Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Современное состояние исследований' в области аэрозольных лекарственных форм и противогрибковых лекарственных препаратов 11
1.1 Современное состояние исследований аэрозольных лекарственных форм 11
1.1.1 Предпосылки создания аэрозольных лекарственных форм 11
1.1.2 Современное^ состояние исследований лекарственных аэрозолей 13
1.1.3 Спреиг особенности понятийного аппарата и терминологии* в отношении лекарственной формы 14
1.2 Микоз стоп как одно из распространенных современных заболваний: Исследования в областитерапиимикозов стоп 18
1.3«Современное состояние исследований^ области разработки фитопрепаратов, обладающих противогрибковым действием 26
1.4 Химический состав лекарственных растений) исследуемой фитокомпозиции противогрибкового действия 34
Заключение по обзору литературы: 34
ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ: 38
2.1 Объекты исследований 38
2.2 Методы исследований 46
ГЛАВА З Разработка технологии и» исследование комплексного извлеченния противогрибкового действия 60
3.1 Обоснование выбора растительных объектов для создания фитокомпозиции 62
3.2 Определение товароведческих показателей сырьевых объектов 59
3.3. Фитохимическое исследование фитокомпозиции 63
3;4 Количественное определение флавоноидов и кумаринов в смеси растительного, сырья 66
315 Исследования по выбору оптимального экстрагента для» получения комплексного извлечения 61
3.6 Исследования по выбору оптимального соотношения растительных объектов в сборе; 68
3.7 Исследования по» выбору оптимальных условий экстракции 70
3.8^Технология«комплексногоизвлечения противогрибкового действия 75
3.9 Оценка качества полученного комплексного извлечения 75
Выводы по главе 79
ГЛАВА 4 РАЗРАБОТКА СОСТАВА И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ, СПРЕЯ НА ОСНОВЕ КОМПЛЕКСНОГО ИЗВЛЕЧЕНИЯ 81
4.1 Выбор и теоретическое обоснование состава спрея 81
412* Биофармацевтические исследования ins vitro модельных образцов спрея по выбору оптимальной композиции вспомогательных веществ 83
А'.Т.Ь Технология получения модельных образцов спрея на основе комплексного извлечения 83
4^2.2'Биофармацевтические исследования in» vitro модельных образцов спрея на основе комплексного извлеченияшпто 84
4:23 Биофармацевтические исследования по выбору оптимального полимера, обладающего пролонгтрующим действием 87
413* Изучение кинематической вязкости исследуемых модельных составов. 90
4.4Исследование микробиологической, чистоты предполагаемого со става спрей композиции 91
4.5 Технология спрея на основе комплексного извлечения 93
Выводы по главе 96
ГЛАВА 5 РАЗРАБОТКА НОРМ КАЧЕСТВА СПРЕЯ НА ОСНОВЕ КОМПЛЕКСНОГО ИЗВЛЕЧЕНИЯ. ...97
5.ГРазработка норм качества для спрея... 97
5.2 Технологические показатели качества спрея, обеспечиваемые до зирующим устройством. 98
5.2.1 Определение качества; выхода спрея из упаковки (модель
ной). ...99
5.2.2 Определение количества холостых нажатий до начала выхода содержимого из у паковки... 100
5.2.3 Определение качества распыления спрея по статистическим отпечаткам факела распыла; — 100
5.2.4 Исследования однородности дозирования спрея. 102
5.2.5 Определение количества доз во флаконе. ..103
5;3 Исследование стабильности спрея при определении сроков его годности... ...103
Выводы по главе. 105
ГЛАВА 6 ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ РАЗРАБО ТАННОГО СПРЕЯ; 106
6.1 Изучение общетоксического действия спрея; ...106
6.1.1 Изучение «острой» токсичности спрея.. ..106
6.1;2 Изучение местнораздражающего действия спрея и комплексного извлечения... 108
6.2 Изучение противовоспалительных свойств спрея. 109
6.3 Изучение специфической активности разработанного спрея. 111
6.3.1. Изучение противогрибковой активности спрея! 111
6.3.2 Изучение антибактериального действия спрея. 112
Выводы по главе... 112
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ. 113
- Современное состояние исследований аэрозольных лекарственных форм
- Объекты исследований
- Обоснование выбора растительных объектов для создания фитокомпозиции
Введение к работе
Актуальность темы. Грибковые заболевания являются одной из старейших патологий, которой страдает человечество, и количественно эти болезни пока не уменьшаются. В то же время арсенал отечественных антимикотических препаратов практически ограничен антифунгальными антибиотиками и препа-ратами на основе синтетических соединений. Но использование данных лекарственных препаратов сопровождается проявлением целого ряда побочных действий, что зачастую ограничивает частоту их применения. При этом, как правило, в качестве основных побочных эффектов наблюдаются: различные аллерги-
ческие реакции, снижение иммунитета, нарушение функционирования пищева-
I рительной системы. В связи с этим поиск новых антимикотических средств,
особенно из сырья растительного происхождения - задача вполне актуальная.
