Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Геропротекторы 12
1.2. Пептидные биорегуляторы 16
1.3. Дельта-сон индуцирующий пептид 20
1.3.1. Химическая структура и характеристика 20
1.3.2. Дельта-сон индуцирующий пептид в межмедиаторных взаимодействиях 26
1.3.3. Дельта-сон индуцирующий пептид как ГАМК-ергический агент 32
1.3.4. Дельта-сон индуцирующий пептид как антистрессорный и антиоксидантный агент 36
1.3.5. Препарат на основе дельта-сон индуцирующего пептида и его эффекты в клинике 50
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 55
2.1. Препарат и пути введения 55
2.2. Животные и их содержание 56
2.3. Методика оценки двигательной активности мышей в тесте «открытое поле» 58
2.4. Методика изучения мышечной силы и физической утомляемости мышей 58
2.5. Методика приподнятого крестообразного лабиринта 59
2.6. Методика восьмилучевого радиального лабиринта 59
2.7. Патоморфологическое исследование 60
2.8. Методика определения воздействия дельтарана на процессы перекисного окисления липидов в норме и в условиях светового стресса 61
2.9. Изучение влияния дельтарана на канцерогенез легких, индуцированный уретаном 64
2.10. Изучение влияния дельтарана на канцерогенез легких, индуцированный бенз(а)пиреном 65
2.11. Статистическая обработка результатов опытов 66
ГЛАВА 3. Влияние дельтарана на биомаркеры старения и продолжительность жизни мышей 67
3.1. Влияние дельтарана на массу тела мышей 67
3.2. Влияние дельтарана на потребление корма и воды у мышей 69
3.3. Влияние дельтарана на продолжительность жизни мышей 73
ГЛАВА 4. Влияние дельтарана на показатели физической активности, мышечной силы и утомляемости, рабочую память и эмоциональный фон мышей 77
4.1. Влияние дельтарана на возрастную динамику двигательной горизонтальной и вертикальной активности и ориентировочной реакции у мышей 77
4.2. Влияние дельтарана на возрастную динамику мышечной силы и утомляемости у мышей 80
4.3. Влияние дельтарана на эмоциональный фон и стресс-устойчивость у мышей 81
4.4. Влияние дельтарана на показатели рабочей памяти у мышей 85
ГЛАВА 5. Влияние дельтарана на окислительные процессы в норме и в условиях светового стресса у мышей 88
ГЛАВА 6. Влияние дельтарана на спонтанный канцерогенез у мышей 92
ГЛАВА 7. Влияние дельтарана на индуцированный канцерогенез легких и мягких тканей у мышей 96
7.1. Влияние дельтарана на частоту, множественность и размеры опухолей легких, индуцированных уретаном у мышей 96
7.1.1. Влияние дельтарана на патоморфологию опухолей легких 100
7.2. Влияние дельтарана на канцерогенез опухолей мягких тканей, индуцированный бенз(а)пиреном у мышей 101
7.2.1. Влияние дельтарана на частоту, множественность и размеры опухолей мягких тканей 101
7.2.2. Влияние дельтарана на продолжительность жизни и выживаемость опухоленосителей 105
7.2.3. Влияние дельтарана на патоморфологию опухолей мягких тканей... 106
ГЛАВА 8. Обсуждение 108
Выводы 128
Практические рекомендации 128
Список литературы 129
- Дельта-сон индуцирующий пептид в межмедиаторных взаимодействиях
- Методика определения воздействия дельтарана на процессы перекисного окисления липидов в норме и в условиях светового стресса
- Влияние дельтарана на потребление корма и воды у мышей
- Влияние дельтарана на показатели рабочей памяти у мышей
Введение к работе
Актуальность проблемы В настоящее время происходит быстрое увеличение в популяции доли пожилых людей и рост связанной с возрастом патологии [Анисимов В.Н., 2003]. Именно поэтому поиск препаратов, обладающих способностью к замедлению процесса старения и повышению качества жизни пожилых, является одной из основных задач геронтологии и гериатрии.
