Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Старение и канцерогенез 10
1.2. Биомаркеры старения 20
1.3. Геропротекторы 22
1.4. Эпифиз, старение и рак 30
1.5. Роль мелатонина в регуляции старения и возрастной патологии 34
1.6. Пептидные биорегуляторы 40
2. Материалы и методы 55
2.1. Животные и условия их содержания 55
2.2. Препараты . 56
2.3. Опухолевые штаммы 56
2.4. Методика изучения влияния эпиталона, вилона и мелатонина на показатели продолжительности жизни и возникновение спонтанных опухолей мышей 56
2.4.1.Схема эксперимента 56
2.4.2:Методика оценки двигательной активности мышей в тесте «открытое поле» 57
2.4.3. Методика изучения мышечной силы и физической утомляемости мышей 58
2.4.4. Исследование эстральной функции у самок мышей 59
2.4.5. Измерение температуры тела мышей 59
2.4.6. Патоморфологическое исследование 59
2.5. Изучение влияния синтетических пептидов эпифиза и тимуса и мелатонина на изменение порога чувствительности гипоталамо гипофизарной системы к гомеостатическому действию эстрогенов з
2.6. Изучение влияния мелатонина и синтетических пептидов эпифиза и тимуса на интенсивность свободнорадикальных процессов 61
2.6.1. Схема опыта 61
2.6.2. Определение флюоресцирующих продуктов ПОЛ (оснований Шиффа) 62
2.6.3. Определение содержания конъюгированных диенов 63
2.6.4.Определение активности СОД 63
2.6.5.Определение уровня перекиснои хемилюминесценции, активированной люминолом 65
2.6.6. Хемилюминометрическое определение общей антиокислительной активности 66
2.7. Методика изучения действия пептидных препаратов на рост перевиваемых опухолей у мышей и крыс 67
2.7.1. Методика опытов по изучению влияния препаратов на рост гепатомы-у крыс 67
2.7.2. Методика опытов по изучению влияния препаратов на рост и метастазирование меланомы В16 у мышей 68
2.7.3. Методика опытов по изучению влияния препаратов на рост лейкоза Р388 у мышей 68
2.7.4. Методика опытов по изучению влияния препаратов на рост опухоли
АКАТОЛ у мышей 69
2.8.Статистическая обработка результатов опытов 69
3.Результаты исследования 70
3.1. Влияние эпиталона, вилона и мелатонина на показатели биологического возраста и возникновение спонтанных опухолей у самок мышей линии СВА
3.2. Влияние синтетических пептидов эпифиза и тимуса и мелатонина на изменение порога чувствительности гипоталамо-гипофизарной системы к гомеостатическому действию эстрогенов 88
3.3. Влияние синтетических пептидов эпифиза и тимуса и мелатонина на интенсивность свободнорадикальных процессов 93
3.4. Влияние синтетических пептидов эпифиза и тимуса и мелатонина на рост перевиваемых опухолей 98
3.4.1.. Влияние на рост гепатомы-27 у крыс 98
3.4.2. Влияния на рост и метастазирование меланомы В16 у мышей 106
3.4.3. Влияние на рост лейкоза РЗ88 у мышей 109
3.4.4. Влияние нарост опухоли АКАТОЛ у мышей 115
4.Обсуждение результатов исследования 121
5.Выводы 140
6.Список литературы 1
- Роль мелатонина в регуляции старения и возрастной патологии
- Методика изучения влияния эпиталона, вилона и мелатонина на показатели продолжительности жизни и возникновение спонтанных опухолей мышей
- Методика опытов по изучению влияния препаратов на рост гепатомы-у крыс
- Влияние синтетических пептидов эпифиза и тимуса и мелатонина на интенсивность свободнорадикальных процессов
Роль мелатонина в регуляции старения и возрастной патологии
Геронтология - наука, изучающая феномен старения живых существ, в том числе человека. Сформировавшись, как научное направление в начале XX столетия, в своем развитии геронтология претерпела несколько стадий. Если в начале века имеются описания клинических наблюдений и анализа случаев долгожительства в живой природе, роли образа жизни в этом процессе и первые попытки увеличения продолжительности жизни, то во второй половине столетия широко изучаются причины и механизмы старения с использованием различных экспериментальных моделей (Анисимов, Соловьев, 1999; Анисисмов, 1999). Современная геронтология является междисциплинарной наукой, включающей в себя ряд дисциплин, таких как биология старения, гериатрия, геронтопсихология и социальная геронтология.
