Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Современное состояние исследований по химии, применению и лекарственным формам вини-лина (обзор литературы)
1.1. Современное состояние исследований по химическому строе-нию и свойствам винилина 9
1.2. Современное состояние исследований по применению винилина в медицинской практике 16
1.3. Современное состояние исследований по фармакологии вини-лина 21
1.4. Современное состояние исследований в области технологии ле-карственных форм винилина 23
1.5. Современное состояние исследований по химии, применению и лекарственным формам прополиса, лецитина и глицирама 24
1.6. Выводы из обзора литературы: 31
ГЛАВА II. Объекты и методы исследования
2.1. Объекты исследования 33
2.2. Методы исследования 39
ГЛАВА III. Разработка состава и технологические ис-следования эмульсии винилина
3.1. Эмульсии как лекарственная форма, общая характеристика (об-зор литературы) 45
3.2. Обоснование выбора лекарственной формы 46
3.2.1. Установление состава, выбор корригирующих компонен-тов 50
3.2.2. Выбор оптимального эмульгатора для эмульсии винилина 56
3.2.3. Обоснование выбора концентрации лецитина в эмульсии 64
3.2.4. Реологические исследования эмульсии винилина. 67
3.2.5. Исследования по выбору эмульгатора 70
3.2.6. Исследование вкусовых свойств эмульсии винилина 75
3.2.7. Выбор условий стабилизации эмульсии винилина 82
3.2.8. Исследование гидрофильно-липофильного баланса 85
3.2.9. Технологическая схема производства эмульсии винилина 87
3.3. Биологический скрининг эмульсии винилина
3.3.1. Исследование острой токсичности эмульсии винилина 88
3.3.2. Исследование антиульцерогенной активности эмульсии винилина 89
3.3.3. Исследование влияния эмульсии винилина на содержа-ние холестерина в сыворотке крови на экспериментальной мо-дели геперхолестериниимии 94
3.3.4. Сравнительное исследование влияние винилина и эмуль-сии винилина на перекисное окисление липидов 95
3.3.5. Определение влияния лекарственных форм винилина на чувствительность эритроцитов к гемолизу 96
3.4. Исследования по стандартизации эмульсии винилина
3.4.1. Стандартизация эмульсии как лекарственной формы 97
3.4.2. Разработка методики количественного определения вини-лина в эмульсии 100
3.4.3. Исследования стабильности эмульсии винилин 111
3.5. Выводы по главе 114
Глава IV. Разработка состава, технологические исследования и биоло-гический скрининг мази винилина
4.1. Мази как лекарственная форма (обзор литературы) 116
4.2. Стандартизация фенольного гидрофильного препарата прополи-са 120
4.3. Разработка состава и технологии мазей с винилином и прополи-сом 123
4.3.1. Исследования по выбору мазевой основы 125
4.3.2. Реологические исследования мазей 126
4.3.3. Технологическая схема производства мази с винилином и прополисом 140
4.4. Проверка микробиологической активности мази 141
4.5. Определение ранозаживляющей активности мази с винилином и препаратом прополиса 143
4.6. Стандартизация мази 144
4.7. Определение стабильности мази с винилином и прополисом при хранении 147
4.8. Выводы по главе 149
Общие выводы: 151
Список литературы 153
- Современное состояние исследований по химии, применению и лекарственным формам прополиса, лецитина и глицирама
- Исследование влияния эмульсии винилина на содержа-ние холестерина в сыворотке крови на экспериментальной мо-дели геперхолестериниимии
- Разработка методики количественного определения вини-лина в эмульсии
- Определение ранозаживляющей активности мази с винилином и препаратом прополиса
Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время на Российском фармацевтическом рынке преобладают лекарственные препараты зарубежного производства. Эти препараты отличаются высоким не только качеством, но и высокой ценой, делающей их для многих граждан нашей страны недоступными. Одним из положительных моментов, характеризующих зарубежную продукцию, является наличие корригированных и удобных в применении лекарственных форм, которые способны обеспечить высокую биологическую доступность и пролонгированность лекарственного средства. Винилин (бальзам Шостаковского) один из препаратов, который до настоящего времени не имеет удобных в применении, корригированных лекарственных форм, хотя считается эффективным и используется при лечении различных заболеваний. Поэтому перспективным направлением в разработке