава мази, содержащей сухой экстракт травы посконника конопляного 119
6.1.1 Выбор вспомогательных веществ 119
6.1.2 Биофармацевтическое исследование мазей в условиях in vitro 119
6.1.3 Изучение структурно-механических свойств мази с сухим экстрактом травы посконника конопляного 123
6.2 Нормирование качества мази с сухим экстрактом травы посконника конопляного 130
Выводы по главе 133
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 134
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ : 136
- Ботаническая характеристика посконника;
- Объекты и материалы исследования
- Исследование качественного состава фенольных соединений
Введение к работе
Актуальность темы. Устойчивая тенденция роста заболеваний инфекционными дерматозами стимулирует поиск новых эффективных и безопасных антимикробных средств. Наряду с целесообразностью получения оригинальных синтетических средств, перспективным направлением остается разработка антимикробных препаратов из новых видов растительного сырья. Большинство фитопрепаратов не обладают сенсибилизирующим действием, характеризуются наличием широкого спектра антибактериальной активности и слабой резистентностью по отношению к ним патогенных микроорганизмов. К сожалению, ассортимент зарегистрированных антимикробных фитопрепаратов в настоящее время крайне ограничен, несмотря на их высокую востребованность в дерматологии, особенно при длительно протекающих хронических формах болезней. Одним из традиционных путей поиска антимикробных средств растительного происхождения является анализ опыта народной медицины. В частности, имеются сведения о наличии антимикробных свойств у травы посконника и применении её в народной медицине в форме настоев для лечения инфекционных заболеваний кожи. Вместе с тем, остается малоизученным вопрос по фитохими-ческому составу травы посконника, отсутствуют данные о биологически активных веществах (БАВ), обуславливающих её антимикробное действие.
Учитывая достаточную распространенность посконника конопляного в различных регионах РФ, в первую очередь Северного Кавказа, и возможность его введения в культуру, представлялось целесообразным рассмотреть это растение в качестве потенциального источника получения лекарственных средств антимикробного действия. Расширение и уточнение данных о составе содержащихся в траве посконника БАВ способствовало бы решению этой задачи. При этом, установление группы веществ, определяющих антимикробное действие травы посконника, является необходимым условием для разработки рациональной технологии и обоснованного нормирования качества создаваемого фи-тосредства и его лекарственной формы.
Таким образом, фармакогностическое и технологическое изучение травы посконника конопляного, получение из этого сырья лекарственных средств антимикробного действия, представляют собой в совокупности актуальное для фармацевтической науки исследование.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение БАВ травы посконника, получение из неё сухого экстракта, разработка технологии и нормирование качества экстрактсодержащей мази антимикробного действия.
Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
провести фитохимическое исследование травы посконника конопляного и определить содержание в сырье основных групп БАВ;
провести макроскопический и микроскопический анализ травы посконника; выявить группу БАВ, определяющую антимикробное действие травы посконника;
с учетом результатов фармакогностического исследования и выявленной группы БАВ антимикробного действия провести нормирование качества растительного сырья;
предложить ориентированные на действующие вещества технологию и нормы качества сухого экстракта травы посконника, изучить условия и сроки его хранения;
разработать состав, технологию и нормы качества антимикробной мази, содержащей сухой экстракт травы посконника конопляного. Научная новизна. Проведен микроскопический анализ травы посконника конопляного и выявлены основные диагностические признаки: эпидермис листа с сильноизвилистыми тонкими стенками; устьица погруженные, аномо-цитного типа, с нижней стороны более многочисленные; верхняя и нижняя стороны листа покрыты 3-6-клеточными простыми волосками; над жилками и по краю листа волоски коленчатоизогнутые; по обеим сторонам листа имеются
также округлые железки с бесцветным, сильнопреломляющим в отраженном
свете содержимым. \
В траве посконника обнаружено 17 аминокислот в свободном (11,0 мг%) и связанном (38,27 мг%) состояниях, из которых 4 относятся к незаменимым, а также определен макро- и микроэлементный состав. Установлен монозный состав и количественное содержание пектиновых веществ (3,85%) и водорастворимых полисахаридов (4,84%). Впервые в данном сырье обнаружено и количественно определено содержание п-кумаровой (0,57%), галловой (0,16%), феру-ловой (0,08%), янтарной (0,008%), яблочной (0,16%) и лимонной (0,67%) кислот. Установлено количественное содержание в траве посконника суммы фе-нолкарбоновых (2,19%) и органических (3,61%) кислот, кумаринов (0,21%), флавоноидов (0,64%) и дубильных веществ (6,12%).
