Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Особенности морфофункционального состояния печени собак в условиях городской среды 8
1.2. Основные метаболические функции печени 9
1.3. Диагностические методы исследования печени 23
1.4. Лечебные и профилактические мероприятия при гепатозах собак... 29
2. Собственные исследования 34
2.1. Материалы и методы исследования 34
2.2. Результаты собственных исследований 40
2.2.1. Анализ заболеваемости собак гепатопатиями в условиях города Тюмени 40
2.2.2. Морфофункциональное состояние печени собак при ее патологии 47
2.2.3. Данные лабораторных исследований крови при патологиях печени 53
2.2.3.1. Гематологические показатели и индексы эндогенной интоксикации при патологии печени 53
2.2.3.2. Биохимические показатели при гепатопатиях собак 59
2.2.4. Ультразвуковая диагностика печени при ее основных патологиях 65
2.2.5. Анализ лечебных мероприятий при гепатозах собак 72
3. Заключение 83
4. Выводы 90
5. Практические предложения 92
Список сокращений 93
Список литературы
- Основные метаболические функции печени
- Диагностические методы исследования печени
- Морфофункциональное состояние печени собак при ее патологии
- Биохимические показатели при гепатопатиях собак
Основные метаболические функции печени
Печень принимает участие в процессах переваривания корма, абсорбции питательных веществ из пищеварительного тракта, их метаболизма и депонирования. Крайне важна ее роль в очищении организма от многочисленных токсинов, их катаболизме и выделении, синтезе гормонов и ксенобиотиков.
Наиболее простым и доступным способом диагностики повреждения печени является анализ морфологического состава периферической крови. Без него не обходится ни одного обследованного больного, не ставится ни один диагноз (В.Т. Морозова, 1996; К.Х. Папуниди, 1996; J.C. Norman и др. 2006). Результаты общего анализа крови предоставляют информацию, на основании которой можно оценить тяжесть анемии и длительность ее проявления, а также определить характер воспалительного процесса и тромбоцитопении (Р. Уошебау, 2010).
При исследовании морфофункциональных показателей Сысуевой А.В. (2008) были выявлены различные формы анемий. У собак с острым токсическим поражением печени анемия имела микроцитарный гипохромный гомогенный характер, что указывало на начало угнетения эритропоэза и острую декомпенсацию функций печени, а также на нарушение обмена железа, это также отмечают Keller P., Freudiger U. (1983), Казаков Д.Н. (2004). У собак с гепатозом чаще всего отмечалась макроцитарная нормохромная анемия, что также указывают в своих исследованиях Козлов СВ. (2004), Куликова Е.П. (2005), Корчагина О.С. (2008). Индекс анизоцитоза эритроцитов (RDW) значительно отражался у каждого животного и соответствовал степени поражения печени и уровню компенсации патологического процесса. На благоприятное течение патологического процесса указывало повышение этого показателя выше нормы. У большинства собак с циррозом печени отмечали макроцитарный нормохромный гетерогенный тип анемии.
При исследовании морфологии эритроцитов при различных патологиях печени Сысуевой А.В. (2008) были обнаружены следующие формы эритроцитов: Эхиноциты - эритроциты с множественными выступами в виде колючек, равномерно распределенных по всей поверхности клеточной мембраны. Они могут появлться при неправильной подготовке препарата и по многим другим причинам, но иногда встречаются при нарушениях обменных процессов.
Акантоциты - на поверхности имеют множественные выпячивания разной величины. Возникают они при нарушении соотношения холестерина и фосфолипидов в клеточной мембране эритроцитов. Встречаются при токсических поражениях печени, циррозе печени, метастазах в печень. Кератоциты - клетки с двумя большими выступами. Причиной образования этих форм является образование вакуоли, которая потом лопается.
Тонкие макроциты (планоциты) характеризуются увеличенным диаметром и нормальным объемом. Форма их обычно круглая. Часто встречаются вместе с мишеневидными клетками. Их образование связано с повышенным содержанием холестерола и лецитина в мембране. Наблюдаются при болезнях печени, особенно вызванных интоксикациями.
