Введение к работе
1.1 Актуальность темы. Технологии лабораторной диагностики регулярно пополняются новыми методиками, позволяющими выявлять на ранней стадии и в короткие сроки многие заболевания. В современной ветеринарной науке и практике при исследовании неспецифических факторов иммунитета ограничиваются, как правило, изучением сыворотки крови. Между тем, внимание ученых в последнее время привлекают, в качестве альтернативы, возможности использования слюны для экспресс-диагностики различных патологий (Денисов А.Б. и др., 2006 и др.), в частности ее иммунологические, биохимические, физические и другие свойства (Барер Г.М. и др., 2003; Bucki R. et al., 2004; Busamia B. et al., 2010).
Тем не менее, большинство известных в медицине методик получения слюны не нашли широкого применения в ветеринарной практике. Кроме того, изучение слюны животных осуществляется в значительно меньших объемах, причем зарубежными исследователями (Larmas M., Scheinin A., 1971; Stevens C., Hume I., 1995 и др.). Бактерицидные свойства слюны, несомненно, будут определяться состоянием оральной микрофлоры (качественный и количественный состав). При этом необходимым условием правильной оценки состояния полости рта и выявляемых в ней изменений является четкое представление о "норме".
Неспецифический иммунитет слюны обеспечивается лизоцимом, комплементом, пропердином, различными гликопротеинами, катионными антимикробными пептидами и т.д. (Мартынова В.А., Голосова Т.В., 1989; Smith D., Taubman M., 1992; Ahmad M. et al., 2004 и др.), исследования которых в данном аспекте немногочислены. Используемые в ветеринарии методики их определения изначально разработаны применительно к сыворотке крови человека, поэтому большинство вопросов реализации этого направления относительно слюны животных на сегодня не решены.
Большая часть исследований бактерицидной активности (БА) сыворотки крови проводится с использованием тест-культуры E. сoli (Красильников А.П., Романовская Т.Р., 1999; Crokaert F. et al., 1988 и др.), несмотря на констатацию зависимости ее величины от вида, а также концентрации, фазы роста тест-культуры и длительности инкубирования проб (Максимлюк К.Н., Телишевская Л.Я., 1995; Саруханов В.Я., Исамов Н.Н., 2001; Малев А.А., 2009; Benge G., 1988; Igumbor E., Osayande D., 2000). Влияние же перечисленных факторов на величину бактерицидной активности слюны животных на сегодня вообще не оценено.
Изучение у животных различных видов таких неспецифических факторов как лизоцим, комплемент, пропердин и др. является важным и актуальным в раскрытии механизмов естественной резистентности и иммунитета в целом. Слюна в качестве объекта этих исследований расширяет диагностические, превентивные и терапевтические возможности врачей.
1.2 Цель и задачи исследований. Целью работы являлось изучение методологических вопросов оценки неспецифических иммунологических показателей слюны у жвачных животных для повышения информативности путем минимизации влияния на них аналитических и преаналитических процедур.
В соответствии с указанной целью решались следующие задачи:
- сравнить эффекты растворов цитрата натрия (2 %), пилокарпина гидрохлорида (1 %) и прозерина (0,05 %) на слюноотделение жвачных животных;
- изучить качественный и количественный состав микрофлоры полости рта коров и овец;
- определить зависимость величины бактерицидной активности слюны от методических факторов (вида и концентрации тест-культуры, времени инкубирования проб, преаналитических процедур, сезона года);
- исследовать факторы неспецифического иммунитета слюны и сыворотки крови коров и овец в сравнительно-видовом аспекте;
- установить степень корреляции бактерицидной активности слюны жвачных с основными факторами неспецифического иммунитета (лизоцимом, комплементом и пропердином) и биохимическими показателями.
1.3 Научная новизна работы. Впервые показана возможность использования M. lysodeikticus в качестве единой тест-культуры при параллельной оценке бактерицидной и лизоцимной активности слюны. Адаптирована применительно к слюне жвачных методика Л.С. Резниковой (1967) по определению комплементарной активности сыворотки крови. Выявлено влияние преаналитических процедур на величины бактерицидной и комплементарной активности слюны жвачных. Установлена степень корреляция бактерицидной активности слюны жвачных с основными факторами неспецифического иммунитета (лизоцимом, комплементом, пропердином) и биохимическими показателями. Определена скорость слюноотделения жвачных животных при воздействии фармакологических препаратов (цитрата натрия, пилокарпина гидрохлорида и прозерина).
1.4 Практическая значимость работы. Для оценки неспецифической иммунологической резистентности организма предлагается новый объект исследования - слюна.
Показана зависимость величины бактерицидной, комплементарной и лизоцимной активности, содержания пропердина слюны жвачных от видовых, сезонных и гендерных характеристик. Обоснована возможность использования M. lysodeikticus для унификации методов параллельной оценки бактерицидной и лизоцимной активности. Выявлено влияние аналитических процедур (вида и концентрации тест-культуры микроба, длительности инкубации проб, предварительного центрифугирования и фильтрования) на величину бактерицидной активности слюны жвачных. Обнаружена связь факторов неспецифического иммунитета слюны с микробным пейзажем ротовой полости. Подготовлено методическое указание «Определение комплементарной активности слюны жвачных животных модифицированной методикой Л.С. Резниковой», утвержденное ректором ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», профессором Г.Ф. Кабировым (ноябрь, 2012 г.).
1.5 Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням «Инфекционные болезни» (Москва, 2011) и научно-практических конференциях: «Научное обеспечение инновационного развития ветеринарной медицины и животноводства» (Казань, 2011); «Актуальные проблемы научного и кадрового обеспечения инновационного развития АПК» (Казань, 2012); «Научно-техническое творчество молодежи – путь к обществу, основанному на знаниях» (Москва, 2012); «Научное обеспечение устойчивого развития отраслей животноводства Российской Федерации» (Новочеркасск, 2012).
1.6 Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 5 – в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
1.7 Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Видовые, сезонные и гендерные различия в бактерицидной, лизоцимной, комплементарной активности и содержании пропердина в слюне жвачных. Модификация применительно к слюне жвачных методики Л.С. Резниковой (1967) по определению комплементарной активности сыворотки крови.
2. Зависимость величины бактерицидной активности слюны от вида используемой тест-культуры, ее концентрации, длительности инкубации проб, преаналитических процедур, а также от сезона года.
3. Степень корреляции бактерицидной активности слюны исследуемых животных с основными факторами неспецифического иммунитета и биохимическими показателями.
1.8 Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 165 страницах компьютерного текста, состоит из Введения, разделов «Обзор литературы», «Материалы и методы исследований», «Результаты собственных исследований и их обсуждение», а также Выводов, Практических предложений и Списка литературы. Работа содержит 24 таблицы, проиллюстрирована 28 рисунками. Список использованной литературы включает 310 библиографических источников, в том числе 217 на иностранном языке и 8 ссылок на интернет-сайт.
