Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Нетрадиционные методы лечения - совре менное направление в повышении эффективно сти противоопухолевой терапии (обзор литературы) 12
Глава II. Характеристика материала и методов ис следования 39
Глава III. Изучение противоопухолевого действия переменного магнитного поля на модели ксено-графтов опухолей человека, культивируемых в диффузионных камерах In Vivo 52
Глава IV. Люминесцентно-микроскопическое ис следование синтетической активности клеток крови, костного мозга, лимфы и некоторых зло качественных опухолей при нетрадиционных методах лечения 58
4.1. Влияние нетрадиционных методов введения химиопрепа-ратов на синтетическую активность клеток крови и костного мозга интактных крыс 59
4.2. Влияние АГХТ на синтетическую активность клеток крови, костного мозга и саркомы 45 животных-опухоленосителей. 62
4.3. Влияние общего воздействия ПеМП (100 Гц 50 мТл) на синтетическую активность клеток крови, костного мозга и саркомы 45 экспериментальных животных 65
4.4. Изучение in vitro изменения синтетической активности опухолевых клеток асцитного варианта рака яичников крыс при действии ПеМП и винкристина 67
4.5. Изучение in vitro синтетической активности клеток лимфы больных раком яичников при действии ПеМП, а также доксо-рубицина в сочетании с эпиталамином и рихлокаином 68
Глава V. Влияние нетрадиционных методов лече ния на костномозговое кроветворение экспери ментальных животных 71
5.1. Влияние общего воздействия ПеМП (100 Гц 50 мТл) на клеточный состав костного мозга интактных и опухолевых крыс 72
5.2. Влияние АГХТ и АГХМТ на клеточный состав костного мозга интактных и опухолевых крыс 75
5.3. Влияние нетрадиционных методов введения неипогена на клеточный состав костного мозга животных без опухоли 84
5.4. Влияние рихлокаина в сочетании с доксорубицином на клеточный состав костного мозга животных с саркомой 45 88
5.5. Влияние су фана в сочетании с циклофосфаном на костномозговое кроветворение крыс без опухоли 90
Заключение 93
Выводы 106
Практические рекомендации 106
Список литературы 108
- Влияние нетрадиционных методов введения химиопрепа-ратов на синтетическую активность клеток крови и костного мозга интактных крыс
- Влияние АГХТ на синтетическую активность клеток крови, костного мозга и саркомы 45 животных-опухоленосителей.
- Влияние общего воздействия ПеМП (100 Гц 50 мТл) на клеточный состав костного мозга интактных и опухолевых крыс
- Влияние нетрадиционных методов введения неипогена на клеточный состав костного мозга животных без опухоли
Введение к работе
Актуальность темы. Химиотерапия является одним из основных методов лечения злокачественных новообразований, наряду с хирургическим и лучевым. Она позволяет снизить биологическую активность опухоли и уменьшить размеры первичного очага и метастазов (Возный Э.К. и соавт., 1995; Ганцев Ш.Х. и соавт., 1995; Непомнящая Е.М., 2002), ослабляет периферический воспалительный процесс, способствует проведению операциий «полного» объема у ранее неоперабельных больных, предупреждает диссеминацию и имплантацию опухолевых клеток во время операции, увеличивает безрецидивную и общую выживаемость больных (Жов-мир В.К. и соавт., 1995; Борисов В.И. и соавт., 1998; Поддубная И.В., 1998; Сидоренко Ю.С. и соавт., 2000, 2001; Светицкий П.В. и соавт., 2001; Fourquet A. et al., 1993; Donehower R.C. et al., 1995; Fisher B. et al., 1995; Gianni A.M. et al., 1995).
Наряду с многочисленными достоинствами, химиотерапия злокачественных новообразований имеет ряд недостатков. Большинство цитоста-тических препаратов не обладает достаточно высокой избирательностью действия и оказывает токсическое влияние на нормальные, прежде всего интенсивно пролиферирующие ткани - костный мозг, эпителий слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта и мочевыделительной системы, фолликулы волос, гонады и другие (Андрюхин В.И. и соавт., 1995; Рас-стригин Н.А. и соавт., 1997; Городецкий В.М., 1998; Сидоренко Ю.С. и соавт., 2001; Montero М.С. et al., 1994.).