Стоматоциты - клетки с центральной зоной просветления овальной формы в виде рта. Наблюдаются при злокачественных новообразованиях, циррозе печени, механической желтухе.
Кодоциты - эритроцит в виде мишени. Центральная часть эритроцита представлена темным кругом, вокруг которого определяется светлое кольцо, периферическая зона вокруг которого окрашивается аналогично центральной части эритроцита. Наблюдается при неравномерности гемоглобина и утолщении плазмолеммы.
Книзоциты - перегородчатые клетки. Причина образования такая же, как у кодоцитов. Часто обнаруживаются в одном мазке вместе с кодоцитами.
Все обнаруженные измененные формы эритроцитов позволяют косвенно судить о характере и тяжести течения патологического процесса и существенно дополняют клиническую картину.
Что касается количества лейкоцитов в периферической крови у собак больных гепатозом, происходит их снижение в 2 раза (СВ. Козлов, 2004). По данным Никулина И.А. (2003) в начальной стадии токсической дистрофии печени у собак происходит увеличение количества лейкоцитов до 16,6±2,0 109/л, для стадии разгара болезни характерно увеличение количества лейкоцитов до 17,1±2,5 109/л. В лейкоцитарной формуле отмечают лимфоцитоз, эозинопению и нейтропению за счет уменьшения сегментоядерных форм.
Казаков Д.Н. (2004) считает, что одновременно с увеличением тяжести течения гепатита происходили изменения лейкограммы, которые характеризовались снижением абсолютного числа эозинофилов, лимфоцитов и моноцитов с одновременным повышением числа нейтрофилов. Однако Кучерявенков М.А. (2012) отмечает выраженный лейкоцитоз при гепатитах независимо от формы возникновения. А Уошебау Р. (2010) отмечает, что у пациентов с бактериальным, вирусным и грануломатозным гепатитами, некрозом, абсцессами и опухолями печени часто выявляют лейкоцитоз и нейтрофилию.
Кучерявенков М.А. (2012) отмечает, что насыщенность крови гемоглобином у собак при токсическом гепатите снижается на 27,41%, гематокритная величина на 14,06%, а фибриногена на 43,32%. СОЭ увеличивается при остром гепатите в 1,91 раза, а при хроническом течении в 1,72 раза.
Эндогенная интоксикация - это полиэтиологичный и полипатогенетичный синдром, характеризующийся накоплением в тканях и биологических жидкостях эндогенных токсических субстанций - избытка продуктов нормального или извращенного обмена веществ или клеточного реагирования. Тяжесть эндогенной интоксикации является косвенным критерием тяжести общего состояния больного. Одними из показателей, характеризующими степень выраженности эндогенной интоксикации, считаются лейкоцитарные индексы, в которых использованы показатели лейкоцитарной формулы.
По изменениям в лейкоцитарной формуле, с учетом других гематологических показателей, можно судить о выраженности воспалительного процесса и эффективности проводимой терапии (Т.В. Кобец, В.Н. Некрасов, А.К. Мотрич, 2003). Диагностические и прогностические возможности расчётных индексов приобретают в настоящее время все большую значимость, поскольку определенные сочетания показателей гемограммы отражают интегральные характеристики гомеостатических систем организма, формирующих неспецифические адаптационные реакции.
Диагностические методы исследования печени
Морфологические изменения в печени при ее патологиях не имеют специфических особенностей, их выраженность колеблется в большом диапазоне. Но можно выделить морфологические признаки основных диффузных поражений, комбинация которых определяет характер поражения печени. Нами были рассмотрены такие патологии как острый гепатит, липидоз (жировая дистрофия печени, стеатоз), амилоидоз печени.