t Тем более, что лекарственные препараты из растительного сырья на сегодняш-
» нии день занимают значительное место в номенклатуре лекарственных средств.
Многокомпонентность лекарственных фитопрепаратов не только расширяет
диапазон терапевтической активности, но и обеспечивает более мягкое их дей-
ствие. }
Среди всех известных дерматомикозов наиболее распространен микоз стоп, что требует не только выбора оптимального лекарственного вещества, но и соответствующей лекарственной формы, для обеспечения рационального использования выбранной субстанции.
Из существующих на сегодняшний день лекарственных форм, больше всего для этих целей подходят спреи, как по своим биофармацевтическим характеристикам, так и по технологическим показателям. Однако в настоящее время ассортимент антимикотических спреев ограничен (термикон, бифосин, ламизил, фунготербин), и состав их не очень разнообразен. Оказывая выраженный терапевтический эффект, данные лекарственные средства не лишены побочных эффектов и имеют ряд противопоказаний.
В связи с этим, изучение возможности разработки противогрибкового спрея на основе фитокомпозиции - вопрос значимый и своевременный.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы, является создание современной" лекарственной формы — спрея * противогрибкового' действия, содержащего в качестве активного компонента комплексное извлечение из нескольких растительных объектов.
Для.реализации данной цели необходиморешить следующие задачи:
- разработать состав фитокомпозиции;
- провести общее фитохимическое изучение исходного растительного
комплекса;
- выбрать оптимальные уел овия* экстрагирования, биологически^ активных
веществ.из.предлагаемого сырьевого»комплекса и провести подробный анализ
і полученного комплексного извлечения;
разработать лекарственную форму — спрей на-основе комплексного? из-влечения; і
выполнить биофармацевтические исследования in vitro с целью выбора соответствующего, состава' вспомогательных компонентов спрея* и, разработать технологическую ;схему его производства;
разработатьнормы качества для* предложенного спрея; провести предварительные > фармакологические исследования и создать необходимую нормативную документацию;
Научная новизна исследований.
Разработана лекарственная форма - спрей дляї профилактики и лечения микозов стоп. В качестве1 активного компонента впервые используется комплексное извлечение из донника лекарственного травы, ромашки, аптечной цветков, зверобоя, продырявленного травы, тысячелистника обыкновенного травы, полыни горькой травы, душицы обыкновенной" травы. Для получения комплексного извлечения, являющегося полупродуктом при производстве выбранной лекарственной формы, установлен оптимальный состав растительных объектов. Показано наиболее подходящее их соотношение в сборе и проведено его фитохимическое изучение. Определены оптимальные условия экстракции
9 действующих компонентов - кумаринов и флавоноидов, из разработанного состава.
Выбрана оптимальная композиция спрея на основании проведенных биофармацевтических исследованийап vitro и реологических характеристик.