лекарственных форм винилина является создание корригированной лекарственной формы для внутреннего применения. Винилин достаточно давно и широко применяется при лечении язвенной болезни желудка и 12 - перстной кишки как обволакивающее, анестезирующее, ранозаживляющее, бактериостатическое и противовоспалительное средство. Но, несмотря на его неприятные органолептические свойства, такие как: раздражающий запах, маслянистый вкус с длительным послевкусием, винилин до настоящего времени выпускается в виде субстанции, расфасованной по 50,0 г. и 100,0 г. Среди лекарственных форм винилина для внутреннего употребления, разработаны лишь масляный раствор и желатиновые капсулы по 1,4 г., которые неудобны в применении, т.к. их на один прием требуется не менее 5 шт. Поэтому они не популярны ни у врачей, ни у больных. Что касается мягких лекарственных форм, то их ассортимент весьма скуден. В настоящее время выпускается только два противоожоговых аэрозоля с винилином: «Винизоль» и «Левовинизоль», содержащих также линетол, цитраль и левомицетин. Эти аэрозоли хорошо зарекомендовали себя при лечении трофических язв, гнойных ран, ожогов, обморожений, однако аэрозольные композиции не всегда удобны в применении и сложны в производстве. Именно поэтому разработка лекарственных форм винилина весьма актуальна.
Цель и задачи исследования. Основной целью настоящей работы является создание оптимальных лекарственных форм винилина: как пероральной лекарственной формы, так и наружной в виде мази; их разностороннее исследование и стандартизация.
Для реализации поставленная цель была конкретизирована следующими задачами:
обосновать выбор лекарственной формы винилина для внутреннего употребления и разработать для неё состав и технологию;
провести сравнительные фармакологические исследования;
предложить методику количественного определения винилина в лекарственных формах и составить соответствующие НД;
разработать наружную лекарственную форму с винилином, обосновать выбор основы, провести биофармацевтические, реологические исследования мази;
провести стандартизацию мази и разработать на неё НД.
Научная новизна. Для винилина выбрана оптимальная пероральная лекарственная форма - эмульсия. Проведены исследования по выбору эмульгатора. Показана целесообразность и преимущества использования в качестве эмульгатора комплекса, включающего в себя эмульгирующие и солюбилизирующие составляющие. Исследование гидрофильно - липофильного баланса этого комплекса показало, что он относится к эмульгаторам для систем М/В. Предложены и апробированы методики количественного определения винилина в лекарственных формах в двух вариантах: с помощью гравиметрического и рефрактометрического анализа. Впервые разработана методика для определения поверхности раздела фаз в гетерогенных системах и установлены реологические показатели эмульсии. В процессе сравнительных фармакологических исследований установлено, что эмульсия винилина обладает гипохолестеринимическим действием и вызывает прооксидантный эффект, что позволяет прогнозировать расширение спектра действия препарата. Также впервые разработана наружная лекарственная форма с винилином - мазь с добавлением гидрофильного комплекса прополиса. Выбраны оптимальная основа - носитель, а также определены её необходимые технологические и реологические параметры. Составлены оригинальные технологические схемы производства для предложенных лекарственных форм.
Практическая значимость результатов исследования. Представленный в работе экспериментально-теоретический материал послужил основой и подтверждением необходимости создания таких лекарственных форм винилина, таких как эмульсия и мазь. Проведенные в отношении этих лекарственных форм технологические, биофармацевтические, фармакологические, в том числе фармакокинетические исследования подготовили создание для них оптимальных технологий, обоснование состава, назначения и дозировки, что позволило рекомендовать их для внедрения в медицинскую и фармацевтическую практику в качестве лечебно-профилактических средств.
Разработаны удобные для приема, рациональные в отношении производства лекарственные формы винилина - эмульсия для внутреннего применения и мазь на основе ПЭО, которые успешно прошли технологическую и фармакологическую апробацию.
Внедрение результатов исследования в практику.