Задачей биологии старения является выяснение первичных механизмов старения организмов и популяций, а также факторов, определяющих продолжительность жизни. Изучение биологии старения включает в себя экспериментальные исследования на животных и клинические исследования людей в различные периоды жизни.
В настоящее время выдвинуты различные предположения о механизмах старения (Ноздрачев и др., 2001). В том числе широко изучается роль генетических факторов, соматических мутаций и репарации ДНК, а также апоптоза в этом процессе (Bohr, Anson, 1995; Morley, 1995; Finch, Tanzi, 1997; Анисимов, Соловьев, 1999; Хансон, 1999). Исследуется также роль эпифиза в механизмах старения (Anisimov, Reiter, 1990; Pierpaoli, 1991). Одной из наиболее плодотворно развивающихся в последние годы теорий старения является свободнорадикальная теория, объясняющая не только механизм старения, но и широкий круг связанных с ним патологических процессов (сердечно-сосудистые заболевания, возрастные иммунодепрессии, рак и др.) Согласно этой теории (Harman, 1956,1994; Ames et al., 1993) свободные радикалы, продуцируемые главным образом в митохондриях повреждают клеточные макромолекулы (ДНК, белки, липиды). Предполагается, что активные формы кислорода вызывают повреждение мембран, коллагена, ДНК, хроматина и структурных белков, нарушая основные функции органов и систем (Пескин, 1997; Cerda, Weitzman, 1997).
Ранее было показано, что видовая продолжительность жизни прямо коррелирует с активностью супероксиддисмутазы (СОД) и ряда антиоксидантов в сыворотке крови (Cutler, 1991). Опыты на D. melanogaster показали, что у долгоживущих линий мух экспрессия СОД, каталазы, глутатионредуктазы и ксантиндегидрогеназы была достоверно большей, чем у короткоживущих (Arkind, Force, 1996).
Известно, что с возрастом развивается ряд патологических процессов, связанных с дефектами иммунной системы, таких как злокачественные новообразования, болезнь Альцгеймера и др. Таким образом, предполагается, что старение иммунной системы может ограничивать продолжительность жизни (Walford, 1969). Тем не менее, несмотря на большое количество накопленных данных о возрастном истощении иммуной системы, их недостаточно для объяснения всех проявлений старения ( Lipschitz, 1987; Makinodan, Kay, 1980; Miller, 1991). Поскольку в иммунные реакции вовлекается большое количество клеточных и гуморальных компонентов, а также множество модулирующих факторов, описать их возрастные изменения достаточно сложно. В последние годы установлено, что иммуномодулирущие препараты могут восстанавливать компетентность иммунных клеток в старом организме и увеличивать продолжительность жизни животных (Морозов, Хавинсон, 1996; 1997).
Во многих исследованиях показано, что ограниченная по калорийности диета увеличивает продолжительность жизни у позвоночных и беспозвоночных животных. Эта модель стала одной из ведущих в изучении фундаментальных механизмов старения и увеличения продолжительности жизни (McCay, et al., 1935; Weindrach, Watford, 1988; Yu, 1994). Предполагается, что в механизмах увеличения продолжительности жизни при ограничении калорийности питания основную роль играют такие факторы, как замедление роста, уменьшение содержания жира в теле, замедление нейроэндокринных или иммунологических возрастных сдвигов, увеличение репарации ДНК, изменение скорости биосинтеза белков и экспрессии генов, снижение температуры тела и основного обмена, ослабление окислительного стресса (Sohal, Weindruch, 1996; Wemdruch, Watford, 1988; Yu, 1994). Важно отметить, что ограниченная по калорийности диета стимулирует апоптоз, который элиминирует пронеопластические клетки в тканях организма (Muskhelishvili, Turturro et al., 1996), замедляет накопление в них мутаций (Derapsey et al., 1993) и развитие возрастной патологии, включая рак (Weindrach, Watford, 1988).
Наиболее яркой и глубоко разработанной концепцией в современной геронтологии является элевационная теория старения, выдвинутая В.М. Дильманом в конце 50-х годов. Ключевое значение в развитии возрастной паталогии у высших организмов придается возрастному повышению порога чувствительности гипоталамуса к регуляторным гомеостатическим сигналам (Дильман, 1958; 1986; 1987).