В последние годы большое внимание уделялось изучению регуляторных пептидов - класса веществ, обладающих способностью к поддержанию стабильности функций организма в норме и при различных патологических процессах [Хавинсон В.Х., Анисимов В.Н., 2003]. К этому классу веществ относится и дельта-сон индуцирующий пептид (ДСИП), эндогенный нонапептид, открытый в 1976 г [Monnier М., Schoenenberger А., 1976]. ДСИП является нейропептидом [Стрекалова Т.В., 1998], участвующим в большинстве межмедиаторных взаимодействий [Михалева И.И., 2003].
Многочисленные экспериментальные исследования позволили установить, что наиболее важными физиологическими эффектами ДСИП в организме являются: регуляция процессов перекисного окисления липидов путем повышения выработки супероксиддисмутазы (СОД) и других ферментов антиокислительной защиты, стимуляция выработки тормозного медиатора - гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК), а также повышение сродства рецепторов к ней, продопаминергическое действие, антистрессорная активность, выражающаяся в снижении летальности и клинических проявлений при различных типах стресса, иммуномодулирующее и антидиабетическое действия, выраженный мембраностабилизирующий эффект, протективное действие при различных ишемических состояниях [Ульянинский Л.С. с соавт., 1992; Шандра А.А. с соавт., 1995; Сергутина А.В., Герштейн Л.М., 2000; Судаков К.В. с соавт.,2003; Умрюхин П.Е. с соавт., 2003].
Вещества с подобными эффектами часто обладают в силу своих биологических свойств геропротекторнои активностью [Анисимов В.Н., 2003]. При изучении активности геропротекторов весьма важной является оценка различных параметров старения, а также физического и эмоционального состояния, отражающих общее состояние и качество жизни.
Сложное и разностороннее взаимодействие между процессами старения и канцерогенеза диктует необходимость изучения этих процессов в совокупности [Anisimov V.N., 1987]. Известно, что вещества, обладающие геропротекторнои активностью, могут оказывать различное воздействие на канцерогенез: как усиливать, так и ослаблять его [Анисимов В.Н., 2003; Blask D.E. et al., 2004].
Действие ДСИП на спонтанный канцерогенез изучено недостаточно [Попович И.Г. с соавт., 2003], в связи с чем представляется обоснованным его исследование. Данные о влиянии ДСИП на индуцируемый канцерогенез отсутствуют.
Таким образом, изучение возможного геро- и онкопротекторного действия ДСИП с использованием моделей оценки физической силы выносливости, интеллектуально-мнестических качеств, эмоционального состояния подопытных животных, канцерогенов различного механизма действия и разной органной специфичности является весьма актуальным направлением экспериментальной геронтологии.
Цель исследования Изучить влияние дельта-сон индуцирующего пептида на продолжительность и качество жизни мышей, процессы перекисного окисления липидов, спонтанный и индуцированный канцерогенез.
Задачи исследования
1) Изучить влияние препарата пептида дельта-сна на продолжительность жизни мышей.
2) Изучить влияние препарата пептида дельта-сна на показатели локомоторной активности мышей в тесте «открытое поле» и тесте удержания на струне.
3) Изучить влияние препарата пептида дельта-сна на показатели эмоционального состояния и стресс-устойчивости мышей в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт».
4) Изучить влияние препарата пептида дельта-сна на когнитивные показатели мышей в тесте «восьмилучевой радиальный лабиринт».
5) Изучить влияние препарата пептида дельта-сна на показатели активности ферментов антиоксидантной защиты у мышей в норме и в условиях светового стресса (постоянного освещения).
6) Изучить влияние препарата пептида дельта-сна на спонтанный канцерогенез у мышей.
7) Изучить влияние препарата пептида дельта-сна на канцерогенез легких, индуцируемых уретаном у мышей.
8) Изучить влияние препарата пептида дельта-сна на канцерогенез опухолей мягких тканей, индуцируемых бенз(а)пиреном у мышей.