На эмульсию винилина разработаны: ТУ 9310-001-43589233-99 «ВИНИЛИН-ЛЮКС», лабораторный регламент (приложение к ТУ), получен гигиенический сертификат на опытную партию эмульсии № 26 пц 1.931 т 222.5.00 от 06.05.2000. Эмульсия принята к производству на предприятии «Ай Си Эн Полифарм» г. Челябинск, на основании разработанной и утвержденной НД. Мазь, включающая в себя винилин с прополисом, прошла производственную апробацию на фармацевтическом производстве «Медигель» г. Невинномысск (Акт технологической апробации на мазь винилина от 20.05.2000).
Методики количественного определения препарата в лекарственных формах рекомендованы к использованию в аналитических подразделениях производств: «Медигель» и «Полифарм».
Основные положения, выносимые на защиту:
результаты технологических, реологических и фармакологических исследований эмульсии винилина;
результаты разработки методов стандартизации эмульсии винилина;
результаты технологических и реологических исследований мази винилина с прополисом;
результаты фармакологической оценки мази;
результаты стандартизации разработанных лекарственных форм и установления сроков их хранения.
Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на региональных научно-практических конференциях по фармакологии, фармации и подготовке кадров (г. Пятигорск, 1998-1999 гг.); на конференции молодых ученых Поволжья и Северного Кавказа (г. Нижний Новгород 15 - 17 февраля 2000). По материалам диссертации опубликовано 8 работ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии (№ государственной регистрации 01.9.80 009596) в рамках проблемы "Фармация" секции № 38 Ученого совета МЗ РФ.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 168 страницах машинописного текста, содержит 43 таблицы, 15 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследований, 2 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 157 наименования, в т.ч. 11 иностранных, и приложения.
Современное состояние исследований по химии, применению и лекарственным формам прополиса, лецитина и глицирама
Используется в терапии эрозий шейки матки трихомонадной этиологии [50]. Истинные (десквамативные) эрозии обычно наблюдаются как результат слущивания поверхностных слоев эпителия под влиянием длительной мацера-ции патологическими выделениями. Такие эрозии даже по истечении острого процесса исчезают не сразу, они поддерживаются как трихомонадной, так и другой бактериальной флорой. При этом существует опасность распростране-ния воспалительного процесса на другие органы и ткани. Лечения проводится местно введением ватных тампонов и турунд, пропитанных винилином. Число процедур на курс лечения от 10 до 25.
Улучшение обычно наступает на 6 – 8 сутки от начала лечебных проце-дур. Восстанавливается плоский эпителий, проходят воспалительный отек и гемморагии. Мазки показали исчезновение лейкоцитов, стафилококков, стреп-тококков, влагалищных трихомонад.
Методика лечения заключается в нанесении препарата самим больным на геморроидальные узлы или виде микро клизм 20% масляного раствора винили-на [124]. Курс лечения от 5 до 50 процедур, в зависимости от тяжести и харак-тера заболевания. При нанесении винилина в чистом виде достаточно часто возникает чувство жжения, которое проходит через 25 – 30 минут и уменьшает-ся с каждой процедурой. Лечение винилином способствует быстрому уменьше-нию воспаления. После двух – трех кратной обработки уменьшается гиперемия слизистой, снимается зуд, исчезает фиброзный налет, наступает быстрая эпите-лизация, трещины и ссадины заживают на 2 – 3 сутки. С уменьшением воспа-ления исчезает и болевой синдром. После лечения винилином уменьшается ко-личество рецидивов и их тяжесть.
Особую популярность винилин завоевал в терапии заболеваний, связан-ных с нарушением кожных покровов и мягких тканей различной этиологии: от мелких ссадин до крупных, длительно не заживающих огнестрельных ран с инфекционным осложнением [51, 116]. Для лечения и профилактики осложне-ний при ожогах различного происхождения: солнечные, химические, термиче-ские, при рентгенотерапии злокачественных новообразований [16]. Различные инфекционные заболевания кожи и мягких тканей, вызываемые различными видами микроорганизмов: фурункулы, карбункулы, красная вульгарная угревая сыпь, т.д.