Разработана рациональная технологическая схема спрея и предложены нормы,качества: описание, подлинность, плотность, величина рН, величина кинематической вязкости, микробиологическая* чистота, количественное опреде-
і ление действующих веществ, а также технологические показатели качества,
обеспечиваемые дозирующим устройством, спрея: количество холостых нажа-
тии, степень эвакуации, статический* отпечаток факела распыла, однородность
дозирования, количество доз во флаконе. ,'
Практическая значимость результатов исследования. \
Практическая значимость работы заключается в.том, что создан ориги-
нальный лекарственный препарат - спрей противогрибкового действия, на ос
нове комплексного извлечения из нескольких растительных объектов. '
Полученные в результате экспериментальных исследований, данные сви-детельствуют о возможности применения спрея для профилактики и лечения микозов стоп. Разработана технологическая схема спрея, определены критерии его качества, установлен срок годности (2* года). Полученные данные свидетельствуют о целесообразности промышленного выпуска спрея.
Внедрение результатов исследования в» практику. Разработана ФСП «Алтай-люкс, спрей противогрибковый», утвержденная в рамках фармацевтического производства ООО «Медлинфарм» г. Москвы (от 03.05.2009), получен акт технологическойапробации производства спреяот того же предприятия. Основные положения, выносимые на защиту:
обоснование выбора состава фитокомпозиции и ее фитохимическое изучение;
результаты определения оптимальных условий экстрагирования биологически активных веществ из исходной смеси растительных объетков;
результаты анализа полученного комплексного извлечения;
,10 . . . ! ..
-результаты биофармацевтических исследованишіп vitro идеологических исследований^ по выбору оптимального* состава; композиции вспомогательных веществдля созданияїспрея;
технологическая^ схема спрея;
результаты разработки; норм* качества спрея; и установление срока.' его
ГОДНОСТИ. ' :
Апробациям публикациягрезультатовисследования:
Основные положения, диссертационной^работы доложены* на межрегио
нальной; научной конференции «Актуальные: проблемы-, фармации»- (г.. Влади
кавказ, 2007 год), наІЖОбщероссийскойшаучнош конференции; с международ
ным- участием «Успехи современного>> естествознания» (г. Сочи; 2008^ год)- на
63-ей: региональной; конференции not фармации; фармакологии m подготовке
кадров; (г. Пятигорск, 2008 год);,нш64-оифегиональной конференции по-фарма
ции; фармакологии и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2009 год); межрегио-
нальнош научной; конференции! «Актуальные: проблемы фармации» (г.. Влади-
кавказ, 2009 год): і
По материаламдиссертации опубликовано 9-работ, из которых 2 работы в
изданиях рекомендуемых ВАК. :
Євязь задачшсследованишс проблемным планом фармацевтических наук.
Диссертационная работа- выполнена1 в- соответствии* с , планом; научно-
исследовательских работ ГОУ ВПч<Пятигорская? государственная? фармацев
тическая академия-Федерального^агентства по здравоохранению и социальному
развитию» (№ государственнотрегистрации;0120010106Г) в рамках проблемы
"ФармацияТ. ,' " , .
Объем? ш структура»диссертации:. Диссертационная работа изложена на* 132 страницах машинописного текста, содержит 36 таблиц,. 13 рисунков,.состоит из введения; обзора литературы (1 глава), второй, главы, посвященной материалам и методам:исследований; 4-х глав, содержащих результаты собственных исследований, общих выводов; списка, литературы и приложений. Список литературы включает 184 первоисточника, в том числе 21 иностранных авторов.
Современное состояние исследований аэрозольных лекарственных форм
Аэрозольные лекарственные формы являются сравнительно новыми в фармацевтической технологии, и находят все большее применение в медицине.