Научная новизна В работе впервые исследовано влияние препарата пептида дельта-сна на показатели поведения мышей в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт», «восьмилучевой радиальный лабиринт», продемонстрировано его анксиолитическое и стресс-протективное действие. Показано, что препарат пептида дельта-сна обладает геропротекторной активностью с продлением жизни последних 10% мышей на 16%. В работе доказано, что постоянное освещение даже небольшой длительности приводит к достоверным сдвигампроцессов перекисного окисления липидов в организме подопытных животных. Продемонстрировано антиоксидантное действие препарата пептида дельта-сна в условиях постоянного освещения. Показано, что препарат пептида дельта-сна оказывает достоверное замедляющее действие на развитие спонтанных опухолей у мышей и канцерогенез легких.
В работе впервые изучено и проанализировано влияние препарата пептида дельта-сна на индуцируемый уретаном и бенз(а)пиреном канцерогенез. Показано, что введение препарата пептида дельта-сна не обладает проканцерогенным действием ни в одной из использованных моделей канцерогенеза.
Научно-практическая значимость работы Полученные результаты могут служить экспериментальным обоснованием для дальнейшего изучения геро- и> онкопротекторного потенциала препарата пептида дельта-сна;, разработки научно-обоснованных рекомендаций по применению препарата, пептида дельта-сна в качестве геропротектора и с целью профилактики злокачественных новообразований.
Результаты исследования внедрены в научно-исследовательскую работу отдела канцерогенеза и онкогеронтологии НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова., Положения, выносимые на защиту
1) Введение препарата пептида дельта-сна в дозе 5 мкг/мышь увеличивает среднюю продолжительность жизни последних 10% выживших мышей.
2) Препарат пептида дельта-сна оказывает достоверное стресспротективное влияние на поведение мышей в условиях теста открытого поля, достоверное анксиолитическое и стресс-протективное действие у мышей в условиях теста «приподнятый крестообразный лабиринт».
3) Препарат пептида дельта-сна достоверным образом не изменяет когнитивные показатели мышей в тесте «восьмилучевои радиальный лабиринт».
4) Препарат пептида дельта-сна повышает активность супероксиддисмутазы в головном мозгу и общей антиокислительной активности печени в условиях постоянного освещения.
5) Препарат пептида дельта-сна оказывает достоверное замедляющее действие на время возникновения опухолей при спонтанном канцерогенезе у мышей.
6) Препарат пептида дельта-сна не оказывает проканцерогенного действия при канцерогенезе легких, индуцируемом уретаном, и при канцерогенезе мягких тканей, индуцируемом бенз(а)пиреном у мышей.
Публикации По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, из них 2 статьи в рецензируемых журналах по перечню ВАК Минобрнауки РФ. Связь с планом НИР Работа выполнялась в соответствии с научной тематикой отдела канцерогенеза и онкогеронтологии НИИ онкологии им. проф. Н.Н. Петрова.
Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 163 страницах, документирована 15 таблицами и иллюстрирована 23 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, изложения собственных результатов (5 глав), обсуждения полученных результатов, выводов и библиографического указателя, включающего 347 источников, в том числе 163 отечественных и 184 иностранных.
Апробация диссертации Результаты работы были доложены и обсуждены на всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» (СанктПетербург, 2006), VI Европейском конгрессе Международной ассоциации геронтологии и гериатрии (Санкт-Петербург, 2007), III научно-практической геронтологической конференции с международным участием «Пушковские чтения» (Санкт-Петербург, 2007), V конференции молодых ученых России «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2008), Конгрессе с международным участием «Пароксизмальный мозг. Мультидисциплинарный подход к проблеме» (Санкт-Петербург, 2008).
Дельта-сон индуцирующий пептид в межмедиаторных взаимодействиях
Одной из ключевых систем организма является серотонинергическая, тесно связанная с обменом мелатонина, взаимодействие с которой ДСИП изучено достаточно подробно [Shandra А.А. et al., 1998].
