Введение к работе
Актуальность исследования. Цитологический метод исследования в
настоящее время широко применяется в диагностике опухолевых и
неопухолевых заболеваний. Используя только рутинное цитологическое
исследование, возникают непреодолимые трудности при установлении
гистогенеза отдельных опухолей, определении источника метастазирования,
трактовке первично-множественных поражений, уточнении степени
распространенности опухолевого процесса. Определение гистологической
формы опухоли при цитологическом исследовании возможно в 60-70%.
Вместе с тем, результаты цитологического метода определяют лечебную
тактику, в связи с чем имеется необходимость в применении новых
уточняющих методов, одним из которых является иммуноцитохимическое
исследование. Разнообразие моноклональных антител, используемых в
иммуноцитохимических исследованиях тонкоигольных пунктатов, в каждом
конкретном случае позволяет ответить на вопрос, имеет ли данная опухоль
эпителиальное происхождение или является саркомой, меланомой,
лимфомой. (Глузман Д.Ф. и соавт., 2003; Петров СВ., Райхлин Н.Т., 2004;
Jaffe S. et al., 2001; Fletcher D.M. et al., 2002).
ИЦХ помогает в определен. источника метастазирования при
невыявленном первичном очаге, хотя лишь три маркера имеют
относительную органоспецифичность. тиреоглобулин для выявления
метастазов и первичной диагностики папиллярного и фолликулярного рака и
кальцитонин - для опухолей из С-клеток щитовидной железы, а также
простатоспецифический антиген для диагностики рака предстательной железы. В настоящее время проводится попытка определить органоспецифичность метастазов по экспрессии высоко- и низкомопекулярных цитокератинов. (Савелов Н.А и соавт., 2005).
Степень распространения опухолевого процесса определяет стадию и тактику лечебных мероприятий. Иммуноцитохимический метод увеличивает выявление метастатического поражения лимфатических узлов на 22-24%. (Fetsch Р.А. et al., 2000; Gown A.M., 2002).
Использование иммуноцитохимического метода позволяет выявить на
дооперационном этапе факторы, определяющие ответ опухоли на лечение.
Исследование рецепторов эстрогенов и прогестерона, онкопротеина
С-егЬВ-2 при раке молочной железы (РМЖ), эндометрия, CD-20 при
фолликулярных лимфомах, CD-I 17 при стромальных
гастроинтерстицинальных опухолях позволяет проводить эффективную целенаправленную таргетную терапию. Экспрессия ряда маркеров клетками опухоли: рецепторов эстрогенов и прогестерона, онкопротеина С-егЬВ-2, маркера апоптоза р53, пролиферативной активности определяет прогноз заболевания и влияет на лечебную тактику (Jeziorski A., et al., 2000; De Laurentiis M. et al., 2005).
В качестве альтернативы иммуногистохимического метода может быть предложено определение экспрессии молекулярных маркеров на клеточном уровне - иммуноцитохимический метод (ИЦХ) (Глухова Е.И., 2003;
Лукашина М.И.., 2003; Афанасьева З.А. и соавт., 2003; 2004; Bozzetti С. et al.
1994, 2000, 2003; Lofgren L. et al., 2003; Jayaram G. et al., 2005) Сопоставление результатов экспрессии молекулярных маркеров при иммуноцитохимическом и иммуногистохимическом исследованиях проводилось рядом исследователей и получена хорошая корреляция: совпадение результатов иммуноцитохимического и иммуногистохимического исследований составило от 61% до 92% (Глухова Е.И., 2003; Лукашина М.И., 2003; Bozzetti С. et al., 1994; Nizzoli R. et al., 1994, 2000, 2003; Lofgren L. et al., 2003; Politi E.N. et al., 2005). Иммуноцитохимическое исследование в ряде наблюдений позволяет устранить необходимость использо іания ряда инвазивных и дорогостоящих диагностических мероприятий. Вместе с тем, остается неясным место иммуноцитохимического метода в современной морфологической диагностике при уточнении гистогенеза, степени распространенности, в определении предсказательных и прогностических факторов при опухоли и опухолеподобных процессах.