В серии экспериментальных исследований и клинических наблюдений было установлено, что именно этот процесс приводит к возрастному включению и выключению функции репродуктивной системы в женском организме, к возрастным изменениям в гипоталамо-гипофизарнонадпочечниковой системе, обеспечивающей тонический уровень глюкокортикоидных гормонов в крови, циркадный ритм и повышение секреции при стрессе, и, как следствие, развитию состояния, обозначенному, как "гиперадаптоз". Следствием аналогичных возрастных изменений в системе метаболического гомеостата, регулирующего аппетит и энергетическое обеспечение функций организма, является нарастание с возрастом содержания жира в теле, снижение чувствительности тканей к инсулину (предиабет) и развитие атеросклероза.
Методика изучения влияния эпиталона, вилона и мелатонина на показатели продолжительности жизни и возникновение спонтанных опухолей мышей
В опытах было использовано 415 самок мышей линий СВА, DBA/2, С57В1, Balb/c, полученных из питомника «Рапполово» РАМН и 221 белая беспородная самка крысы разведения вивария Центрального рентгено-радиологического института. Животные содержались по 10 экземпляров в полипропиленовых клетках при режиме освещения 12:12 часов и температуре 22 ± 2 С. Они получали стандартный лабораторный корм и водопроводную воду без ограничений. 2.2. Препараты
При проведении эксперимента были использованы следующие препараты: -физиологический раствор (Phoenix pharmaceuticals Ltd, Англия); -эпиталон (Ala-Glu-Asp-Glu) и вилон (Lys-Glu), (в ампулах по 10 мкг в 1 мл и по 1 мкг в 1 мл раствора); пептид печени (ПП) (в ампулах по 1 мкг в 1 мл раствора), выпускаемые Санкт-Петербургским институтом биорегуляции и геронтологии РАМН; -мелатонин (Sigma, США); -диэтилстильбэстрол-пропионат (ДЭСП), выпускаемый Ростовским химзаводом им. Октябрьской революции (в ампулах 0,1% масляного раствора по 1 мл);
В опытах на крысах использовался штамм гепатомы-27. Штамм был получен из Российского Онкологического научного центра РАМН (Москва). В опытах на мышах использовали штаммы меланомы В16, лейкоза Р388 и опухоли толстой кишки АКАТОЛ. Часть штаммов была получена из РОНЦ РАМН (Москва), остальные поддерживались в НИИ онкологии им. проф. Н.Н.Петрова. Подробная характеристика штаммов описана в литературе (Софьина и др., 1980).
200 самок мышей линии СВА в возрасте 6 месяцев рандомизированно разделили на четыре группы. 50 животным подкожно вводили эпиталон по 0,1 мкг (5 дней подряд раз в месяц). 50 животным вводили по 0,1 мкг вилона, 50 мышам - физиологический раствор (контрольная группа) по той же схеме. 50 мышей наряду с инъекциями физиологического раствора получали в ночные часы (с 18.00 до 9.00 ч.) мелатонин с питьевой водой (20 мг/л) по той же схеме.
Всех мышей ежемесячно взвешивали. В каждой группе находили среднее значение массы животных и ошибки среднего, наклон линейной регрессии нарастания массы с возрастом и его среднее значение по группам. Кроме того, мышей делили на классы: худые (массой до 28 г), средние (от 29 до 33 г) и толстые (больше 34 г). Определяли количество (в %) толстых, средних и худых мышей в каждой группе на 6-й, 12-й и 15-й месяц опыта.
Один раз в три месяца, в те же сроки, что и взвешивание, производили определение количества потребляемого корма из расчета масса съеденного корма в граммах на одну мышь.
Раз в три месяца у животных в течение 2 недель ежедневно цитологически исследовали содержимое влагалищных мазков для оценки астральной функции. Каждые 3 месяца исследовали двигательную активность мышей, их мышечную силу и утомляемость, а также измеряли температуру тела. За животными наблюдали до их естественной гибели. Регистрировали день гибели животных и рассчитывали среднюю продолжительность жизни мышей, возраст 90% смертности, максимальную продолжительность жизни, скорость старения популяции (а в уравнении Гомпертца: R= R0 exp(at), где Ro - во время to), а также время удвоения смертности (MRDT) (Гаврилов, Гаврилова, 1991).
Методика оценки двигательной активности мышей в тесте «открытое поле» Животных каждой экспериментальной группы по одному помещали в пластиковую камеру размером 30x21x9 см, дно которой было расчерчено на квадраты 5x5 см: 5 квадратов по длине и 4 - по ширине. В течение 58 минут наблюдали за перемещениями мыши в «открытом поле» и фиксировали следующие параметры поведения: 1) количество пересеченных квадратов поля (квадрат считается пересеченным, если животное переступило его границу хотя бы двумя лапами), 2) число вертикальных стоек (животное поднимается на задние лапы), 3) длительность реакции груминга морды, тела и гениталий. Для исключения ориентировочной реакции, связанной с запахами, после каждого животного пол камеры протирали влажной тряпкой. Тестирование проводили в возрасте 6, 9, 12 и 18 месяцев в дневное время в интервале с 10 до 17 часов.