При жировом гепатозе печень у животных увеличена в объеме, набухшая, с притуплёнными краями. Капсула напряжена, консистенция дряблая. Окраска неравномерная ярко-желтого цвета (рисунок 3). Исследуя патологический материал печени собак, нами отмечаются нарушения балочного строения печени печеночные клетки подверглись некрозу или жировой дегенерации (рисунок 4,5). В различных отделах долек много переполненных желчью капилляров. В просвете протоков находилось скопление большого количества слизи и слущенных клеток эпителия.
Соединительнотканная основа стенок протока утолщена и инфильтрирована эозинофильными лейкоцитами. Эозинофилы концентрируются между печеночными балками, а также вокруг самого протока (рисунок 4,5). Центральная вена печеночных долек в результате нарушенного оттока крови и ослабления
Амилоидоз печени (пудель, 13 лет). На ранних стадиях амилоидоза при небольшом увеличении обнаруживаются тонкие гомогенные бледно окрашенные тяжи или небольшие глыбки по ходу капилляров, в основном в периферических частях долек, вокруг сосудов и в междольковой соединительной ткани (рисунок 7). Происходит сдавливание и деформация печеночных балок, а также сужение просветов капилляров. На поперечном разрезе амилоид образует вокруг капилляров гомогенные кольца и муфты. Происходит отложение амилоида и в стенке центральной вены. Амилоидоз может иметь диффузное, зональное или мультифокальное распределение в паренхиме. В зависимости от прогрессирования процесса амилоид накапливается в печени все в больших количествах и отложения его можно найти в интермедиальной зоне и в центральных частях долей. В результате отложения амилоида в дольках под эндотелием капилляров (между стенкой капилляра и печеночной балкой) происходит сдавливание с одной стороны капилляров, а с другой - балок, что нарушает питание ткани, вызывая атрофию и гибель гепатоцитов. Атрофированные балки имеют вид тонких, угловатых пластинок, потерявших взаимную связь. Проходя в разных направлениях, они образуют небольшие перемычки между массами амилоида. В протоплазме атрофированных клеток при сильном увеличении можно найти зерна пигмента липофусцина и капли жира. Ядра гепатоцитов также подвергаются изменениям (пикнозу) и распаду.
При макроскопическом осмотре печень при гепатите увеличена (рисунок 8). Печень может выступать за край реберной дуги. Край печени закруглен. Желчный пузырь увеличен с желчью темно-зеленого цвета. На разрезе печень ярко-красного цвета, рисунок сглажен. При микроскопическом исследовании печени при гепатите собак гепатоциты могут быть измененные. Наблюдается нечеткие контуры ядер гепатоцитов, которые могут содержать более двух ядрышек (рисунок 9). В ядрах и купферовских клетках могут обнаруживаться крупные тельца-включения относительно постоянного размера и однородные по своей структуре. Возможна визуализация участком с выраженным некрозом в периацинарных областях. В гепатоцитах наблюдается вакуолизация цитоплазмы.
При гистологическом исследовании можно увидеть расширение межбалочных капилляров, которые заполнены эритроцитами (рисунок 10,11). Происходит отек стромы в результате изменений сосудов. Воспалительная реакция также представлена клеточными инфильтратами, состоящей из лимфоцитов, нейтрофилов, эозинофилов, макрофагов и плазматических клеток.
Фульминарная форма гепатита (беспородная собака, 4 года). Массивный некроз паренхимы с кровоизлияниями очаговая пролиферация грануляционной ткани сохранившиеся гепатоциты с явлениями белковой дистрофии. Гистосрез. Окраска гематоксилин-эозином, Рисунок 10. Фульминарная форма гепатита (беспородная собака, 4 года). Массивный некроз паренхимы с кровоизлияниями очаговая пролиферация грануляционной ткани сохранившиеся гепатоциты с явлениями белковой дистрофии. Гистосрез. Окраска гематоксилин-эозином, 200
Для оценки уровня интоксикации и степени тяжести протекания гепатопатий мы происследовали целесообразность применения интегральных лейкоцитарных индексов крови, так как данный метод отличается простотой и доступностью для ветеринарных врачей. Для этого использовали клинические показатели периферической крови собак (таблица 4). Было отобрано 66 проб крови от больных и 20 проб крови от клинически здоровых животных.