Показано, что ДСИП усиливает активность моноаминоксидазы в хвостатом и прилежащем ядрах головного мозга, увеличивает активность глутамат-дегидрогеназы в гиппокампе крыс [Доведова Е.Л., Ашмарин И.П., 1982; Сергутина А.В., Герштейн Л.М., 2000], дозозависимо ингибирует высвобождение соматостатина в гипоталамусе [Iyer K.S., McCann S.M., 1987]. При оценке действия вводимого ДСИП на систему МАО и связанную с ней агрессивность и эмоциональное состояние самцов мышей [Войтенко Н.Н.„ 2007] выявлено, что введение пептида повышало активность МАО-А, что подтверждают результаты работы Е.Л. Доведовой (1982), и кроме того, данные ее более позднего исследования [Доведова Е.Л., 1989]. Эти результаты расцениваются как признаки регуляции ДСИП развития серотонинергических нейронов ядер шва среднего мозга и их клеток-мишеней, а также дофаминовых нейронов черной субстанции мозга.
ДСИП значительно удлинял ночной подъем активности пинеальной N-ацетилтрансферазы и уровня мелатонина в 3 часа темной фазы, не имея подобного эффекта в другое время суток [Oaknin S. et al., 1986]. Получены данные, согласно которым пептид стимулирует синтез и высвобождение мелатонина, серотонина и 5-метокситриптофола, но не влияет на пинеальную циклическую AMP [Ouichou A. et al., 1992].
В работе А.А. Шандра с соавт. (1998) изучались аспекты действия ДСИПа при взаимодействии с серотонинергической системой: проводились интранигральные и интрагиппокампальные микроинъекции ДСИПа крысам в условиях пикротоксинового и каинатового киндлинга с изучением уровня усвоения триптофана нейронами. Пептид имел противосудорожный эффект на оба вида киндлинга, также было отмечено увеличение захвата триптофана, связанное с его введением.
Проводилось [Карпенко Л.Д. с соавт., 1994] исследование действия ДСРШа и серотонина на нейроны улитки. ДСИП ингибировал спонтанную активность нейронов и сокращал ответы «молчащих» клеток на деполяризацию и тактильные стимулы. Серотонин активизировал нейроны и имел обратный ДСИП эффект. Авторы предполагают, что ДСИП может непосредственно влиять на нейроны не через серотонинергическую систему, и допускают, что гиперполяризующий эффект пептида может возникать через улучшение транспорта хлора или изменения активности аденилатциклазной системы.
В работе A. Ouichou et al. (1992), эффекты пептида на секрецию», мелатонина и серотонина сравнивались с таковыми у изопротеренола. Эффект ДСИП был более быстрым и коротким, пептид потенцировал изопротеренол-индуцированное усиление секреции мелатонина. Авторы интерпретируют полученные результаты как доказательство того, что ДСИП- индуцированное усиление секреции индоламинов из пинеальных желез реализуется не через нораденергическую или опиоидную систему.
Та же группа авторов [Ouichou A., Pevet Р., 1992] сообщает, что аналогичное ДСИП действие на секрецию мелатонина и 5-метокситриптофола оказывает триптофан. Предполагается, что стимулирующий эффект ДСИП на секрецию мелатонина реализовывался за счет высвобождения триптофана при деградации пептида.
В геронтологии одним из важных биомаркеров старения является возрастное изменение средней температуры тела, которое связывается в том числе с серотонинергической системой [Анисимов В.Н., 2000]. В работе К. Tsunashima с соавт. (1994) исследовался эффект введения ДСИП на изменения температуры тела, вызванные у крыс агонистами серотонинергической системы. Гипертермия, вызванная введением больших доз 5-метоксидиметилтриптамина была нивелирована, а гипотермия, индуцированная низкими дозами того же вещества, была усилена введением ДСИП. ДСИП имел усиливающий эффект на гипотермию, вызванную 8-гидрокси-2-тетралином. Пиндолол предотвращал усиление ДСИП гипотермических эффектов 8-гидрокси-2- тетралина и апоморфина. Предполагается, что терморегулирующее действие пептида реализуется через 5-НТ1А механизм, по крайней мере, у крыс.
Влияния на электрически вызванную секрецию серотонина в срезах коры головного мозга крыс ДСИП не оказывал [Schlicker Е. et al., 1991]. Кроме того, известно, что ДСИП активирует спонтанное высвобождение норадреналина в синаптосомах мозга крысы [Ульянинский Л.С., 1992].
