Введение к работе
Актуальность темы. Развитие эпизоотического процесса при туберкулезе у животных в определенной степени связано с эпидемическим процессом у человека и наоборот, так как не вакцинированные животные, не обладая достаточным иммунитетом, будут заражаться и создавать резервуар возбудителя (Биргер М.О. 1982; Донченко А.С. 1997; Ридер Г.Л. 2001).
Наличие более 50 видов микобактерий, сложность строения, резкое повышение устойчивости к средствам химико- и антибиотикотерапии представляют серьезную медико-ветеринарную и социальную проблему (Беляков В.Д. 1998; Данилевская Н.В. 2005; Коротяев А.И. 1998).
Использование вакцины БЦЖ, туберкулезного аллергена (туберкулина токсино-аллергена), адьюванта Фрейнда экспериментальных ДНК - вакцин, анатоксинов и антибиотикотерапия не решили проблему эффективности профилактических, диагностических и лечебных мероприятий в борьбе с туберкулезом (Бектемиров Т.А. 2007; Леви Д.Т. 1999).
Актуальными проблемами остаются совершенствование средств и способов аллергодиагностики и специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота, повышения эффективности и снижения токсичности антибиотиков (Никитин А.В. 2009; Сорокин Г.В. 2008; Федоров Ю.Н. 2005).
Вышеизложенное определило выбор темы, цель и задачи исследований.
Цель работы: Целью работы явилось усовершенствование синтетической питательной среды для выращивания свежевыделенных микобактерий туберкулеза бычьего вида для получения нативного туберкулина и токсино-аллергенов, изыскание биологической модели аллергии и повышения эффективности туберкулезного анатоксина и канамицина.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи исследования:
1. Усовершенствование жидкой и плотной синтетической питательной среды для выращивания, выделения микобактерий туберкулеза и получение токсино-аллергенов;
2. Создание способа безопасной биологической модели аллергии туберкулёза, путём сенсибилизации морских свинок и сельскохозяйственных животных убитыми микобактериями туберкулёза, для изучения процесса детоксикации и инактивации токсина аллергена и проявление аллергических реакций;
3. Усовершенствование средств и способа детоксикации и инактивации туберкулезных токсино-аллергенов и модификации канамицина;
4. Изучение протективных, иммуногенных свойств полученного туберкулезного анатоксина, а также лечебной и бактерицидной эффективности модифицированного канамицина.
Научная новизна. Детоксикация, полимеризация и инактивация туберкулезных молекулярных токсино-аллергенов позволило получить анатоксин, обладающий протективными и иммуногенными свойствами. Установлено, что иммунизация кроликов туберкулезным анатоксином вызывает образование в сыворотке крови аллергеннейтрализующие и преципитирующие антитела, которые могут быть использованы в качестве новых диагностических тестов.
Модификация канамицина по способу получения туберкулезного анатоксина повысило бактерицидную активность и лечебную эффективность препарата в отношении канамициноустойчивых микобактерий туберкулеза бычьего вида при утрате токсичности.
Полученные результаты при детоксикации и инактивации туберкулезных токсино-аллергенов, модификация канамицина по принципу получения анатоксинов, выявление в сыворотке крови кроликов иммунизированных туберкулезным анатоксином преципитирующих и аллергеннейтрализующих антител, получение биологической модели аллергии к туберкулину являются приоритетными.
Теоретическая и практическая значимость работы. Иммуногенные протективные свойства туберкулезного анатоксина могут составить основу специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота.
Разработанный и апробированный способ сенсибилизации морских свинок и сельскохозяйственных животных суспензией из автоклавированных микобактерий туберкулеза позволяет использование в качестве безопасной биологической модели аллергии для изучения аллергической реакции, динамики детоксикации и инактивации туберкулезных токсино-аллергенов при изготовлении туберкулезного анатоксина.
Установленное образование у вакцинированных кроликов туберкулезным анатоксином преципитирующих и аллергеннейтрализующих антител создают возможность использование новых диагностических проб при диагностике туберкулеза у животных.
На защиту выносятся следующие основные положения:
1. Усовершенствование жидкой и плотной с агаром синтетической среды для выращивания и выделения микобактерий туберкулеза.
2. Сравнительная оценка разных методов деструкции микобактерий туберкулеза для получения растворимых токсино-аллергенов.
3. Результаты сенсибилизации морских свинок и температурного воздействия на проявление реакции кожи на токсино-аллергены.
4. Результаты редуцирующего и инактивирующего действия формальдегида на туберкулезные токсино-аллергены и получение анатоксина.
5. Результаты усовершенствования метода получения туберкулезного анатоксина.
6. Повышение эффективности модифицированного канамицина к микобактериям туберкулеза.
7. Результаты определения бактерицидной и лечебной эффективности канамицина, модифицированного детоксикацией и полимеризацией.
Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы изложены и одобрены на всероссийских научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Курской государственной сельскохозяйственной академии имени И.И. Иванова и Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.
По теме работы опубликовано восемь научных статей в т.ч. три в журналах рекомендованных ВАК РФ. Получен один патент РФ на изобретение и одно положительное решение о выдачи патента на изобретение.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах компьютерного текста и включает общую характеристику работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований и их обсуждение, выводы и практические предложения. Работа иллюстрирована 10 рисунками, 5 фото и 11 таблицами. Список литературы включает в себя 196 источников, в том числе 71 иностранных авторов.