Измерение мышечной силы и утомляемости проводилось через 1 год после начала эксперимента. Мышей подвешивали на струну, натянутую на высоте 75-80 см, так, чтобы они цеплялись передними лапами и висели на веревке до момента утомления и падения. Время, через которое мыши переставали цепляться за струну и падали, фиксировали как "время висения". Через 20 минут мышей подвешивали второй раз и снова измеряли время висения. Время выражали в секундах и находили среднее значение из двух показателей, высчитывали сумму, а также разницу между временем первого и второго висения, что могло служить показателем восстановления сил. Кроме того, учитывая вес подвешенных животных, вычисляли отношение массы мыши ко времени ее первого и второго висения и времени висения к массе животного. Из этих показателей также находили среднее значение, сумму и разницу. В группах подсчитывали те же показатели, но уже по классам в зависимости от веса животных. 2.4.4. Исследование эстральной функции у самок мышей
Исследования эстральной функции у животных обеих возрастных групп производили каждые 3 .месяца, начиная с возраста 6 мес. Оценивались следующие параметры эстральной функции: длительность эстрального цикла, соотношение фаз эстрального цикла, рассчитывалось относительное число коротких (менее 4 дней) и длинных (более 4 дней) эстральных циклов, относительное число животных с регулярными циклами, с персистирующим эструсом и анэструсом.
Всех павших или убитых в состоянии крайней слабости животных вскрывали. На аутопсии осматривали кожу и все внутренние органы. При этом выявленные новообразования классифицировали согласно рекомендациям Международного агентства по изучению рака (МАИР) как «фатальные» (то есть, послужившие непосредственной причиной гибели животных) или как «случайные» (в случаях, когда животное погибло от других причин) (Gart et al., 1986). Все опухоли, а также ткани и органы, подозрительные на наличие опухолевого роста, вырезали и фиксировали в 10% нейтральном формалине. После рутинной гистологической обработки ткани заливали в парафин. Гистологические срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и изучали микроскопически. Использовали гистологическую классификацию опухолей, предложенную МАИР (Turusov, Mohr, 1990).
Методика опытов по изучению влияния препаратов на рост гепатомы-у крыс
Влияние мелатонина, эпиталона и вилона на чувствительность гипоталамуса к ингибирующему действию эстрогенов оценивалась путем сравнения результатов опытов с совместным введением этих препаратов с ДЭСП и введением только ДЭСП. Мелатонин (см. результаты в группах 7 и 8) и вил он (см. результаты в группах 5 и 6) в обеих сериях опытов не влияли на величину КГЯ у животных, получавших ДЭСП.
Самая низкая величина КГЯ в первой серии опытов отмечена при совместном введении эпиталона и ДЭСП (группа 4, таблица 11) Эта величина была статистически достоверно ниже, чем при введении одного эпиталона (группа 3) (р 0,01), а также несколько уменьшена по сравнению с показателями для животных, получавших ФР и ДЭСП (группа 2, таблица 11). Последнее свидетельствует о том, что эпиталон обладал способностью снижать порог чувствительности гипоталамуса к тормозящему действию ДЭСП. У старых крыс (таблица 12; рис.8) подобный эффект эпиталона обнаружить не удалось.