Антибластомные химиопрепараты вызывают в нормальных клетках и тканях организма хромосомные нарушения, тератогенные эффекты, а в некоторых случаях способствуют развитию вторичных злокачественных новообразований (Кинзирский А.С., 1995; Расстригин Н.А. и соавт., 1997; Гершанович М.Л. и соавт., 1999).
Значительная часть цитостатиков оказывает иммунодепрессивное действие, способствуя развитию в организме интеркуррентной бактериальной, грибковой, вирусной и протозойной инфекции, вызывая обострение хронических очагов инфекции (Кинзирский А.С., 1995; Поляничко М.Ф., Швырев Д.А., 2000; Матвеева О.Н., 2005). У части онкологических больных наблюдается непереносимость цитостатиков или реакции, несвойственные фармакологическому действию химиопрепаратов (Городецкий В.М., 1998; Гершанович М.Л. и соавт., 1999).
Кроме того, есть факторы, усугубляющие токсичность химиотерапии и снижающие ее противоопухолевую эффективность. Это первичная и приобретенная в процессе лечения резистентность опухоли к цитостатикам (Горбачева Л.Б., 1995; Скотникова О.И. и соавт., 1995; Гершанович М.Л. и соавт., 1999; Светицкий П.В., 2001; Sonneveld P. et al., 1992; Ferry D.R. et al., 1994), пожилой возраст онкологических больных и слабые регенераторные возможности их организма, сопутствующие или перенесенные инфекционные и воспалительные процессы в дыхательной, сердечно-сосудистой и пищеварительной системе, почечная недостаточность, интоксикация организма больного продуктами жизнедеятельности и распада злокачественной опухоли (Шихлярова А.И., 1999; Светицкий П.В. и соавт., 2000; Калинин С.А., 2005; Лыков А.В., 2005; Wishart G.C. et al., 1993; Sikic B.I., 1997).
Для решения данной проблемы в онкологии могут быть использованы нетрадиционные методы и средства лечения, к которым относится применение физических факторов (Чиссов В.И., Соколов В.В., 1995; Лазарев А.Ф. и соавт., 1999; Гаркави Л.Х. и соавт., 2001; Донцов В.А., 2001; Меерович И.Г., 2005; Sieron A. et al., 1995; Preece A.W. et al., 1998; Ruiz-Gomez M.J. et al., 2002), новые способы введения лекарственных препаратов (Сидоренко Ю.С. и соавт., 1995, 2001, 2003; Чиссов В.И., Вашакмадзе Л.А., 1995; Златник Е.Ю., 2003; Mayer Lawtence D., 1996), применение биологически активных веществ животного и растительного происхождения (Сидоренко Ю.С. и соавт., 1999, 2001; Владимирова Л.Ю., 2000; Гаркави Л.Х. и соавт., 2002; Злат-
7 ник Е.Ю., 2003; Aviles A. et al., 1996), а также использование неспецифических для лечения опухолевого процесса лекарственных препаратов, обладающих антитоксическим и иммуномодулирующим действием (Бочарова О.А., 1999; Розенко Л.Я. и соавт., 2000; Златник Е.Ю. и соавт., 2001; Машковский М.Д., 2003).
В Ростовском научно-исследовательском онкологическом институте под руководством академика РАМН Ю.С. Сидоренко разрабатываются и успешно применяются при лечении онкологических больных оригинальные методы введения противоопухолевых химиопрепаратов, растворенных в естественных средах организма — крови и ее компонентах, лимфе, ликво-ре и других (Сидоренко Ю.С. и соавт., 1982 - 2003; Лазутин Ю.Н., 1996; Владимирова Л.Ю., 2000; Карташов С.З., 2002; Златник Е.Ю., 2003; Григо-ров СВ., 2004). Это позволяет при лечении злокачественных новообразований различной локализации снизить токсичность цитостатиков для нормальных органов и тканей, повысить эффективность химиотерапии и ан-тибиотикотерапии, активизировать систему кроветворения и иммунологической защиты организма (Златник Е.Ю. и соавт., 1997, 2003; Малейко М.Л., 1998; Попова И.Л., 1999; Семилеткин О.М., 1999; Сидоренко Ю.С. и соавт., 2000; Карташов С.З. и соавт., 2001; Касьяненко В.Н., 2001; Нестерова Ю.А., 2004; Скрипниченко О.В., 2005).