На основании корреляционного сопоставления результатов микробиологического и фитохимического анализа фракций БАВ из травы посконника установлено, что веществами, определяющими антимикробное действие данного растительного сырья, являются фенолкарбоновые кислоты. Осуществлены исследования по стандартизации и предложены нормы качества травы посконника конопляного с учетом выявленных действующих веществ.
Для количественной селективной оценки содержания фенолкарбоновых кислот в траве посконника в присутствии флавоноидов предложено использовать сочетание прямой и дифференциальной спектрофотометрии.
Установлено, что наилучшей экстрагирующей способностью по отношению к фенольным соединениям травы посконника является спирт этиловый 95%.
Определены способ и условия получения сухого экстракта травы посконника конопляного. Обоснован выбор и применен метод вакуум-фильтрационного экстрагирования сырья в технологии сухого экстракта травы посконника, позволивший на уровне 96%-ой эффективности извлечь фенолкарбоновые кислоты. Предложено включить в перечень нормируемых показателей
качества сухого экстракта травы посконника содержание фенолкарбоновых кислот (не менее 14%).
Предложена мазь, содержащая сухой экстракт травы посконника, проведены исследования по разработке ее состава и технологии. Установлено, что 2% мазь сухого экстракта травы посконника обладает антимикробным действием по отношению к ряду грамотрицательных и грамположительных штаммов микроорганизмов.
Практическая значимость результатов1 исследования. Проведенные фитохимические, товароведческие исследования, установленные в ходе макро-и микроскопического анализа травы посконника характерные диагностические признаки, позволили разработать проект ФСП на траву посконника конопляного.
Выявленные действующие вещества травы посконника - фенолкарбоно-вые кислоты позволили отнести их к основному нормируемому показателю качества сырья и получаемых лекарственных средств, ориентировать на них технологию сухого экстракта, включая стадии экстракции и очистки, осуществить выбор оптимального состава и стандартизацию экстрактсодержащей мази.
Разработанная методика количественного определения суммы фенолкарбоновых кислот в траве посконника и получаемых из неё лекарственных средствах позволяет дифференцировано и более объективно, в сравнении с применяемыми методиками, оценивать их содержание.
Разработанный оптимальный состав, технология и нормирование качест
ва, установленная стабильность при хранении в течение 18 месяцев, а таюке
выраженность антибактериального действия предложенной мази с сухим экс
трактом травы посконника создают необходимые условия для серийного про
изводства этой лекарственной формы. *
Степень внедрения. По результатам исследований разработан лабораторный регламент на производство сухого экстракта травы посконника конопляного и проект ФСП: «Трава посконника конопляного» (акт внедрения ООО
«Кубаньлектравы» от 11.12.06 г.). Методики оценки качества и предложенные
технологии фитопрепаратов травы посконника апробированы в отделах контроля качества и производственных цехах ООО «Кубаньлектравы» (акт апробации от 24.11.06 г.), ЗАО «Роскарфарм» (акт апробации от 17.12.06 г.). Фрагменты диссертационного исследования внедрены в учебный процесс фармацевтического факультета ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (акт внедрения от 22.04.08 г.). Основные положения, выносимые на защиту: результаты фармакогностического исследования и нормирования качества травы посконника конопляного;
данные по выявлению БАВ, содержащихся в траве посконника и обеспечивающих её антимикробное действие;
итоги исследования по разработке технологии и нормированию качества сухого экстракта травы посконника конопляного;
результаты исследования по разработке состава, технологии, стандартизации мази с сухим экстрактом травы посконника и предложения по его использованию. Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены на II и IV региональных научно-практических конференциях молодых ученых и студентов юга России «Медицинская наука и здравоохранение» (Анапа, 2004 и 2006 гг.); 60-й региональной научной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2005 г.); Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фармацевтической науки и практики» (Запорожье, 2006 г.), региональном конгрессе «Человек и лекарство. Краснодар — 2008» (г. Краснодар, 2008 г.). По результатам исследований опубликовано 11 работ, в том числе в рекомендуемых ВАК журналах - 3 работы.
Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (№ гос. регистрации
0120.0500289).
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной объектам и методикам исследований, 4-х глав собственных исследований, выводов, а также списка литературы, включающего 176 наименований, в т.ч. 36 источников иностранных авторов. Работа изложена на 152 страницах машинописного текста, содержит 47 таблиц и 25 рисунков.
Ботаническая характеристика посконника
Посконник (Eupatorium L.) — род растений из семейства астровых (Aste-raceae), подсемейства Eupatorieae, насчитывающий до 400 видов, растущих преимущественно в тропической Америке; два вида встречаются в тропической Африке, четыре — в Европе и Азии [47].
Род посконник введен в культуру с 1640 г. (Япония, Австралия, Страны Южной и Северной Америки). Размножаются эти растения семенами, делением куста осенью и весной, черенками.
Филогенетические и биогеографические исследования рода Посконник проведены в 2000 г в университете г. Теннези (США) [171].
Выявленные виды изучаемого рода приведены в таблице 1.
Родовое латинское название Eupatorium дано растению по имени Митри дата VI Евпатора (132 — 63 гг. до н.э.), понтийского царя, который опасаясь отравления, составил весьма сложное по составу противоядие (54 компонента), полную опись которого обнаружили в царском архиве. Среди прочих ингредиентов в этом списке был и посконник конопляный [88].
Высоким ростом и листвой посконник удивительно похож на мужскую особь конопли - посконь. Сходством с коноплей вообще и с посконью в частности объясняются русское и латинское видовое название cannabinum. Конской гривой и седачом назван посконник у Даля. В народе его называют: благородиш конопелъный, конопелъник, конопля водяная, конская грива, крапива глухая, кунигундова трава, многолетний петишник, ргпик, репник, репяшник, седач, седаш, сидач, собачки водяные, трава королевская, трава королевича, туман, шапочник. Белорусский вариант названия —рэчтк. У англичан посконник носит имя Hemp-agrimony [70].
На территории России встречаются 3 вида посконника. На Дальнем Востоке растёт посконник Линдлея (Eupatorium lindleyanum), посконник Глена (Eupatorium glehni) - на Южном Сахалине и Курильских островах. В Европейской части, в том числе и на Северном Кавказе, наиболее распространен посконник конопляный (Eupatorium cannabinum) [129].
Посконник конопляный - травянистое опушенное растение с прямым ветвистым стеблем высотой 75-175см. Листья слегка пушистые, на коротких черешках, супротивные, рассеченные на 3 длиннозаостренных, ланцетных, когте-видно-пильчатых сегмента, снизу железистых. Цветки розовые, обоеполые, трубчатые с двумя длинными, нитевидными долями столбика пестика, собраны по 4-6 в корзинки на верхушке стебля, корзинки в свою очередь образуют щитковидно-метельчатое соцветие. Цветоложе голое. Тычинок 5, завязь нижняя, одногнездная, с одним столбиком и с двухраздельным рыльцем. Лопасти столбика длинные, тупые. Плод — семянки с хохолком. Корневище с корнями очень похожи на сырье валерианы. Корневище вертикальное, короткое, слегка коническое, толстое, длиной до 4 см, толщиной 0,5-3 см, с рыхлой сердцевиной или полое с поперечными перегородками. Излом зернистый, слабоволокнистый. Корни многочисленные, длиной до 40 см и более. Цвет подземных органов желтовато-бурый. Корни и трава имеют специфический запах и горький вкус [28,43,70,107,166].
Кроме распространенности в европейской части России и на Кавказе, посконник конопляный встречается на юге Западной Сибири, в юго-западных районах Средней Азии, а также на Украине (кроме Крыма) и в Беларуси. Общее распространение - Скандинавия, Средняя, Атлантическая и Южная Европа, Балканский полуостров, Малая Азия, Турецкая Армения, Иран, США. Растет большими группами на влажных местах, по берегам ручьев, рек, в оврагах, лесных долинах, по болотистым кустарникам [70,107,132,137].
В Львовском государственном университете О.Г. Демкивым и Р.Е Дармо-граем были проведены фенологические исследования развития посконника конопляного и определены сроки сбора его надземной части. Установлено, что продолжительность цветения растения составляет 45±5С и зависит от температуры воздуха и количества выпавших за этот период осадков [42].