Чрезвычайно мало работ посвящено взаимодействию ДСИП и крайне важной для нейрофизиологии и понимания механизмов поведения и старения метэнкефалиновой системы. Интересным является сообщение A. Nakamura с соавт., (1989), в котором приводятся данные о том, что ДСИП не связывается ни с одним подтипом опиоидных рецепторов. При этом ДСИП существенно стимулировал высвобождение иммунореактивного метэнкефалина из срезов ствола мозга крысы. Это высвобождение было кальций-зависимым. Данные результаты можно интерпретировать следующим образом: ДСИП действует на опиоидные рецепторы непрямым образом через стимуляцию высвобождения метэнкефалина, реализуя таким образом свой антиноцицептивный эффект. Имеются сведения [Young Y.M. et al., 1985], что антиноцицептивное действие ДСИП не блокировалось налоксоном. Это также может указывать на заинтересованность пептида в функционировании опиоидной системы неклассическим образом, без связывания непосредственно с опиоидными рецепторами, однако информации на эту тему ввиду малого количества работ недостаточно.
Методика определения воздействия дельтарана на процессы перекисного окисления липидов в норме и в условиях светового стресса
В основе ХЛ в присутствии перекиси водорода и сульфата железа лежит каталитическое разложение перекиси ионами металлов переходной валентности (реакция Фентона). Образующиеся при этом НО радикалы реагируют с ненасыщенными жирными кислотами и переводят их в свободнорадикальное состояние, тем самым инициируя свободнорадикальное окисление в исследуемом объекте. Образующиеся неустойчивые тетраоксиды распадаются с выделением кванта света. Использовались следующие реактивы: 1) 60 мМ раствор КН2Р04 буфера, содержащего 105 мМ КС1, рН 7,4±0,05 2) 0,01 мМ раствор FeS04, готовится перед измерением, раствор должен быть прозрачным. 3) 2 % раствор перекиси водорода. Все реактивы готовились на деионизированной воде. В измерительную кювету биохемилюминометра БХЛ-06 М (Нижний Новгород, Россия) вносились 25 мкл центрифугата, 400 мкл фосфатного буфера и 400 мкл раствора FeSC 4. Для инициации процесса в пробу быстро вносили 200 мкл раствора перекиси водорода. Сигнал регистрировался в течение 50 секунд и график о получаемой информации в виде непрерывной кинетической кривой выводился на дисплей компьютера. Интенсивность процесса СР окисления определялась по величине светосуммы за 30 секунд и измерялась в условных единицах, рассчитанных на 1 мг белка. Антиоксидантный потенциал пробы коррелировал с величиной тангенса угла наклона кривой на стадии максимального убывания вспышки и измерялся в условных единицах. В основе методики лежит определение активности супероксиддисмутазы в условных единицах с использованием НАДН и ЭДТА. Использовались следующие реактивы: В кювету помещали 2 мл реагента 1, 0,05 мл фосфатного буфера (контроль) или пробы (опыт). Перемешивали и устанавливали начальную плотность при 540 нм. Реакцию запускали, добавляя 0,1 мл НАДН, отмечая при этом время. Через 5 мин регистрировали оптическую плотность. Рассчитывали процент подавления контрольной реакции образцом, причем за 1 условную единицу активности принимали количество образца, подавляющее контрольную реакцию на 50%. Далее рассчитывалась активность в условных единицах на 1 мг. белка субстанции. Анализируемый материал перед измерением обрабатывали, добавляя к 0,2 мл материала (доведенного до 1 мл) 0,3 мг этанола и 0,15 мг хлороформа. Осадок центрифугировался 30 мин при 500 об/мин. В опыт брались 0,05 мл супернатанта. 2.8.3. Определение активности глутатионпероксидазы Глутатионпероксидаза катализирует расщепление гидроперекиси третбутила, используя в качестве субстрата восстановленный глутатион. Использованы следующие реактивы: 1. Трис-HCl буфер, ОД М (рН 8.5) с 0,34 мМ ЭДТА 2. Сложный Трис-HCl буфер, содержащий 0,078% азида натрия и 0.01% глутатиона восстановленного 3. Гидроперекись третичного бутила, приготовленную ex tempore: 5 мкл трет-бутила добавлялась к 2.5 мл дистиллированной воды. 4. ТХУ, 20% раствор. 