Особое внимание в Ростовском НИИ онкологии уделяется также магнитотерапии, которая применяется в комплексном лечении онкологических больных не одно десятилетие (Уколова М.А. и соавт., 1969; Кваки-на Е.Б., 1972; Салатов Р.Н. и соавт., 1991, 1995, 2001; Гаркави Л.Х. и соавт., 1996, 2001, 2002; Бордюшков Ю.Н. и соавт., 1997, 1999, 2000). Разработаны методики применения магнитного поля в пред- и послеоперационном периоде (Салатов Р.Н. и соавт., 1999, 2001; Дашков А.В., 2001; Чилин-гарянц С.Г. и соавт., 2001), изучен механизм центрального (на область гипоталамуса) и периферического (на опухолевый очаг) воздействия переменного магнитного поля различной частоты и интенсивности (Уколо-
8 ва М.А. и соавт., 1971; Квакина Е.Б., 1972; Гаркави Л.Х. и соавт., 1996, 2001, 2002; Бордюшков Ю.Н. и соавт., 1997; Жукова Г.В. и соавт., 1997, 2000; Шихлярова А.И., 2001), рассмотрена возможность проведения экст-
* ракорпоральной обработки магнитным полем крови при АГХТ (Бордюш-
ков Ю.Н. и соавт., 1999, 2000; Салатов Р.Н., 2000; Старжецкая М.В., 2002; Златник Е.Ю., 2003).
Тем не менее, способы химиотерапии на аутологичных жидких тканях и их компонентах, а также использование магнитных полей в лечении онкологических больных продолжают оставаться нетрадиционными мето-
v дами лечения, механизм действия которых до конца не выяснен, поэтому
данная проблема представляет большой научный и практический интерес.
Цель работы. В экспериментальных условиях изучить механизмы
действия переменного магнитного поля с параметрами 100 Гц 50 мТл,
аутогемохимиотерапии, лимфохимиотерапии, а также некоторых имму-
(% нотропных препаратов, и выяснить роль этих механизмов в повышении
противоопухолевой эффективности химиотерапии.
Поставленная цель достигалась решением следующих задач:
Исследовать противоопухолевое действие переменного магнитного поля (100 Гц 50 мТл) на модели ксенографтов опухолей человека, культивируемых в диффузионных камерах в брюшной полости крыс.
Провести люминесцентно-микроскопическое исследование синтетической активности нуклеиновых кислот клеток крови, костного мозга, лимфы и некоторых злокачественных опухолей на различных экспериментальных моделях при аутогемохимиотерапии, воздействии переменного магнитного поля, рихлокаина и эпиталамина.
^ 3. Изучить влияние переменного магнитного поля (100 Гц 50 мТл),
аутогемохимиотерапии, нейпогена, местного анестетика - рихлокаина и кардиотоника - суфана на клеточный состав костного мозга интактных и опухолевых животных.
9 Научная новизна работы. В диссертационной работе впервые:
на модели ксенографтов злокачественных новообразований человека, культивируемых в диффузионных камерах в брюшной полости крыс показано противоопухолевое действие переменного магнитного поля с параметрами 100 Гц 50 мТл и экспозицией 20 и 40 мин;
в опытах in vivo и in vitro с помощью люминесцентной микроскопии исследовано влияние аутогемохимиотерапии, переменного магнитного поля (100 Гц 50 мТл), рихлокаина и эпиталамина на синтетическую активность клеток крови, костного мозга, лимфы и некоторых злокачественных опухолей. Показана возможность сохранения, а в некоторых случаях и активизации с помощью указанных воздействий синтетических процессов в иммунокомпетентных клетках организма при химиотерапии, а также способность данных методов подавлять синтез нуклеиновых кислот в клетках злокачественных новообразований;
на основании результатов исследования костномозгового кроветворения крыс показано иммунотропное и миелопротекторное влияние общего воздействия переменного магнитного поля (100 Гц 50 мТл), аутогемохимиотерапии и аутогемохимиомагнитотерапии;
исследовано костномозговое кроветворение экспериментальных животных при введении нейпогена на аутокрови и показана способность данного метода активизировать не только гранулоцитарный и моноцитар-ный ростки гемопоэза, но и эритробластический, который также повреждается при химиотерапии;
по данным миелограммы крыс показано иммунотропное и миелопротекторное действие рихлокаина и суфана, чем обосновывается возможность их применения в качестве сопровождения при химиотерапии злокачественных новообразований.