По мнению профессора Э. А. Коржавых аэрозоли — это пожалуй, одна из самых необычных лекарственных форм, среди особенностей которой автор вы , деляет то, что они относятся к газообразным ЛФ и отличаются значительно меньшей стабильностью; а использование в .медицине разных народов;просле живается очень давно, однако, свое современное наименование получили толь ко в:ХХ?в. И, наконец; следующая-особенность — высокая рольдостижений. на учно-техническогошрогресса в развитии данного класса ЛФ — вплоть до корен ного изменения предметноиюбласти понятия «аэрозоль» [60]. Впервые-аэрозоли появились.в 30-х годах в-Европе, когда норвежским ученым Эриком-Ротхеймом (1926 г.) был открыт способ упаковывать, краски в баллончики, под давлением в смеси с пропаном и бутаном [51].
Последующие попытки были осуществлены в 1937 г. Так Иддингсом, для заполнения:баллончиков, применялся низкотемпературный метод [60].
В этом, же году Хоккенойсу удалось создать аэрозольную упаковку инсектицида в пропане. Но после, нескольких испытаний работа в этом направлении была приостановлена из-за, большой опасности воспламенения подобных составов.[17].
Американскими учеными Саннивэн и Гудьо (1938г.) были предложены работы по изучению инсектицидов в аэрозольной упаковке. Первая же аэрозольная упаковка в США была создана в 1941 г, представлявшая собой средство1 для уничтожения насекомых, упакованное в стеклянный сосуд, где пропел-лентом служил фреон-12. В первые годы создания аэрозольной упаковки наблюдалась тенденция наполнять.их такими веществами, которые одновременно являются и активным продуктом, и пропеллентом, так, например, хлористым этилом (для целей анестезии) или хлорфторумводородами (для тушения пожаров). В промышленном масштабе производство аэрозолей началось в США, начиная с 1946 г [183], а первая.медицинскаяаэрозольная упаковка была выпущена в 1955 году [126].
Чешским ученым Hi Фуксом (1955 г) изучены механические свойства аэрозолей. В этом же году отечественными учеными И.И. Елкиным и СИ. Эдельштейном были разработаны аэрозоли с антибиотиками, которые нашли дальнейшее клиническое применение в медицинской практике [22, 162].
В дальнейшем СИ. Энделыптейном с точки зрения медицинского применения, сформулировано определение аэрозолей1 [161].
В. Коула и Mf Дурасовой (1957 г) было предложено новое направление в разработке аэрозольных препаратов, ориентированное на ветеринарию.
Отечественным ученым В:СЯрных с помощью аэрозольных генераторов механизированы ветеринарно-санитарные работы. Автором наиболее глубоко изучены.процессы дезинсекции помещений для животных с помощью аэрозолей, а также применение аэрозолей для ингаляционной химиотерапии и вакцинации животных [163].
Немалая роль в изучении применения аэрозолей в сельском хозяйстве приходится еще на одного отечественного ученого - Г.И. Коротких (1970т).
Следует отметить, что вопросами технологии получения аэрозолей занимались Б.В. Дерягин (1961г), Г.Р. Шеферд (1961 г), английские ученые X. Грин, В. Лейн (1969г), П.А. Сандерс (1970г) [23, 180, 182].
В.М. Цетлином изучена технология- получения аэрозольных баллонов, свойства различных пропеллентов и также применение аэрозолей для дезинфекции [158].
Первой попыткой обобщить отечественный и зарубежный опыт по производству и применению продуктов, упакованных под давлением, неоспоримо можно считать опубликование монографии по технологии и экономике произ водства; аэрозольных упаковок F.-Щ Кореньковым с соавторами (1968 К)І,. в которой? широко освещена возможность, использования; аэрозольных упаковок для различных веществ применяемых в медицинеивбыту. Приведены рецептуры различных как отечественных такш зарубежных аэрозольных продуктов [17].