5. Реагент Эллмана, разведенный метанолом до концентрации 10 мМ. Готовились 3 пробы: опытная, контрольная и стандартная. Опытная проба содержит 0.1 мл реактива 1 , 0,2 мл центрифугата ткани и 0.73 мл реактива 2. Стандартная проба содержит 0,1 мл реактива 1 , 0,2 мл центрифугата ткани и 0.73 мл реактива 2 и 0,2 мл ТХУ. Контроль содержит 0,83 мл реактива 1, 0,2 мл центрифугата ткани и 0,2 мл ТХУ. Все пробы инкубировались 10 минут на водяной бане при температуре 37 в течение 10 минут для подготовки к началу реакции. Реакцию запускали добавлением 0.07 мл гидроперекиси третичного бутила. После 5 минут инкубации при температуре 37 реакцию останавливали. 0.2 мл 20% раствора ТХУ, выдерживали 10 минут и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 20 минут. Для регистрации оставшегося глутатиона использован реактив Эллмана. К 2.62 мл реактива 1 добавляли 0.1 мл супернатанта и 0.025 мл реактива 4. Образовалось окрашенное соединение с максимум поглощения при 412 нм. Активность фермента выражается в ммолях GSH за минуту и относится к 1 мг белка.
Изучение влияния дельтарана на канцерогенез легких, индуцированный уретаном трехмесячных мышей-самок линии SHR были рандомизированно разделены на 2 группы. Животным 1 группы (35 животных в группе) однократно внутрибрюшинно был введен уретан (НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова), растворенный в изотоническом растворе хлористого натрия, в дозе 1 г/кг. Первая группа получала дельтаран в вышеописанных дозировках и путях введения. Второй группе вводилось по 0, 1 мл 0,9% физиологического раствора подкожно в сутки в течение 5 дней ежемесячно в течение всего эксперимента.
Влияние дельтарана на потребление корма и воды у мышей
Результаты возрастной динамики двигательной активности и ориентировочной реакции мышей представлены в таблице 6.
В возрасте 3 мес, при первом измерении по двигательной вертикальной и горизонтальной активности, количеству реакций груминга и числу актов дефекации мышей в тесте "открытое поле" значимых различий между группами не наблюдалось.
В возрасте 6 мес в контрольной группе в среднем на 32% сократилось число пересеченных квадратов и на 52% снизилось число вертикальных стоек (р 0.01), тогда как число реакций груминга и дефекаций по сравнению с возрастом 3 мес существенно не изменились. В дальнейшем число пересеченных квадратов оставалось относительно постоянным до естественной смерти животных, оставаясь в пределах 150-180 квадратов в среднем на мышь. Число же вертикальных стоек продолжало уменьшаться, отражая нарастающее с возрастом снижение интереса животных к окружающей среде и вертикальной подвижности; к возрасту 15 мес число стоек в группе контроля снизилось в среднем до 4 на мышь, таким образом, уменьшившись на 84% по сравнению с показателями тех же мышей в молодом возрасте. Количество реакций груминга и дефекаций оставалось величиной более или менее постоянной на протяжении всей жизни животных контрольной группы. В группе мышей, получавших дельтаран, как и в группе контроля, горизонтальная активность, то есть число пересеченных квадратов, уменьшившись на 27% к возрасту 9 месяцев по сравнению с исходным уровнем, в дальнейшем не изменялась и оставалась таковой до конца жизни животных. Обращает на себя внимание, что количество пересеченных квадратов последними 10% оставшихся в живых мышей, в предельном для этих животных возрасте в 21 месяц, составляло в среднем 200 пересеченных квадратов на мышь, то есть отличалось от показателя тех же мышей в молодости всего на 12%. Более того, последние оставшиеся в живых 10% мышей демонстрировали в целом более высокую горизонтальную активность, чем умершие ранее животные группы, получавшей дельтаран, - в среднем на 17
Вертикальная активность мышей группы, получавшей дельтаран, уменьшившись к возрасту 15 месяцев на 50% по сравнению с возрастом 3 месяца, не изменялась на протяжении всей их дальнейшей жизни. Более того, по сравнению с группой контроля у мышей группы, получавшей дельтаран, отмечалось существенное замедление возрастного уменьшения вертикальной активности - в возрасте 15 месяцев мыши группы, получавшей дельтаран, совершали на 74% больше стоек, чем животные группы контроля (р 0.01) (Рис. 6).