Теоретическое и практическое значение работы. Проведенные экспериментальные исследования расширяют представление о механизме противоопухолевого, иммунокорригирующего и миелопротекторного дей-
10 ствия переменного магнитного поля (ПеМП), аутогемохимиотерапии (АГХТ), рихлокаина и суфана.
В работе показана целесообразность применения рихлокаина и эпи-таламина при лимфохимиотерапии в процессе инкубации противоопухолевых препаратов с лимфой, что позволяет сохранить, а в некоторых случаях и активизировать биосинтетические процессы в ее иммунокомпетентных клетках.
Результаты, представленные в работе, дают основание рекомендовать использование в клинической практике ПеМП с параметрами 100 Гц 50 мТл, экспозицией 20 и 40 мин. как для иммунокоррекции, так и в качестве местного противоопухолевого воздействия.
Полученные положительные результаты обосновывают возможность введения нейпогена не только стандартным внутривенным способом, но и после инкубации с аутокровью, - для активизации не только гранулоци-тарного, но и эритробластического ростка кроветворения, который также повреждается при химиотерапии.
Основные положения, выносимые на защиту:
Переменное магнитное поле с параметрами 100 Гц 50 мТл оказывает на опухолевые клетки как прямое цитостатическое воздействие, так и опосредованное - через активизацию гемопоэза и повышение биосинтетической активности иммунокомпетентных клеток крови макроорганизма.
Использование в качестве растворителя химиопрепаратов ауто-крови, а также применение в процессе химиотерапии местного анестетика рихлокаина и кардиотоника суфана препятствует проявлению миелотокси-ческого действия цитостатиков и активизирует биосинтетическую активность иммунокомпетентных клеток крови и костного мозга.
Апробация работы. Апробация диссертации состоялась 24 февраля 2005 г. на заседании Ученого Совета Ростовского научно-исследовательского онкологического института.
Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 13 научных работах.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 149 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов исследования, 3 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего в себя 284 отечественных и 100 зарубежных источников. Материалы диссертации иллюстрированы 9 рисунками и 29 таблицами.
Влияние нетрадиционных методов введения химиопрепа-ратов на синтетическую активность клеток крови и костного мозга интактных крыс
В опытах с животными без опухоли было проведено исследование влияния различных способов введения химиопрепаратов - доксорубицина, винкристина и циклофосфана на синтетическую активность клеток крови и костного мозга с целью выявления наименее токсического для системы кроветворения метода воздействия. Учитывая, что при люминесцентной микроскопии не всегда удается идентифицировать разновидности клеток костного мозга, для изучения а все клетки были условно разделены на 3 группы: зрелые (диаметр клеток диаметра зонда микроскопа), бластные (d клеток d зонда) и мегакариоциты.
Опыты с введением доксорубицина, проведенные на 21 интактной крысе, показали, что традиционное внутривенное введение химиопрепара-та не изменяет биосинтетическую активность клеток периферической крови и костного мозга (табл. 4.1). Это может быть объяснено высокими компенсаторными способностями здорового (без опухоли) организма.
Введение химиопрепарата на аутокрови достоверно (в среднем на 0,07±0,01 отн. ед.) увеличивает показатель синтетической активности а зрелых клеток (d клеток d зонда, мегакариоциты) костного мозга и клеток периферической крови, сохраняя на уровне контрольных значений соотношение РНК и ДНК в бластных клетках костного мозга. В связи с тем, что при люминесцентной микроскопии основную часть видимых на темном фоне клеток составляют иммунокомпетентные клетки (лимфоциты, гранулоциты, мононуклеарные фагоциты), то полученные результаты могут указывать на способность АГХТ активизировать биосинтетические процессы в иммуноцитах крови и костного мозга организма.