Вьішедшаяшоноірафияшольских авторової 972 г), в; большей степени посвящена-, применению лекарственных аэрозолей\ принтом, не ві полной мере охватывает саму сущность, технологиишроизводства,-аэрозольных лекарственных форм; [177] . Особый вклад в создание, исследование, производство»и- применение аэ розолей? внес отечественный у ченыш E.G. Башурас соавторами (1978; г);.точно осветив? аспекты» технологии» приготовления, классификации: аэрозолей; прин ципы работы .аэрозольных упаковок, клапанов» распылителей насадок, изго товление различных конструкцию аэрозольных баллонов. и? методов их напол нения [8; Ш]:
В настоящее времягу многих ученых не:утратился интерес к исследовани-ямшюбластшаэрозолеш. Так; ЭШ. Коржавых сформулировано современное- определение понятия «Аэрозоль», в соответствии с которым под аэрозолем, следует понимать;газообразную І лекарственную форму, представляющую собой дисперсию лекарствен-ного: вещества; в газовой5среде, получаемую в момент применения» или непосредственно перед ним;, путем распыления; либо разбрызгивай ия? лекарственного препарата (ЛИ) из аэрозольного устройства в струе газа-пропеллента;
Предложенное определение уточняет существующие дефиниции; шзакре-пляет сложившуюся среди населения и специалистов здравоохранения: тенденцию относить к аэрозолям преимущественно распыляющие и разбрызгивающие устройства, которые могут быть как герметичными (под давлением), так и негерметичными (спреи) [60];
Глубокое и тщательное изучение аэрозолей позволило Э.А. Коржавых в дальнейшем разработать обобщенную классификацию аэрозолей, которая пред 14 ставляет собой шестиуровневую комбинированную систему с тремя фиксированными верхними и тремя динамическими нижними уровнями с унифицированной номенклатурой лекарственных аэрозолей. В соответствии с предложенной классификацией, аэрозоли лекарственные делятся на подклассы, каждый из которых по технологическому признаку подразделяется на ряд классификационных групп. Так, выделены два рода аэрозолей, получаемых путем распыления и разбрызгивания: группа собственно аэрозолей; группа спреев и др.- [59].
Разработанные автором теоретические подходы к обобщенной классификации и номенклатуре лекарственных аэрозолей позволяют на практике анализировать этот сегмент фармацевтического рынка и выстраивать ассортиментную политику, как в оптовых, так и в розничных организациях [61].
Следует отметить, что в последнее время все большее распространение получают различные модифицированные аэрозольные лекарственные формы, а именно - спреи. При этом теоретические основы создания спреев в фармацевтической технологии изучены не в полной мере, а так же нет однозначного ответа, что же такое спрей - модификация аэрозолей или самостоятельная лекарственная форма [141].
Поэтому дальнейшее изучение и совершенствование спреев, как лекарственной- формы, требует более глубокого подхода к разработке, свойствам и оценочным критериям данной лекарственной формы, что и определяет цель и задачи наших настоящих исследований.
Объекты исследований
В экспериментальных исследованиях использовались субстанции и вспомогательные вещества, полученные от заводов-изготовителей с соответствую-щими-протоколами анализа по требованиям НД (ГФ X, XI и XII изд., отдельных ВФС и ФС, ГОСТ, ОСТ и ТУ).
Алюминия хлорид — АІСІубГЬО (М.м. 241,42) Алюминия хлорид гексагид-рат. Содержит не менее 98,0 % АІСІз бНгО. Кристаллический порошок от белого до слегка желтоватого цвета, гигроскопичен. Легко растворим в воде и спирте 96 %, растворим в эфире. Хранят в воздухонепроницаемом контейнере. При количественном определении использовали также Алюминия хлорид безводный.
Аиетонитрнл — CH3CN (М.м. 41,05). Метилцианид. Этаннитрил. Прозрачная, бесцветная жидкость. Смешивается с водой, ацетоном, эфиром и метанолом. Раствор ацетонитрила 100 г / л имеет нейтральную реакцию по лакмусовой бумаге. Температурные пределы перегонки от 80 до 82 С, должно перегоняться не менее 95 %. Минимальное пропускание 98 % в области длин волн от 255 до 420 нм. Использовали также Анетонитрил для хроматографии - минимальное пропускание 98 % при длине волны от 240 нм. Минимальная чистота 99,8 %. Бутанол - CH3CH2CH2GH2OH (М.м. 74,12). н-Бутанол. 1-Бутанол. Прозрачная, бесцветная жидкость. Растворим в воде, смешивается со спиртом 96 %, эфиром. Температура кипения от 116 до 119С.