Различие между группами по количеству вертикальных стоек стало достоверным начиная с возраста 12 мес, и оставалось таковым до смерти животных.
Как и в случае с горизонтальной активностью, вертикальная активность последних оставшихся в живых мышей группы, получавшей дельтаран, по достижении ими возраста 21 мес была несколько выше, чем у ранее умерших 15-месячных животных.
Частота реакций груминга и актов дефекации в открытом поле у мышей группы, получавшей дельтаран, как и в группе контроля, оставалась более или менее неизменной в течение всей жизни животных. В группе, получавшей дельтаран, в целом имела место большая индивидуальная изменчивость, чем в группе контроля. Кроме того, следует отметить, что сравнить результаты самых старых животных этой группы в возрасте 21 месяца с таковыми в группе контроля не удалось бы, ввиду того, что к этому моменту в группе контроля уже умерли все мыши. ,
Результаты измерения мышечной силы и утомляемости мышей в тесте удержания на струне представлены в таблице 7.
В контрольной группе в возрасте 3 мес время первого удержания на струне, второго удержания и разница между ними были сопоставимы с таковым в группе, получавшей дельтаран,.
К возрасту 6 месяцев время первого удержания в группе контроля уменьшилось на 9%, время второго удержания, то есть показатель восстановления сил, сократилось на 22%. В группе, получавшей дельтаран, по достижении мышами возраста 6 мес время первого удержания на струне уменьшилось на 12%, время второго удержания сократилось на 6%.
В дальнейшем в обоих группах показатели мышечной силы и утомляемости последовательно снижались, отражая естественный процесс старения мышей. К концу жизни мыши в среднем на 50% меньше времени удерживались на струне в первый раз, и на 61% меньше времени могли удержаться на струне во второй раз.
В целом мыши группы, получавшей дельтаран, имели на 15-17% лучшие показатели мышечной силы и утомляемости, чем мыши группы контроля, однако это различие ни в один временной период не было статистически достоверным.
Влияние дельтарана на показатели рабочей памяти у мышей
При подкожном введении дельтаран оказывал? определенное модифицирующее влияние на канцерогенез легких, индуцируемый уретаном у мышей: Основные результаты эксперимента представлены в таблице 14.
Через 6 месяцев- после однократного внутрибрюшинного введения уретана в дозе 1 г/кг у 51 % животных контрольной группы возникли-. мультицентричные опухоли легких. Среднее число опухолей. Has 1 мышь, составило.0;51±0,9. Среди опухолей превалировали узлы.малого ( 0,5-мм)-и среднего (0 6 - 1 мм) размеров. Крупные ( 1 мм) опухолевые узлы представлены в редких случаях - всего в- трех (3,1%): Минимальное количество.опухолей на одну мышь составляло Г, максимальное - 15. Общее количество опухолевых узлов.в группе контроля - 95.
При; введении дельтарана подкожно- в вышеописанных дозировке и продолжительности курса у мышей, получивших однократные инъекциш уретана, опухоли легких возникли в 46 % случаев, что на;5%-реже; чем в. группе контроля . Это различие-достоверным не является.
Среднее- число опухолей на 1 мышь составило 0,46±0,9; Так же, как группе контроля, подавляющее большинство опухолевых узлов составляли! узлы малого и среднего размеров. Крупные опухолевые узлы, представлены двух случаях (2,5%). Минимальное количество опухолей на одну мышь составляло 1, максимальное - 14. Общее количество опухолевых узлов в; группе дельтарана - 79, что на 17% меньше, чем в группе контроля, хотяэто различие также недостоверно.