Различные эрозивно – язвенные процессы: трофические язвы, язвы после бубонов, эрозивно – язвенные процессы при варикозном расширении вен, мок-нущие дерматиты, и др. Имеются сведения об эффективности применения ви-нилина при слоновости ног и чесотке.
Наружно винилин применяется в чистом виде или в различных компози-циях с маслами и жирами различного происхождения, с содержанием винилина от 20% до 90%. С винилином готовят мази на гидрофобных основах: с ланоли-ном, вазелином и жирами. Примером служат мази по типу Микулича, в кото-рых винилином заменен перуанский бальзам.
Винилин или композиции с ним наносят, не втирая на кожу или при об-ширных ранах в виде повязок с салфетками, пропитанными винилином или его композициями. Салфетку меняют через 1 – 7 дней. При нанесении чистого ви-нилина возникает чувство жжения в первые 5 – 30 минут, которое постепенно проходит и уменьшается при повторном применении. Боли в ранах при исполь-зовании винилина уменьшаются через 3 – 4 часа после первого наложения и исчезают после 1 – 3 перевязок. Уменьшается мацерация кожи, отек. После 4 – 7 дней лечения застарелых гнойных ран, исчезает зловонный запах, удаляются некротические участки, причем без повреждения свежих грануляций и безбо-лезненно. В первые 1 – 3 дня и к 10 – 15 дню применения препарата наблюдает-ся усиление экссудации. Причем это явление совпадает с увеличением в эти же периоды количества лейкоцитов в крови. В фазе падения числа лейкоцитов уменьшается экссудация и начинается энергичная эпителизация с краев раны. Исследование отпечатков ран показало усиление фагоцитарной активности и уменьшение содержания бактериальной флоры. В композициях с другими про-тивомикробными средствами увеличивается эффективность последних, причем у резистентных видов микроорганизмов появляется чувствительность к анти-микробным препаратам.Влияние винилина на инволюцию язвенного процесса Эксперимент проводился на белых крысах, которым вводили интрагаст-рально винилин в дозе 3мл на одно животное [55]. Через 1 час вызывали язвен-ное поражение введением гистамина 6мг/кг, атофана 300мг/кг, резерпина 30мг/кг.
После введения гистамина у контрольных животных наблюдались дест-руктивные изменения слизистой оболочки желудка с образованием язв точеч-ного характера, отечностью и кровоизлияниями в слизистой и подслизистой оболочках. На фоне введения винилина изменения в слизистой оболочке выра-жены значительно слабее – меньше язв и их размер, отечность и кровоизлияния наблюдались в отдельных случаях.
Механизм действия препарата предполагается в защите слизистой желуд-ка от возрастающей активности кислотно – пептического фактора, возникаю-щего на фоне введения гистамина. В опытах на модели атофановой язвы, также указывается на тормозящее воздействие винилина на развитие эрозивно – язвенных изменений в желудке.
Установлено, что атофан вмешивается в обменные процессы, сопровож-даемые усиленным высвобождением гистамина в желудке и кишечнике, что вызывает повышение секреции желудочного сока с высокой кислотностью. За-щитное действие винилина состоит в том, что, обволакивая слизистую, он пре-пятствует воздействию желудочного сока на слизистую желудка.
Аналогичные результаты получены на резерпиновой модели язвы желуд-ка. Причем, во всех случаях винилин способствовал сохранению функциональ-ной активности клеток в зоне дефектов и практически не влиял на интенсив-ность секреции мукоидных веществ и интенсивность поглощения кислорода стенкой желудка. Полученные данные позволили сделать вывод о том, что ос-новной механизм действия винилина связан с его обволакивающим действием. В серии опытов на собаках с изолированным желудком и эзофаготомией, винилин, введенный в желудок, незначительно снижает уровень секреции при мнимом кормлении, но понижает общую кислотность и содержание свободной соляной кислоты, а также угнетает активность пепсина. Поэтому, исходя из этих данных, предполагается, что винилин принимает участие в гуморальной регуляции секреции желудочного сока.