Цель исследования - определить возможности
иммуноцитохимического метода исследования в диагностике и оценке важнейших факторов прогноза злокачественных и доброкачественных образований.
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: Изучить преимущества и недостатки использования жидкостной системы Cytospin приготовления препаратов при ИЦХ исследовании.
Оценить возможности иммуноцитохимического метода в определении гистогенеза некоторых опухолей и метастатических поражений без выявленного первичного очага.
Выявить значение иммуноцитохимического метода в диагностике метастатического поражения лимфатических узлов.
Показать возможности иммуноцитохимического метода и провести
сравнительный анализ с иммуногистохимическим исследованием в
определении пролиферативной активности (Ki-67), экспрессии рецепторов эстрогенов, прогестерона и онкопротеина С-егЬВ-2 при раке молочной железы.
Изучить экспрессию стероидных гормонов при доброкачественной патологии молочной железы.
Научная новизна и практическая значимость. Апробирован принципиально новый подход в приготовлении и обработке цитологических препаратов для иммуноцитохимического исследования с использованием жидкостной системы Cytospin, позволяющий получить монослой клеток и уменьшить расход сывороток в 6-8 раз, сократить время просмотра препарата. Разработана новая среда накопления, не изменяющая морфологию и биологию клеток, сохраняющая их до 48 часов (патент на изобретение № 2246110 «Питательная среда накопления образца клеток для последующего цитологического и\или иммуноцитохимического анализа», решение о выдаче от 19.05.04).
В работе показаны возможности иммуноцитохимического метода в предоперационной морфологической диагностике опухолей без выявленного первичного очага, при первично множественных поражениях, фенотипировании В- и Т-клеточных лимфом, оценке степени распространения опухолевого процесса.
ИЦХ метод имеет большое значение при оценке некоторых предсказательных и прогностических факторов при исследовании злокачественных и доброкачественных образований молочных желез: рецепторов стероидных гормонов (РЭ и РП), белка пролиферативной активности Ki-67 и онкопротеина С-егЬВ-2. Полученные результаты в равной мере соответствуют и не уступают ИГХ исследованиям, что подтверждается высоким уровнем корреляции между методами и позволяют рекомендовать использование иммуноцитохимических исследований перед назначением неоадъювантнои терапии. Использование ИЦХ значительно расширяет возможности цитологического метода в определении гистогенеза новообразований, источника метастазирования опухолей, степени распространения злокачественного процесса, а также на дооперационном этапе позволяет оценить факторы прогноза злокачественных и доброкачественных образований.
Внедрение в практику. Результаты исследования внедрены в практику отделения онкоцитологии МНИОИ им. П.А.Герцена. По материалам диссертации опубликовано 22 работы. Основные положения выносимые на зашиту.
1. Использование жидкостной системы Cytospin при ИЦХ исследовании.
2. ИЦХ метод в определении гистогенеза некоторых опухолей и
метастатических поражений без выявленного первичного очага.
3. Значимость иммуноцитохимического метода в диагностике
метастатического поражения лимфатических узлов.
4. Сравнительный анализ иммуноцитохимического и
иммуногистохимического методов исследования в определении
пролиферативной активности (Ki-67), экспрессии рецепторов эстрогенов,
прогестерона и онкопротеина С-егЬВ-2 при раке молочной железы.
5. Результаты экспрессии стероидных гормонов (RE, RP) при
доброкачественной патологии молочной железы.
Апробация работы. Диссертация апробирована 23 ноября 2006 года на
заседании межотделенческой конференции отделений онкоцитологии,
патоморфологии, модификаторов и протекторов противоопухолевой терапии,
отделения прогноза эффективности консервативного лечения, клинических
подразделений МНИОИ им. П.А.Герцена. Результаты исследования
доложены на V Всероссийском съезде клинических цитологов в Пскове (14-
17 июня 2003 г.), на III съезде онкологов и радиологов СНГ в Минске (19
февраля 2004г.), на XXX Европейском конгрессе цитологов в Афинах (12-15
октябя 2004г.), на II Научно-практической конференции врачей онкологов
ФМБА РФ (19- 20 октября 2006 г).
Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 207