Множественность опухолей в общей группе мышей для контроля составила 2,71±0,6, то есть в целом была небольшой. В группе,, получавшей дельтаран, множественность составляла 2,26±0,56, она была меньшей, чем в контроле на 17%. Достоверным различие не было. Значение имеет также подсчет множественности опухолей среди животных-носителей опухолей, учитывая, что в данном эксперименте новообразования развились в целом только у половины мышей групп. Этот показатель для группы контроля составлял 5,28±0,9 и для группы, получавшей дельтаран, - 4,94±0,92. Наблюдалась тенденция к снижению множественности опухолей в группе, получавшей дельтаран, - на 7% по сравнению с группой контроля. Статистической достоверности в данном случае также не наблюдалось. Таким образом, введение дельтарана сопровождалось тенденцией к уменьшению частоты и множественности опухолей как в общей группе мышей, так и в среди мышей-опухоленосителей. Однако статистически достоверных отличий ни по одному показателю не наблюдалось. Морфология развившихся аденом легких весьма характерна и соответствует описаниям уретановой модели индуцируемого канцерогенеза [Грицюте Л. А., 1975]. Макроскопически в нефиксированной легочной ткани в группе контроля опухоли выглядели как полупрозрачные серые выпуклые округлые узелки, в основном небольшого размера. При прикосновении пуговчатым зондом данные образования упругие, неподвижные. На свежем препарате визуальное выявление образований затруднено. Расположены опухоли по поверхности долей легких, приподнимая плевру. В глубине легочной ткани в условиях данного эксперимента узлов не было. После фиксации в формалине опухолевые узлы имели вид округлых белесоватых образований, четко отграниченных от легочной паренхимы (рис. 12, 13). В 3 % случаев (3 препарата) имело место разрастание опухолевой ткани с нечеткими неровными границами по типу инфильтрации ткани легкого. На продольном срезе легкого опухоли располагались в основном на периферии. В одном случае опухоль представляла собой крупный опухолевый узел размером 0,5 на 0,6 см округлой формы, инфильтрирующий плевру и ребра мыши (рис. 14). Что касается распределения опухолевых узлов по долям легких, то здесь никакой четкой закономерности выявить не удалось - новообразования возникали относительно равномерно во всех долях легких мышей контрольной группы. При макроскопическом исследовании в группе животных, получавших дельтаран, на нефиксированных препаратах новообразования имели тот же вид, что вив группе контроля. После фиксации в формалине опухолевые узлы всегда были четко отграничены от легочной ткани. В этой группе наличие крупных опухолей отмечено в 2 случаях (2,5%). Новообразования были представлены в основном узлами малого и среднего размера (рис 15). Аденомы в группе контроля представляли собой узлы, чаще всего достаточно четко отграниченных от окружающей легочной ткани. Собственная соединительнотканная капсула отсутствовала, опухоли окружались ободком спавшихся коллабированных оттесненных альвеол. Висцеральная плевра, покрывающая опухоли, местами утолщена, при этом целостность ее сохранена на всем протяжении. Воспалительной реакции вокруг аденом не наблюдалось. По гистологической структуре преобладали аденомы железистого строения. В аденомах железистого типа аденоматозная дифференцировка отмечалась преимущественно в центральной части узлов, тогда как на периферии опухолевая ткань более однородна. Иногда в опухолях железистого типа встречались очаги аденоматоза.
Микроскопически при большом увеличении сформированная аденома представляла собой узел, состоящий из светлых кубовидных клеток с круглым или овальным крупным ядром, содержащим 2-3 ядрышка. Клетки мономорфны, митозы в них чрезвычайно редки. Чаще встречались аденомы из крупных клеток. Наблюдались и узлы, состоящие из мелких клеток с темными ядрами небольшого размера, также образовывавшие характерные аденоматоидные структуры. Достаточно часто встречалось сочетание разных типов клеток в пределах одного опухолевого узла. В опухолевой ткани прослеживалось преобладание паренхимы над стромой. Строма опухолей, как правило, весьма скудная, в основном представлена была сетью коллагеновых волокон, в которой в небольшом количестве имелись кровеносные сосуды. В группе, получавшей дельтаран, отчетливых отличий микроскопического строения опухолей обнаружить не удалось, общий вид новообразований совпадал с таковым в группе контроля.