Морфофункциональное состояние печени собак при ее патологии
Вызывает частичное или полное растворение холестериновых камней при энтеральном применении, уменьшает насыщенность желчи холестерином, что способствует мобилизации холестерина из желчных камней. Урсодезоксихолевая кислота оказывает иммуномодулирующее действие, влияет на иммунологические реакции в печени: уменьшает экспрессию некоторых антигенов на мембране гепатоцитов; влияет на количество Т-лимфоцитов, образование интерлейкина 2, уменьшает количество эозинофилов.
Основные эффекты урсодеоксихолевой кислоты на обмен холестерина: снижение секреции холестерина в желчь; уменьшение кишечной абсорбции холестерина и стимуляцию выхода холестерина из камней в желчь; ингибирование важнейшего фермента синтеза холестерина в печени — ГМК-КоА-редуктазы.
По возрастанию гидрофобных свойств желчные кислоты располагаются в следующем порядке: урсодезоксихолевая хенодеоксихолевая деоксихолевая литохолевая. Этот порядок определяет увеличение токсичности желчных кислот, так как именно гидрофобные свойства обеспечивают проникновение желчных кислот в липидные слои, прежде всего в мембраны, как плазматические, так и мембраны митохондрий, что вызывает изменение их функционирования и в конечном итоге гибель клетки. Урсодезоксихолевая кислота конкурирует с токсичными желчными кислотами в процессе абсорбции в тонкой кишке и на мембране гепатоцитов (Т.Е. Полунина, 2009; А.Р. Умерова, 2010).
Урсодезоксихолевая кислота составляется не более 5% от общего пула желчных кислот. При приеме лекарственных препаратов, содержащих урсодезоксихолевую кислоту, ее доля в общем пуле желчных кислот увеличивается до 60%. Это приводит к уменьшению всасывания токсичных желчных кислот и поступлению их в печень, что объясняет цитопротективные свойства урсодезоксихолевой кислоты. Эти же эффекты обеспечиваются и другими механизмами. В частности урсодезоксихолевая кислота способна встраиваться в клеточную мембрану, которая становится более устойчивой к повреждающему действию токсичных желчных кислот и продуктам метаболизма этанола. Урсодезоксихолевая кислота предотвращает также другие эффекты токсичных желчных кислот: дисфункцию митохондрий, выход цитохрома С из мембран в цитозоль клетки с последующим развитием апоптоза, нарушение гомеостаза клеточных ионов и клеточной смерти посредством некроза.
С замещением токсичных желчных кислот связываются и иммуномодулирующие свойства урсодеоксихолевой кислоты. Накопление токсичных желчных кислот при холестазе индуцирует экспрессию молекул главного комплекса гистосовместимости I и II класса на мембранах гепатоцитов и холангиоцитов, что способствует их распознаванию с последующей деструкцией цитотоксическими Т-лимфоцитами. Уменьшая количество токсичных желчных кислот, урсодезоксихолевая кислота приводит к подавлению этого процесса.
Урсодезоксихолевая кислота в медицинской практике применяется при лечении хронического гепатита в том числе атипичных формы хронического аутоиммунного гепатита, острого вирусного гепатита, лекарственных и других токсических поражений печени, первичного билиарного цирроза, первичного склерозирующего холангита, атрезии внутрипеченочных желчных путей, холестаза при парентеральном питании, дискинезии желчевыводящих путей, хронического описторхоза, профилактики повреждений печени при использовании гормональных контрацептивов и цитостатиков (СИ. Лютинский, 2002).