Исследование влияния эмульсии винилина на содержа-ние холестерина в сыворотке крови на экспериментальной мо-дели геперхолестериниимии
Как видно из приведённых в таблице данных, масляный раствор винили-на не обладает противоязвенным действием, снижая статистически недостовер-но количество язв в пилорическом отделе желудка. В случае применения эмульсии официнального препарата, стабилизированной раствором желатина, в пилорическом отделе желудка язвы отсутствуют, т.е. субстанция винилина спо-собствует инволюции ульцерогенеза в пилорическом отделе желудка. В обоих случаях общая площадь и количество язв изменялись незначительно.
Комбинация эмульгаторов из глицирама и лецитина, введенных в растворе желатина (группа животных №5), в фундальном отделе желудка снижали пло-щадь язв на 50% (Р 0,05) и количество их на 62,5% (Р 0,05) по сравнению с контрольной группой животных, что свидетельствует о благоприятном воздей-ствии выше названных веществ на патологический процесс в фундальном отде-ле желудка. Раствор желатина практически не влиял на процесс язвообразова-ния. Разработанная нами лекарственная форма – эмульсия винилина снижала ко-личество язв в 3 - 15раз: средняя площадь язв в фундальном отделе желудка снижалась на 83% по сравнению с контрольной группой-1 (Р 0,05), на 88,6% (Р1 0,05) по сравнению с масляным раствором, на 89,8% (Р2 0,05) по сравне-нию с винилином в желатиновом геле и на 66,7% (Р3 0,05) по сравнению с комплексом эмульгаторов, тогда как у всех животных этой группы в пилори-ческом отделе язвы отсутствовали.
Таким образом, разработанная нами технологическая формула винилина, лецитина и моноаммонийной соли глициризиновой кислоты объединила в себе положительные стороны влияния на саногенез язвенной болезни желудка: так комплекс способствовал заживлению язв, действуя в фундальном отделе же-лудка, а винилин – в пилорическом. Актуальность исследований связана с изучением фармакологической ак-тивности новой лекарственной формы винилина [75, 141, 144]. Цель данного фрагмента работы: изучить влияние эмульсии винилина на содержание холестерина в сыворотке крови на модели гиперлипидемии вызы-ваемой твином-80. В качестве объекта исследования была использована разработанная эмульсия винилина, а препаратом сравнения служила субстанция винилина. Эксперимент проводили на белых крысах обоего пола массой 180-200 гр. Животные содержались в стандартном режиме вивария. Винилин и эмульсию винилина вводили в дозе 100мг/кг и 200 мг/кг соот-ветственно вводили крысам интрагастрально четырехкратно на протяжении пя-тисуточного опыта. Метод исследования: Модель эндогенной гиперлипидимии вызывали однократным внутри-брюшинным введением твина – 80 в дозе 250 мг/на 100 г на фоне лечебно – профилактического применения лекарственной формы с винилином. Через 14 часов после внутрибрюшинного введения твина – 80, крыс под легким эфир-ным наркозом декапитировали, собирая кровь в предварительно обмытые рас-твором гепарина центрифужные пробирки. Полученную кровь центрифугиро-вали при 3000 об/мин – 15 минут. Определение холестерина в сыворотке крови проводили по методу Илька [95]. Контрольной группой служили животные, не подвергшиеся санации. Результаты исследования представлены в табл. 21. Как видно из приведенных в табл. 21 данных, введение твина – 80 вызы-вает повышение содержание холестерина в сыворотке крови на 41,3%. Содер-жание холестерина на фоне введения винилина недостоверно снижается на 8,0%, по сравнению с контрольной группой. При использовании разработанной лекарственной формы винилина – эмульсии, наблюдается снижение уровня хо-лестерина на 27,8% (Р 0,05). Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что гипохолстери-нимическая активность разработанной лекарственной формы манифестна и превышает таковую у официнального (традиционного) препарата винилина. Этот факт позволяет сделать вывод о перспективности расширения спек-тра применения винилина в лечебной практике, в том числе для коррекции но-зологических форм заболеваний, связанных с нарушением липидного обмена. Актуальность исследований связана с изучением влияния винилина и разработанной эмульсии винилина на содержание ТБК – активных продуктов в сыворотке крови. Такое исследование для винилина и его лекарственных форм проводись впервые [98, 107, 110]. Цель исследования связана с изучением механизма действия винилина и его лекарственных форм на обменные процессы в организме. Эксперимент про-водился на модели гиперлипидимии, вызываемой твином – 80, при которой возрастает уровень перекисных соединений в организме (ТБК – активных про-дуктов). Объекты исследования, экспериментальные животные, дозы и способ введения, получение сыворотки крови подробно описаны в п. 3.3.3. Метод основан на спектрофотометрическом определении окрашенных продуктов, образующихся при взаимодействии тиобарбитуровой кислоты и пе-рекисных соединений крови [6, 44]. Полученное соединение извлекают бутано-лом и измеряют оптическую плотность опытной пробы против холостой пробы при двух длинах волн 535 и 570 мн. Результаты исследования отражены в табл. 22
Разработка методики количественного определения вини-лина в эмульсии
Из наружных лекарственных форм винилина существует пока два аэро-зольных препарата «Винизоль» и «Левовинизоль», содержащие кроме винили-на линетол, левомицетин и цитраль. Они пользуются большим спросом и попу-лярностью у населения и врачей и используются для лечения ожогов, ран и трофических язв. Но у них ограничен спектр применения и при их производст-ве возникают определенные технологические трудности.