Исследование синтетической активности клеток крови и костного мозга 28 интактных крыс при различных способах введения винкристина показало, что традиционное внутривенное введение химиопрепарата достоверно снижает на 0,06-0,09±0,01 отн. ед. показатель а зрелых и бластных клеток костного мозга, а также клеток периферической крови (табл. 4.2). Данный эффект указывает на токсическое действие винкристина в отношении биосинтетических процессов прежде всего в иммунокомпетент-ных клетках крови и их костномозговых предшественниках.
Введение препарата на аутокрови способствует сохранности уровня синтетических процессов в бластных клетках костного мозга в пределах контрольных значений, а показатель а у зрелых клеток костного мозга и периферической крови достоверно увеличивает в среднем на 0,14 отн. ед. по сравнению со значениями традиционного введения винкристина и на 0,05-0,08 отн. ед. по сравнению с контролем. Внутривенное введение винкристина, инкубированного с аутокровью с последующей обработкой ПеМП повышает синтетическую активность зрелых клеток костного мозга и периферической крови по сравнению с традиционным способом на 0,08-0,1±0,01 отн. ед., а параметр а бластных клеток — 0,07±0Д отн. ед.
Таким образом, токсическое действие винкристина можно снизить путем введения его на аутокрови в сочетании с обработкой магнитным полем или без него, при этом достигая сохранности активности синтетического аппарата клеток в пределах физиологических колебаний и даже ее увеличения.
Для исследования влияния способа введения циклофосфана на синтетическую активность клеток крови и костного мозга химиопрепарат вводили интактным крысам внутривенно обычным способом и на аутокрови в дозе 100 мг/кг. Полученные результаты свидетельствуют, что циклофос-фан при внутривенном введении оказывает на систему кроветворения весьма токсическое действие, резко угнетая функциональное состояние синтетического аппарата клеток периферической крови на 0,1 ±0,01 отн. ед., а костного мозга - на 0,12—0,17±0,01 отн. ед. по сравнению с контролем (табл. 4.3). Введение циклофосфана внутривенно на аутокрови достоверно повышает показатели параметра а, но эти данные не достигают контрольных значений.
Из представленных результатов следует, что способ введения различных химиопрепаратов оказывает влияние на проявление их миелоток-сического действия, при этом нельзя не отметить положительный эффект аутогемохимиотерапии, которая способствует снижению токсического влияния противоопухолевых лекарственных средств в отношении системы кроветворения.
Влияние АГХТ на синтетическую активность клеток крови, костного мозга и саркомы 45 животных-опухоленосителей
На 21 белой крысе с перевивной опухолью С-45 было исследовано влияние аутогемохимиотерапии на синтетическую активность клеток крови, костного мозга и саркомы 45. Животным вводили внутривенно доксо-рубицин обычным способом и на аутокрови, в дозе 6,7 мг/кг.
Согласно полученным данным, представленным в табл. 4.4, наличие в организме опухоли (саркомы 45 объемом 1 см ) сопровождается достоверным повышением синтетической активности клеток крови и костного мозга.
Традиционное внутривенное введение опухолевым животным док-сорубицина вызывает в бластных клетках костного мозга достоверное снижение уровня синтетических процессов на 0,1 ±0,01 отн. ед. Показатель а зрелых клеткок крови и костного мозга сохраняется в пределах контрольных значений. Введение животным-опухоленосителям доксорубици-на, инкубированного с аутокровью, способствует достоверному повышению уровня синтетических процессов в клетках костного мозга на 0,14— 0,19 отн. ед., что может указывать на снижение миелотоксического действия химисипрепарата при АГХТ и некоторую активизацию биосинтетических процессов в иммуноцитах костного мозга.
Изучение влияния способов введения доксорубицина на синтетическую активность клеток саркомы 45 показывает, что традиционное введение химиопрепарата достоверно снижает показатель а ее клеток на 0,23— 0,28 отн. ед. При этом введение доксорубицина на аутокрови угнетает синтез нуклеиновых кислот в ее клетках в 2 раза, что является статистически достоверным не только по отношению к контролю, но и к группе со стандартным внутривенным введением химиопрепарата. Отмеченная закономерность наблюдается как при анализе крупно-, так и мелкоклеточной генерации опухолевых клеток .