Вода очищенная - бесцветная прозрачная жидкость нейтральной реакции (рН 5,0 - 6,8), без запаха и вкуса. Используется как универсальный растворитель для лекарственных и вспомогательных веществ (ФС 42-2619-97).
Глицерин - СН2ОНСНОНСН2ОН (М.м. 92,10). Бесцветная, прозрачная, густая жидкость, гигроскопичная. Смешивается с водой. Используется как пластификатор в составе мягких лекарственных форм (ГОСТ 6824-76).
Диазореактив — 5 мл раствора сульфаниловой кислоты (4,5 г сульфанило-вой кислоты и 45 мл концентрированной хлористоводородной кислоты в 500 мл воды) вносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, поставленную на лед, прибавляют 2,5 мл раствора нитрита натрия. Смесь оставляют на льду в течение 5 мин, затем прибавляют еще 10 мл раствора нитрита натрия, взбалтывают, оставляют на льду в течение 5 мин и доводят объем раствора водой до метки. Хранят на льду. Применяют свежеприготовленным, сохраняя на льду.
Калия гидроксид — КОН (М.м. 56,11). Калия гидроокись. Кали едкое. Белые куски, цилиндрические палочки или гранулы с кристаллической структурой на изломе. Гигроскопичен. Очень легко растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96 %, практически нерастворим в эфире. (ГОСТ 24363-80, СТ СЭВ 1439-78).
Кислота уксусная «х. ч. ледяная» - СН3СООН (М.м. 60,05) Бесцветная прозрачная жидкость, с резким специфическим запахом. Содержание уксусной кислоты 99,8 % (ГОСТ 61-75). [20, 21].
Кумарин — бесцветные игольчатые кристаллы, температура плавления 67-68 С.
Лецитин соевый голландский - маслянистая жидкость, густой мазеобразной массы, темно коричневого цвета. Получают из различных видов растительного и животного сырья: из семя или ростков сои или кукурузы, мозгов живот 40 ных, яичных желтков и др. (регистрационный номер в СЭС г. Москва 3164/35633) [90].
Метанол - СНзОН (М.м. 32,04). Метанол-яд. Спирт метиловй. Прозрачная, бесцветная, воспламеняющаяся жидкость. Смешивается с водой и спиртом 96 %. Температура кипения от 64 до 65 С. (ГОСТ 6995-77, х.ч., ч.д.а.).
Натрия гидроксид - NaOH (М.м. 40,00) Натр едкий. Натрия гидроокись. Белые куски или цилиндрические палочки, имеющие на изломе кристаллическую структуру, гигроскопичен. Очень легко растворим в воде; легко растворим в спирте 96 %, растворим в глицерине; очень мало растворим в ацетоне и эфире. (ГОСТ 4328 - 77). [20, 21].
Нипагин — метиловый эфир параоксибензойной кислоты — порошок белого или слегка желтоватого цвета, растворим в хлороформе, спирте этиловом, ацетоне (ФС 42-1406-89).
Нипазол - пропиловый эфир параоксибензойной кислоты - порошок белого цвета, не растворим в воде, хорошо растворяется в органических растворителях (ВФС 42-2079-91).
Полиэтиленоксид 400 (ПЭО-400) - полимер этиленгликоля со степенью полимеризации от 8 до 10. Бесцветная вязкая-жидкость со слабым характерным запахом, гигроскопичная. Смешивается с водой, ацетоном, хлороформом и спиртом этиловым. Не растворяется-в эфире. Применяется в качестве одного из компонентов для приготовления основы для мазей и суппозиториев, солюбили-затора труднорастворимых в воде веществ, неводного растворителя и пластификатора (ТУ - 2483-167-05757587-2000) [3].