В связи с тем, что винилин обладает выраженной противовоспалитель-ной, анальгезирующей, ранозаживляющей и противомикробной активностью, нами было решено разработать для него наружную лекарственную форму – мазь. С целью усиления противомикробной активности нами было решено до-бавить в мазь препарат прополиса. Прополис обладает широким противомик-робным, противогрибковым и противовирусным действием. Достоинством прополиса является отсутствие резистентности к нему микроорганизмов, он не вызывает дисбактериоза и обладает также ранозаживляющей и противовоспа-лительной активностью [1, 27, 90]. Также как и винилин, прополис отличается большой физиологичностью и отсутствием побочного действия на организм человека, кроме возникающей в редких случаях индивидуальной непереноси-мости. Однако ассортимент наружных лекарственных форм прополиса весьма ограничен: это настойка прополиса и аэрозольный препарат «Пропосол», а также мази «Пропоцеум» и «Апрополь», пользующиеся большой популярно-стью у населения и врачей [62, 96]. Более широкое распространение прополис получил в косметологии: для лечения и профилактики различных видов угре-вой сыпи [36, 102]. На основании данных п. 3.3. в результате которых установ-лено прооксидантное действие и отсутствие фармакологической активности у винилина, применяемого в виде масляного раствора, наша задача заключалась в разработке мази на гидрофильной основе, в которую можно было бы ввести ви-нилин и прополис. В этой проблеме много нерешенных технологических во-просов: недостаточно изучена реология таких мазей, их сочетания с различны-ми основами-носителями, не выяснена для них оптимальная технологическая схема и т.д. Такие мази представляют, как правило, сложные гетерогенные системы с большим набором ингредиентов, обладающих различными физико-химическими свойствами, и относящихся к разным фармакологическим груп-пам. Для оценки их качества используются различные физико-химические ме-тоды исследования. Современный уровень развития позволяет использовать новые физико-химические способы для более глубокого понимания сложной структуры компонентов внутри лекарственного средства, для оценки качества на стадиях изготовления и хранения, а также выявления их биодоступности. Для качественного и количественного определения действующих веществ ис-пользуются следующие физико-химические методы анализа: ВЭЖХ, ГЖХ, ТСХ, полярография, потенциометрия; УФ- и ИК-спектрофотометрия, грави-метрия. Определение оптимальных количеств вспомогательных веществ (эмульгаторы, поверхностно-активные вещества, растворители, солюбили-заторы, стабилизаторы), необходимых для создания стабильных основ, возможно на основе исследования их физико-химических свойств; гидрофиль-но-липофильного баланса, поверхностно-активных, диэлектрических показате-лей, показателей вязкости, термодинамических параметров активации вязкого течения. В технологии мягких лекарственных форм стали уже традиционными реологические методы исследования. Данная группа методов основана на нали-чии в дисперсных системах, структуры коагуляционного типа, характери-зующегося упруго – вязко – пластичными свойствами. Для подобных сис-тем характерен такой тип течения, при котором существует функциональная зависимость значений вязкости от приложенного напряжения или скорости сдвига, а также способность восстанавливать структуру после