Полученные данные говорят о том, что введение доксорубицина после инкубации с аутокровью крысам-опухоленосителям вызывает у них более глубокое угнетение синтетической активности в ткани опухоли по сравнению с животными, получавшими доксорубицин внутривенно (рис. 4.1). На наш взгляд, это связано с увеличением туморотропности цитостатика, конъюги-рованного с белками и/или форменными элементами крови, что препятствует проявлению его токсического действия на клетки костного мозга.
Исследование in vivo влияния магнитного поля на синтетическую активность клеток крови, костного мозга и саркомы 45 проводилось на 28 крысах (14 — без опухоли, 14 - с С-45).
Согласно полученным данным (табл. 4.6) общее воздействие ПеМП вызывает у интактных крыс незначительное повышение синтетической активности клеток крови и костного мозга, что может быть объяснено деятельностью регуляторных систем здорового организма, обеспечивающих такой гомеостаз, который невозможно изменить с помощью действия физических факторов незначительной интенсивности.
Воздействие ПеМП на животных с саркомой 45 вызывает статистически достоверное увеличение биосинтетических процессов в клетках крови на 0,05±0,01 отн. ед., а в клетках костного мозга - на 0,07-0,09±0,02 отн. ед., что может быть связано как с изменением деятельности регуляторных систем организма-опухоленосителя под влиянием ПеМП, так и с неспецифическим иммунотропным эффектом последнего. Исключение составляют мегакариоциты костного мозга, показатель а которых не выходит за пределы физиологических колебаний. Влияние общего воздействия ПеМП (100 Гц 50 мТл) на функциональное состояние синтетического аппарата клеток саркомы 45 выражается в том, что а более зрелых опухолевых клеток (d d зонда микроскопа) достоверно снижается на 0,17 отн. ед., а более молодых клеток (d клеток d зонда) - на 0,24 отн. ед. (табл. 4.7, рис. 4.2). Уменьшение синтетической активности клеток саркомы 45 почти в 2 раза может быть вызвано как прямым цитостатическим действием ПеМП, так и посредством активизации магнитным полем иммунокомпетентных клеток организма.
Анализируя полученные результаты, следует отметить разнонаправленное действие магнитного поля на биосинтетические процессы в клетках опухоли и в трансформированных клетках организма, выражающееся в угнетающем влиянии на первые и активизирующем - на вторые.
Влияние общего воздействия ПеМП (100 Гц 50 мТл) на клеточный состав костного мозга интактных и опухолевых крыс
Для исследования влияния переменного магнитного поля (100 Гц 50 мТл) на костномозговое кроветворение, интактных животных и крыс с саркомой 45 помещали в плексигласовых боксах между магнитоиндукто-рами аппарата «Градиент-1» и проводили ежедневное общее 20-минутное воздействие ПеМП в течение 5 дней. По окончании опыта в приготовле-ных и окрашенных мазках костного мозга определяли процентное содержание всех видов клеток и составляли миелограмму.
Изучение клеточного состава костного мозга интактных крыс показало, что общее воздействие ПеМП вызывает увеличение содержания клеток гранулоцитарного ростка кроветворения с 59,65% (в контроле) до 62, 24% (табл. 5.1). При этом наблюдается статистически достоверное снижение числа палочкоядерных лейкоцитов на 4,55% и увеличение количества сегментоядерных лейкоцитов на 8,51%, что может указывать на ускорение созревания клеток гранулоцитарного ряда, вызванного магнитным воздействием. Достоверно увеличивается и число клеток моноцитарного ряда. Наряду с этим, отмечено отсутствие ретикулярных клеток стромы, тучных клеток, макрофагов и снижение числа плазматических клеток, что может указывать на отсутствие раздражения ретикуло-эндотелиальнои системы организма и на активный процесс образования форменных элементов крови, преобладающий над процессом образования стромальных элементов. Кроме этого, наблюдается достоверное снижение числа мегакариоцитов, что может привести к уменьшению тромбоцитообразования.
У животных с саркомой 45 общее воздействие ПеМП вызывает незначительное увеличение общего количества клеток гранулоцитарного ряда с 57,33 до 58,35% (табл. 5.2), с некоторым уменьшением их молодых форм. При этом наблюдается статистически достоверное снижение числа палочкоядерных лейкоцитов (на 4,23%), а количество сегментоядерных, наоборот, достоверно увеличивается на 6,33%. Это подтверждает возможность ПеМП ускорять созревание клеток гранулоцитарного ряда, также как в опытах у интактных крыс.