Объекты и материалы исследования
Объектом нашего исследования была трава посконника конопляного. Растительное сырье заготавливали в Краснодарском и Ставропольском краях в июле-августе 2003-2006 гг, т.е. в фазу наибольшего накопления БАВ [42].
Образцы сырья травы посконника конопляного, которые использовались для проведения фитохимических и технологических исследований приведены в таблице 4.
В процессе экспериментальных исследований применяли субстанции лекарственных, вспомогательных веществ, отвечающие требованиям НД (ГФ
СССР X и XI изд., отдельных ФС, ГОСТ, ОСТ и ТУ).
В качестве экстрагентов служили спирт этиловый 95% (ФС 42-3071-00), хлороформ (ТУ-2631-066-44493179-01), гексан (ТУ-2631-003-05807999-98), ацетон (ГОСТ 2603-79), бутанол (ГОСТ 6006-78), этилацетат (ГОСТ 22300-76) и вода очищенная (ФС 4202619-97).
В методике количественного определения и хроматографическом анализе были использованы рабочие стандартные образцы рутина (Sigma № R5143 или НПО ВИЛАР ТУ 64-4-127-96), кумарина (Sigma № С4261), п-кумаровой (Sigma № С9008) и галловой кислоты (Sigma № G8647).
При разработке технологии мази с сухим экстрактом травы посконника конопляного использовали вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению и отвечающие требованиям соответствующих НД на них:
Приборы и аппаратура: весы аналитические лабораторные 2 класса по ГОСТ 24108-80 с пределом взвешивания 200,0 г; термостат по ГОСТ 25336-82; эксикатор по ГОСТ 25336-82; спектрофотометр СФ-56; система капиллярного электрофореза «Капель-103Р»; аминокислотный анализатор «Аминохром II»; центрифуга УЛР-1; роторный испаритель ИР-1М2; валки лабораторные типа ПД 320-160/160; микроскоп серии LW 200 Т, ротационный вискозиметр «Рео-тест-2» типа RV (Германия) с цилиндрическим устройством, фильтрационные установки, сушильные аппараты, сита, приборы для определения технологических и товароведческих показателей и др.
Метод хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента широко используется в качественном анализе фенольных соединений (флавоноидов, ку-маринов, фенолкарбоновых кислот) и особенно их смесей. Хроматографическая характеристика этих веществ, реакций окрашивания под действием тех или иных диагностических реактивов в зависимости от структуры, приведены во многих работах [10,30,31].
Для хроматографического анализа применяли различные номера бумаги «Filtrahy, пластинки для тонкослойной хроматографии «Silufol» (марки UV-254, 366, Чехия), пластинки «Sorbfil» (марки ПТСХ-П-А и ПТСХ-АФ-А-УФ, Россия).
На хроматограммы наносили 0,01-0,05 мл растворов извлечений. Для хроматографического изучения фенольных соединений использовали метод восходящей и нисходящей одномерной, двумерной хроматографии на бумаге. Этот метод оказался необходим для отделения фенолкарбоновых кислот от флавоноидов и их раздельного анализа. Для хроматографирования применяли системы растворителей: бензол-этилацетат-уксусная кислота (50:50:1); хлоро-форм-формамид; 2% уксусная кислота; 15% уксусная кислота; 30% уксусная кислота; н.бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2); бензол-этилацетат (2:1). Растворители для приготовления хроматографических систем использовали квалификации х.ч и ч.д.а. Соотношение растворителей, обозначенных цифрами, взяты в объемных единицах [11].
Из всего многообразия современных методов, используемых для разделения и анализа многокомпонентных систем, в частности экстрактов из лекарственного растительного сырья, наиболее часто в последнее время стали используется метод капиллярного электрофореза [27,81].
Традиционно этот метод сравнивают с ВЭЖХ, поскольку в обоих методах разделение происходит в ограниченном пространстве (капилляре или колонке) с участием движущей жидкой фазы (буферного раствора или элюента) и для регистрации сигналов используют схожие принципы детектирования и программы обработки данных. Тем не менее, у методов есть и отличия, которые, безусловно, относятся к достоинствам капиллярного электрофореза (высокая эффективность разделения, малый объем анализируемой пробы, более простая и менее дорогостоящая аппаратура, экспрессность и меньшая себестоимость единичного анализа и т.д.), что говорит о возможности применения его для изучения компонентного состава суммарных извлечений и фракций травы посконни-ка конопляного [63].