Результаты исследования представлены в таблице 13 и на рис. 9, 10 и 11. Было установлено, что вилон не оказывает какого-либо воздействия на интенсивность свободнорадикальных процессов ни в одной исследуемой ткани. В то же время, эпиталон и мелатонин обладали антиоксидантной активностью, что проявлялось в статистически достоверном изменении ряда показателей свободно-радикальных процессов. Под влиянием эпиталона на 14% снизилось содержание диеновых конъюгатов в печени (р 0,01) по сравнению с контролем. В ткани головного мозга на 29% снизилось количество оснований Шиффа (р 0,01). Общая антиоксидантная активность у ТаблицаІЗ. Показатели свободнорадикальных процессов у мышей, подвергавшихся воздействию пептидных биорегуляторов или мелатонина
ОШ - основания Шиффа мышей, получавших эпиталон, на 26% превышала контрольные показатели в сыворотке крови (р 0,001). Интенсивность люминолзависимой хемилюминесценции под влиянием эпиталона снизилась в сыворотке крови на 37% (р 0,05) и на 23% - в ткани головного мозга (р 0,05). Мелатонин снижал содержание диеновых конъюгатов в сыворотке крови, а также в тканях головного мозга и печени ( на 43% , 16% и 10%, соответственно, р 0,05), и оснований Шиффа в ткани головного мозга и печени (на 29% и 16% соответственно, р 0,05), по сравнению с контролем. Усиление общей антиоксидантной активности под влиянием мелатонина отмечено только в сыворотке крови (на 33%, р 0,001). Мелатонин также снизил интенсивность люминолзависимой хемилюминесценции в сыворотке крови на 44% (р 0,05). Ни в одной ткани не было обнаружено изменения активности супероксиддисмутазы под влиянием исследуемых препаратов по сравнению с контролем.
Трансплантация опухолей животным первой группы (негативный контроль), получавшим ФР, удалась успешно во всех случаях. Рост опухоли регистрировали с 7-го дня. Отмечено рассасывание опухоли у одного животного на 21-й день после перевивки. У части животных на поздних сроках опыта в результате агрессивного роста новообразования и инвазии кожи наблюдалось изъязвление кожи в месте трансплантации с последующей некротизацией наружной поверхности опухоли (рис.13).
Статистически достоверное влияние эпиталона на рост гепатомы (если судить по средним значениям размеров опухолей на протяжении всего опыта) установить не удалось. Однако обращает на себя внимание, что начиная с 30-х суток после перевивки распределение значений объемов опухолей во второй группе крыс перестает подчиняться нормальному закону (см. рис. 14. и 15.). Так, например, на 32-е сутки животные, получавшие эпиталон, отчетливо разделяются на две подгруппы: у 5 крыс (50%) средний объем опухоли составлял 0,14 + 0,014 см3, у других 5 животных - 18,0 + 3,453 см3 при среднем значении по группе 9,47 + 3,192 см3 (Рис.14.). На 50-й день в живых в этой группе осталось 9 крыс, которых тоже можно было разделить на две подгруппы. В первой подгруппе у трех из пяти животных замечено полное рассасывание опухолей и у двух объем опухолей составлял соответственно 0,006 и 0,158 см3. Средний объем опухолей в этой подгруппе (с учетом «нуллеров», у которых опухоли рассосались) составил 0,033 + 0,004 см3. В то же время среди четырех оставшихся животных средний размер опухоли составлял 62,77 + 8,034 см3 (рис.15.). В целом среднее значение объема гепатомы по всей второй группе составило 27,914 + 10,243 см3. Таким образом, эпиталон проявляет 50% селективность, хотя в половине случаев дает практически полное излечение вплоть до рассасывания уже образовавшихся опухолей.
Вилон при введении его животным с перевитой гепатомой на 16-й день после начала опыта оказывал достоверный ингибирующий эффект на рост опухоли - объем опухоли в этом случае был меньше контрольного на 60% (см. рис.12 и таблицу 14.) (р 0,05). На 18-й и 21-й день эффект сохраняется, но уже на 23-й день снижение динамики роста опухоли становится недостоверным, и в дальнейшем размер опухоли у крыс, получавших вилон, не отличается от такового у контрольных животных. Таким образом, вилон дает ингибирующий эффект лишь на ранних сроках после перевивки опухоли. Необходимо отметить, что у двух крыс на 28-й и 43-й день опыта наблюдалось полное рассасывание опухоли.
Влияние синтетических пептидов эпифиза и тимуса и мелатонина на интенсивность свободнорадикальных процессов
В целом, в течение нашего эксперимента температура тела подопытных животных на различных сроках измерения оказывалась ниже, чем у контрольных мышей.
Ранее было показано, что введение мелатонина снижает температуру тела у млекопитающих и птиц. Напротив, пинеалэктомия может ее повысить, а последующее введение мелатонина восстанавливает этот эффект (Arendt, 1995). Снижение температуры тела отмечалось также у обезьян (макаки резус) на фоне ограниченной по калорийности диеты (Lane, Baer et al, 1996). Тем не менее, имеется упоминание об увеличении температуры тела на 0,5 С у самцов крыс при употреблении мелатонина с питьевой водой (Wolden-Hanson; Mitton, 2000). Данных об изменении температуры тела у животных под влиянием природных пептидов тимуса и эпифиза в литературе не имеется.