Отличием является показатель клеточности эритробластического ростка кроветворения. Если у интактных крыс воздействие ПеМП не влияет на общее количество клеток данного ряда, то у опухоленосителей клеточ-ность эритрона снижается на 2,44% и происходит это за счет уменьшения числа более зрелых клеток. Статистически достоверное сокращение эритрона может быть вызвано как токсическим воздействием злокачественного новообразования и нарушенных под его влиянием регуляторных механизмов макроорганизма, так и некоторым вытеснением клеток эритробластического ряда увеличенной пролиферацией иммунокомпетентных клеток - лимфоцитов, гранулоцитов, плазматических клеток и макрофагов. Общим в действии ПеМП на гемопоэз интактных и опухолевых животных является снижение числа мегакариоцитов, что будет способствовать уменьшению образования тромбоцитов.
Анализ клеточного состава костного мозга показал, что введение ин-тактным крысам доксорубицина в дозе 6,7 мг/кг (табл. 5.3) обычным внутривенным способом вызывает некоторое снижение общего количества клеток гранулоцитарного ростка кроветворения (на 5,38%), эритробласти-ческого (на 1,52%) и лимфоцитарного (на 1,0%). При этом статистически достоверно увеличивается число моноцитов (в 2 раза), плазматических клеток (в 6 раз), макрофагов (в 2 раза), ретикулярных клеток стромы (в 3 раза), тучных клеток (в 14 раз). Данный эффект указывает на напряженное состояние ретикуло-эндотелиальной системы и некоторую гипоплазию кроветворной ткани с обнажением ретикулярной стромы.
Введение химиопрепаратов внутривенно после инкубации с аутокро-вью, а также сочетание воздействия инкубации с аутокровью и обработки ПеМП (100 Гц 50 мТл, 20 мин) способствует нормализации клеточности основных ростков гемопоэза, а происходящее на этом фоне уменьшение количества ретикулярных клеток стромы указывает на активное образование клеток паренхимы костного мозга.
При изучении влияния на костномозговое кроветворение интактных крыс различных способов введения циклофосфана (табл. 5.4) было выяснено, что его внутрибрюшинное введение в дозе 100 мг/кг вызывает уменьшение общего числа клеток гранулоцитарного ростка кроветворения на 10,2%, эритробластического ряда - на 2,0% и лимфоцитарного ряда - на 1,0%. При этом достоверное увеличение количества ретикулярных клеток стромы (в 13 раз), плазматических клеток (в 4 раза), макрофагов (в 2 раза) и тучных клеток (в 10 раз) указывает на опустошение костного мозга, обнажение ретикулярной стромы и напряженное состояние ретикуло-эндотелиальной системы.
Внутривенное введение циклофосфана вызывает несколько иные изменения в клеточном составе костного мозга. Оказывая более токсическое влияние в отношении гранулоцитопоэза (уменьшение общего числа клеток на 11,8%) и лимфоцитопоэза (на 4,42% по сравнению с контролем), оно в то же время способствует повышению количества клеток эритробластиче-ского ростка кроветворения (на 3±0,4%), а также увеличению содержания моноцитов (на 1,23±0,15%) и макрофагов (в 4,5 раза). Последнее может выступать компенсаторной реакцией на уменьшение числа гранулоцитов и лимфоидных клеток. Внутривенное введение химиопрепарата характеризуется также высоким содержанием плазматических клеток (в 3 раза по сравнению с контролем), ретикулярных клеток стромы (в 11,7 раз) и тучных клеток (в 8 раз), что указывает на гипоплазию кроветворной ткани, обнажение ретикулярной стромы и раздражение РЭС.