ее разрушения [46, 106]. Широкое распространение реологических исследований обусловлено тем, что структурно-механические свойства, в особенности – вязкость, пре-дельное напряжение сдвига, коэффициент тиксотропного нарушения структу-ры, являются важными факторами, определяющими терапевтические и потре-бительские свойства мягких лекарственных форм. Важно отметить необходимость изучения взаимосвязи структурно-механических свойств систем с высвобождением из них действующих веществ, что определяет терапевтическую активность. Неотъемлемым этапом исследо-вания эмульсионных основ является определение их коллоидной стабильно-сти. С этой целью широко используются методы центрифугирования и термо-статирования. Важным показателем, определяющим качество эмульсионных основ, являются степень дисперсности внутренней фазы. Дисперсионный анализ эмульсий методом микроскопирования основан на том, что реальные эмульсии представляют собой полидисперсные системы, содержащие капли размером от 0,1 до 100 мкм и более, хорошо наблюдаемые в световой микро-скоп. Среди новых методов исследования эмульсионных и гелевых системах, описанных в литературе, – определение их стабильности с помощью лазерной техники и микроволнового излучения, а также ультразвуковой метод измерения коэффициентов диффузии лекарственных веществ внутри гидрогелей [31, 97]. Из приведенных сведений можно сделать вывод, что мази как лекарствен-ная форма сейчас переживает "пик" своего развития, так что любые фармаколо-гические и технологические исследования в отношении этой лекарственной формы весьма актуальны. Особенно это касается лекарственных форм давно известных препаратов, но мало изученных с современных позиций [32, 123].
Определение ранозаживляющей активности мази с винилином и препаратом прополиса
Исследованию была подвергнута мазь с винилином и прополисом, а так-же основа-сплав – ПЭГ 400 и ПЭГ 1500. Определение чувствительности пато-генных микроорганизмов к мази и к основе проводили, используя способ «ко-лодцев»[65, 78].
Методика заключается в следующем: стерильные чашки Петри устанав-ливают на строго горизонтальную поверхность, наливают в них 2% мясопеп-тонный агар (рН=7,2 – 7,4) в количестве 20 мл для создания оптимальной тол-щины слоя, равной 4 – 5мм. Для тех видов микробов, которые не растут на мя-сопептонном агаре, как, например стрептококки, пневмококки и другие, приме-няют 5% кровяной или сывороточный агар. Перед посевом чашки со средой подсушивают в термостате.
Толстый слой агара засевают 1 – 2мл взвеси испытуемых микроорганизма и растирают шпателем до равномерного распределения микроорганизмов по всей поверхности чашки Петри. Излишек взвеси полностью удаляют, подсуши-вают в течение 30 минут. Затем сверлом (d=6мм) проделывают отверстия (“ко-лодцы”) на расстоянии 2,5см от центра чашки Петри и на одинаковых расстоя-ниях друг от друга, которые затем заполняют исследуемыми объектами и осно-вой. После этого чашки ставят в термостат при 37С, не переворачивая, строго горизонтально, чтобы образовались круглые зоны.
Лекарственное вещество, находящееся в диске, диффундирует из мазе-вой основы в агар, формируя вокруг диска зону угнетения роста чувствитель-ных к нему микроорганизмов, четко выделяющуюся на фоне сплошного роста. Через 24 часа измеряли диаметры зоны угнетения роста. Результаты определе-ния отражены в табл. 39.