Известно, что снижение температуры тела и связанное с ним замедление метаболических процессов в организме увеличивает продолжительность жизни животных (Walford, 1974; Анисимов, Соловьев, 1999). Следовательно, можно предположить, что одним из механизмов действия исследуемых геропротекторов является снижение интенсивности обменных процессов у животных. В этой связи представлялось необходимым оценить функциональное состояние нервной системы самок мышей линии СВА, как основного регулятора обмена. В качестве маркеров были выбраны локомоторная и двигательная активность, мышечная сила и утомляемость животных.
На основании наблюдений в тесте "открытое поле" можно сделать заключение, что у контрольных мышей локомоторная активность с возрастом уменьшается. Под влиянием вилона и мелатонина локомоторная активность несколько снижалась на ранних сроках опыта по сравнению с контролем, тогда как наибольшее снижение двигательной и локомоторной активности мышей на протяжении всего опыта наблюдалось при введении эпиталона. Снотворный эффект мелатонина ранее был описан в литературе (Arendt, 1995). Было также установлено, что при внутривенном введении эпиталамина собакам отмечался седативный эффект, причем сонное состояние у животных длилось 2-3 часа (Слепушкин, Пашинский, 1982). В то же время, сообщалось об увеличении локомоторной активности у самцов крыс на 19% при употреблении мелатонина с питьевой водой (Wolden-Hanson, Mitton, 2000). В литературе не имеется данных о подобных эффектах выделенных из тимуса препаратов (тималин, тимоген).
В целом, результаты наших экспериментов подтверждают предположение о том, что эпиталон и мелатонин оказывают тормозящее влияние на активность центральной нервной системы, возможно, путем снижения уровня обменных процессов, что подтверждалось в увеличении массы тела животных при одном и том же уровне энергопотребления. В то же время, введение препаратов не оказало неблагоприятного влияния на их физическую активность животных. Более того, нами было показано, что мыши с повышенным весом (более 34 г), получавшие вилон, при подвешивании на струне висели дольше, т.е. были физически сильнее, чем в контроле. Таким образом, введение вилона снижало утомляемость мышей и увеличивало мышечную силу. Ни эпиталон, ни мелатонин таким эффектом не обладали. В литературе имеются данные об улучшении общего состояния и, в том числе, об увеличении мышечного тонуса у больных лейкопенией и у людей с признаками радиационного иммунодефицита на фоне иммунокоррекции пептидным экстрактом тимуса тималином (Морозов, Хавинсон, 1996). Возможно, тималин обладает нейростимулирующим механизмом действия. Поскольку в наших экспериментах вилон увеличивал мышечную силу мышей СВА, можно сделать предположение о сходных механизмах действия тималина и вилона.
Известно, что в ходе старения организма и связанной с ним патологии одну из ключевых ролей играет повышение порога чувствительности гипоталамо-гипофизарного комплекса, регулирующего секрецию гонадотропинов, к их гомеостатическому действию, что, по-видимому, лежит в основе механизма возрастного выключения репродуктивной функции (Дильман, 1971; 1994; Anisimov, 1987). Полученные нами в тесте с КГЯ данные позволяютпредположить, что одним из возможных механизмов действия геропротекторов является снижение порога чувствительности гипоталамуса, что приводит к нормальному функционированию эстральной функции у животных в более зрелом возрасте (Хавинсон, Морозов, 2000).
Изучение эстральной функции у самок мышей СВА показало, что длительное введение эпиталона и мелатонина замедляло старение репродуктивной системы. У этих животных не наблюдалось уменьшения с возрастом относительного числа коротких эстральных циклов или увеличения числа более длинных циклов, что отмечалось у контрольных животных. У мышей, получавших вилон, обнаружена тенденция к увеличению относительного числа более длинных циклов. По другим показателям оценки состояния эстральной функции значительных различий между контрольными и подопытными животными не выявлено.
Наши наблюдения соответствуют литературным данным о том, что в механизме действия эпиталамина и мелатонина важное значение имеет их влияние на метаболизм и гормональный баланс. Установлено, что тогда как избыток освещенности, угнетающий продукцию и секрецию мелатонина, вызывает преждевременное выключение репродуктивной функции и развитие возрастной патологии, то темнота оказывает противоположный эффект (Arendt, 1995). Обнаружено, что при назначении мелатонина с питьевой водой в ночное время крысам линии Holtzman, число животных, имевших эстральные циклы ненормальной длительности, было достоверно меньшим, чем в группах, получавших питьевую воду (Meredith et al, 1998).