Влияние нетрадиционных методов введения неипогена на клеточный состав костного мозга животных без опухоли
В последние годы в онкологической практике для снятия такого опасного побочного проявления химиотерапии как фебрильная нейтропе-ния начал применяться нейпоген, активное вещество которого (филгра-стим) является гранулоцитарно-колониестимулирующим фактором. Нейпоген стимулирует в костном мозге образование нейтрофильных грануло-цитов и усиливает их функциональную активность. Но миелотоксическое действие химиотерапии проявляется не только в сокращении численности клеток гранулоцитарного ростка кроветворения, но и в угнетении эритро-поэза, лимфоцитопоэза и других направлений деятельности костного мозга. В связи с этим была предпринята попытка введения нейпогена экспериментальным животным внутривенно не только на 5% растворе глюкозы, но и на аутокрови, а также апробировать интрамедуллярный (в костный мозг бедренной кости) способ введения препарата с целью определения возможности увеличения клеточности других ростков кроветворения. Доза нейпогена во всех случаях составила 10 мкг/кг.
Исследование клеточного состава костного мозга показало, что стандартное внутривенное введение нейпогена (табл. 5.8) вызывает увеличение общего количества клеток гранулоцитарного ростка кроветворения на 3,37%, причем происходит равномерное, на.всех этапах образования и созревания, увеличение числа клеток. Кроме этого, наблюдается достоверное увеличение содержания клеток моноцитарного ряда (в 1,5 раза) и макрофагов (в 2,7 раза по сравнению с контролем). Наоборот, в эритробластическом ростке кроветворения отмечается снижение общего количества клеток на 5,79%, а в мегакариоцитарном — в 2 раза. Это может быть объяснено происходящей под действием нейпогена пролиферацией стволовых клеток костного мозга в направлении гранулоци-топоэза в ущерб другим росткам кроветворения. Содержание других видов клеток костного мозга сохраняется в пределах контрольных колебаний.
Внутривенное введение нейпогена на аутокрови (после инкубации в течение 45 мин. при 37С) приводит к увеличению содержания эритроид-ных клеток (на 7,31%) по сравнению со стандартным введением препарата, при этом активное состояние гранулоцитарного и моноцитарного ростков гемопоэза сохраняется. Низкий уровень содержания ретикулярных клеток стромы (0,02%), плазматических клеток (0,23%) и тучных клеток (0,01%) указывает, что введение нейпогена на аутокрови не вызывает раздражения ткани костного мозга.
При внутривенном введении нейпогена, инкубированного с ауто-кровью (20 мин. при 37С) и далее обработанного ПеМП (100 Гц 50мТл, 20 мин.) в костном мозге наблюдается такая же активность гранулоцитопоэза, как и при стандартном введении препарата, а некоторое увеличение числа сегментоядерных лейкоцитов указывает на ускоренный процесс созревания гранулоцитов. Общее количество клеток эритробластического ряда достоверно выше показателей эритрона при стандартном способе введени-ия. Содержание клеток мегакариоцитарного ростка кроветворения понижено (0,51%), как и при других способах введения нейпогена и, видимо, является характерным для данного лекарственного препарата. Статистически достоверное уменьшение числа плазматических клеток, ретикулярных клеток стромы и тучных клеток указывает на отсутствие какого-либо отрицательного действия на гемопоэз данного способа введения нейпогена. Введение нейпогена непосредственно в костный мозг (интрамедул-лярно) (табл. 5.9) вызывает такие же изменения в костномозговом кроветворении, как и стандартный внутривенный способ введения. Исключени-ие составляет достоверное снижение числа ретикулярных клеток стромы (в 1,5 раза), плазматических клеток (в 2 раза) и тучных клеток (в 8-10 раз), что может указывать на отсутствие какого-либо повреждающего действия данного способа введения нейпогена, а также на активный процесс кроветворения . Таким образом, при использовании нетрадиционных методов введения нейпогена можно активизировать не только гранулоцитарный и моно-цитарный ростки кроветворения (интрамедуллярное введение), но и эрит-робластический (введение на аутокрови). Кроме того, как мы полагаем, введением лекарственного препарата непосредственно в костный мозг можно добиться более быстрого воздействия его на стволовые кроветворные клетки, а также снизить потери нейпогена, связанные с транспортом по системе кровообращения, когда часть препарата может быть метаболи-зирована в других тканях организма. Немаловажна способность нейпогена снижать образование мегакариоцитов, что может привести к уменьшению образования тромбоцитов и снижению риска развития тромбоэмболии в организме опухоленосителей.