Оценка результатов проводилась по диаметру зон задержки роста вокруг «колодца», включая и диаметр самого «колодца». Зоны измерялись с помощью миллиметровой бумаги. В некоторых случаях зоны угнетения имели овальную форму; в таких случаях измеряли наибольший и наименьший диаметры зоны и вычисляли среднюю величину, которая и принималась за показатель. Отсутст-вие зон задержки роста микроорганизмов вокруг «колодца указывает на то, что испытуемая культура не чувствительна к данному препарату. Зоны диаметром более 10 мм указывают на чувствительность испытуемой культуры к данному препарату. Чем зона задержки роста испытуемой культуры больше, тем выше её чувствительность к данному препарату. более 10мм – высокая активность; 10мм – умеренная активность; менее 10мм – отсутствие активности. Результаты, приведенные в табл. 40 показывают, что наиболее чувстви-тельны к исследуемому препарату культуры стафилококков и бацилл, и это оп-равдывает наш выбор в отношении основы и состава для лекарственной формы винилина и прополиса – мази. Определение ранозаживляющей активности мази с винилином и пре-паратом прополиса У животных, находящихся под этаминаловым наркозом (30 мг/кг внутри-брюшинно), в области спины выстригалась шерсть на площади около 6 см2. За-тем в асептических условиях скальпелем делали разрез кожи длиной 2 см до собственной фасции и накладывали два шва до полного смыкания краев раны [8, 104]. После этого на операционное поле наносили исследуемую мазь в коли-честве 250 мг. Лечение проводили в течение недели, ежедневно обрабатывая раневую поверхность однократно. В контрольной группе раны не обрабатыва-лись. По окончании эксперимента на 8-е сутки швы снимали и ранотензиомет-рически с помощью динамометра определяли прочность раны на разрыв. На модели линейной раны установлено, что все исследуемые мази обладают выраженной ранозаживляющей активностью, достоверно увеличивая прочность рубца. Наибольшей активностью обладала мазь, содержащая винилин и пропо-лис: она увеличивала прочность рубца на 80% (Р 0,01), причем в данном слу-чае ранозаживляющее действие винилина усиливалось за счет добавления про-полиса. Из табл. 40 также видно, что в разработанной мази наблюдается синер-гизм фармакологического эффекта винилина и прополиса. Качественная реакция на фенольный гидрофильный препарат прополиса в мази проводили следующим образом: 1 г мази растворяли в 10 мл горячей во-ды. Раствор фильтровали. К 2 мл фильтрата прибавляли 2 капли 5% спиртового раствора железа окисного хлорида; появлялось буро – зеленое окрашивание (фенольная гидроксильная группа). Далее к 2 мл фильтрата прибавляли 0,2 мл раствора свинца ацетата ос-новного; выпадал желтый осадок (полифенолы). Было установлена также идентичность спиртового извлечения из мази по спектру поглощения фенольного гидрофильного препарата прополиса соответ-ствующему препарату (рис.14) [118]. 1 г мази растворяли в 5 мл кислоты уксусной ледяной при нагревании на водяной бане. 1 мл полученного раствора прибавляли к 3 мл ангидрида уксус-ного в конической колбе емкостью 25 мл и хорошо перемешивали. К получен-ному раствору прибавляли без перемешивания 0,5 мл раствора кислоты серной в ангидриде уксусном (2 – 3 капли кислоты серной концентрированной в 10 мл ангидрида уксусного). Появлялась зелёная окраска, которая в течение 1 – 2 мин переходила в коричневую. Таким образом, с помощью цветных качественных реакций и положения максимума в спектре поглощения подтверждена подлинность винилина и фе-нольного гидрофильного препарата прополиса в исследуемой мази [77]. Для проведения стандартизации мази разработана методика количествен-ного определения фенольных извлечений прополиса, в основу которой положе-на способность препарата поглощать излучение в УФ – области спектра. Приведенная методика, описанная в разделе 4.2., была использована нами для разработки количественного определения фенольных соединений прополи-са в мази. Необходимо было извлечь сумму фенольных соединений из иссле-дуемой лекарственной формы. Для этой цели в качестве растворителя была выбрана горячая вода, поскольку собственно препарат прополиса был получен с помощью этого экстрагента. Для этой цели: около 1,5 г (точная навеска) мази помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляли 25 мл теплой воды (40-500С) и нагревали на водяной бане 10 минут до растворения, доводили объ-ем раствора водой до метки и перемешивали. Раствор фильтровали; 1 мл фильтрата помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводили объем раствора 95% этиловым спиртом до метки. Оптическую плотность полученного раствора измеряли на спектрофото-метре при длине волны 292 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. В качестве рас-твора сравнения использовали 95% этиловый спирт (рис 15).