Селен обладает выраженными антиоксидантными свойствами, что позволяет использовать этот микроэлемент для профилактики онкологических заболеваний, провоцируемых химическими воздействиями и радиацией. Selenium стимулирует образование антител и, тем самым, повышает защиту организма от инфекционных и простудных заболеваний. Участвует в выработке эритроцитов (М.Д. Машковский, 2010). Ромашка аптечная обладает прекрасным антисептическим действием. Ее широко используют для лечения желудочно-кишечного тракта, при метеоризме и диарее. Лекарственным сырьем являются соцветия ромашки аптечной. Препараты ромашки аптечной оказывают спазмолитическое, противовоспалительное, антисептическое, седативное и некоторое обезболивающее действие.
Настой ромашки при приеме повышает секрецию пищеварительных желез, оказывает желчегонное действие, уменьшает процессы брожения, снимает спазмы кишечника. Механизм спазмолитического действия объясняется холинолитическими свойствами гликозидов растения. Эфирное масло ромашки несколько усиливает и углубляет дыхание, учащает ритм сердечных сокращений, расширяет сосуды головного мозга, а также обладает дезинфицирующими и противовоспалительными свойствами благодаря наличию в нем хамазулена. Препараты ромашки ускоряют процессы регенерации эпителия при экспериментальных язвах и задерживают развитие экспериментального воспаления (М.Д. Машковский, 2010).
В современной медицине препараты из почек и листьев березы используют при авитаминозе, отеках, воспалении мочевого пузыря, атеросклерозе, хронических заболеваниях почек, а также как желчегонное и отхаркивающее средство. Настой листьев, кроме того, обладает общеукрепляющим действием, помогает при мокнущих экземах и климактерических неврозах. При сыпях, вызванных нарушением обмена веществ и аллергией, настой березовых листьев используется для очистки крови, выведения токсинов и комплексов антиген, количество которых может при аллергии зашкаливать и вызывать приступы удушья при бронхиальной астме (М.Д. Машковский, 2010).
Изучение влияния предложенной нами схемы лечения на клинический статус и функциональное состояние печени было проведено на нескольких разновозрастных группах собак. Апробация лекарственной композиции была проведена в условиях ветеринарных клиник г.Тюмени "Ветэкспресс" и "Доктор А".
Биохимические показатели при гепатопатиях собак
Полученные нами данные выявляют параллелизм между гиперфосфатазеемией и гиперхолестеринемией.
Низкая концентрация фибриногена (ниже 1г/л) наблюдается при острых гепатитах, а высокая концентрация наблюдалась у собак с хроническим гепатозом и новообразованиях печени (6,8±0,19г/л и 11,3±0,08 г/л соответственно).
Полученные результаты свидетельствуют о том, что определение фибриногена можно использовать для дифференциальной диагностики поражений печени, причем гипофибриногенемия проявляется при остром диффузном поражении печени, а гиперфибриногенемия при опухолях печени.
Повышение уровня трансферрина происходит при остром гепатите (0,93±0,03г/л). При хроническом гепатите данный показатель составляет 0,23±0,01г/л, что немного выше, чем у клинически здоровых животных. При новообразованиях происходит небольшое снижение трансферрина в сыворотке крови 0,18±0,03г/л, в данном случае этот показатель является неинформативным.
Нами установлено, что С-реактивный белок для дифференциальной диагностики гепатопатий не информативен вследствие повышения его при любых воспалительных реакциях организма. Уровень триглицеридов повышается только при остром токсическом гепатите 18,3±0,53 ммоль/л, в остальных случаях данный показатель был в пределах нормы. При изучении содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови было выявлено, что при острой форме гепатоза наблюдается повышение концентрации иммуноглобулина А - 4,9±0,19 г/л, иммуноглобулина G - 46,2±1,68 г/л и иммуноглобулинам - 25,63±1,30 г/л.
При остром гепатите наблюдается только гипериммуноглобулинемия М, в среднем концентрация Ig М равно 13,75±0,95 г/л. При новообразованиях печени наблюдается небольшое повышение всех иммуноглобулинов. При изучении количественных характеристик изменений в сосудистой системе печени было выявлено, что диаметр воротной вены и печеночных вен практически не отклонялся от показателей клинически здоровых животных при хроническом гепатите. Также при данной патологии происходит небольшое отклонение линейной скорости в воротной вене, в среднем он составил 14,8±0,03см/с, при этом у клинически здоровых собак данный показатель составил 15,0 ±0,6см/с.