Пропиленгликолъ 1,2 - бесцветная вязкая жидкость со слабым характерным запахом. Растворима в воде, диэтиловом эфире, одноатомных спиртах, карбоновых кислотах, альдегидах, аминах, ацетоне, этиленгликоле и ограниченно растворима в бензоле. Обладает умеренными консервирующими и бактерицидными свойствами, применяется в качестве растворителей природных соединений, экстрагента, пластификатора и пенетратора (ТУ -6-09-2434-81) [111]. Поливинилтірролидон (ПВП) — мелкокристаллический, белый, гигроскопичный порошок, растворимый вводе, глицерине, ПЭО-400, спирте этиловом. Применяется в качестве пролонгирующего и пленкообразующего вещества [84].
Коллидон BASE (Германия) - 90 : НД -42-8482-98 (высокомолекулярный).
КоллидонВА8Р (Германия)-30 : НД-42-8482-98 (среднемолекулярный).
Коллидон BASF (Германия) - 25 : НД -42-8482-98 (низкомолекулярный).
Рутин - зеленовато-желтый мелкокристаллический порок без запаха и вкуса. Практически не растворим в воде, мало растворим в кипящей воде, очень мало растворим в 95 спирте, трудно растворим в кипящем спирте, растворим в метиловом спирте и разбавленных растворах едких щелочей, нерастворим в кислотах [36].
Свинца (II) ацетата основного раствор — Свинцовый уксус. Содержит не менее 16,7 % (м / м) и не более 17,4 % (м/ м). Pb (А.м. 207,19) в виде соединения, соответствующего примерно формуле С8Ні4іоРЬз. 40 г свинца (II) ацетата ((СН3СОО)2РЬ ЗН20; М.м. 379,33 - бесцветные или белые кристаллы. ) растворяют в 90 мл воды, свободной от углерода диоксида. Доводят рН раствора до 7,5 раствором натрия гидроксида концентрированным, центрифугируют и используют прозрачный, бесцветный раствор над осадком. При хранении в хорошо закрытом контейнере раствор должен быть прозрачным.
Спирт этиловыйный — С2Н5ОН (46,07). Прозрачная бесцветная подвижная, летучая жидкость с характерным спиртовым запахом. Применяется как растворитель многих лекарственных и вспомогательных веществ,(ФС - 42-3072-94).
Трифторуксусная кислота - F3CCOOH (М.м. 114,03). Жидкость. Смешивается с ацетоном, спиртом 96 % и эфиром. Температура кипения около 72 С [20,21].
Твгт-80 — продукт оксиэтилирования моноолеата сорбитана. Маслянистая жидкость янтарного цвета, слабого характерного запаха и горького вкуса. Легко растворим в воде, образует желтоватый раствор. Растворим в спирте, этилаце-тате, метаноле, толуоле, в персиковом и кукурузном маслах. Нерастворим в минеральных маслах. Применяется в. качестве эмульгатора, смачивающего, диспергирующего и солюбилизирующего вещества в мазях, эмульсиях, суспензиях и таблетках (ТУ 6-14-938-79) [111].
Трава донника (НегЪа melilotus officinalis) — смесь цельных или частично измельченных листьев, цветков, плодов и кусочков стеблей толщиной до 3 мм и длиной до 30 см. Листья очередные, тройчатые, длинночерешковые, с обратно-яйцевидными или удлиненно-ланцетовидными листочками длиной до 3 см, шириной до 1 см с загругленной верхушкой и зубчатым краем. Под лупой (12х) на обеих поверхностях видны волосики. Прилистники ланцетовидные или шиловидные почти всегда цельнокрайние, редко у самых нижних листьев с 1-2 зубчиками, голые. Цветки мелкие, чашечка колокольчатая, пятизубчатая; остающиеся при плодах, голая. Венчик мотыльковый, длиной 5-7 мм, ниже сросшиеся лепестки (лодочка) короче боковых лепестков (крылья), которые почти равны.верхнему лепестку (флагу). Тычинок 10, из них 9 срослись, пестик 1. Иногда встречаются незрелые плоды. Плоды мелкие, овальные односеменные бобы с заостренным носиком длиной от 3 до 5 мм с поперечно-морщинистой и неравномерно ячеистой поверхностью. Под лупой (24х) видны редкие.волоски. Цвет стеблей, листьев, плодов - зеленый, цветков - желтый. Запах ароматный (кума-риновый). Вкус водного извлечения солоновато-горький [146].