Для электрофоретического разделения соединений использовали систему капиллярного электрофореза «Капель-103Р» (ОАО «НПФ Люмэкс», Россия) с кварцевым капилляром Ьэфф/ЬобЩ==50/60 см, Ю=75 мкм. Детектирование осуществляли спектрофотометрически при 254 нм. В качестве ведущего электролита использовали боратный буферный раствор, ввод пробы осуществляли давлением 150мБархс Электрофорез проводили под напряжением в 20 кВольт. Для градуировки прибора использовали калибровочные растворы стандартных образцов. По электрофореграмме определяли качественную характеристику вещества - время миграции и количественную (после построения градуировочной зависимости) - высоту или площадь пика, пропорциональную концентрации вещества.
Исследование качественного состава фенольных соединений
Для идентификации кумаринов траву посконника конопляного измельчали и получали из нее хлороформное извлечение в соотношении сырье - экстра-гент 1:50. Извлечения сгущали под вакуумом до концентрированного состояния.
Присутствие кумаринов устанавливали на основе их способности взаимодействовать со щелочами с последующим образованием азокрасителя с диа-зосоединением, а также по лактонной пробе [31].
Качественный состав кумаринов изучали методом тонкослойной хроматографии (пластинки «Silufol»UV - 254) в системах растворителей: I - бензол-этилацетат (1:2), II - хлороформ (бумага, импрегнированная смесью формамид-ацетон (3:1)).
На хроматограммах (в тонком слое сорбента) кумарины обнаруживали по флюоресценции зон адсорбции в УФ-свете при длинах волн 254 и 365 нм до и после обработки различными реактивами: парами аммиака, спиртовым раствором щелочи, раствором диазотированной сульфаниловой кислоты [31,134].
Результаты хроматографического анализа представлены в таблице 5.
Анализ полученных результатов хроматографического исследования и сравнение значений Rf окрашенных пятен с Rf стандартных образцов позволило нам идентифицировать 4 вещества: кумарин, умбеллиферон, скополетин, гер-ниарин.
Для изучения качественного состава флавоноидов траву посконника экстрагировали 95% спиртом (1:20). Часть отфильтрованного спиртового извлечения концентрировали вакуум-выпариванием до 1/3 первоначального объема. Полученный концентрат последовательно обрабатывали в делительной воронке хлороформом, этилацетатом и бутанолом. Этилацетатную и бутанольную фракции спиртового извлечения из травы посконника наносили на старт бумаги FN-6 и развивали в системах н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2) и 15% раствор уксусной кислоты. Учитывали собственную окраску флавоноидов, их способность флуоресцировать в УФ-свете, а также образовывать окрашенные комплексы с хро-могенными реактивами: раствором аммимака, 2% спиртовым раствором алюминия хлорида, 1% спиртовым раствором хлорида железа (III) и др.
Полученные результаты приведены в таблице 6. Таблица 6 - На основании полученных результатов хроматографического анализа, сравнительного анализа с хроматографическими характеристиками достовер ных образцов флавоноидных веществ, а также с учетом данных научной литературы были обнаружены следующие вещества: гиперозид, изокверцитрин, рутин, кверцетин, кемпферол. В ходе анализа было также установлено, что среди полученных на хроматограмме пятен наибольшим по интенсивности и размеру было пятно, принадлежащее рутину.
Качественный анализ проводили методами бумажной и тонкослойной хроматографии (2.2.1.1).
Результаты хроматографического анализа представлены в таблице 7. Таким образом, полученные результаты хроматографических исследований позволяют сделать вывод о наличии в траве посконника кофейной, хлоро-геновой, неохлорогеновой, феруловой кислот,п-кумаровой кислот, что согласуется с данными литературы. Из данных таблицы 7 видно, что в траве посконника конопляного из веществ кумариновой природы в наибольшем количестве содержится незамещенный кумарин, из флавоноидных соединений — рутин, из производных фенолкарбонових кислот преобладает п-кумаровая кислота.
Таким образом, на основании данных научной литературы, а также результатов собственных хроматографических и электрофоретических исследований в качестве стандартных образцов нами для количественного определения кумаринов был выбран кумарин, флавоноидов - рутин, фенолкарбоновых кислот - п-кумаровая кислота.