При остром гепатите у собак с различной массой наблюдалось расширение как печеночных, так и воротной вены. При этом наблюдалось небольшое снижение линейной скорости в воротной вене (13,6±0,08см/с), что объясняется затрудненным кровотоком вследствие сдавливания стенок сосудов отечными тканями.
При жировой дистрофии печени наблюдалось наоборот уменьшение сосудов и снижение линейной скорости в воротной вене (13,1±0,06см/с). Это связано с выраженным воспалением, жировым перерождением и увеличением в размерах паренхимы печени.
Во всех случаях кровоток определялся ламинарным гепатопетального типа (направлен в сторону печени). Сосудистая архитектоника внутрипеченочных сосудов была не изменена.
Несмотря на широту распространения гепатопатий и, казалось бы, наличия большого количества препаратов, применяемых в гепатологической медицинской практике, подбор эффективных препаратов для лечения собак сложен. Поэтому нами была разработана схема лечения гепатоза собак.
Было сформировано 3 опытных и 1 контрольная группа. В каждой опытной и контрольной группе находилось по 15 собак больных клинически выраженным гепатозом. Все животные были обследованы, проведены клинические и биохимические исследования крови, ультразвуковая диагностика. Опытным группам собакам давали лекарственную композицию в следующих дозах и режимах Урсосан 10 мг/кг, Змкг/кг селена и 1 мл/кг растительного сбора 2 раза в день в течение 30дней: 1 группа собаки в возрасте старше 9 лет, 2 группа - собаки в возрасте 7-9 лет, 3 группа - собаки в возрасте 5-7 лет.
Для лечения собак контрольной группы в течение 30 суток применяли стандартную схему лечения - проводили терапию с применением препарата «Эссенциале» 10мг/кг живой массы курсом 25-ЗОдней, но-шпу по 0,04мл/1 кг живой массы 1 раза в день, в/м (5 дней); гамавит по 1 -5 мл, 1 раза в день, п/к (7 дней).
В начале опыта у всех собак отмечались вялость, снижение аппетита и поведенческих реакций, болезненность при пальпации живота в области печени. Также отмечались специфические изменения биохимии крови (снижение уровня альбумина, повышение уровня глобулина, общего билирубина, щелочной фосфатазы, ЛДГ, AST, ALT), ультразвуковой картины печени (увеличение размеров печени, тупой край, снижение эхогенности паренхимы, васкуляризация не нарушена, структура однородная, мелкозернистая).
После лечения у всех опытных собак и собак контрольной группы клинические признаки проявления токсического гепатоза отсутствовали. К концу лечения двигательная активность собак всех групп повысилась, шерстный покров приобрел блеск, слизистые оболочки и кожа приобрели физиологическую окраску. У собак 1 и контрольный группы желтушность не пропала, но стала намного меньше.
Биохимические показатели крови свидетельствуют о том, что лекарственная композиция проявила высокий терапевтический эффект, особенно в 3 опытной группе. Основные показатели, такие как количество билирубина, глобулина, AST, ALT в 3 контрольной группе животных достоверно снизилось в результате лечения до нормы, также как и в контрольной группе, а уровень альбумина в данных группах пришел в физиологические нормы. В 1 группе также произошло изменение данных показателей, но по сравнению со 2 и 3 опытными группами данная схема лечения проявила меньший терапевтический эффект. Следовательно, можно утверждать, что применение лекарственной композиции при клинически выраженном гепатозе собак более интенсивно восстанавливает клиническое состояние, чем общепринятое лечение.
Проведенные исследования показали, что назначение нового способа благоприятно отразилось на общем состоянии всех больных животных. Животные стали более активны, нормализовалась функция желудочно-кишечного тракта, видимые слизистые оболочки приобрели естественную окраску.