Обоснование выбора растительных объектов для создания фитокомпозиции
Количественное определение суммьь флавоноидов в пересчете на рутин проводили методом дифференциальной спектрофотометрии по реакции ком-плексообразования с алюминия хлоридом в кислой среде. Использование этого метода позволяет определить сумму флавоноидов в присутствии полифенольных соединений, не образующих комплекса с алюминия? хлоридом в кислой среде, что является принципиальным для анализа многокомпонентных фитопрепаратов, [85].
Сумму кумаринов в пересчете на кумарин проводили методом, прямой спектрофотометрии, основанной на способности кумаринов к поглощению УФ-области спектра. Из групповых методов анализа кумаринов УФ-спектрофотометрический метод является наиболее перспективным,- так как позволяет проводить компонентный анализ на основе различий спекторов поглощения, не требует предварительного разделения и относительно прост в аппаратурном оформлении [81]1.
Методики проведения количественного определения-описаны в соответствующем пункте главы 2. Результаты» проведенных исследований представлены в таблицах 6 и 7.
Основная стадия получения препаратов из лекарственных растений - экстракция биологически активных веществ из сырья. При экстрагировании любого вида сырья необходимо подобрать оптимальный экстрагент, а также изучить влияние различных факторов на кинетику процесса экстракции. Экстрагент, действуя как активный компонент системы, влияет на скорость, полноту и качество экстракции [171].В качестве экстрагентов нами рассматривались спирто-водные смеси различных концентраций. Критериями выбора концентрации,экстрагента были количественное определение кумаринов и флавоноидов. Результаты исследований приведены на рисунке 1
Как видно из данных рисунка 1, спирт этиловый 70 %-ной концентрации в наибольшей степени извлекает из фитокомпозиций сумму кумаринов (0,141%) и сумму флавоноидов (0,081%), на основании чего он выбран нами в качестве эктсрагента.
Исследования по выбору оптимального соотношения растительных объектов в сборе
На следующем.этапе наших исследований экспериментально определено оптимальное соотношение растительных компонентов для проведения их совместного экстрагирования. Фитокомпоненты специфического действия (донника лекарственного трава, зверобоя продырявленного трава, ромашки аптечной цветки) начинали исследовать с равных соотношений, постепенно увеличивая их объемные части.
Сопутствующие растительные объекты (тысячелистник обыкновенный, полынь горькая, душица.обыкновенная), дублирующие по действию основные компоненты фитокомпозиций, добавляли во все исследуемые составы,в соотношении 1:1:1. Исследуемые составы фитокомпозиций получали мацерацией в течение 24 часов в соотношении сырье - экстрагент 1:5. В качестве экстрагента использовали 70 %-ный спирт этиловый. Изучаемые модельные составы фито-компзиции представлены в таблице 8.
Критериями, выбора оптимального соотношения растительных объектов фитокомпозиций было определение количества действующих веществ, а также предварительные исследования специфической активности исследуемых композиций [149, 162].
. При дальнейшем увеличении объемных частей растительного сырья, значительного увеличения выхода действующих веществ не наблюдается, на основании чего составы № 15, 16, 17 и 18 по данному показателю были выбраны для дальнейших исследований, как наиболее оптимальные.
В результате проведенного количественного определения сумы кумари-нов установлено, что в фитокомпозициях № 15, 16, 17, 18 их содержание практически одинаковое. В связи, с чем данные составы исследовались на проявление специфической активности в отношении патогенных штаммов Candida albicans и Trichophyton rubrum. Результаты исследований представлены в таблице 9.
